Ürün Adı HEPAVASE MA-96 (TMB) Ürün Kodu 4AME3/ 4AME 11 Sınıflandırma Ek II Liste A ya da Liste B 98/79/EC (IVDD) içinde listelenmemiştir Kullanım Amacı İnsan serum ve plazmasındaki Hepatit A IgM antikorlarının (Anti-HAV IgM) kalitatif in-vitro belirlemesi Yasal Üretici GENERAL BIOLOGICALS Adres E mail CORPORATION Tel. +886-3-5779221 Faks +886-3-5779227 #6, INNOVATION FIRST ROAD, SCIENCE PARK, HSINCHU, TAIWAN, R.O.C. Sales.group@gbc.com.tw Avrupa Yetkili 1.1 Medical Technology Promedt Consulting GmbH Temsilcisi Adres Altenhofstrasse 80, D-66386 St. Ingbert, Germany Tel. +49 6894-581020 Faks +49 6894-581021 E mail info@mt-procons.com Üretici Hizmetini İçeren Son Testlerin Yapıldığı Firma GENERAL BIOLOGICALS CORP. #6, INNOVATION FIRST ROAD, SCIENCE PARK, HSINCHU, TAIWAN, R.O.C. Araştırma ve Geliştirme Hizmeti GENERAL BIOLOGICALS CORP. #6, INNOVATION FIRST ROAD, SCIENCE PARK, HSINCHU, TAIWAN, R.O.C. Sterilizasyon kolaylığı ve sterilizasyon yöntemi Yok (HEPAVASE MA 96 TMB Steril İVD değildir.
No İçerik Sayfa 1. Kullanım Amacı 3 2. Özet ve Test Açıklamaları 3 3. Test Prensibi 3 4. Kit İçeriği 4 4.1 Kit ve İçeriğinin Saklama Koşulları 6 5. Kullanım Talimatı 6 5.1. Uyarılar 6 5.2. Örnek Toplama ve Hazırlama 7 5.3. Reaktifleri Saklama Koşulları 7 5.4. Plate Yıkama Prosedürü 7 5.5. Test Prosedürü 8 5.6. Sonuçların Değerlendirilmesi 9 5.7. Test sonuçlarının Geçerliliği 10 5.8. Sonuç Yorumlama 10 5.9. Sorun Giderme 10 5.10. Sınırlamalar ve Engellemeler 11 5.11. Performans Özellikleri 13 5.11.1. Diagnostik Duyarlılık ve Diagnostik Özgünlük 13 5.11.2. Analitik Duyarlılık 14 5.11.3. Kesinlik 15 5.11.4. İzlenebilirlik 15 5.12. Test Prosedürünün İş Akış Şeması 16 6. Referanslar 17
1. Kullanım amacı HEPAVASE MA-96 (TMB) kiti insan serumu ve plazmasındaki (heparinli, sitratlı ya da EDTAlı) Hepatit A virus IgM antikorlarının (Anti-HAV IgM) in-vitro kalitatif tespiti için bir Enzim İmmunotest Kiti 2. Özet ve Test Açıklamaları Hepatit A virusu (HAV); Picornaviridae ailesine ait, 27nm çapında ve zarfı olmayan bir tek zincirli RNA virusudur (1-2). Hepatit A (en çok bulunan formu ile akut viral hepatit), insanlarda ortalam 28 günlük bir inkübasyon periyodundan sonra fekal-oral taşınma ile oluşan bir enfeksiyondur. Tipik HAV enfeksiyonu ile ortaya çıkan hastalık, beklenmedik bir şekilde beliren ateş, kırıklık, anoreksia, mide bulantısı, karın rahatsızlıkları, koyu renkli idrar ve sarılık semptomlarına sahiptir (2). Hepatit A antijeni, geç akut faz sırasında enfeksiyonun başlamasından hemen sonra dışkıda tespit edilebilir (3). Hepatit A akut fazı sırasında AntiHAV IgM antikorları oluşur, erken ve geç nekahat döneminde Anti-HAV IgG antikorlarının artması ile Anti-HAV IgM miktarı azalır. (4). Anti-HAV IgM genellikle akut fazın 3-4. aylarında yok olur. Eğer Anti-HAV IgM antikoru tespit edilmiş ise akut hepatit A enfeksiyonu var olabilir demektir (5). Aşı yapılmasından sonra çok nadir olarak Anti-HAV IgM oluşumu gerçekleşir (6). Anti-HAV IgM antikorlarının belirlenmesi Hepatit A enfeksiyonunun diğer tip enfeksiyonlardan ayırt edilmesinde