Anti-HCV (+)/ HCV-RNA (-) olgularda HCV-spesifik lenfosit yanıtının ELISPOT metodu ile saptanması Uluhan Sili 1, Abdurrahman Kaya 2, Selda Aydın 3, Nur Hondur 4, Ali Mert 5, Fehmi Tabak 4, Reşat Özaras 4, Recep Öztürk 4 1 Marmara U niversitesi, Tıp Fakültesi, İnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji AD, İstanbul 2 Süleymaniye Kadın Doğum ve C ocuk Hastalıkları EAH, İnfeksiyon Hastalıkları Bo lumü, İstanbul 3 İstanbul Medipol U niversitesi, Tıp Fakültesi, İnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji AD, İstanbul 4 İstanbul U niversitesi, Cerrahpaşa Tıp Fakültesi, İnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji AD, İstanbul 5 İstanbul Medipol U niversitesi, Tıp Fakültesi, İç Hastalıkları AD, İstanbul
Hepatit C virüsü Dünya nüfusunun ~%3 ünün (~170 milyon) HCV ile enfekte olduğu tahmin edilmektedir 3-4 milyon yeni infeksiyon / sene U lkemizdeki prevelansı ~%1 (~700,000) Akut HCV infeksiyonunun %55 - %85 i kronikleşmektedir Son yıllarda etkin tedavisi var ancak pahalı Henüz aşısı yok
HCV virolojisi Flaviviridae ailesi Lipid zarflı, 9500 nt, (+) ssrna genom
HCV poliproteini 3000 aa
Anti-HCV (+) liğine yaklaşım Anti-HCV (+) TEKRAR 2x (-) (+) STOP HCV-RNA (-) (+) Kronik KC Hastalığı TEKRAR (-) Yanlış seropozitiflik Kontrol edilmiş akut HCV
Soru: Anti-HCV (+) olup HCV-RNA (-) olması yanlış seropozitifliği mi, yoksa akut HCV nin Metot: başarılı kontrolünü mü go sterir? HCV-spesifik lenfosit yanıtının ELISPOT metodu ile saptanması spesifik hücresel immün yanıt varlığı başarıyla kontrol altına alınmış geçirilmiş akut HCV infeksiyonu
Metot Periferik kan mononükleer hücrelerin (PKMNH) ayrıştırılması HCV peptitleri (core, NS2 ve NS3) ile uyarma Pozitif kontrol: influenza NP1 peptitleri Antijen spesifik lenfositlerin çoğalması (2 hafta) ELISPOT metodu ile antijen spesifik lenfositlerin saptanması
T-lenfosit yanıtı Lenfositler resepto rleri aracılığıyla hedef hücre yüzeyindeki peptid (epitop)-majör histokompatibilite kompleksini (MHK) tanırlar
Peptid dizini (epitop kütüphanesi) 15 aa uzunlukta, birbirleriyle 11 aa örtüşen peptid dizinleri Olası tüm CD4 ve CD8 epitoplarının kapsanması Viral antijen
HCV spesifik lenfositlerin çoğaltılması PKMNH 0. gün Lenfosit soyu 14. gün ELISPOT
ELISPOT IFN-γ salgılayan hücrelerin sayılması Aktifleşen lenfositler spesifik oldukları antijenle karşılaştıklarında IFN-γ salgılarlar Yakalanan IFN-γ nokta (spot) oluşturur LENFOSİT IFN- IFN- IFN-
ELISPOT spot-forming unit (SFU) nokta oluşturan birim
