In vitro Diagnostik Kullanım İçindir BD MAX Sistemi ile kullanım içindir Türkçe 4 I

Transkript

1 MAX Cdiff In vitro Diagnostik Kullanım İçindir P0215(02) BD MAX Sistemi ile kullanım içindir Türkçe 4 I KULLANIM AMACI BD MAX System'de (BD MAX Sistemi) yapılan BD MAX Cdiff assay (BD MAX Cdiff testi) Clostridium difficile enfeksiyonu (CDI) olduğundan şüphelenilen hastalarda insan sıvı veya yumuşak gaita örneklerinde Clostridium difficile toksin B geninin (tcdb) direkt ve kalitatif olarak saptanması için otomatik bir in vitro diagnostik testtir. Doğrudan örnek üzerinde yapılan bu test Clostridium difficile toksin B geni DNA'sının amplifikasyonu için gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ve amplifiye edilmiş DNA'nın saptanması için hedefe spesifik florojenik hibridizasyon probları kullanır. BD MAX Cdiff assay'in CDI tanısına yardımcı olması amaçlanmıştır. PROSEDÜRÜN ÖZETİ VE AÇIKLAMASI Clostridium difficile sağlık bakımı tesislerinde antibiyotikle ilişkili diyare ve psödomembranöz kolitin önde gelen nedeni olan anaerobik, gram pozitif bir basildir. 1,2 CDI insidansı giderek artmaktadır ve şiddetli vakalar daha sık görülmektedir. 3,4,5 CDI hastalığı belirtileri hafif diyareden şiddetli kolite ve hatta bağırsak perforasyonu ve ölüme kadar gider. En sık görülen risk faktörü antibiyotiklere maruz kalmaktır. 6 Clostridium difficile enfeksiyonunun tanısı diyare gibi klinik bulgular ve belirtiler ile laboratuvar veya patoloji testlerini temel alır. Toksijenik Clostridium difficile laboratuvar tanısı arasında anaerobik kültür ve sonrasında gaitada bulunan toksin geni/genleri veya enzimi/enzimlerinin saptanması bulunmaktadır. 7 CDI gelişmesi için toksin B'nin gerekli olduğu düşünülmektedir. 8 Doğrudan gaita üzerinde veya izole edilmiş bir Clostridium difficile suşunda yapılan doku kültürü sitotoksisite testi çok emek ister, vakit alır ve sonuçlar en erken saatte elde edilebilir. Toksin A ve B ve tüm Clostridium difficile suşlarında bulunan bir enzim olan glutamat dehidrogenazın (GDH) saptanması için şu anda çoğu klinik laboratuarda enzim immünoassay (EIA) kullanılmaktadır çünkü sonuçlar aynı gün alınabilir, testi yapması kolaydır ve nispeten ucuzdur. Ancak özellikle toksin EIA'ları için hassasiyet düşüktür ve bu durum atlanan pozitif sonuçlara yol açabilir. 7 Yakın zamanlarda toksin A ve/veya toksin B saptanması için hücre sitotoksisite ve immünoassaylere göre yüksek hassasiyet ve özgüllüğe sahip PCR yöntemleri geliştirilmiştir. 9 Ayrıca bu testler 3 saatten kısa süre içinde yapılabilir. Bu özelliklerin kombinasyonu CDI hastalarının kısa süre içinde hedeflenmiş tedavisini mümkün kılabilir ve böylece hasta sonuçları daha iyi hale getirilebilir, iyileşme süresi kısaltılabilir ve enfeksiyon kontrol uygulamaları geliştirilebilir. PROSEDÜR İLKELERİ Bir sıvı veya yumuşak gaita örneği toplanır ve laboratuvara gönderilir. Test için gaita numunesine tek kullanımlık bir 10 µl inokülasyon özesi batırılır ve ardından bir BD MAX Cdiff Sample Buffer Tube'e (BD MAX Cdiff Örnek Tampon Tüpü) konur. Örnek Tampon Tüpü bir septum kapağıyla kapatılır ve vortekslenir. Bir çalışma listesi oluşturulur ve Örnek Tampon Tüpü, BD MAX Cdiff Unitized Reagent Strip (BD MAX Cdiff Ünitize Reaktif Stripi) ve BD MAX PCR Cartridge'ı (BD MAX PCR Kartuş) BD MAX System'e yüklenir. BD MAX System'i hedef lizisi, DNA ekstraksiyonu ve konsantrasyonu dahil örnek hazırlanmasını, reaktif rehidrasyonu ve hedef nükleik asidin amplifikasyonu ve gerçek zamanlı PCR kullanılarak saptanmasını otomatik olarak gerçekleştirir. BD MAX System sonuç yorumlamasını otomatik olarak yapar. Bu test ayrıca Ekstraksiyon Tüpünde bulunan bir Örnek İşleme Kontrolü içerir. Örnek İşleme Kontrolü; DNA ekstraksiyon adımları, termal döngüleme adımları, reaktif bütünlüğü ve inhibe edici maddelerin varlığını izler. Enzimatik hücre lizisi sonrasında serbest kalan nükleik asitler manyetik boncuklarda yakalanır. Bağlı nükleik asitlerin bulunduğu boncuklar Yıkama Tamponu kullanılarak yıkanır ve nükleik asitler Elüsyon Tamponunda ısı ile elüsyona uğratılır. Elüe edilmiş DNA, Nötralizasyon Tamponu kullanılarak nötralize edilir ve PCR reaktiflerinin rehidrasyonu için Master Mix içine aktarılır. Rekonstitüsyon sonrasında, BD MAX System BD MAX PCR Cartridge'a ekstrakte edilmiş nükleik asitler içeren, PCR için sabit bir hazır solüsyon hacmi verir. BD MAX PCR Cartridge'daki mikrovalfler PCR başlamadan önce amplifikasyon karışımını sınırlamak ve böylece buharlaşma ve kontaminasyonu önlemek için sistem tarafından mühürlenir. 1

2 Amplifiye DNA hedefleri, bir uçta söndürücü kısım ve öteki uçta bir floresan raportör boya (florofor) ile etiketlenmiş hidroliz (TaqMan) problarıyla saptanır. Farklı floroforlarla etiketlenmiş problar BD MAX System'in iki farklı optik kanalında tcdb ve Örnek İşleme Kontrolü amplikonlarını saptamak üzere kullanılır: Problar doğal durumundayken florofor floresansı söndürücüye yakınlığı nedeniyle söndürülür. Ancak hedef DNA varlığında problar tamamlayıcı sekanslarına hibridize olur ve DNA polimerazın, DNA şablonu boyunca yeni oluşan iplikçiği sentezlerken 5' 3' ekzonükleaz aktivitesi ile hidrolize uğrar. Bunun sonucunda floroforlar söndürücü moleküllerden ayrılır ve floresan yayılır. BD MAX Cdiff assay için kullanılan iki optik kanalda saptanan floresans miktarı doğrudan hidrolize uğrayan, karşılık gelen prob miktarıyla orantılıdır. BD MAX System, bu sinyalleri her PCR döngüsünde izler ve program sonunda verileri son bir sonuç sağlamak üzere yorumlar. REAKTİFLER VE MATERYALLER REF İçindekiler Miktar BD MAX Cdiff Master Mix tcdb'ye spesifik moleküler prob ve primerlerle birlikte Örnek İşleme Kontrolüne spesifik 24 test moleküler prob içeren kurutulmuş PCR Master Mix. BD MAX Cdiff Strips Örnek işleme ve DNA ekstraksiyonu için gerekli tüm sıvı reaktifler ve tek kullanımlık pipet 24 test uçlarını içeren Ünitelendirilmiş Reaktif Stribi. BD MAX Cdiff Extraction Tube (Ekstraksiyon Tüpü) DNA manyetik afinite boncukları, Akromopeptidaz ve Örnek İşleme Kontrolü içeren 24 test dondurularak kurutulmuş pelet. BD MAX Cdiff Sample Buffer Tube 24 test Septum Kapağı 25 GEREKLİ FAKAT SAĞLANMAMIŞ EKİPMAN VE MALZEMELER BD MAX PCR Cartridges (BD MAX PCR Kartuşları) (BD Diagnostic Systems Katalog no ) VWR Multi-Tube Vortexer (VWR katalog no ) Vortex Genie 