çok yararlıdır. HEPAVASE MA-96 (TMB) ) serum ve plazma (heparinli, sitratlı ve EDTAlı) örneklerinde Hepatit A virus IgM antikorlarını kalitatif olarak belirleyen hızlı bir testtir. Serum ve plazmadaki Anti-HAV IgM seviyesini belirlemek için; solid faz olarak Anti-Human IgM kaplı mikrotiter plate ve likid faz olarak HAV Ag ile peroxidase-konjugatlı Anti-HAV kullanan IgM capture prensibine dayalı bir ELISA kitidir. Absorbans değeri cutoff değerinden büyük olan örnekler Anti-HAV IgM için POZİTİF olarak kabul edilir. Absorbans değeri cutoff değerinden küçük ya da eşit olan örnekler Anti-HAV IgM için NEGATİF olarak kabul edilir. Absorbans değeri yeniden test aralığı içinde olan (Cutoff Değeri ± 10 %) örnekler yeniden test edilmelidir ve sonuçları yukarıdaki gibi değerlendirilmelidir. Eğer her iki test sonucu da yeniden test aralığı içinde çıkar ise hastalardan alınacak yeni örneklerin test edilmesi önerilmektedir.
3. Test Prensibi HEPAVASE MA-96 (TMB) IgM capture prensibine dayanan solid fazlı bir ELISA kitidir. Solid fazını anti-human IgM kaplı polistren kuyucuklardan oluşan mikrotiter pleyt, likid fazı ise peroxidase-konjugatlı Anti-HAV oluşturur. Anti-HAV IgM içeren serum ya da plazma örneği, Anti-human IgM kaplı kuyucuklara eklenip ve inkübe edildiğinde, örnek içinde bulunan IgM antikorları kuyucuklardaki Anti-human IgM ler ile bağlanırlar. HAV Ag içeren solusyon ve peroxidase-konjugatlı anti-hav içeren solusyonların eklenmesinden sonra kuyucuklarda (Anti-h IgM) (Anti-HAV IgM) (HAV Ag) (Anti-HAV peroxidase) kompleksi oluşur. Bağlanmayan materyallerin uzaklaştırılması için pleytin yıkanmasından sonra, TMB substrat solusyonu kuyucuklara eklenir ve inkübe edilir. Eğer örnek içinde Anti-HAV IgM var ise; kuyucuklardaki peroxidase aktivitesi örnekteki anti-hav IgM içeriğini görünür hale getirecektir. Sülfirik asit eklenmesi ile peroxidase-tmb reaksiyonu son bulur. Oluşan rengin optik densitesi uygun bir fotometre ile 450nm de ve 620-690nm arasında seçilen referans bir dalga boyunda ölçülür *8. Yukarıda tanımlanan test prensibinin özetini aşağıda bulabilirsiniz: A. Örnekler (Anti-HAV IgM antikorları içeren): 1. Plate (Anti-h IgM) + örnek (Anti-HAV IgM içeren) Plate (Anti-h IgM) IgM Anti-HAV 2. Plate (Anti-h IgM) IgM Anti-HAV + HAV + Anti-HAV peroxidase Plate (Anti-h IgM) IgM Anti-HAV HAV (Anti-HAV HRPO) kompleksi 3. Bağlanmayan materyallerin uzaklaştırılması için yıkama 4. plate (Anti-h IgM) IgM Anti-HAV HAV (Anti-HAV HRPO) kompleksi + TMB solusyonu Açık maviden maviye. 5. Açık maviden maviye + 2N H2SO4 açık sarıdan sarıya, 450nm de ve 620-690 nm referans dalgaboyunda OD okunması *1. B. Örnekler (Anti-HAV IgM antikorları içermeyen): 1. Plate (Anti-h IgM) + örnek (Anti-HAV IgM antikorları içermeyen) Plate (Anti-h IgM) 2. Plate (Anti-h IgM) + HAV + Anti-HAV peroxidase Plate (Anti-h IgM) ------ kompleks oluşmaz 3. Bağlanmayan materyallerin uzaklaştırılması için yıkama 4. Plate (Anti-h IgM) + TMB solusyonu (renksiz) renksiz 5. renksiz + 2N H2SO4 renksiz, 450nm de ve 620-690 nm referans dalgaboyunda OD okunması *1.
