DENDRİTİK HÜCRE BAZLI AŞI ÜRETİMİNDE KALİTE STANDARTLARI. Msc. Bio. Fatma Eyüboğlu Ünüvar Acıbadem Labcell Hücre Laboratuvarı

Transkript

1 DENDRİTİK HÜCRE BAZLI AŞI ÜRETİMİNDE KALİTE STANDARTLARI Msc. Bio. Fatma Eyüboğlu Ünüvar Acıbadem Labcell Hücre Laboratuvarı

2 DENDRİTİK HÜCRE BAZLI AŞI NEDİR? İmmün yanıt profesyonel antijen sunan hücreler Anti-tümör olarak bilinen dendritik hücrelerin T hücrelerine antijeni sunması efektörü ile başlar sağlamak Tümöre karşı aktif bağışlama Dendritik Hücre Bazlı Aşı Tümörlere Hastanın karşı kendi immün yanıtın arttırılması anti-tümör esasına yanıtını dayanır. uyarmak Tümöre özgü bağışıklık Sriram Subramaniam, National Cancer Institute (NCI)

3 ÜRETİM BASAMAKLARI Aferez ile dolaşan kök hücre toplanması Mononükleer hücre izolasyonu Monositlerin flask yüzeyine yapışması için inkubasyon Farklılaşma sitokinlerinin yüklenmesi Hybrid Medical Animation Tümör lizat hazırlanması Maturasyon sitokin kokteylinin eklenmesi Dendritik Hücre Aşısı

4 Dendritic cell-based approaches in the fight against diseases, Rafael de Freitas e Silva, Maria Carolina Accioly Brelaz de Castro and Valéria Rêgo Alves Pereira, Front. Immunol., 26 February 2014 doi: /fimmu KULLANIM ALANLARI HIV Herpes Simpleks Virüs Layşmanyaz İnfluenza Candida Albicans Kanser Otoimmün Hastalıklar

5 AMAÇ Kalite - Üretim koşulları -- Ürün özellikleri Doz Uygulama zamanı

6 KALİTE KONTROL SÜRECİ Ham ürün kabul öncesi kalite kontrol İşlem öncesi kalite kontrol Ara üretim kalite kontrol Bitmiş ürün kalite kontrol SÜREÇLER HAM ÜRÜN OPERASYONEL SÜRECİ Donör Seçimi Bilgilendirilmiş Onam Formu Ham Ürünün toplanması Ham Ürün Paketlenmesi Ham Ürün Transferi ÜRETİM SÜRECİ İşlem Öncesi Ara Ürün Süreci Bitmiş Ürün Süreci Etiketleme Birinci ve ikinci paketleme BİTMİŞ ÜRÜN OPERASYONEL SÜRECİ Üçüncü paketleme Transfer Uygulama Takip (Cell Vigilance)

7 SÜREÇ SORUMLULARI Ham ürün kabul öncesi süreçler Ham ürün, Ara Ürün ve Bitmiş Ürün Kalite Kontrol Süreçleri Üretim Süreci Paketleme ve Transfer Uygulama Klinik Takip Operasyon Birimi Kalite Kontrol Birimi Kalite Kontrol Birimi Üretim Birimi Üretim Birimi Operasyon Birimi Klinik Hekim Klinik Hekim Operasyon Birimi

8 HAM ÜRÜN KABUL ÖNCESİ KALİTE KONTROL PARAMETRE METOD LİMİT REFERANS Ambalaj Görsel Bütünlüğü tam, sağlam, güvenlik bandı yırtılmamış Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Görünüm Görsel Temiz, Berrak Taşıma Isısı Isı takip cihazı Merkezin belirlediği ısı aralığında Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Miktar Tartım > 200 ml Acıbadem Labcell Deneyimi Viral Seroloji Eliza/Nükleik Asit Testi (NAT) HBS Ag Anti-HCv HIV 1-2 NEGATİF Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 RPR VDRL Etiket Görsel Etiket ve tanımlama bilgilerinin uyumlu ve tamamlanmış olması gereklidir 5th Edition NetCord FACT Standards Doküman Görsel Doldurulması ve imzalanması gereken dokümanların eksiksiz olması gereklidir 5th Edition NetCord FACT Standards

