ISSN:1306-3111 e-journal of New World Sciences Academy 2009, Volume: 4, Number: 1, Article Number: 5A0001 ECOLOGICAL LIFE SCIENCES Received: March 2008 Accepted: January 2009 Series : 5A ISSN : 1308-7358 2009 www.newwsa.com Mehmet Akyüz Sevda Kırbağ University of Fırat mehmetaky210@hotmail.com skirbag@firat.edu.tr Elazig-Turkiye ELAZIĞ VE BİNGÖL ÇEVRESİNDEN TOPLANAN P. eryngii var. ferulae NİN KÜLTÜRE ALINMASI ÖZET Bu çalışmada, Elazığ (İçme) ve Bingöl (Kiğı) çevresinden toplanan Pleurotus eryngii (DC. ex Fr.) Quel. var. ferulae Lanzi nin, misel ve tohumluk misel (spawn) elde edilebilmesi araştırılmıştır. Ana kültürün çoğaltılmasında; %2.0 malt-ektrakt agar, tohumluk miselin (spawn) eldesinde, arpa taneleri kullanılmıştır. Misel ve spawn materyali, 25 o C derecede inkübe edilmiş, 4 o C derecede muhafaza edilmiştir. Ülkemizin biyolojik varyetelerinden biri olan ve stok kültür olarak muhafaza edilmesi düşünülen P. eryngii var. ferulae, laboratuvar koşullarında kültürü yapılarak koruma altına alınmış ve gen kaynakları muhafaza edilmiştir. Anahtar Kelimeler: P. eryngii var. ferulae, Kültüre Alınma, Misel, Tohumluk Misel, Ferulae sp. CULTIVATION OF P. eryngii var. ferulae COLLECTED FROM VICINITY OF ELAZIG AND BINGOL ABSTRACT This study was researched the obtain of extracting pure mycelium and spawn of Pleurotus eryngii (DC. ex Fr.) Quel. var. ferulae Lanzi, which collected from vicinity of Elazığ (İçme) and Bingöl (Kiğı). For the propagation of main culture, 2.0% malt-extract agar was used. Grains of barley was used for the preparation of spawn. Mycelium and spawn were incubated at 25 o C and maintenanced at 4 o C. Mycelium of P. eryngii var. ferulae, one of the biological variety in Turkey was obtained from wild basidiocarp in the laboratory, preserved as a stock culture. Keywords: P. eryngii var. ferulae, Cultivation, Mycelium, Spawn, Ferulae sp.
1. GİRİŞ (INTRODUCTION) Doğa da, mevsimlere bağlı olarak yetişen yabani mantarlar insanoğlunun geçmişten günümüze kadar önemli gıda maddelerinden birisidir. Günümüzde gıda maddesi olarak tüketilmekte olan bazı mantarlar doğa dan toplanmaktadır. Zehirli mantarların halk tarafından kolay ayırt edilememesi önemli zehirlenmelere yol açmakta ve hatta ölümlere bile neden olmaktadır [1]. Yenen yabani mantarların doğal gelişim sınırları içerisindeki belli faktörlerin belirlenerek kültür ortamında yetiştiriciliğinin yaygınlaştırılması, tüketici üzerindeki bu olumsuz etkinin ortadan kalkmasına, buna bağlı olarak da değişik türdeki mantarların üretim ve tüketiminin hızlı bir şekilde artmasına neden olacaktır. Doğu Anadolu Bölgesi nin dağlık alanlarında, halk tarafından kırkor bitkisi olarak adlandırılan, Ferulae sp. üzerinde P. eryngii var. ferulae doğal olarak yetişmektedir. Yöre halkı tarafından göbek - göbelek diye adlandırılan P. eryngi var. ferulae nin, önceki yıllarda bol miktarda tüketildiği bilinmektedir. Son yıllarda ise; kırkor bitkisinin; yakacak ve hayvan yemi olarak kullanılması ve iklimsel değişiklikler gibi faktörlerden dolayı bu mantarın şapka formunda azalma gözlenmiştir. Ayrıca; mantarın şapka yapısının tam olgunlaşmadan, bilinçsizce toplanması sonucunda sporlarının da doğal çevreye yayılmasının engellendiği gözlenmiştir. 