2 (VWR katalog no ) veya eşdeğeri NALGENE Cryogenic Vial holder (VWR, katalog no ) Tek kullanımlık inokülasyon özeleri (10 µl) Tek kullanımlık eldivenler, pudrasız Sıvı veya yumuşak gaita örnekleri toplamak için kuru, temiz kaplar Harici Kontroller için kültür yapılırsa: Anaeroblar için önceden redüklenmiş agar plakası (örn. Brusella Agarı; %5 koyun kanlı, hemin ve vitamin K1 eklentili, BD BBL katalog no ) UYARILAR VE ÖNLEMLER BD MAX Cdiff assay in vitro Diagnostik kullanım içindir. Bu ürün sadece BD MAX System'de kullanılabilir. Son kullanma tarihi geçmiş reaktifler ve/veya materyalleri kullanmayın. Varışıyla birlikte dış kartonu mühürleyen etiket bozulmuşsa kiti kullanmayın. Koruyucu poşetler geldiklerinde açık veya yırtıksa reaktifleri kullanmayın. Reaktifleri reaktif poşetleri içinde kurutucu yoksa veya açılmışsa kullanmayın. Reaktif poşetlerinden kurutucuyu çıkarmayın. Reaktiflerin koruyucu poşetini her kullanımdan sonra fermuar şeklinde kapanan mühürle hemen kapatın. Mühürlemeden önce varsa poşetlerdeki fazla havayı giderin. Reaktifleri ısıya ve neme karşı koruyun. Neme uzun süre maruziyet ürün performansına etki edecektir. Reaktifleri folyo bozulmuş veya hasarlıysa kullanmayın. Farklı poşetler ve/veya kitler ve/veya lotlardan reaktifleri karıştırmayın. Kontaminasyon oluşacağından ve test sonuçlarını olumsuz etkileyebileceğinden kapakları birbirleriyle değiştirmeyin veya tekrar kullanmayın. Ünitelendirilmiş Reaktif Stripleri uygun sıvı dolması için kontrol edin (sıvıların tüplerin alt kısmında olmasını sağlayın) (bkz. Şekil 1). Tüm pipet uçlarının var olduğundan emin olmak için Ünitelendirilmiş Reaktif Striplerini kontrol edin (bkz. Şekil 1). Master Mix ve Extraction Tube barkod okunabilirliği bozulabileceğinden kimyasal solüsyonları kullanırken dikkatli davranın. Bu testin düzgün yapılması için uygun laboratuvar tekniği şarttır. Testin yüksek analitik hassasiyeti nedeniyle tüm malzeme ve reaktiflerin saflığını korumak için büyük dikkat gösterilmelidir. Laboratuvarın aynı genel alanında diğer PCR testlerinin yapıldığı durumlarda BD MAX Cdiff assay, test için gereken herhangi bir ek reaktif ve BD MAX System'in kontamine olmamasına dikkat edilmelidir. Her zaman reaktiflerin mikrobiyal ve deoksiribonükleaz (DNase) kontaminasyonundan kaçının. Reaktifler ve kartuşlar kullanılmadan önce eldivenler değiştirilmelidir. Amplikonlu ortamların kontaminasyonunu önlemek için kullandıktan sonra BD MAX PCR Cartridges'u parçalarına ayırmayın. BD MAX PCR Cartridges mühürleri kontaminasyonu önleyecek şekilde tasarlanmıştır. Çapraz kontaminasyon riskinin en aza indirilmesi için laboratuvarda rutin olarak çevrenin izlenmesi gerekmektedir. BD MAX Microfluidic Cartridges (Mikrofluidik Kartuşları) en çok 2 çalışma için kullanılabilir. 2

3 BD MAX Cdiff assay'in önerilen süre aralıklarının dışına çıkması geçersiz sonuçlara neden olabilir. Belirtilen süreler içinde yapılmayan testler tekrarlanmalıdır. Yerel, bölgesel ve/veya ulusal yönetmelikler veya sertifikasyon sağlayan kurumların gereklilikleri veya kılavuz ilkelere göre ek kontroller test edilebilir. Örnekleri her zaman bulaşıcı olabilirlermiş gibi ve CLSI Belgesi M29 10 'da ve Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories de tanımlandığı şekilde güvenli laboratuvar prosedürlerine göre kullanın. 11 Tüm reaktifleri kullanırken koruyucu giysiler ve tek kullanımlık eldivenler kullanın. Testi yaptıktan sonra ellerinizi iyice yıkayın. Ağzınızla pipetlemeyin. Örneklerin veya kit reaktiflerinin kullanıldığı yerlerde sigara içmeyin ve bir şey yemeyin ve içmeyin ve çiğnemeyin. Kullanılmamış reaktifleri ve atığı ulusal, bölgesel ve yerel yönetmeliklere göre atın. Ek uyarılar, önlemler ve işlemler için BD MAX System Kullanıcı El Kitabına 12 başvurun. SAKLAMA VE STABİLİTE Numuneler taşıma sırasında 2 ile 25 C arasında tutulmalıdır. Donmaya veya aşırı sıcağa maruz kalmaya karşı koruyun. Örnekler test yapılmasından önce 2 8 C'de 5 güne kadar veya 2 25 C'de 48 saate kadar saklanabilir. BD MAX Cdiff assay bileşenleri 2 25 C'de belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Son kullanma tarihi geçmiş bileşenleri kullanmayın. BD MAX Cdiff Master Mix ve Extraction Tubes mühürlenmiş poşetlerde sağlanır. Ürünü nemden korumak için açtıktan hemen sonra tekrar mühürleyin. Reaktif tüpleri, ilk açma ve tekrar mühürlenmesinden sonra 2 25 C'de 7 güne kadar stabildir. KULLANIM TALİMATLARI Numune Toplama/Nakil Yeterli bir örnek almak için örnek toplama işlemi yakından izlenmelidir. Kuru, temiz bir kap kullanılarak sıvı veya yumuşak gaita örnekleri şu işleme göre toplanır: 1. Sıvı veya yumuşak gaitayı (ama idrarı değil) kaba aktarın. Örnekle tuvalet kağıdı, su veya sabun karıştırmaktan kaçının. 2. Kabı etiketleyin. 3. Kabı laboratuvara hastanenin standart işletim prosedürlerine göre gönderin ( Saklama ve Stabilite kısmına bakınız). Numune Hazırlama NOT: Test edilecek her örnek ve her Harici Kontrol için bir (1) Örnek Tampon Tüpü, bir (1) Septum Kapağı, bir (1) Master Mix, bir (1) Ekstraksiyon Tüpü ve bir (1) Unitized Reagent Strip gereklidir. Gereken sayıda malzemeyi koruyucu poşetlerinden veya kutularından çıkarın. Açılmış Master Mix veya Extraction Tube torbalarını saklamak için fazla havayı çıkarın ve poşetleri fermuar şeklinde kapanan mührü kullanarak kapatın. 1. Bir barkod etiketli Örnek Tamponu Tüpünü (saydam kapak) barkodların üzerini etiketlemeden veya yazmadan veya gizlemeden uygun örnek tanımlamayla etiketleyin. 2. Örneği yüksek hızda 15 saniye boyunca vorteksleyin ve test için gaita materyaline bir 10 µl inokülasyon özesini batırın. Yumuşak gaita örnekleri için yaklaşık 10 µl almak üzere özenin dış kısmında bulunan herhangi bir fazla gaitayı giderin. 3. Kapağı Örnek Tampon Tüpünden çıkarıp özeyi sıvıya yerleştirin. Örneği tüpe bırakmak üzere özeyi parmaklar arasında yuvarlayın. 4. Tüpü bir Septum Kapağıyla mühürleyin. 5. Örnek Tampon Tüpünü bir NALGENE Cryogenic Vial (NALGENE Kriyojenik Flakon) tutucuya yerleştirin. 6. Varsa test için ek örnekleri Adım 1 5'i tekrarlayarak hazırlayın ve sonra hemen adım 7'ye geçin. 7. Tüm hazırlanmış örnekleri aynı anda Çoklu Tüp Vorteksleyici ile bir (1) dakika boyunca maksimum hızda vorteksleyin. BD MAX Cdiff assay vorteksleme adımından hemen sonra yapılmalıdır. 3