4. Kit İçeriği Saklama Koşulları: Aşağıdaki tabloda 1-8 maddeleri 2-8 C de saklanmalıdır. Yıkama solusyonu D (20X) ve 2N H2SO4 2-30 C de saklanabilir. NO Materyal Kodu Ürünler Açıklama 96 test için miktar (1) 3B040MPCM Anti-IgM Kaplı Plate İnsan IgM antikorları ile kaplı mikrotiter 1 plate plate (2) 3A071-M3/5 Anti-HAV Peroxidase Solusyonu Anti-HAV peroxidase (horseradish) konjugat, bufferda protein stabilizatörü ile seyreltilmiş. Koruyucular: 0.003% gentamycin ve 1şişe, 7 ml (3) 3A090-M3/5 (4) 3A115 3A115S Anti-HAV IgM Pozitif Kontrol Örnek Diluent (5) 3A118-V3/5 Hepatit A Virus Antijen Solusyonu (6) 3A110-M3/5 Anti-HAV IgM Negatif Kontrol (7) 3B135TMB-A TMB Substrat Solusyonu 3B145TMB-A A (8) 3B140TMB-B TMB Substrat Solusyonu 3B150TMB-B B (9) 3B112PBS3/5 Konsantre Yıkama Solusyonu D (20X) (10) 3B155SACID2N 3B155SACID2N5 AKSESUARLAR: (ihtiyaç duyulduğunda) NO Materyal Kodu Ürünler (11) 2P951001 Yapışkan Slipler (12) 2P505001 Emici tamponlar (13) 2P403001 Siyah kapak 0.01% thimerosal. Seyreltilmiş Anti-HAV IgM içeren serum, bufferda protein stabilizatörü ile seyreltilmiş. Koruyucular: 0.003% gentamycin ve 0.01% thimerosal. bufferda protein stabilizatörü. Koruyucular: 0.003% gentamycin ve 0.01% thimerosal. Hepatit A virus antijenleri, bufferda ve protein stabilizatörü. Koruyucular: 0.003% gentamycin ve 0.01% thimerosal. bufferda protein stabilizatörü. Koruyucular: 0.003% gentamycin ve 0.01% thimerosal. 1 şişe, 2 ml 1 şişe, 11 ml 1 şişe, 7 ml 1 şişe, 2 ml 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine (TMB) organik tabanlı (0.6 mg/ml). 1 şişe, 10 ml Sitrik asit buffer 0.03% H2O2 içeren. 1 şişe, 10 ml Tween-20 ile konsantre fosfat buffer. 1 şişe, 52 ml 2N H2SO4 2N Sülfirik Asit 1 şişe, 12 ml KİT İÇERİĞİNDE BULUNMAYAN GEREKLİ MATERYALLER NO Ürünler (1) 5 µl, 50 µl, 100µl ve 1.0 ml mikropipetler ve uçlar (2) 100 ml 0.15M Normal Tuz. (3) +37 C ayarlanabilen su banyosu ya da inkübatör. (4) Örnek dilusyonu için tüpler. (5) Plate yıkama ekipmanları. (6) ELISA Mikro Plate Okuyucu: İkili dalgaboyu 450nm ile referans dalgaboyu olarak 620-690nm, bant genişliği 10nm *1 (7) Temiz su: distile ya da deiyonize. (8) Opsiyonel olarak tam otomatik EIA mikroplate analizör. Kullanıcı otomatik EIA mikro-plate analizörün kit ile validasyonlarını yapmalıdır.