9 İŞLEM ÖNCESİ KALİTE KONTROL PARAMETRE METOD LİMİT REFERANS Tam Kan ya da Aferez Örneği Canlılık Hücre sayısı Tripan Blue Acridine Orange Ethidium Bromür 7AAD Thoma Lamı Otomatize Kan Sayım Cihazı >%90 ACB Labcell Deneyimi > 400x10 6 ACB Labcell Deneyimi Sterilite Aerob Anaerob Tiyoglikolat agar Tryptic soy broth Kanlı Agar Negatif Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Mantar Sabouraud dekstroz agar Tümör Lizat Sterilite Aerob Anaerob Tiyoglikolat agar Tryptic soy broth Kanlı Agar Negatif Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Mantar Sabouraud dekstroz agar

10 Tümör Lizat Mononükleer Hücre ARA ÜRÜN KALİTE KONTROL PARAMETRE METOD LİMİT REFERANS Canlılık Hücre Sayısı Aerob Sterilite Anaerob Mantar Tripan Blue Acridine Orange Etidyum Bromür 7AAD Thoma Lamı Otomatize Kan Sayım Cihazı Tiyoglikolat agar Tryptic soy broth Kanlı Agar Sabouraud dekstroz agar Otomatize Kültür Sistemleri > %90 Targeted Cancer Therapy by Dendritic Cell Vaccine, Hiroyuki Abe, Touko Shimamoto, Shinichiro Akiyama and Minako Abe, Cancer Treatment - Conventional and Innovative Approaches Chapter 14 > 4x10 7 Negatif FDA - 21 CFR 610 General Biological Products Standard Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Lizat (Protein Miktarı) Bradford Otomatize Sistemler > 5000 µg Autologous Tumor Lysate-Pulsed Dendritic Cell Immunotherapy with Cytokine-Induced Killer Cells Improves Survival in Gastric and Colorectal Cancer Patients, Daiqing Gao, Changyou Li, Xihe Xie, Peng Zhao, Xiaofang Wei, Weihong Sun, Hsin-Chen Liu, Aris T. Alexandrou, Jennifer Jones, Ronghua Zhao, Jian Jian Li, April 2014, Volume 9, PLOS ONE Sterilite Aerob Anaerob Mantar Tiyoglikolat agar Tryptic soy broth Kanlı Agar Sabouraud dekstroz agar Otomatize Kültür Sistemleri Negatif FDA - 21 CFR 610 General Biological Products Standard Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014

11 BİTMİŞ ÜRÜN KALİTE KONTROL LİMİT METOD REFERANS Hücre Sayısı >20x10 6 Thoma Lamı Otomatize Sayım cihazı Anupama Sharma, Ursula Koldovsky, Shuwen Xu, Rosemarie Mick, Robert Roses, Elizabeth Fitzpatrick, Susan Weinstein, Harvey Nisenbaum, Bruce L Levine, Kevin Fox, Paul Zhang, Gary Koski and Brian J Czerniecki, HER-2 Pulsed Dendritic Cell Vaccine Can Eliminate HER-2 Expression and Impact DCIS, NIH Public Access PMC 2013 Sep. 01 Canlılık > 70% CD 1a 0-53 % CD 11c > %95 CD 209 > %95 Saflık CD 83 > %95 CD 86 > %95 HLA-DR > %95 CD 45 > %95 CD 54 > %95 Tripan Blue Acridine Orange Etidyum Bromür 7AAD Akım Sitometrik Analiz Anupama Sharma, Ursula Koldovsky, Shuwen Xu, Rosemarie Mick, Robert Roses, Elizabeth Fitzpatrick, Susan Weinstein, Harvey Nisenbaum, Bruce L Levine, Kevin Fox, Paul Zhang, Gary Koski and Brian J Czerniecki, HER-2 Pulsed Dendritic Cell Vaccine Can Eliminate HER-2 Expression and Impact DCIS, NIH Public Access PMC 2013 Sep 01 Luciano Castiello, Marianna Sabatino, Yingdong Zhao, Barbara Tumaini, Jiaqiang Ren, Jin Ping, Ena Wang, Lauren V Wood, Francesco M Marincola, Raj K Puri and David F Stroncek, Quality Controls in Cellular Immunotherapies: Rapid Assessment of Clinical Grade Dendritic Cells by Gene Expression Profiling, The American Society of Gene & Cell Therapy Etkinlik Analizi > %40 Lenfosit Proliferasyon Testi (MTT,XTT,WST1) Acıbadem Labcell Deneyimi

12 MTT BAZLI T HÜCRE PROLİFERASYON VE İNHİBİSYON TESTİ MTT (3- [4, 5- dimethylthiazol- 2- yl]- 2, 5 diphenyltetrazolium bromide) bazlı hücre canlılık ve proliferasyon testi, hücre çoğalması ve canlılığını in vitro ortamda hassas bir şekilde belirleme testidir.