4 BD MAX System'in Çalışması NOT: Ayrıntılı talimat için BD MAX System Kullanıcı 12 El Kitabına başvurun (Çalıştırma kısmı). NOT: BD MAX Cdiff assay yukarıdaki vorteksleme adımından hemen sonra yapılmalıdır (Örnek Hazırlama, Adım 7). Yeniden test etmek gerekirse örnekleri yeniden vorteksleyin. 1. BD MAX System'in gücünü açın (daha önce yapılmadıysa) ve <user name> (kullanıcı adı) ve <password> (şifre) girerek oturum açın. 2. Reaktifler ve kartuşlar kullanılmadan önce eldivenler değiştirilmelidir. 3. BD MAX Cdiff kitinden gerekli sayıda Ünitelendirilmiş Reaktif Stribi çıkarın. Her stripi, tüm sıvıların tüplerin alt kısmında olmasını sağlayacak şekilde sert bir yüzeye hafifçe vurun. 4. Gerekli sayıda Ekstraksiyon Tüpü/Tüpleri ve Master Mix Tüpü/Tüplerini koruyucu poşetlerinden çıkarın. Fazla havayı çıkarın ve poşetleri fermuar şeklinde kapanan mühür ile kapatın. 5. Test edilecek her örnek için bir (1) Ünitelendirilmiş Reaktif Stribi BD MAX System Rack üzerine, Raf A'nın 1. Pozisyonuyla başlayarak yerleştirin. 6. Bir (1) Ekstraksiyon Tüpünü (beyaz folyo) Şekil 1'de gösterildiği gibi her Ünitelendirilmiş Reaktif Stribinde Pozisyon 1 içine tıklatarak oturun. 7. Bir (1) Master Mix Tube'ü (yeşil folyo) Şekil 1'de gösterildiği gibi her Ünitelendirilmiş Reaktif Stribinde Pozisyon 2 içine tıklatarak oturun. Şekil 1: BD MAX Cdiff Extraction Tubes ve Master Mix Tubes'ü (Ekstraksiyon Tüpleri ve Ana Karışım Tüpleri) Ünitelendirilmiş Reaktif Striplerine tıklatarak oturtun. 8. Run (Çalıştır) simgesine tıklatın ve barkodu tarayıcıyla tarayarak veya manuel giriş yaparak (lot izlenebilirliği için) BD MAX Cdiff assay için kit lot numarasını girin. NOT: Adım 8'i her yeni kit lot kullanıldığında tekrarlayın. 9. Çalışma Listesi'nde gezinin. Aşağı açılan menüyü kullanarak <BD MAX Cdiff 56> öğesini seçin. 10. Çalışma Listesine Örnek Tampon Tüpü Kimliği, Hasta Kimliği ve Erişim Numarasını (varsa) barkodu tarayıcıyla tarayarak veya manuel olarak girin. 11. Aşağı açılan menüden uygun kit lot numarasını seçin (dış kutuda bulabilirsiniz). 12. Geriye kalan tüm Sample Buffer Tube'leri için 9 11'e kadar olan adımları tekrarlayın. 13. Sample Buffer Tube'lerini adım 5 ila 7'de belirtildiği gibi ilgili Ünitelendirilmiş Reaktif Striplerine karşılık gelen BD MAX System Rack(lar) içine yerleştirin. NOT: Sample Buffer Tube'lerini, 1D barkod etiketleri dışarıya bakacak şekilde (böylece örnek kaydedilirken Sample Buffer Tube'leri daha kolay taranabilir) örnek rafına/raflarına yerleştirin. 14. BD MAX Sistemi'ne gereken sayıda BD MAX PCR Kartuşu/Kartuşları yerleştirin (bkz. Şekil 2). Her kartuş toplam 24 örnek için 12 adede kadar örneklik 2 çalışmayı alır. BD MAX System her çalışma için PCR Kartuşunda pozisyon ve sırayı otomatik olarak seçer. BD MAX PCR Cartridges tüm şeritler kullanılıncaya dek birden fazla kullanılabilir. BD MAX PCR Cartridges'ın kullanımını maksimuma çıkarmak için, 2000 Sample Mode'u kullanarak, şerit atamaları için Worklist (Çalışma listesi) sekmesinin altında Run Wizard'ı (Sihirbazı Yürüt) seçin. Daha fazla ayrıntı için BD MAX System Kullanıcı El Kitabına başvurun. 4

5 Şekil 2: BD MAX PCR Kartuşlarını Yükleyin 15. Rakı/rakları BD MAX System'e yükleyin (Şekil 3). Taraf A Taraf B Şekil 3: Rakı/Rakları BD MAX System'e yükleyin. 16. BD MAX System kapağını kapatın ve işleme başlamak için <Start> (Başlat) öğesine tıklayın. 17. Çalışma sonunda, sonuçları hemen kontrol edin veya Sample Buffer Tube leri 2 8 C'de 5 güne kadar VEYA 25 ± 2 C'de sonuçlar kontrol edilinceye kadar maksimum 5 saat saklayın. NOT: Bir çalışma sırasında bir septum kapağı hasar görmüşse örneği saklamadan önce yenisiyle değiştirin. NOT: Hazırlanmış BD MAX Cdiff Sample Buffer Tube leri, örnek, Sample Buffer Tube'üne eklendikten sonra 2 8 C'de maksimum 120 sa (5 gün) VEYA 25 ± 2 C'de maksimum 5 sa saklanabilir. Bir IND (Belirsiz), UNR (Çözümlenmemiş) veya INC (Eksik) sonuç elde edildiğinde veya bir Harici Kontrol hatası oluştuğunda bu zaman çerçevesi içinde hazırlanan Sample Buffer Tube'ten bir test tekrarı yapılmalıdır ( Tekrar Test Prosedürü kısmına bakın). 5

6 KALİTE KONTROLÜ Kalite kontrol prosedürleri test performansını izler. Laboratuvarlar, tüm analitik sürecin etkililiğini izlemek için yerel, bölgesel, eyalet, ulusal ve/veya ülke yönetmeliklerinin ya da sertifikasyon sağlayan kurumların kılavuz ilkelerine veya gerekliliklerine göre kontrol malzemelerinin sayısını, türünü ve test edilme sıklığını ortaya koymalıdır. Genel Kalite Kontrolü rehberliği için CLSI MM03 ve EP12. 13,14 kısımlarına bakabilirsiniz. 1. Harici Kontrol materyallerini BD sağlamaz. BD MAX System yazılımında örnek test sonucunu yorumlamak amacıyla Harici Pozitif veya Negatif Kontroller kullanılmaz. Harici kontroller hasta örnekleriymiş gibi ele alınır. (Harici Kontrol test sonuçlarının yorumlanması için Sonuçların Yorumlanması bölümündeki Tablo 1'e bakın.) 2. Bir (1) Harici Pozitif Kontrol ve bir (1) Harici Negatif Kontrol her bir laboratuvar düzeninde BD MAX System'de yeterli işlem doğrulama elde edilinceye kadar en azından günlük olarak çalışılmalıdır. Kontrol testinin azaltılmış sıklığı ilgili yönetmeliklere uygun olmalıdır. Harici Pozitif Kontrolün önemli reaktif hatası açısından izlemesi amaçlanır. Harici Negatif Kontrol hedef nükleik asitlerle ayıraç veya çevresel kontaminasyonu (veya taşımayı) saptamak üzere tasarlanmıştır. 3. Kullanıcının laboratuvar kalite kontrol programı için en uygun kontrolü seçmesini mümkün kılmak üzere çeşitli tiplerde harici kontroller önerilir. a. Harici Negatif Kontrol: Ticari olarak mevcut kontrol malzemesi [örn., toksijenik olmayan Clostridium difficile (ATCC )] suşu veya daha önce toksijenik olmadığı ya da toksijenik negatif olduğu nitelendirilmiş bir örnek Clostridium difficile. BD, kontrol preparatının sonucu olarak kontaminasyon potansiyelini azaltmak için Harici Negatif Kontrol'ün Harici Pozitif Kontrol'den önce hazırlanmasını önerir. b. Harici Pozitif Kontrol: Ticari olarak mevcut kontrol malzemesi [örn., tcdb genini taşıyan bir Clostridium difficile (ATCC 43255)] ya da toksijenik olduğu bilinen ya da toksijenik pozitif olarak nitelendirilmiş bir örnek Clostridium difficile. Harici Kontrol süspansiyonlarının hazırlanması için, izolatların salin solüsyonda 0.5 McFarland (~1 X 10 7 CFU/mL) turbiditede yeniden süspanse edilmesi önerilir. ~3,3 X 10 5 CFU/mL nihai süspansiyon elde edecek şekilde salin içinde seri dilüsyonlar gerçekleştirin ve karşılık gelen Sample Buffer Tube'ü bakteriyel süspansiyonunun 10 µl özesi ile inoküle edin. Örnek gibi işleme koyun ve test edin (Örnek Hazırlama ve BD MAX Sisteminin Çalışması kısımlarına bakın). 