4.1. Kit ve İçeriğinin Saklama Koşulları * Kit/İçerik Saklama Sıcaklığı Durum Saklanabilirlik HEPAVASE MA-96 (TMB) KIT +2~+8 C Orjinal 15 ay Anti-HAV IgM Pozitif Kontrol +2~+8 C Orjinal 15 ay Anti-HAV IgM Negatif Kontrol +2~+8 C Orjinal 15 ay HAV Antijen Solusyonu +2~+8 C Orjinal 15 ay Örnek Diluent +2~+8 C Orjinal 16 ay Anti-human IgM Plate +2~+8 C Orjinal 15 ay 2 ay Anti-HAV Peroxidase Konjugat +2~+8 C Orjinal 15 ay Solusyonu Konsantre Yıkama Solusyonu D +2~+8 C Orjinal 24 ay (20X) 20X Seyreltilmiş Yıkama Solusyonu Oda Sıcaklığı Seyreltilmiş 2 gün +2~+8 C Seyreltilmiş 1 hafta TMB Substrat Solusyonu A +2~+8 C TMB Substrat Solusyonu B +2~+8 C 2N Sülfirik Asit Oda Sıcaklığı Orjinal Orjinal Orjinal 24 ay 24 ay 24 ay 5. Kullanma Talimatı 5.1. Uyarı 5.1.1. Bu kit sadece prosefyonel kullanım içindir. 5.1.2. 5.1.3. Bu kit sadece in-vitro teşhis içindir. 5.1.4. Kullanmadan önce bütün reaktifleri ve numuneleri oda ısısına çıkarın (20-30ºC) ve dikkatlice karıştırın. Reaktifleri son kullanma tarihinden sonra kullanmayınız. 5.1.5. Farklı lottaki reaktifleri karıştırmayınız.
5.1.6. Ağızla pipetleme yapmayınız. 5.1.7. Örneklerin veya reaktiflerin kullanıldığı bölgede yemek yemeyiniz ya da sigara içmeyiniz. 5.1.8. Tüm kit içeriğinin ve örneklerin potansiyel sağlık riski taşıdığını göz önünde bulundurunuz. Kullanımları ve atılımları laboratuvarınızın güvenlik prensiplerine gore yapılmalıdır. Bazı güvenli ürünler koruyucu eldiven giyilmesini ve aerosol kullanımından kaçınılmasını gerektirebilir. 5.1.9. Enfeksiyonlu numuneler ve asit ihtiva etmeyen maddeler döküldüğünde %5 sodyum hipoklorid ile temizlenmelidir ya da sizin daha önceden biyo-zararlı ürünler için uygulamakta olduğunuz uygulamalar ile temizlenmelidir. 5.1.10. Bütün atık materyalleri atılmadan önce uygun olarak dezenfekte edilmelidir. Hem sıvı hem de katı faz en az 1 saat 121ºC de otoklavlanmalıdır. Katı faz aynı zamanda yakılabilir. Asitsiz likit atık %1 son konsantrasyona karşı seyreltilmiş sodium hipoklorid ile kullanılabilir. Asit içeren likit atıklar yukarıda belirtilen şekilde kullanılmadan önce nötralize edilmeli ve etkili dezenfeksiyon elde etmek için 30 dakika beklenmelidir. 5.1.11. 2N Sülfirik Asit; deri, gözler, solunum yolu ve mukoz membranlar için tahriş edicidir. 2N Sülfirik asitin deri ve mukoz membranlar ile temasından kaçınınız. Temas etmesi halinde bol miktarda su ile yıkayınız. İnhalasyonu olması halinde temiz hava alınız ve ağrı hissetmeniz durumunda mutlaka doktora başvurunuz. 5.1.12. TMB substrat solusyonu A yanıcı organik çözücüler içermektedir. TMB substrat solusyonu A deri ve mukoz membranlar için tahriş edicidir. 5.2. Örnek Toplama ve Hazırlama 5.2.1. Kan alımından önce hastalarda özel bir hazırlık yapılması gerekmemektedir. Kan, Kabul görmekte olan medical yöntemler ile alınmalıdır. 5.2.2. Bu kit ile serum ve plazma kullanılabilir. Tam kan örnekleri hemolizi önlemek için hemen ayrılmalıdır. Pıhtılar (fibrin ağı, eritrositler, ) kullanımdan önce uzaklaştırılmalıdır. Örnekler kullanılmadan önce 2-8 Cde saklanmalı ve bozulmaları önlemek için ısı inaktivasyonundan kaçınılmalıdır. Uzun süreli saklamalar için -20 C nin altında dondurulmalıdır. 5.2.3. Kendi kendine buz çözücü özelliği olan soğutucular kullanılması önerilmez. 5.2.4. Dondurulmuş örnekler çalışılmadan önce tamamen çözdürülmeli ve homojen olarak karıştırılmalıdır. 5.2.5. Arka arkaya dondurup çözdürmekten kaçınınız. 5.2.6. UYARI 1. Örnekler peroksidaz aktivitesini önleyici bir AZIDE içeriği ihtiva etmemelidir. 2. Tam olarak koagüle olmamış serumlar ve mikrobiyal içeriği olan örnekler kullanılmamalıdır.