2. ÇALIŞMANIN ÖNEMİ (RESEARCH SIGNIFICANCE) Ülkemizde P. eryngii türü mantarın ticari üretimine daha yeni başlanmıştır. Bu çalışma ile, P. eryngii var. ferulae nin kültürünün teşvik edilmesi ve bundan sonraki çalışmalarda kullanılmak üzere yabani şapkalardan misel ve spawn üretimi gerçekleştirilmiştir. 3. MATERYAL VE METOT (MATERIAL AND METHOD) 3.1. Materyal (Material) P. eryngii var. ferulae; Nisan-Mayıs 2007 tarihin de Elazığ (İçme) ve Bingöl (Kiğı) çevresinde Ferulae sp. kalıntıları üzerinde toplanarak ilgili literatürlere [2, 3, 4, 5 ve 6] göre teşhisi yapılmıştır (Şekil 1a). 3.2. Metot (Method) 3.2.1. Doku Kültürü Yöntemiyle P. eryngii var. ferulae den Ana Kültür Elde Edilmesi (The Propagation of the Main Culture from P. eryngii var. ferulae by Using Uissue Culture) Steril malt ekstrakt-agar bulunan plaklara, % 70 lik alkol ile temizlenmiş şapkanın (Şekil 1a) iç yüzeyindeki taze etli kısmından yaklaşık olarak 2-3 mm büyüklüğündeki doku parçası, steril bistürü ile kesilerek aktarılmıştır. Daha sonra, petrilerin kapakları kapatılarak etiketlenip, doku parçalarından misel gelişimi için 25 ºC de inkübasyona bırakılmıştır. Bulaşık olmayan misel kısımları yeniden malt ekstrakt-agar ortamına 1-2 defa pasajlanarak saf misel elde edilmiştir (Şekil 1b). 3.2.2. Tohumluk Misel (Spawn) Eldesi (Spawn preparation) Bir kg arpa tanesi, çeşme suyunda 40 dakika süreyle kaynatılarak, süzgece boşaltılıp yıkanmış ve süzülmesi için 1-2 saat bekletilmiştir. Bu taneler, kurutma kağıtları üzerine 2-3 cm kalınlıkta serilip, oda sıcaklığında 4-6 saat süreyle bekletilerek %55 oranında nem içermesi sağlanmıştır. Hazırlanan tanelerin, ph seviyesini 5.5-6.5 arasında tutmak için 2 g kireç, yapışmasını önlemek için ise 8 g alçı eklenmiştir [7 ve 8]. Hazırlanan arpa taneleri 250 ml erlenlerin içine 120 g olacak şekilde doldurulmuştur. Erlenlerin 2
ağzı pamukla iyice kapatılarak, 121ºC de 1 atm basınç altında 15 dakika süreyle otoklavda steril edilmiştir. Petrilerde çoğaltılan miselin aktif gelişim gösteren uç kısımlarından, steril bir bistüri yardımıyla 0.5 cm² büyüklüğünde 2-3 parça kesilerek taneler aşılanmıştır. Erlenler 25±1ºC de inkübasyona bırakılmış, 3-4 günde bir elle sallanarak taneler üzerinde gelişmeye başlayan miselin ortamda homojen dağılması sağlanmıştır. Misel, tüm taneleri sardıktan sonra (Şekil 1c), uzun süre muhafaza edilmesi için erlenler parafilm ile sarılıp 4.0±1ºC de buzdolabına muhafaza edilmiştir. 