4. Tüm Harici Kontroller beklenen sonuçları vermeli (Harici Pozitif Kontrol için pozitif, Harici Negatif Kontrol için negatif) ve hiç başarısız harici kontrol olmamalıdır (Çözümlenmemiş veya Belirsiz sonuçlar). 5. Pozitif test sonucu veren bir Harici Negatif Kontrol örnek kullanımına ve/veya kontaminasyon olayına işaret eder. Karışma ve/ veya kontaminasyondan kaçınmak için örnek kullanım tekniğini gözden geçirin. Negatif sonuç veren bir Harici Pozitif Kontrol bir örnek kullanımı/hazırlanması problemine işaret eder. Örnek kullanım/hazırlık tekniğini gözden geçirin. 6. Bir Çözümlenmemiş, Belirsiz veya Eksik test sonucu veren bir Harici Kontrol, bir reaktif veya BD MAX Sistemi başarısızlığına işaret eder. BD MAX Sistemi monitörünü herhangi bir hata mesajı açısından kontrol edin. Uyarı ve hata kodlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı El Kitabında 12 "Sistem Hata Özeti" kısmına başvurun. Problem devam ederse açılmamış bir poşetten reaktifler kullanın veya yeni bir test kiti kullanın. 7. Her Ekstraksiyon Tüpü bir sentetik hedef DNA dizisi içeren bir plazmid olan bir Örnek İşleme Kontrolü içerir. Testin öngörüsünü sağlayarak, işlenen numunede bulunan DNA ile birlikte Örnek İşleme Kontrolü çıkarılır, yerleştirilir ve amplifiye edilir. Örnek İşleme Kontrolü, örnek işleme adımları sırasında DNA yakalama, yıkama ve DNA elüsyonunun etkinliğini ve ayrıca PCR analizi sırasında amplifikasyonu ve saptamanın etkinliğini izler. Örnek İşleme Kontrolü sonucu kabul kriterlerini karşılayamazsa, örnek sonucu Çözülmemiş olarak rapor edilir; ancak, tüm pozitif (POS) test kiti sonuçları rapor edilir ve hiçbir hedef NEG. olarak adlandırılmaz, Çözülmemiş bir sonuç numuneyle ilişkili inhibisyonun veya reaktif hatasının bir sonucudur. Çözümlenmemiş olarak bildirilen herhangi bir numuneyi aşağıdaki Tekrar Test Prosedürü kısmına göre tekrarlayın. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Sonuçlar BD MAX Sistem monitöründe 'Results' (Sonuçlar) penceresinde 'Results' (Sonuçlar) sekmesinde bulunur. BD MAX Sistem yazılımı otomatik olarak test sonuçlarını yorumlar. Bir test sonucu hedef ve Örnek İşleme Kontrolünün amplifikasyon durumu temelinde NEG (negatif), POS (pozitif) veya UNR (çözümlenmemiş) olarak belirtilebilir. IND (belirsiz) veya INC (eksik) sonuçlar BD MAX Sistemi başarısızlığı nedeniyledir. Sonuçlar aşağıdaki karar algoritmasını temel alır. Tablo 1: BD MAX Cdiff Assay Sonuç Yorumlama Bildirilen test sonucu Cdiff POS Cdiff NEG Sonuçların Yorumlanması a tcdb geni DNA'sı saptandı tcdb geni DNA'sı saptanmadı Cdiff UNR IND INC Çözümlenmemiş hedef veya Örnek İşleme Kontrolü amplifikasyonu yok, inhibitör örnek veya reaktif başarısızlığı BD MAX System hatası nedeniyle belirlenmemiş sonuç (Uyarı veya Hata Kodlarıyla b ) Eksik Çalışma (Uyarı veya Hata Kodlarıyla b ) a BD MAX Cdiff assay sonuçları kurumsal programlar ve uygulamalarla uyumlu olarak önlem düzeyi için bir kılavuz olarak kullanılabilir. b Uyarı ve hata kodlarının yorumlanması için BD MAX System Kullanıcı El Kitabında 12 "Sorun Giderme" kısmına başvurun. 6

7 TEKRAR TEST PROSEDÜRÜ NOT: Örnek hacmi nedeniyle, Örnek Tampon Tüpünden BD MAX System'de bir tekrar test yapılması için yeterli hacim mevcuttur. Oda sıcaklığında saklanan Örnek Tampon Tüpleri için tekrar test çalışmanın sonundan sonraki 5 saat içinde yapılmalıdır. Alternatif olarak 2 8 C'de saklanan Örnek Tampon Tüplerinden tekrar testi 120 saat (5 gün) içinde yapılmalıdır. Kalan gaita örneği de 2 8 C'de saklanırsa alındıktan sonraki 5 gün veya 2 25 C'de saklanırsa 48 saat içinde tekrar test için kullanılabilir. NOT: Yeni örnekler tekrar örneklerle aynı çalışmada test edilebilir. ÇÖZÜMLENMEMİŞ SONUÇ Çözümlenmemiş sonuçlar, örnekle ilişkili inhibisyon veya reaktif başarısızlığı, uygun hedef veya Örnek İşleme Kontrolü amplifikasyonunu önlerse alınabilir. Örnek(ler) karşılık gelen Örnek Tampon Tüpünden/Tüplerinden yukarıda tanımlanan zaman çerçeveleri içinde tekrarlanabilir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX Sisteminin Çalışması bölümündeki bilgileri izleyerek tekrar başlayın. Kalan gaita örneği de yukarıda belirtilen zaman çerçevesi içinde tekrar test için kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. BELİRSİZ SONUÇ Belirsiz sonuçlar, bir Sistem hatası olması durumunda alınabilir. Örnek(ler) karşılık gelen Örnek Tampon Tüpünden/Tüplerinden yukarıda tanımlanan zaman çerçeveleri içinde tekrarlanabilir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX Sisteminin Çalışması bölümündeki bilgileri izleyerek tekrar başlayın. Kalan gaita örneği de yukarıda belirtilen zaman çerçevesi içinde tekrar test için kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. Uyarı veya hata kodu mesajlarının yorumlanması için BD MAX Kullanıcı El Kitabına 12 (Sorun Giderme kısmı) bakın. EKSİK SONUÇ Eksik sonuçlar, Örnek Hazırlama veya PCR beklenen zaman noktalarına ulaşmazsa alınabilir. Örnek(ler) karşılık gelen Örnek Tampon Tüpünden/Tüplerinden yukarıda tanımlanan zaman çerçeveleri içinde tekrarlanabilir. Örneği/örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX System'in Çalışması bölümündeki bilgileri izleyerek tekrar başlayın. Kalan gaita örneği de yukarıda belirtilen zaman çerçevesi içinde tekrar test için kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. Uyarı veya hata kodu mesajlarının yorumlanması için BD MAX Kullanıcı El Kitabına 12 (Sorun Giderme kısmı) bakın. HARİCİ KONTROL HATASI Harici Kontroller test edildiklerinde beklenen sonuçlar vermelidir. Örneklerin hatalı bir Harici Kontrol sonucu nedeniyle tekrarlanması gerekirse, örnekler Örnek Tampon Tüplerinden taze hazırlanmış Harici Kontroller ile birlikte yukarıda tanımlanan zaman çerçeveleri içinde tekrarlanmaları gerekir. Örnekleri bir (1) dakika boyunca vorteksleyin ve BD MAX Sisteminin Çalışması bölümündeki bilgileri izleyerek tekrar başlayın. Kalan gaita örneği de yukarıda belirtilen zaman çerçevesi içinde tekrar test için kullanılabilir. Örnek Hazırlama kısmından tekrar başlayın. KLİNİK NUMUNELERDEN