5.3. Reaktiflerin Saklama Koşulları 5.3.1. Kit 2-8 C de saklanmalıdır. Dondurmayınız. 5.3.2. Plate stripleri orjinal aliminyum folyosu açıldıkan sonra içinde kullanılmalıdır. Kullanılmayan stripler aliminyum folyo içinde saklanmalı ve ağzı sıkıca bantlanmalıdır. 5.3.3. Kullanımdan hemen sonra reaktifleri 2-8 C de saklayınız. 5.3.4. Yıkama solusyonu D (20X) konsantre, kristalleşmeyi önlemek için oda ısısında saklanmalıdır. Eğer kullanımdan önce kristal çökelme yaparsa kristallenme çözülünceye kadar 37 C su banyosu içinde bekletilmelidir. 5.4. Plate Yıkama Prosedürü 5.4.1. Yıkama Solusyonu Hazırlanması: Yıkama Solusyonu D (20X) Konsantreyi distile veya deiyonize su ile 1:20 oranında seyreltiniz. Musluk suyu kullanmayınız. 5.4.2. Plate Yıkanması: Aspire/dağıtım fonksiyonlu cihazlar ile plate yıkanması: Herbir siklusta herbir kuyucuk en az 350μl yıkama solusyonu ile 6 kez yıkanmalıdır. 5.4.3. Pleyti tersyüz ederek sıvılarını akıtınız ve absorbent kağıt üzerinde kurutunuz. Çok fazla atık yıkama solusyonu kalması test sonuçlarınızı olumsuz etkileyecektir. Uygun olmayan yıkamalar hatalı sonuçlara neden olacaktır. UYARI 5.5. Test prosedürü Test yöntemi otomatik EIA mikroplate immunoanalizörler ile uygulanabilir. Lütfen aşağıdaki prosedüre göre programları kurunuz. Kullanmadan önce tüm reaktifleri ve örnekleri oda ısısına (20-30 C) getiriniz. Su banyosu ya da inkübatörü +37±1 C ye ayarlayın. 5.5.1. 5.5.2. 3 kuyucuk Negatif control için, 2 kuyucuk Pozitif control için ve herbir örnek için birer kuyucuk ayırınız. 2 kuyucuk blank için ayırınız(bu kuyucuğa örnek ya da konjugat eklemeyiniz). Ayırdığınız 3 kuyucuğa 100 μl Negatif Kontrol, 2 kuyucuğa 100 μl Pozitif Kontrol ve örnekler için ayırdığınız kuyucuklara 100 μl Örnek Diluent ekleyiniz. 5.5.3 Herbir örnek için 1+200 seyreltme yapınız: Örneklere verdiğiniz numaralara gore seyreltme için tüplere de numaralar veriniz. Herbir tüpe 1.0 ml %.0 9 Tuz Solusyonu(serum fizyolojik) ve 5 μl örnek koyunuz ve çalkalayarak karıştırınız. 5.5.4. Örnek Diluent içeren kuyucuklara 5 μl seyreltilmiş örnek ekleyiniz. 5.5.5. Pleyti yavaşça sallayınız. 5.5.6 Pleyti yapışkan slip ile kaplayınız. Reaksiyon pleytini +37±1 C deki su banyosunda ya da inkübatörde 1 saat inkübe ediniz. 5.5.7. 5.5.8. İnkübasyon periyodunun sonunda yapışkan slipi çıkarıp atın ve 5.4)de belirtilen pleyt yıkama prosedürüne gore pleyti yıkayınız. 5.5.9. Blank kuyucukları hariç tüm kuyucuklara 50 μl Hepatit A Virus Antijen Solusyonu ve 50 μl Anti-HAV Peroxidase Konjugat Solusyonu ekleyiniz. Yeni bir yapışkan slip ile kaplayınız. Reaksiyon pleytini +37±1 C deki su banyosunda ya da inkübatörde 1 saat inkübe ediniz. 5.5.10. 