26.11.2011 02 14.02.2018 1 / 7 KYS.19 TA 01 1-AMAÇ Eker Süt Ürünlerinde, ham madde olarak kabulü yapılan çiğ sütün ve süttozunun antibiyotik içerip içermediğini kontrol etmek. 2-KAPSAM VE GEÇERLİLİK Bu talimat çiğ sütte ve süttozunda iyileştirme kapsamında yürütülen faaliyetlerin tümünü kapsar. 3-REFERANSLAR VE İLGİLİ DÖKÜMANLAR Numune alma talimatı Kalite formları 4-TANIMLAR Kromatografi: Bir karışımda bulunan maddelerin, biri sabit diğeri hareketli faz olmak üzere birbirleriyle karışmayan iki fazlı bir sistemde ayrılması ve saflaştırılması yöntemidir. 5-SORUMLULAR Laboratuvar sorumlusu; bu talimatın hazırlanması, gözden geçirilmesi, takibi ve uygulanmasından, kalite müdürü kontrolünden sorumludur. 6-UYGULAMA 1- İşletmeye hammadde olarak gelen çiğ sütün talimatına göre numuneleri alınır. Bu talimata göre analizleri yapılır. 2- Haftalık olarak antibiyotik test kitleri kontrol edilir ve laboratuvar sorumlusuna bildirilerek gerekli olan ihtiyaçlar karşılanır. 3- Analiz için kullanılan cihazların arızası durumunda laboratuvar sorumlusuna bilgi verilir. 4- Analiz için kullanılan tüm malzemelerin yeri belirlenir, kullanıldıktan sonra temizlenip, yerine konulur. 5- Analiz için kullanılan kimyasal çözeltiler hazırlanırken vücutla temas etmemesine dikkat edilmelidir, herhangi bir tehlike durumunda laboratuvar sorumlusuna haber verilir. 6.1. Antibiyotik Testi 6.1.1.Sütte Antibiyotik Testi 6.1.1.1. Mayalama Testi 1- Yaklaşık 250 ml. süt 85-90 ºC ye kadar pastörize edilir ve paslanmaz mayalama kaplarına dökülür. 2-45 ºC ye kadar soğutulur. 3- Süte %3 oranında kültür ilave edilir ve karıştırılır. 4-45-48 ºC deki etüve yerleştirilir ve 2 saat inkübasyona bırakılır. 5- Bu süre sonunda pıhtı oluşmuşsa, süt antibiyotikli değildir, pıhtı oluşmamışsa süt antibiyotiklidir.
26.11.2011 02 14.02.2018 2 / 7 KYS.19 TA 01 6.1.1.2. Betastar antibiyotik test kiti ile antibiyotik testi 1- Adaptörün fişini prize takarak arka paneldeki düğmesine basarak çalışır konuma getiriniz. Sıcaklık otomatik olarak ayarlı olduğundan gösterge 47,7 C ye gelinceye kadar inkübatör ısınacaktır. 2- İlk önce şişenin üstündeki kapak açılarak lastik kapağın çıkarılması sağlanır Enjektöre basılarak sütün içine 1 cm kadar daldırılıp süt çekilir ve enjektörü serbest bırakarak sütün enjektör ucuna dolması sağlanır.(0,2 ml süt tamamıyla tüpü doldurulmaktadır.)
26.11.2011 02 14.02.2018 3 / 7 KYS.19 TA 01 3- Süt örneği şişeye yavaşça boşaltılır ve tüm sütün şişeye boşaltıldığından emin olunur. Tüpler 47,7 C ye gelmiş inkübatöre yerleştirilir. Teste başlamak için ısıtma butonu basılır. Isıtma butonu 4- Isıma butonuna bastığınızda S1 ışığı yanmaya başlayacak ve 3 dk. boyunca S1 ışığı yanacaktır. 3 dk. Sonunda sürenin dolduğunu belirten ses duyacaksınız. Daha sonra tüplere kromatografik kağıtlar ok. İşaretleri aşağıda olacak şekilde solüsyona daldırılır. Bu sırada şişe inkübatörden çıkartılmaz. Sesi kapatmak için alarm susturma düğmesine basınız. Alarm susturma düğmesi 5- İnkübasyona devam edilir. 2 dak. sonra kağıt çıkartılır. Ok işareti aşağıda olacak şekilde tutulur Alttaki pembe çizgi üsteki pembe çizgiye göre daha kalın ise antibiyotik yok tam tersi üstteki pembe çizgi alttaki pembe çizgiye göre kalın ise antibiyotik var. Her iki çizgide aynı kalınlıkta (ince) ise antibiyotik var demektir. Çubukta herhangi çizgi yoksa yanlış analiz demektir. Analiz tekrar edilecektir.