KÜLTÜR ALINMASI Gaitalardan doğrudan tür tanımlaması yapmak için klinik örneklerden hastane işlemleri kullanılarak kültür alınabilir. PROSEDÜRÜN KISITLI OLDUĞU ALANLAR Bu ürünün sadece sıvı veya yumuşak gaitalarla kullanılması amaçlanmıştır; diğer klinik örnek tiplerinin performans özellikleri belirlenmemiştir. Bu ürün sadece BD MAX System'de kullanılabilir. Yanlış test sonuçlarının nedeni uygunsuz numune toplama, muamele veya saklama, teknik hata, örnek karışması veya örnekteki organizma sayısının testin analitik duyarlılığının altında olması olabilir. Hatalı sonuçları önlemek için prospektüs talimatı ve BD MAX Sistemi Kullanıcı El Kitabına 12 dikkatle uymak gereklidir. Bir BD MAX Cdiff pozitif test sonucu canlı organizmaların mutlaka bulunduğu anlamına gelmez. Ancak tcdb geninin varlığına işaret eder ve Clostridium difficile toksijenik organizmasının varsayılan bir şekilde saptanmasını mümkün kılar. BD MAX Cdiff assay tür tanımlama için kullanılamaz çünkü Clostridium difficile için spesifik primerler ve problar içermez. Tüm PCR tabanlı in vitro diagnostik testlerde olduğu gibi testin saptama limitinin altında çok düşük hedef düzeyleri saptanabilir ama sonuçlar tekrar edilemeyebilir. Mesalamin rektal süspansiyon lavmanı ve Gynol II* BD MAX Cdiff assay'de hafif inhibisyon yapabilir (Daha fazla ayrıntılar için Enterferans Yapan Maddeler kısmına bakınız). Tums* ve Maalox* sıvı BD MAX Cdiff assay'i inhibe edebilir (Ek ayrıntılar için Enterferans Yapan Maddeler kısmına bakınız). Yalancı negatif sonuçlar numunelerin yetersiz toplanması, taşınması veya saklanması sonucunda nükleik asit kaybı veya yetersiz bakteriyel hücre lizisi nedeniyle oluşabilir. Örnek İşleme Kontrolü teste PCR amplifikasyonu inhibitörleri içeren örneklerin tanımlanmasına yardımcı olmak üzere eklenmiştir. Örnek İşleme Kontrolü nükleik asidin örneklerin yetersiz toplanması, taşınması veya saklanması nedeniyle kaybedilip kaybedilmediğini veya bakteriyel hücrelerin yetersiz lizise uğrayıp uğramadığını belirtmez. BD MAX Cdiff assay sonuçları bazen geçersiz örnek işleme kontrolü nedeniyle Çözümlenmemiş olabilir veya Sistem arızası nedeniyle belirsiz veya eksik olabilir ve son sonuçların elde edilmesinde gecikmeye neden olabilecek şekilde tekrar test yapılmasını gerektirebilir. Primer veya prob bağlayıcı bölgelerdeki mutasyonlar veya polimorfizmler Clostridium difficile tcdb gen varyantlarının saptanmasını etkileyebilir ve BD MAX Cdiff assay ile yalancı negatif bir sonuç verebilir. 7

8 tcdb geni olmayan veya nonfonksiyonel bir Toksin B proteini olan varyant toksijenik Clostridium difficile çok nadirdir BD MAX Cdiff assay tcdb genini hedefler ve Toksin A+/Toksin B- varyant suşları saptayıp saptayamayacağı bilinmemektedir. Fazla miktarda gaita BD MAX Cdiff assay'ii inhibe edebilir. Tüm in vitro diagnostik testlerle olduğu gibi pozitif ve negatif prediktif değerler prevalansa yüksek ölçüde bağlıdır. BD MAX Cdiff assay performansı prevalansa ve test edilen popülasyona göre değişebilir. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ BD MAX Cdiff assay'in klinik performans özellikleri çok merkezli bir prospektif araştırma çalışmasında belirlenmiştir. Çalışmaya altı (6) araştırma merkezi katılmıştır. Çalışmaya katılabilmeleri için örneklerin diagnostik testlerin endike olup istendiği Clostridium difficile enfeksiyonu olan hastalardan gelmesi gerekmekteydi. Hasta başına sadece tek örnek ve sadece yumuşak veya sıvı gaitalar dahil edilmiştir. Karşılaştırmalı Referans Yöntemi Clostridium difficile suşunu izole etmek için anaerobik kültür olarak tanımlanan toksijenik bir kültürden oluşmuş ve sonra suş mevcutsa izolatın toksijenisitesi Doku Kültürü Sitotoksisite testi ile değerlendirilmiştir. Anaerobik kültür modifiye Sikloserin Sefoksitin Fruktoz Agar plaklarında yapılmıştır. Clostridium difficile'ye morfolojik olarak benzeyen ve Gram boyama, karakteristik ahır tipi koku, pozitif Pro-disk (L-prolin) testi ve çikolatalı agar plağında aero intoleransı ile doğrulanan koloniler toksijenisite açısından değerlendirilmiştir. Bu durum üretici tarafından önerildiği şekilde pişirilmiş et glukoz (CMG) broth filtratlarında yapılan toksin/antitoksin testiyle belirlenmiştir. Toksijenik kültür ve BD MAX Cdiff assay'le toplam yumuşak veya sıvı gaita örneği test edilmiştir uyumlu örnek ve bildirilebilir sonuç vardır (Tablo 2). Toksijenik kültürle karşılaştırıldığında BD MAX Cdiff testi toksijenik Clostridium difficile pozitif örneklerde %96,3'ünü ve toksijenik Clostridium difficile negatif örneklerin %92,4'ünü tanımlamıştır (Tablo 3). Tablo 2: BD MAX Cdiff Assay'le Elde Edilen Sonuçların Toksijenik Kültürle Karşılaştırılması Tüm Çalışma Merkezleri BD MAX Cdiff assay Toksijenik kültür + - Toplam Toplam Klinik Çalışma Merkezleri Tablo 3: BD MAX Cdiff Assay'le Elde Edilen Performansın Toksijenik Kültürle Karşılaştırılması Çalışma Merkezi 1 %4,3 (9/210) Çalışma Merkezi 2 %10,0 (26/261) Çalışma Merkezi 3 %8,0 (28/352) Çalışma Merkezi 4 %3,5 (17/487) Çalışma Merkezi 5 %14,4 (21/146) Çalışma Merkezi 6 %18,3 (73/399) Genel %9,4 (174/1.855) a GA: Güven Aralıkları Prevalans %95 GA a ile hassasiyet %95 GA a ile özgüllük %87,5 (7/8) (%52,9, %97,8) %100 (26/26) (%87,1, %100) %96 (24/25) (%80,5, %99,3) %90,9 (10/11) (%62,3, %98,4) %95,2 (20/21) (%77,3, %99,2) %97,3 (71/73) (%90,5, %99,2) %96,3 (158/164) (%92,2, %98,3) %94,4 (152/161) (%89,7, %97) %90,6 (213/235) (%86,2, %93,7) %93,9 (276/294) (%90,5, %96,1) %90,9 (279/307) (%87,1, %93,6) %94,3 (115/122) (%88,6, %97,2) %92 (298/324) (%88,5, %94,5) %92,4 (1.333/1.443) (%90,9, %93,6) BD MAX Cdiff assay'le test edilen yumuşak veya sıvı gaita örneği içinde 47'si (%2,9) ilk testten sonra Çözümlenmemiş olarak bildirilmiştir. Bunların otuz dördü (34)'ü tekrarlanmiş ve 26'sı tekrar test edildiğinde çözümlenmiştir. Genel olarak tekrardan sonra %0,5'i çözümlenmemiş olarak kalmıştır. Analitik Hassasiyet BD MAX Cdiff assay için analitik hassasiyet (Saptama Limiti veya LoD) şu şekilde belirlenmiştir: Simüle olarak pozitif örnekler hazırlamak için inokülasyon özeleri farklı konsantrasyonlarda ve 3 toksin tipini (0, III, VIII) temsil eden 4 Clostridium difficile suşundan hazırlanıp kantifiye edilmiş çok çeşitli Clostridium difficile bakteriyel süspansiyonlarına batırılmıştır. Her öze sonra toksijenik Clostridium difficile için negatif fekal matriksi zaten içeren bir Sample Buffer Tube'ye aktarılmıştır. Her Clostridium difficile suşu her konsantrasyonda 24 replikat olarak 2 farklı kullanıcı tarafından 3 farklı BD MAX Cdiff assay üretim lotu kullanarak çalışılmıştır. Replikatların %95'inin pozitif test edildiği en düşük konsantrasyon olarak tanımlanan analitik hassasiyet (LoD), loop başına 125 ile 265 CFU aralığında değişmiştir (Tablo 4). 8