5.5.11. İnkübasyon periyodunun sonunda yapışkan slipi çıkarıp atın ve 5.4)de belirtilen pleyt yıkama prosedürüne gore pleyti yıkayınız. 5.5.12. Renk gelişimi için aşağıdaki iki yöntemden birini seçiniz: NOT: TMB Substrat Solusyon A renksiz veya açık mavi renkli olmalıdır.aksi takdirde dökülmelidir. TMB Substrat Solusyonu A ve B nin karışımı miks hazırlandıktan sonraki 30 dakika içinde uygulanmalıdır. Miks solusyon yoğun ışıktan uzak tutulmalıdır. Kullanmadan önce temiz bir kapta TMB Substrat Solusyonu A ve B yi eşit miktarlarda karıştırınız. İki blank kuyucuğu da dahil olmak üzere herbir kuyucuğa
100 μl karıştırdığınız mix solusyondan ekleyiniz. A. B. İki blank kuyucuğu da dahil olmak üzere herbir kuyucuğa önce 50μl TMB Substrat Solusyonu A, sonra 50μl TMB Substrat Solusyonu B ekleyiniz. Dikkatlice pleyti çalkalayınız 5.5.13 Pleytin üzerini siyah kapak ile kapatıp oda sısında 30 dakika bekletiniz. 5.5.14 Reaksiyonu durdurmak için blank de dahil herbir kuyucuğa 100 µl 2N H2SO4 eklenmelidir. 5.5.15 Hassas bir spektrofotometre ile 15 dakika içinde kontrollerin ve test örneklerinin 450/620-690nm de absorbanslarını ölçünüz *1. İlk blank kuyucuğu için blank spektrometre uygulayınız. *1. NOT: Blankin rengi renksizden açık sarıya dönmelidir; aksi takdirde test sonuçları geçersizdir. Bu durumda test tekrar edilmelidir. 5.6. Sonuçların Değerlendirilmesi 5.6.1. NCx Hesaplanması (Negatif Kontrol Absorbansı). Örnek: Örnek No. Absorbans 1 0.080 2 0.085 3 0.079 NCx = (0.080+0.085 + 0.079) / 3 = 0.081 NCx 0.2 olmalı, aksi takdirde test geçersizidir. 5.6.2. PCx Hesaplanması (Pozitif Kontrol Absorbansı) Örnek: Örnek No. Absorbans 1 1.223 2 1.205 PCx = (1.223 + 1.205) /2 = 1.214 PCx 0.5 olmalı, aksi takdirde test geçersizidir. 5.6.3. P-N Değeri Hesaplanması P-N = PCx - NCx Örnek: P - N = 1.214 0,081 = 1,133 P - N Değeri 0.3 olmalı, aksi takdirde test geçersizidir. 5.6.4. Cutoff Değeri Hesaplanması Cutoff Değeri = NCx + (PCx)/4 Örnek: Cutoff Değeri = 0.081+(1.214/4) = 0.385 5.6.5. Yeniden Test Aralığı Hesaplanması Yeniden Test Aralığı = Cutoff Değeri ±10% Örnek: Cutoff Değeri = 0.385 Yeniden Test Aralığı = (0.385-0.039) dan (0.385 +0.039) = 0.346 dan 0.424 5.7. Test Sonuçlarının Geçerliliği 5.7.1. NCx 0.2 olmalı, aksi takdirde test geçersizidir. 5.7.2. PCx 0.5 olmalı, aksi takdirde test geçersizidir. 5.7.3. P-N Değeri 0.3 olmalı, aksi takdirde test geçersizidir. 5.8. Sonuç Yorumlama 5.8.1. O.D. değeri Cutoff değerinden YÜKSEK olan örnekler Anti-HAV IgM için NEGATİF olarak kabul edilir. 5.8.2. O.D. değeri Cutoff değerinden DÜŞÜK olan örnekler Anti-HAV IgM için POZİTİF olarak kabul edilir. 5.8.3. Eğer O.D./cut-off oranı yeniden test aralığı içinde ise test tekrar edilmelidir ve yukarıdaki gibi değerlendirilmelidir.