Çalışma Grubu Anti-HCV (+)/ HCV-RNA (-) n=8 Kalıcı Virolojik Yanıtlı Grup n=7 Kronik HCV İnfeksiyonlu Grup n=5 Erkek/Kadın, n (%) 4/4 (50/50) 1/6 (14/86) 3/2 (60/40) Yaş, sene 51.5 (29 67) 52 (31 56) 57 (22 78) ALT, IU/L 20 (11 34.3) 15.7 (6.7 22) 67.7 (20 202) Histolojik Aktivite Endeksi NA 5.5 (0 11) 5 (4 6) Fibroz NA 1 (0 5) 2 (1 2) Anti-HCV test edilme sayısı HCV-RNA test edilme sayısı 2 (2 6) NA NA 2 (2 3) NA NA Tedavi öncesi HCV-RNA, NA 34.8 10 5 NA IU/mL (3.96 10 5 202 10 5 ) En son HCV-RNA, IU/mL 0 (0 0) 0 (0 0) 22.7 10 5 (1.03 10 5 70.3 10 5 ) Genotip, n NA 1a (1), 1b (5), 3a (1) 1b (5)
İnfluenza spesifik lenfosit yanıtı 300 250 İnfluenza yanıtlı hücreler (SFU/ 100,000) 200 150 100 50 * 0 Anti-HCV (+) HCV-RNA (-) 8/8 Kalıcı Virolojik Yanıtlı 6/7 Kronik HCV İnfeksiyonlu 5/5
HCV spesifik lenfosit yanıtı 120 100 HCV yanıtlı hücreler (SFU/ 100,000) 80 60 40 20 * 0 Anti-HCV (+) HCV-RNA (-) 5/6 Kalıcı Virolojik Yanıtlı 7/7 Kronik HCV İnfeksiyonlu 4/5
SONUÇ Anti-HCV (+) olup HCV-RNA (-) olan ve tıbbi o zgeçmişinde akut hepatit geçirme o yküsü olmayan 6 hastanın 5 inde (%83) HCV-spesifik lenfosit yanıtı go sterilmiştir Bulgularımız bu hastaların immün sistemlerinin akut HCV infeksiyonunu kontrol edebildiği sonucunu desteklemektedir Bu başarılı lenfosit yanıtlarının daha detaylı incelenmesi aşı geliştirilmesine katkı sağlayabilir
TEŞEKKÜR Peptit dizinleri Asst. Prof. Ann Leen, Ph.D. Center for Cell and Gene Therapy, Baylor College of Medicine, Houston, Texas İstanbul U niversitesi, Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi, BYPS-1-26/31012007 no lu Prof. Dr. Recep Öztürk adına olan proje desteği Otomatize ELISPOT okuyucusu Biolog Serpil Efe, Prof. Dr. Ahmet Soysal, Prof. Dr. Mustafa Bakır Marmara U niversitesi, Tıp Fakültesi, C ocuk Hastalıkları AD, C ocuk İnfeksiyon Hastalıkları BD İstatistik Analiz Prof. Dr. Pınar Ay, Marmara U niversitesi, Tıp Fakültesi, Halk Sağlığı AD
İlginiz için Teşekkürler! Sorularınız? Yrd. Doç. Dr. Uluhan Sili Marmara U niversitesi, Tıp Fakültesi İnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji AD uluhan@hotmail.com uluhan.sili@marmara.edu.tr
Antijen Spesifik Lenfosit Yanıtını Saptama Metodu + HCV-peptit karışımı (core, NS2, NS3) HCV yanıtlılar boş fito pep. HCV INF NP pep. PKMNH 10 13 days ELISPOT + Influenza NP1 peptit Influenza yanıtlılar
Antijen Spesifik Lenfosit Yanıtı Çalışma Grubu- HCV Kalıcı Virolojik Yanıt- HCV Kronik HCV Enfeksiyonu- HCV 140 140 140 120 120 120 100 100 100 80 80 80 60 60 60 40 40 40 20 20 20 0 YK NE MG CK HA YC HB MT 0 GÖ AT SG SÇ BY GE ŞD 0 FÜ RG İK KE MİY Çalışma Grubu- Influenza Kalıcı Virolojik Yanıt- Influenza Kronik HCV Enfeksiyonu- Influenza 350 350 350 300 300 300 250 250 250 200 200 200 150 150 150 100 100 100 50 50 50 0 YK NE MG CK HA YC HB MT 0 GÖ AT SG SÇ BY GE ŞD 0 FÜ RG İK KE MİY