9 Tablo 4: BD MAX Cdiff Assay'in Saptama Limiti Clostridium difficile Suşu Toksin tipi LoD (CFU/öze [%95 GA a ]) ATCC [140, 502] ATCC [82, 298] ATCC BAA-1805 III 205 [102, 412] ATCC VIII 125 [66, 235] a GA: Güven Aralığı Analitik Dahil Olma Bu çalışmaya coğrafi köken, toksin tipleri, NAP1/027/BI salgınları ve temporal farklılıklar dikkate alınarak çeşitli toksijenik Clostridium difficile suşları dahil edilmiştir. 21 ülkeyi temsil eden 23 toksin tipi içeren altmış dört (64) suş test edilmiş ve bunlara iyi karakterize edilmiş klinik izolatlar ve halka açık koleksiyonlar dahil edilmiştir. Test tüm test edilen toksijenik Clostridium difficile suşlarını doğru olarak tanımlamıştır. Analitik Özgüllük BD MAX Cdiff assay gaita örneklerinde bulunması muhtemel diğer organizmalar (bakteriler, virüsler) veya filogenetik olarak ilgili örnekleri (toksijenik Clostridium difficile dışında Clostridium) içeren örneklerle yapılmıştır. 6 Clostridium difficile suşundan altısı (6) tcdb genini taşımaz, 1 X 10 8 CFU/mL'lik bir konsantrasyonda test edilmiştir, BD MAX Cdiff assay ile negatif bir sonuç ortaya koymuştur. 30 Clostridium suşundan otuzu (30), Clostridium difficile dışında (4 Clostridium sordellii suşu dahil), 1 X 10 8 CFU/mL'lik konsantrasyonda test edilmiştir, BD MAX Cdiff assay ile negatif bir sonuç ortaya koymuştur. 98 diğer bakteriyel suşların doksan sekizi (98) (93 tür ve alt tür dahil), 1 X 10 8 CFU/mL'lik (veya ~ 1 X 10 8 genomik DNA cp/ml veya 1 X 10 8 elementary gövde/ml'lik konsantrasyonda test edilmiştir), BD MAX Cdiff assay ile negatif sonuçlar ortaya koymuştur. Virüslerden 1 X 10 5 PFU/mL konsantrasyonunda test edilen 7'sinden yedisi (7) BD MAX Cdiff assay ile negatif sonuçlar vermiştir. Enterferans Yapan Maddeler BD MAX Cdiff assay'le potansiyel enterferans açısından perianal, rektal ve/veya gaita örneklerinde bazen bulunan veya kullanılan yirmi beş (25) biyolojik ve kimyasal madde değerlendirilmiştir. İki (2) organizma da (Escherichia coli ATCC ve nontoksijenik Clostridium difficile ATCC ) bakteriyel enterferansı değerlendirmek için yüksek yükte test edilmiştir. Toksijenik Clostridium difficile negatif örnekler ve toksijenik Clostridium difficile pozitif örnekler 2 3X LoD değerinde örneklerde bulunması muhtemel olan her bileşenin en yüksek miktarı veya enterferans yapan organizmalarla test edilmiştir (her suştan 1 X 10 8 CFU/mL). Potansiyel enterferans yapıcı maddeler arasında kalsiyum karbonat (Tums*) ve ayrıca magnezyum ve alüminyum hidroksit (Maalox* sıvı) vardır. Sonuçlar her ikisi BD MAX Cdiff assay'de hafif inhibisyon gösteren (İkinci Derivativ Tepe Absis Gecikmesi) ancak beklenen test sonuçlarının halen alındığı Mesalamin rektal süspansiyon lavmanı ve Gynol II* dışında hiçbir test edilen maddeyle bildirilebilir enterferans göstermemiştir (Tablo 5). Tablo 5: BD MAX Cdiff Assay ile test edilen Endojen ve Ticari Olarak Eksojen Maddeler Marka Adı veya Açıklama Sonuç Marka Adı veya Açıklama Sonuç Nistatin NI Pepto Bismol* NI Hyderm* Hidrokortizon (krem) NI Ex-Lax* NI Gliserin supozituarlar NI Metronidazol NI Ihle Patı NI Vankomisin NI Anusol* Plus NI Polysporin* NI Preparation H* Bio-Dyne* kremli NI Naproksen NI Major Prep* fenilefrinli NI Tucks* kişisel temizlik pedleri NI Tums* I Trigliserit Karışımı (C2-C10) NI Maalox* sıvı I Palmitik asit NI Mesalamin rektal süspansiyon lavmanı a Stearik asit NI Fleet* mineral yağ lavmanı NI Kan NI Gynol II* vajinal kontraseptif (nonoksinol-9 ile) a Mukus NI Imodium AD* NI Escherichia coli + toksijenik olmayan Clostridium difficile NI I: BD MAX Cdiff assay ile enterferans. NI: BD MAX Cdiff assay ile bildirilebilir enterferans yok. a Mesalamin rektal süspansiyon lavmanı ve Gynol II* (nonoksinol-9 ile) BD MAX Cdiff assay'de hafif inhibisyon (İkinci Derivativ Tepe Absis Gecikmesi) gösterdi ancak beklenen test sonuçları halen elde edildi. 9

10 Tekrarlanabilirlik Tekrarlanabilirlik paneli aşağıdaki şekilde 5 örnek kategorisinden oluşmuştur: Orta Pozitif (MP): 2 5X LoD Düşük Pozitif (LP): 1 2X LoD Yüksek Negatif 1:10 (HN1:10): 1X LoD'nin 10 kat dilüsyonu Yüksek Negatif 1:100 (HN1:100): 1X LoD'nin 100 kat dilüsyonu Doğru Negatif Her kategorideki örnekler 5 ayrı günde üçlü olarak test edilirken her gün 2 panel 2 teknisyen tarafından 3 klinik çalışma yerinde 1 ayıraç lotu kullanılarak test edilmiştir (Çalışma Yerinden Çalışma Yerine). Genel anlaşma yüzdesi MP, LP ve Neg kategorileri için %100 ve HN1:100 ve HN1:10 kategorileri için sırasıyla %92,2 ve %50,0 negatif anlaşma olmuştur (Tablo 6). Son test sonucunu belirlemek üzere kullanılan bir dahili kriter olan İkinci Derivativ Tepe Apsisi (SDPA) test tekrarlanabilirliğini değerlendirmenin ek bir yolu olarak seçilmiştir. Varyans bileşenleri ile (SD ve %CV) genel ortalama SDPA değerleri Tablo 6'da gösterilmektedir. Category (Kategori) Tablo 6: Bir Lot kullanarak Çalışma Yerinden Çalışma Yerine Tekrarlanabilirlik Çalışması Sonuçları ÇALIŞMA YERİ Çalışma Merkezi 1 Çalışma Merkezi 2 Çalışma Merkezi 3 Yüzde Anlaşma Yüzde Anlaşma Yüzde Anlaşma Toplam Yüzde Anlaşması Genel Ortalama SDPA Değerleri a Neg a 30/30 %100,0 30/30 %100,0 30/30 %100,0 %100,0 (%95,9, %100,0) 28,7 0,30 1,1 HN1:100 a,b 28/30 %93,3 25/30 %83,3 30/30 %100,0 %92,2 (%84,8, %96,2) 28,8 0,39 1,4 HN1:10 a,b 17/30 %56,7 8/30 %26,7 20/30 %66,7 %50,0 (%39,9, %60,1) 28,8 0,36 1,2 LP 30/30 %100,0 30/30 %100,0 30/30 %100,0 %100,0 (%95,9, %100,0) 32,5 0,77 2,4 MP 30/30 %100,0 30/30 %100,0 30/30 %100,0 %100,0 (%95,9, %100,0) 31,6 0,82 2,6 a Gerçek Negatif ve Yüksek Negatif kategorisi için bildirilen SDPA değerleri Örnek İşleme Kontrolü içindir. Diğer kategoriler için bildirilen SDPA değerleri toksijenik Clostridium difficile hedefi içindir. b Yüksek Negatif kategoriler için beklenen test sonucunun negatif olduğu kabul edilmiştir. Bu nedenle yüzde anlaşma negatif sonuçlar için hesaplanmıştır. SD %CV Bulaşma/Çapraz Kontaminasyon BD MAX Cdiff assay'de yüksek toksijenik bakteriyel yüklü Clostridium difficile örnekleri işlerken çalışma içi bulaşma ve çalışmalar arası bulaşmayı araştırmak üzere bir çalışma yapılmıştır. Bir yüksek pozitif üye ve bir negatif üyeden oluşan bir panel çok sayıda örnek hazırlamak için kullanılmıştır. Bir Clostridium difficile suşu (Tox 0, ATCC 9689) yüksek pozitif Clostridium difficile panel üyesi(~3 x 10 8 CFU/mL) için kullanılmıştır. Negatif üye herhangi bir hedef analit içermemiştir. Yüksek pozitif panel üyesinden on iki (12) replikat ve negatif panel üyesinden 12 replikat, her çalışmada negatif ve pozitif örnekler sırasıyla kullanılarak test edilmiştir. Üç (3) kullanıcı 24 örnekte toplam 9 çalışma olacak şekilde arka arkaya 3 çalışma yapmıştır. Bulaşma kontaminasyonu nedeniyle yalancı pozitif sonuç bulunmamıştır. 10