26.11.2011 02 14.02.2018 4 / 7 KYS.19 TA 01 6.1.2.Süttozunda Antibiyotik Testi 6.1.2.1.Mayalama Testi 100 g. numune 50 C deki saf su ile 1000 ml. ye tamamlanıp karıştırma kabına konur ve karıştırılır. Köpürme oluşmuşsa 10-15 dk. bekletilir ve köpük varsa kaşıkla atılır. Sütte olduğu gibi mayalama testi ile antibiyotik kontrolü yapılır. 6.1.2.2. Betastar antibiyotik test kiti ile antibiyotik testi 100 g. numune 50 C deki saf su ile 1000 ml.ye tamamlanıp karıştırma kabına konur ve karıştırılır. Köpürme oluşmuşsa 10-15 dk. bekletilir ve köpük varsa kaşıkla atılır. Sütte olduğu gibi betastar antibiyotik test kiti ile antibiyotik kontrolü yapılır. 6.1.3. DSM Delvo İnkubatörü ile Antibiyotik Testi 1- Dsm Delvo İnkübatörü fişe takılır ve 64 C(+/- 0,5) ye gelmesi beklenir. 2- Tüpler analizden 10 dk. önce soğutucudan çıkartılır ve oda sıcaklığına gelmesi sağlanır. Ağzı kapalı tüplerden 2 tane (paralel olarak) makasla kesilir. 3- Şırınga yardımı ile bir miktar süt numunesi alınır ve tüpün içine yavaşça boşaltılır. 4- İnkübatörün sıcaklığı 64 C (+/- 0,5) ye gelince test tüpleri inkübatöre yerleştirilir. İnkübatör zamanı 3 saate ayarlanır ve start tuşuna basılır. 3 saatlik inkübasyon süresinden sonra tüpler çıkartılır.
26.11.2011 02 14.02.2018 5 / 7 KYS.19 TA 01 5- Sarı renk numunede antibiyotik kalıntısı omadığını veya tespit limitinin altında olduğunu göstermektedir. Sonuç negatiftir. 6- Sarı-Mavi renk numunedeki antibiyotik kalıntısının bulma limitine çok yakın olduğunu göstermektedir. Sonuç negatiftir. 7- Mor renk numunedeki antibiyotik kalıntısının bulunduğunu göstermektedir. Sonuç pozitiftir.
26.11.2011 02 14.02.2018 6 / 7 KYS.19 TA 01 6.1.4. Charm quad test kiti ile antibiyotik testi 1-Tek aşamalı immunoreseptör sistemi lateral flow teknolojisine dayanan bir sistemdir. chloramphenicol, beta-lactam, tetracycline, ve streptomicin ilaçları ile renkli reseptörlerle reaksiyona girer. Oluşan kontrol çizgisi ile test çizgisi arasındaki renk farklılığı görsel olarak veya ROSA READER ile karşılaştırılarak değerlendirilir. Böylelikle Charm QUAD test kitleri ile süt içerisindeki chloramphenicol, beta-lactam, tetracycline, ve streptomicin grubu antibiyotiklerin Rusya Federasyonu Limitleri'nin altında ya da üstünde bulunup bulunmadığı tespit edilebilmektedir. 2- Duyarlılık ve limitler 3- Test kitleri ve kit içeriğinde bulunan standart pozitif tabletleri 0-7 C de depolanmalıdır. 4- Çiğ süt 0-15 C de olmalıdır.test edilecek sütler buzdolabı şartlarında depolanabilir.test,10-30 C de doğal olarak hava sirkülasyonunun olduğu ortamda gerçekleştirilmelidir. 5- İnkübatörün sıcaklığı 40 ± 1 C ye ve TIME SELECT düğmesi ile 5 dakikaya ayarlanmalıdır. Test striplerinin şekilleri bozuk olmamalıdır. - Tüm süt numuneleri test edilmeden önce iyice çalkalanmalıdır. - Her test stripi etiketlenmelidir. - Test stripini inkübatörün bölmesine düzgünce yerleştirin. Test stripini düzgünce tutarak Peel to here kısmına kadar sıyırın. - 300µl±15µl süt numunesini pipeti dik tutarak yavaşça test stripine aktarılır. - Test stripi üzerindeki koruma folyosu vakit geçirmeden kapatılmalıdır. Bir test stripinin işlemi bitmeden diğerine geçilmemelidir. Tüm test stripleri 1 dakika içerisinde tamamlanmalıdır. - İnkübatörün kapağını kapatın ve TIME START düğmesine basarak 5 dakikalık süreyi başlatın. - 5 dakika inkübe edin. İnkübasyon süresi 6 dakikayı geçmemelidir. - Test striplerini inkübatörden alın. Örneğin pipetlendiği kısmı sıkmadan test stripini dik pozisyonda taşıyın.
26.11.2011 02 14.02.2018 7 / 7 KYS.19 TA 01 6- Görsel değerlendirme Aşağıdakilerden herhangi biri gözlenmişse test geçersizdir. -C çizgisi oluşmamışsa -C çizgisi yarımsa ya da dağınıksa -Antibiyotik kalıntısı olmadığını gösteren Negatif test görseli - Antibiyotik kalıntısı olduğunu gösteren Pozitif test görseli 7-DAĞITIM VE DOSYALAMA Bu dökümanın kontrolünden doğan kayıtlar, Kayıtların Kontrolü Prosedürüne göre muhafaza edilir.