13 Kontrol 1x10 5 DH T HÜCRE PROLİFERASYON T HÜCRE İNHİBİSYON 9x10 4 Lenfosit 1x10 4 DH 8x10 4 Lenfosit 2x10 4 DH 6x10 4 Lenfosit 4x10 4 DH Kontrol 1x10 5 Lenfosit Kontrol 1x10 5 Lenfosit,PHA 9x10 4 Lenfosit 1x10 4 MKH, PHA 8x10 4 Lenfosit 2x10 4 MKH, PHA Hücreler 96 kuyucuklu hücre kültürü plakalarında üretildikten sonra tetrazolium bileşiği olan MTT hücreler üzerine eklenip inkube edilir. Sarı renkli MTT, mor renkli formazan'a indirgenir. Bu indirgenme yanlızca mitokondrial redüktaz enzimi varlığında gerçekleştiği için formazan'ın oluşum miktarı ile canlı hücre sayısı doğru orantılıdır. DMSO gibi bir çözücünün ortama eklenmesi ile formazan kristalleri çözünür ve spektrofotometrik olarak okunur

14 BİTMİŞ ÜRÜN KALİTE KONTROL LİMİT METOD REFERANS Sterilite Aerob Anaerob Mantar Endotoksin Mikoplazma Negatif < 5 EU/kg Negatif Tiyoglikolat agar Tryptic soy broth Kanlı Agar Sabouraud dekstroz agar Limulus Amebosit Lizat Testi (LAL) Jel Clot Chromogenic method PCR (Polimeraz Zincir Reaksiyonu) DAPI Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Anupama Sharma, Ursula Koldovsky, Shuwen Xu, Rosemarie Mick, Robert Roses, Elizabeth Fitzpatrick, Susan Weinstein, Harvey Nisenbaum, Bruce L Levine, Kevin Fox, Paul Zhang, Gary Koski and Brian J Czerniecki, HER-2 Pulsed Dendritic Cell Vaccine Can Eliminate HER-2 Expression and Impact DCIS, NIH Public Access PMC 2013 September 01 FDA - 21 CFR 610 General Biological Products Standard, Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Tümorojenite Stabilite 48. saat > %70 Atık Ürün Varlığı Gerekmez Sitogenetik Analiz FDA - 21 CFR 610 General Biological Products Standard, Türkiye Gerekmez Telomeraz Enzim Aktivitesi İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Gerekmez Comet Assay Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014 Gerekmez İn-vivo test 0,5 µg/ml (Pen/Strep) Tripan Blue Acridine Orange Etidyum Bromür 7AAD boyamalarından herhangi biri kullanılarak canlılık takibi Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) Türkiye İlaç ve Tıbbi Cihaz Kurumu, İnsan Doku Ve Hücre Ürünlerinin Ruhsatlandırılması Ve Bu Ürünlerin Üretim, İthalat, İhracat, Depolama Ve Dağıtım Faaliyetlerini Yürüten Merkezler Hakkında Tebliğ, Sayı;28962, 4 Nisan 2014

15 Alıcı ve Verici Bilgileri Ayrı Yazılır Kare Kod İçeriği: GTIN No Ürün Kodu Alıcı Kodu (Protokol No) Verici Kodu (Protokol No) ETİKET Ürün Adı Ürün No Ek solusyon völüm: Ürünü Seyreltmede kullanılan İzotonik solüsyon volüm Kan Grubu Ek Solusyon Volüm Volüm Alıcı Bilgiler Ad/Soyad: Prt.No. Verici Bilgileri Ad/Soyad: Prt.No. Kalite Kontrol No Ürt. T: SKT: Saklama Isısı: Firma Adı

16 PAKETLEME Sızdırmaz, tercihen burgu kapaklı Üst ve/veya Yön contalı Etiketi Dayanıklı su geçirmez ve Işınlama sızdırmaz Yapmayınız Gönderici Merkez Tanımlama Bilgileri (Dış Kap): travma ve basınç etkilerine dayanıklı malzemeden Doküman bölmeli En az bir yüzeyi 100mm x 100mm Tavsiye Edilen Nakil Şartları Alıcı bilgilerinin silinmez solmaz ve okunaklı Yanlızca şekilde Otolog yazılı Kullanım İçindir Otolog kullanım için ise Birinci kap İkinci kap Üçüncü kap Dikkatli Taşıyınız Paketi Açmayınız Biyolojik Tehlike