11 REFERANSLAR 1. Dubberke ER, Wertheimer AI. Review of current literature on the economic burden of Clostridium difficile infection. Infect Control Hosp Epidemiol 2009; 30: Poutanen SM, Simor AE. Clostridium difficile-associated diarrhea in adults. Can Med Assoc J 2004;171: Redelings MD, Sorvillo F, Mascola L. Increase in Clostridium difficile-related mortality rates, United States, Emerg Infect Dis 2007;13: McDonald LC, Owing M, Jernigan DB. Clostridium difficile Infection in Patients Discharged from US Short-Stay hospitals, Emerging Infectious Diseases, 2006, 12 (3): Pepin J, Valiquettte L, Alary ME. Clostridium difficile associated diarrhea in a region of Quebec from 1991 to 2003: a changing pattern of disease severity. CMAJ. 2004;171: Bignardi GE. Risk factors for Clostridium difficile infection. J Hosp Infect 1998; 40: Peterson LR, Robicsek A. Does my patient have Clostridium difficile infection? Ann Intern Med 2009;151: Lyras D, O Connor JR, Howarth PM, et al. Toxin B is essential for virulence of Clostridium difficile. Nature 2009;458: Delmee M. Laboratory diagnosis of Clostridium difficile disease. Clin Microbiol Infect Aug;7(8): Clinical and Laboratory Standards Institute. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections; Approved Guideline. Document M29 (Refer to the latest edition). 11. Centers for Disease Control and Prevention, and National Institutes of Health. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. Chosewood L.C. and Wilson D.E. (eds) (2009). HHS Publication number (CDC) BD MAX System User s Manual (Refer to the latest version) BD Life Sciences, Sparks, MD, USA. 13. Clinical and Laboratory Standards Institute. Molecular Diagnostic Methods for Infectious Diseases; Approved Guideline, document MM03 (Refer to the latest edition). 14. Clinical and Laboratory Standards Institute. User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline. Document EP12 (Refer to the latest edition). 15. Cohen SH et al. (1998) Isolation of a Toxin B-deficient mutant strain of Clostridium difficile in a case of recurrent Clostridium difficile Associated Diarrhea, Clin. Infect. Dis. 26: Cohen SH et al. (2000) Analysis of the pathogenicity locus in Clostridium difficile strains, J. Infect. Dis. 181: MacCannell D. et al. (2006) Characterization of a novel, tcdb-deficient, NPA1 variant strain of Clostridium difficile, 46th Annual ICAAC, San Francisco, Sept McFarland, L.V., et al., Implications of the changing face of Clostridium difficile disease for health care practitioners. Am J Infect Control, (4): p Rupnik M. et al. A novel toxinotyping scheme and correlation of toxinotypes with serogroups of Clostridium difficile isolates, J Clin Microbiol, 1998, 36 (8): Rupnik M. et al. Comparison of toxinotyping and PCR ribotyping of Clostridium difficile strains and description of novel toxinotypes, Microbiology 2001, 147, Rupnik M. et al. New types of Toxin A-Negative, Toxin B-Positive strains among Clostridium difficile isolates from Asia, J Clin Microbiol, 2003, 41(3):

12 Manufacturer / Производител / Výrobce / Fabrikant / Hersteller / Κατασκευαστής / Fabricante / Tootja / Fabricant / Proizvođać / Gyártó / Fabbricante / Атқарушы / 제조업체 / Gamintojas / Ražotājs / Tilvirker / Producent / Producător / Производитель / Výrobca / Proizvođač / Tillverkare / Üretici / Виробник / 生产厂商 Use by / Използвайте до / Spotřebujte do / Brug før / Verwendbar bis / Χρήση έως / Usar antes de / Kasutada enne / Date de péremption / 사용기한 / Upotrijebiti do / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Дейін пайдалануға / Naudokite iki / Izlietot līdz / Houdbaar tot / Brukes for / Stosować do / Prazo de validade / A se utiliza până la / Использовать до / Použite do / Upotrebiti do / Använd före / Son kullanma tarihi / Використати до\line / 使用截止日期 YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = края на месеца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec měsíce) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) ΕΕΕΕ-MM-HH / ΕΕΕΕ-MM (MM = τέλος του μήνα) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fin del mes) AAAA-KK-PP / AAAA-KK (KK = kuu lõpp) AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj mjeseca) ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja) AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) ЖЖЖЖ-АА-КК / ЖЖЖЖ-АА / (АА = айдың соңы) YYYY-MM-DD/YYYY-MM(MM = 월말 ) MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mėnesio pabaiga) GGGG-MM-DD/GGGG-MM (MM = mēneša beigas) JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesiąca) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) AAAA-LL-ZZ / AAAA-LL (LL = sfârşitul lunii) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = конец месяца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj meseca) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet av månaden) YYYY-AA-GG / YYYY-AA (AA = ayın sonu) РРРР-MM-ДД / РРРР-MM (MM = кінець місяця) YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = 月末 ) Catalog number / Каталожен номер / Katalogové číslo / Katalognummer / Αριθμός καταλόγου / Número de catálogo / Katalooginumber / Numéro catalogue / Kataloški broj / Katalógusszám / Numero di catalogo / Каталог нөмірі / 카탈로그번호 / Katalogo / numeris / Kataloga numurs / Catalogus nummer / Numer katalogowy / Număr de catalog / Номер по каталогу / Katalógové číslo / Kataloški broj / Katalog numarası / Номер за каталогом / 目录号 Authorized Representative