5.9. Sorun Giderme Eğer sonuç alınamazsa aşağıdaki sorun giderme maddelerini kontrol ediniz: 5.9.1. Yanlış yıkama prosedürü uygulanması. 5.9.2. Pozitif örnekler ile kontaminasyon. 5.9.3. Örnek, konjugat ya da substrattan yanlış miktarlarda uygulama. 5.9.4. Kuyucuk kenarının konjugat ile kontamine olması. 5.9.5. Örneğin; sediment içeren örnek, hemolize olmuş serum ya da plazma gibi yanlış örneklerin kullanılması ya da kullanımdan önce örneklerin iyi karıştırılmaması. 5.9.6. Yanlış inkübasyon zamanı ya da sıcaklığı uygulanması. 5.9.7. Aspiratör/dağıtıcı cihazların başlıklarının ya da iğnelerinin tıkanması. 5.9.8. Yetersiz aspirasyon. 5.10. Sınırlamalar ve Engellemeler 5.10.1. Bu reaktif kiti sadece insan serumu ve plazması için kullanılır. 5.10.2. 5.10.3. 5.10.4. Teknisyenden ya da bozuk cihazlardan kaynaklanan büyük teknik hatalardan ötürü her enzim immunotest kiti ile tekrar edilemez yanlış pozitif sonuçlar alınabilir. Bu reaktif kiti kadavra örnekleri için kullanıma uygun değildir. Çeşitli Karışımlar: 1. Heparin, sitrat ve EDTA gibi antikoagülantlar test sonuçlarını etkilememektedir. 2. 8.0 g/l den yüksek hemoglobin miktarı test sonuçlarını etkilememektedir. 3. 0.3 g/l den yüksek bilirubin test sonuçlarını etkilememektedir. 4. 5.0 g/l den yüksek triglyceride test sonuçlarını etkilememektedir. 5. Romatoid faktörü yüksek pozitif örnekler yanlış pozitif sonuçlara neden olmaktadır. 6. Hamilelik test sonuçlarını etkilememektedir.
5.11. Performans Özellikleri 5.11.1. Diagnostik Duyarlılık 1. Hastaneye yatırılan hasta örnekleri: GBC HEPAVASE MA-96 (TMB) ve Diagnostik negatif pozitif Toplam Özgünlük Karşılaştırma Testi Negatif 1378 0 1378 Pozitif 4 188 192 toplam 1382 188 1570 Diagnostik duyarlılık = 100% x 188/192 = 98% Diagnostik özgünlük = 100% x 1378/1378=100% 2. Akut hepatit A olan hastalar: GBC HEPAVASE MA-96 (TMB) negatif pozitif Toplam Karşılaştırma Testi Negatif 51 0 51 Pozitif 0 0 0 toplam 51 0 51 Uygunluk = 100% 3. Nekahat döneminde olan Hepatit A hastaları: GBC HEPAVASE MA-96 (TMB) negatif pozitif Toplam Karşılaştırma Negatif 28 0 28 Testi Pozitif 0 0 0 toplam 28 0 28 Uygunluk = 100% 4. Hepatit A taşıyıcıları: GBC HEPAVASE MA-96 (TMB) negatif pozitif Toplam Karşılaştırma Negatif 107 0 107 Testi Pozitif 0 0 0 toplam 107 0 107 Uygunluk = 100% 5. Oto-immun hastalar: GBC HEPAVASE MA-96 (TMB) negatif pozitif Toplam Karşılaştırma Negatif 20 0 20 Testi Pozitif 0 0 0 toplam 20 0 20 Uygunluk = 100%
6. HAV enfeksiyonu olan hastalar: GBC HEPAVASE MA-96 (TMB) 5.11.2. Analitik Duyarlılık negatif pozitif Toplam Karşılaştırma Negatif 19 0 19 Testi Pozitif 0 0 0 toplam 19 0 19 Uygunluk = 100% 7. Diğer viral enfeksiyonları olan hastalar: GBC HEPAVASE MA-96 (TMB) negatif pozitif Toplam Karşılaştırma Negatif 35 0 35 Testi Pozitif 0 0 0 toplam 35 0 35 Diagnostik özgünlük / Uygunluk = 100% Analitik Duyarlılık 100 GBU/ml (Lot. No.: A49C32PT) Analitik Duyarlılık = 61.7 GBU/ml Conc. (GBU/ml) OD Log (Conc.) Log (OD) 200 1.256 2.30103 0.09898964 100 0.846 2-0.07262964 50 0.385 1.69897-0.41453927 25 0.250 1.39794001-0.60205999 Cutoff 0.506 1.79003187-0.29584948 Duyarlılık (GBU/ml) 61.7 ------------- ------------ 預測 = prediction 線性 = Linearity
Linear Regresyon R 0.991195 R 2 0.982468 Adjusted R 2 0.973702 Standard error 0.051643 Number of observed value 4 5.11.3. Kesinlik Çalışma içi Çoğalma: Çalışma-içi CV% < 15 Çalışmalar arası Çoğalma: Çalışmalar-arası CV% < 20 5.11.4. İzlenebilirlik Anti-HAV IgM Pozitif Kontrol Konsantrasyonu = 800±200 GBU/ml
