UYGULAMA NOTU Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometre M027 LCMSMS ile Gıdalarda Sentetik Boyaların Analizi (Sudan Boyaları) HAZIRLAYAN Dr. Engin Bayram Ant Teknik Cihazlar Ltd. Şti.
KONU: Sudan Boyaları (SudanI, SudanII, SudanIII vb), kimyasal yapısında, en az bir azo ( N=N ) grubu içeren sentetik boyalar olup, endüstriyel olarak, tekstil, plastik, boya vb. diğer bir çok alanda renklendirici olarak kullanılmaktadır. Gıda maddelerinin, görünüşlerine bir diğer ifade ile sahip oldukları renklere göre değerlendirilmesi ve tercih edilmesi, yüzlerce yıldır kabul gören ve uygulanan bir yöntemdir. Gıda endüstrisi de, bu boyaların sahip oldukları canlı renkler nedeniyle gıda maddelerinin üretiminde kullanılması sonucunda yukarıda bahsedilen endüstri grubuna dahil edilebilir. Sudan boyaları ilk olarak 1987 yılında Uluslararası Kanser Araştırma Ajansı (IARC) tarafından kanserojen etkileri dikkate alınarak değerlendirilmiştir. Her ne kadar bu boyaların kanserojen olduğuna dair kesin kanıtlar olmasa da, genetik mutasyona ve bunun sonucunda da dolaylı olarak kansere sebep olabildiklerine dair bazı deliller olması nedeniyle ilgili boyaların kullanımına (miktar, saflık vb.) birçok ülkede kısıtlama getirilmiştir. ÇALIŞMANIN AMACI: LC-MSMS yöntemi kullanılarak Sudan boyalarının analizinin gerçekleştirilmesi. METOD ve MATERYALLER: Bu çalışmamızda Shimadzu LCMS-8040 Triple Quadrupole sistemiyle gıdalarda sudan boyalarının analizi basit, hızlı ve güvenilir bir metot ile tespit edilmiştir. NUMUNE HAZIRLAMA: Sertifikalı analit standartları, metanol ile seyreltilerek korelasyon eğrisi için gerekli standart karışımlar hazırlanmıştır. ANALİTİK KOŞULLAR: MS Koşulları; Cihaz Model Spreyleme Gazı Akış Hızı Kurutma Gazı Akış Hızı DL Sıcaklığı HB Sıcaklığı İyon Kaynağı/Polarite : Shimadzu : LCMS-8040 TQ : 3 L/dk : 15 L/dk : 250 ºC : 400 ºC : ESI (+) Madde ve MRM geçişleri; ID# Name m/z Ref. Ions 1 Sudan-I 249.10>93.20 249.10>232.10 2 Sudan II 277.20>121.10 277.20>156.00 3 Sudan III 350>76.90 350>92.20 4 Sudan IV 381.20>225.20 381.20>106.10 5 Para red 294.10>156.00 294.10>140 6 RhodaminB 443.10>341.20 443.10>355.20 7 Sudan Black 457.20>194.10 457.20>211.10 8 Sudan Orange 215.10>93.10 215.10>122.10 9 Sudan Red-7B 379.50>115.10 379.50>183.10
LC Koşulları; Cihaz Model Kolon Mobil Faz A Mobil Faz B Akış Oranı Enjeksiyon Hacmi : Shimadzu : Nexera XR : Restek ARC C18 (2.7um, 100x2.1 mm) : %0,1ml Formik asit %100 suda : %0,1ml Formik asit %100 formik asitte : 0.4 ml/dk (Gradient program) : 5 ul Gradient Program:
Kromatogramlar: Kalibrasyon Çözeltisi (Kantitatif Kromatogramlar, 1pg/uL) 3.5 (x1,000) 4:249.10>93.20(+) 4:249.10>232.10(+) Sudan-I (x1,000) 5:277.20>121.10(+) 4.0 5:277.20>106.20(+) 3.5 Sudan II 0 3.25 3.50 3.75 (x1,000) 7:350>76.90(+) 4.0 7:350>92.20(+) 3.5 Sudan III 4.75 5.00 5.25 5.50 (x100) 3:294.10>156.00(+) 3:294.10>128.10(+) 5.0 4.0 Para red 4.25 4.50 4.75 5.00 (x100) 9:381.20>106.10(+) 9:381.20>91.20(+) Sudan IV 5.50 5.75 6.00 6.25 (x10,000) 2:443.10>355.20(+) 2:443.10>341.20(+) RhodaminB 2.75 0 3.25 3.50 1.75 0 2.25 0
(x10,000) 0 6:457.20>194.10(+) 6:457.20>211.10(+) 1.25 0 Sudan Black 6.0 (x1,000) 1:215.10>93.10(+) 1:215.10>122.10(+) 5.0 4.0 Sudan Orange 0.75 0 0.25 0 4.50 4.75 5.00 5.25 (x1,000) 2.25 8:379.50>183.10(+) 8:379.50>115.10(+) 0 1.75 0 1.25 0 0.75 0 0.25 0 Sudan Red-7B 0 1.75 0 2.25 5.50 5.75 6.00 6.25 Kalibrasyon Eğrileri (0,5-10pg/uL): Sudan I Sudan II
Sudan III Sudan IV Para red RhodaminB Sudan Black Sudan Orange
Sudan Red-7B Kaynakça: 1- Development of a method for the analysis of seven banned azo-dyes in chilli and hot chilli food samples by pressurised liquid extraction and liquid chromatography with electrospray ionization-tandem mass spectrometry, O. Pardo, V. Yusà, N. León, A.Pastor, Talanta 78 (2009) 178 186 2- Simultaneous determination of four Sudan dyes in rat blood by UFLC MS/MS and its application to a pharmacokinetic study in rats. H. Zhu, Y. Chen, C. Huang, Y.Han, Y.Zhang, S. Xie, X. Chen, M.Jin, Journal of Pharmaceutical Analysis 5 (2015) 239 248 3- Quantitative analysis of illegal dyes in eggs using LC/MS/MS, R. Kochhar, S. Rane, S. Damale, D. Bhandarkar, S. Raju, A. Datar, P. Rasam, J. Kelkar, Shimadzu Corp. Poster Pres., ASMS 2015 TP 334, PO-CON1549E Bu Aplikasyon Notu uygulamanın gerçekleştirildiği tarihe ait bilgiler ışığında oluşturulmuştur. Bu yayında yer alan bilgilerin referans gösterilerek başka bir yerde kullanılması Ant Teknik in iznine tabidir. Aplikasyon Notu Ant Teknik tarafından önceden bildirilmeksizin değiştirilebilir. antteknik.com