in the European Community / Оторизиран представител в Европейската общност / Autorizovaný zástupce pro Evropském společenství / Autoriseret repræsentant i De Europæiske Fællesskaber / Autorisierter Vertreter in der Europäischen Gemeinschaft / Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα / Representante autorizado en la Comunidad Europea / Volitatud esindaja Euroopa Nõukogus / Représentant autorisé pour la Communauté européenne / Autorizuirani predstavnik u Europskoj uniji / Meghatalmazott képviselő az Európai Közösségben / Rappresentante autorizzato nella Comunità Europea / Европа қауымдастығындағы уәкілетті өкіл / 유럽공동체의위임대표 / Įgaliotasis atstovas Europos Bendrijoje / Pilnvarotais pārstāvis Eiropas Kopienā / Bevoegde vertegenwoordiger in de Europese Gemeenschap / Autorisert representant i EU / Autoryzowane przedstawicielstwo we Wspólnocie Europejskiej / Representante autorizado na Comunidade Europeia / Reprezentantul autorizat pentru Comunitatea Europeană / Уполномоченный представитель в Европейском сообществе / Autorizovaný zástupca v Európskom spoločenstve / Autorizovano predstavništvo u Evropskoj uniji / Auktoriserad representant i Europeiska gemenskapen / Avrupa Topluluğu Yetkili Temsilcisi / Уповноважений представник у країнах ЄС / 欧洲共同体授权代表 In Vitro Diagnostic Medical Device / Медицински уред за диагностика ин витро / Lékařské zařízení určené pro diagnostiku in vitro / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medicinska pomagala za In Vitro Dijagnostiku / In vitro diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo medicale per diagnostica in vitro / Жасанды жағдайда жүргізетін медициналық диагностика аспабы / In Vitro Diagnostic 의료기기 / In vitro diagnostikos prietaisas / Medicīnas ierīces, ko lieto in vitro diagnostikā / Medisch hulpmiddel voor in-vitro diagnostiek / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urządzenie medyczne do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Dispozitiv medical pentru diagnostic in vitro / Медицинский прибор для диагностики in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Medicinski uređaj za in vitro dijagnostiku / Medicinteknisk produkt för in vitro-diagnostik / İn Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz / Медичний пристрій для діагностики in vitro / 体外诊断医疗设备 Temperature limitation / Температурни ограничения / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning / Temperaturbegrenzung / Περιορισμοί θερμοκρασίας / Limitación de temperatura / Temperatuuri piirang / Limites de température / Dozvoljena temperatura / Hőmérsékleti határ / Limiti di temperatura / Температураны шектеу / 온도제한 / Laikymo temperatūra / Temperatūras ierobežojumi / Temperatuurlimiet / Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limites de temperatura / Limite de temperatură / Ограничение температуры / Ohraničenie teploty / Ograničenje temperature / Temperaturgräns / Sıcaklık sınırlaması / Обмеження температури / 温度限制 Batch Code (Lot) / Код на партидата / Kód (číslo) šarže / Batch-kode (lot) / Batch-Code (Charge) / Κωδικός παρτίδας (παρτίδα) / Código de lote (lote) / Partii kood / Numéro de lot / Lot (kod) / Tétel száma (Lot) / Codice batch (lotto) / Топтама коды / 배치코드 ( 로트 ) / Partijos numeris (LOT) / Partijas kods (laidiens) / Lot nummer / Batch-kode (parti) / Kod partii (seria) / Código do lote / Cod de serie (Lot) / Код партии (лот) / Kód série (šarža) / Kod serije / Partinummer (Lot) / Parti Kodu (Lot) / Код партії / 批号 ( 亚批 ) Contains sufficient for <n> tests / Съдържанието е достатъчно за <n> теста / Dostatečné množství pro <n> testů / Indeholder tilstrækkeligt til <n> tests / Ausreichend für <n> Tests / Περιέχει επαρκή ποσότητα για <n> εξετάσεις / Contenido suficiente para <n> pruebas / Küllaldane <n> testide jaoks / Contenu suffisant pour <n> tests / Sadržaj za <n> testova / <n> teszthez elegendő / Contenuto sufficiente per <n> test / <п> тесттері үшін жеткілікті / <n> 테스트가충분히포함됨 / Pakankamas kiekis atlikti <n> testų / Satur pietiekami <n> pārbaudēm / Inhoud voldoende voor n testen / Innholder tilstrekkelig til <n> tester / Zawiera ilość wystarczającą do <n> testów / Conteúdo suficiente para <n> testes / Conţinut suficient pentru <n> teste / Достаточно для <n> тестов(а) / Obsah vystačí na <n> testov / Sadržaj dovoljan za <n> testova / Innehåller tillräckligt för <n> analyser / <n> test için yeterli malzeme içerir / Вистачить для аналізів: <n> / 足够进行 <n> 次检测 Consult Instructions for Use / Направете справка в инструкциите за употреба / Prostudujte pokyny k použití / Se brugsanvisningen / Gebrauchsanweisung beachten / Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / Consultar las instrucciones de uso / Lugeda kasutusjuhendit / Consulter la notice d emploi / Koristi upute za upotrebu / Olvassa el a használati utasítást / Consultare le istruzioni per l uso / Пайдалану нұсқаулығымен танысып алыңыз / 사용지침참조 / Skaitykite naudojimo instrukcijas / Skatīt lietošanas pamācību / Raadpleeg de gebruiksaanwijzing / Se i bruksanvisningen / Zobacz instrukcja użytkowania / Consultar as instruções de utilização / Consultaţi instrucţiunile de utilizare / См. руководство по эксплуатации / Pozri Pokyny na používanie / Pogledajte uputstvo za upotrebu / Se bruksanvisningen / Kullanım Talimatları na başvurun / Див. інструкції з використання / 请参阅使用说明 Do not reuse / Не използвайте отново / Nepoužívejte opakovaně / Ikke til genbrug / Nicht wiederverwenden / Μην επαναχρησιμοποιείτε / No reutilizar / Mitte kasutada korduvalt / Ne pas réutiliser / Ne koristiti ponovo / Egyszer használatos / Non riutilizzare / Пайдаланбаңыз / 재사용금지 / Tik vienkartiniam naudojimui / Nelietot atkārtoti / Niet opnieuw gebruiken / Kun til engangsbruk / Nie stosować powtórnie / Não reutilize / Nu refolosiţi / Не использовать повторно / Nepoužívajte opakovane / Ne upotrebljavajte ponovo / Får ej återanvändas / Tekrar kullanmayın / Не використовувати повторно / 请勿重复使用 Serial number / Сериен номер / Sériové číslo / Serienummer / Seriennummer / Σειριακός αριθμός / Nº de serie / Seerianumber / Numéro de série / Serijski broj / Sorozatszám / Numero di serie / Топтамалық нөмірі / 일련번호 / Serijos numeris / Sērijas numurs / Serie nummer / Numer seryjny /Número de série / Număr de serie / Серийный номер / Seri numarası / Номер серії / 序列号 12