5.13. Test Prosedürü İş Akış Şeması HEPAVASE MA-96 (TMB) Özet Prosedürü 5 μl örneği 1 ml tuz solusyonu ile seyreltiniz. KONTROLLERİ SEYRELTMEYİNİZ. 2 Blank kuyucuğu hariç uygun kuyucuklara 100 μl Kontrollerden (3 x NC, 2x PC) ve 100 μl örnek diluent ekleyiniz. 100 μl örnek diluent içeren kuyucuklara 5 μl seyreltilmiş örnek ekleyiniz. Yapışkan slip ile kaplayınız. Pleyti +37 ±1 C de 1 saat inkübe ediniz. Pleyti yıkayınız. Blank kuyucukları tün kuyucuklara 50μl HAV Antijen Solusyonu ve 50μl Anti-HAV Peroxidase Konjugat Solusyonu ekleyiniz. Pleyti +37 ±1 C de 1 saat inkübe ediniz. Pleyti yıkayınız. (Renk gelişimi için iki enzimatik reaksiyondan birini seçiniz) / \ TMB Substrat solusyonu A ve B den eşit miktarlarda karıştırınız. Bu karışımdan herbir kuyucuğa 100 µl ekleyiniz. \ / Pleyti oda ısısında 30 dakika inkübe ediniz. Herbir kuyucuğa 100μl 2N H2SO4 ekleyiniz. Herbir kuyucuğa önce 50 µl TMB substrat solusyonu A, sonra 50 µl TMB substrat solusyonu B ekleyiniz. Pleyti dikkatlice sallayınız. 450 nm de ve referans dalga boyu olarak 620-690 nmde absorbanslarını ölçün. *1.
6. Referanslar: 1. Melnick JL. History and epidemiology of hepatitis A virus. J Infect Dis 1995;171(Suppl 1):2-8. 2. Koff RS. Hepatitis A. Lancet 1998;341:1643 49. 3. Lemon SM, Binn LN. Serum neutralizing antibody response to hepatitis A virus. J Infect Dis. 1983;148: 1033-1039. 4. Duermeyer W, Van der Veen J, Koster B. ELISA in Hepatitis A. Lancet. 1978; 1(8068):823-824. 5. Bower WA, Nainan OV, Han X, Margolis HS. Duration of viremia in hepatitis A virus infection. J Infect Dis. 2000;182:12-17. 6. Craig AS, Schaffner W. Prevention of hepatitis A with the hepatitis A vaccine N Engl J Med 2004; 350:476-481 7. The reference wavelength of spectrometer can be 620nm to 690nm. However, user should validate the photometer in combination with this kit before use. *1 Spektrometrenin referans dalga boyu 620nm ile 690nm olmalıdır. Ayrıca, kullanıcı kullanım öncesi bu kit ile birlikte spektrometre valide edilmelidir. Symbols Key / Symbolschlüssel / Erklärung des Symbols / Interpretazione simboli / Clave dos Simbolos / İşaret Açıklamaları Manufacturer / Hersteller / Fabricante / Fabbricante / Fabricant / Fabricante / Üretici In Vitro Diagnostic Medical Device / In-Vitro-Diagnostikum / Producto sanitario para diagnóstico in vitro / Dispositivo medico-diagnostico in vitro / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / İn-vitro Diagnostik Tıbbi Bakım Batch code / Chargenbezeichnung / Código de lote / Codice del lotto / Code du lot / Código do lote / Parti Kodu Use By / Verwendbar bis / Fecha de caducidad / Utilizzare entro / Utiliser jusque / Prazo de validade / İle kullanım Temperature limitation / Temperaturbegrenzung / Límite de temperatura / Limiti di temperatura / Limites de température / Limites de temperatura / Sıcaklık Limitleri CE Mark / CE-Zeichen / Marquage CE / Marchio CE / CE Marca / Marca CE / CE İşareti Catalogue number / Bestellnummer / Número de catálogo / Numero di catalogo / Référence du catalogue / Referência de catálogo / Katalog Numarası Consult Instructions for Use- / Gebrauchsanweisung beachten / Consulte las instrucciones de uso / Consultare le istruzioni per l'uso / Consulter les instructions d'utilisation / Consulte as instruções de utilização / Kullanım için Danışma Bilgileri