17 Gerekli doku veya hücre özelliklerini koruyabilmek için sıcaklık, süre ve diğer taşıma koşulları tanımlanması Taşıma boyunca iç koşullarının kayıt altına alacak sistem Araç sürücüsüne, taşıma esnasında oluşabilecek bir kaza durumunda alınacak tedbirler ile taşınan ürün özelliklerinin yazılı olduğu doküman TRANSFER Paket taşınan ürün ile ilgili bilgi, izin, uyarı ve benzeri bilgileri içeren belgeler ile tarnsfer Teslimat sadece alıcı iletişim bilgileri yazılı kişiye ya da alıcı kurum ya da kuruluş ise sadece kurumun yetkilendirdiği kişilere yapılmalıdır Çıkmadan önce sıcaklık ve fiziksel koşulları kayıt altına alınarak tutanakla teslim edilmelidir Paket araç içerisinde daha önceden belirlenmiş bir bölgede üst yönü dikkate alınarak düzenli biçimde taşınmalıdır Paket yerinden ayrılmayacak, düşmeyecek, devrilmeyecek şekilde sabitlenmiş olmalıdır Türkiye Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı, İnsan Doku Ve Hücreleri İle Bunlarla İlgili Merkezlerin Kalite Ve Güvenliği Hakkında Yönetmelik Birinci Bölüm, Sayı:27742, 27 Ekim 2010 Türkiye Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı, Enfeksiyöz Madde ile Enfeksiyöz Tnı ve Klinik Örneği Taşıma Yönetmeliği, Sayı:27710,

18 UYGULAMA Uygulama öncesi stabilite (canlılık) ve sterilite testleri yerinde tekrar edilmelidir. Bu süreç kullanıcı sorumluluğundadır Uygulama yöntem ve teknikleri bu eğitimin kapsamı dışındadır Türkiye Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı, İnsan Doku Ve Hücreleri İle Bunlarla İlgili Merkezlerin Kalite Ve Güvenliği Hakkında Yönetmelik Birinci Bölüm, Sayı:27742, 27 Ekim 2010 Türkiye Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı, Enfeksiyöz Madde ile Enfeksiyöz Tnı ve Klinik Örneği Taşıma Yönetmeliği, Sayı:27710,

19 UYGUN OLMAYAN DURUMDA HASTADA OLUŞTURACAĞI RİSKLER DÜŞÜK CANLILIK DÜŞÜK HÜCRE SAYISI STERİLİTE YANITSIZ TEDAVİ TOKSİK ETKİ YETERSİZ DOZA BAĞLI BAŞARISIZ TEDAVİ ENFEKSİYOZ BULAŞA BAĞLI KOMPLİKASYONLAR VEYA HASTANIN KAYBEDİLMESİ

20 UYGUN OLMAYAN DURUMDA HASTADA OLUŞTURACAĞI RİSKLER HATALI HÜCRE KARAKTERİ DÜŞÜK ETKİNLİK MATUR OLMAYAN DENDRİTİK HÜCRE KULLANIMINA BAĞLI BAŞARISIZ ANTİJEN SUNUMU BAŞARISIZ TEDAVİ İMMATUR DH LERİN TUMOR TELORANSINI İNDÜKLEMESİ International Society For Cellular Therapy, Dendritic Cells: A Basic Review, last updated May 2003 How tolerogenic dendritic cells induce regulatory T cells, Roberto A. Maldonado and Ulrich H. von Andrian, Adv Immunol. 2010

21 TAKİP (CELL VİGİLANCE) 2 yıl boyunca izlem ve takip Etkinlik Yan etki İstenmeyen Olay

22 AMAÇ DAHA SAĞLIKLI BİR BEDENDE YAŞAM KALİTESİNİ YÜKSELTMEKKEN, DAHA KÖTÜSÜNE İZİN VERME. KAŞ YAPARKEN GÖZ ÇIKARMAMAK İÇİN HERŞEY KONTROL ALTINDA...

23 SAĞLIKLI GÜNLER, TEŞEKKÜRLER.