4. SONUÇLAR VE TARTIŞMA (RESULTS AND DISCUSSION) Doğu Anadolu Bölgesi nde P. eryngii ve varyeteleri doğal olarak yetişmekte ve halk tarafından besin olarak tüketilmektedir. Kültür koşullarında üretimi yapılan P. eryngii nin [8], farklı bitkisel materyaller kullanılarak üretilmesi ve ürün miktarı bakımından da iyi sonuç alınması nedeniyle, bu türün kültür mantarı olarak ileriki dönemlerde yaygın bir şekilde üretilebileceği bildirilmektedir. Kültür mantarı üretiminde, teknik olarak en sık karşılaşılan sorunlardan biri misel üretimi ve spawn materyalinin oluşturulmasıdır. P. eryngii nin misellerinin agar ortamını 10-12 günde sardığı belirtilmiştir [8]. Bu çalışmada P. eryngii var. ferulae nin misellerinin agar ortamını 25 günde sardığı tespit edilmiştir. P. eryngii var. ferulae nin, misel gelişim süresi ve fiziksel görünümünün (Şekil 1b), P. eryngii den [8], farklı olduğu gözlenmiştir. Ayrıca, kültür mantarlarının misel gelişimi üzerine değişik besin maddelerinin etkisinin olduğu bir çok çalışmada ifade edilmiştir [3, 4, 7, 9, 10, 11 ve 12]. (a) (b) (c) Şekil 1. P. eryngii var. ferulae den misel ve tohumluk misel (spawn) elde edilmesi a: P. eryngii var. ferulae nin fruktifikasyonu. b: P. eryngii var. ferulae nin miseli c: P. eryngii var. ferulae nin tohumluk miseli (spawn)). P. eryngii var. ferulae, arpa tanelerini 15 günde sardığı saptanmıştır (Şekil 1c). A. bitorquis miselinin gelişim süresinin, buğday tanelerine ilave edilen katkı maddelerinin etkisiyle değiştiği belirtilmiştir [13]. Pleurotus miselleri haşlanmış buğday ortamını 8-21 günde sardığı, bunun nedeninin türün genetik yapısına bağlı olduğu belirtilmiştir [14, 15, 16, 17 ve 18]. Sonuç olarak, ticari olarak üretilmeyen P. eryngii var. ferulae nin (Resim 1a) doku kültürü yöntemiyle, misel ve spawn materyalinin (Resim 1b-c) elde edilmesiyle kültür mantarı olarak kullanılmasına katkıda bulunacağı ve bundan sonraki çalışmalar için miselin kullanılacağını düşünmekteyiz. 3
TEŞEKKÜR (ACKNOWLEDGMENT) Bu çalışma; Fırat Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Yürütme Birimi FÜBAP-FF-2007-1446 nolu proje ile desteklenmiştir. Katkılarından dolayı FÜBAP a teşekkür ederiz. KAYNAKLAR (REFERENCES) 1. Demir, A., (2003). Mantar. Tarım Ekonomi Araştırma Enstitüsü (TEAE-Bakış), sayı 3, nüsha 4. 2. Gücin, F., (1983). Elazığ İli Sınırları İçinde Yetişen Bazı Makrofunguslar Üzerinde Taksonomik Araştırma, Doktora Tezi, Ege Ünv. Fen Fakültesi, Biyoloji Bölümü, Bornova, İzmir. 3. Antonielli, M., Granetti, B., Pocceschi, N., Lupatelli, M., AND Venanzi, G., (1986). Indagini Preliminari Sulla Crescita del micelio di Pleurotus eryngii (Fr. ex. D.C.) Quelet var. ferulae Lanzi in Presenza di Alcuni Estratti di Ferula communis L. Annali Fac. Agr. Univ. Perugia, Vol XL, 161-172. 4. Granetti, B., (1987). Effetto Stimolante Dell Acida Ferulico Sulla Crescita In vitro del Micelio di Alcuni di Ceppi di P. eryngii (DC ex Fr.) Quel., P. ferulae (Lanzi), P. nebrodensis (Inz.) Quel. Annali Fac. Agr. Univ. Perugia, Vol (XLI) 889-907. 5. Urbanelli, S., Fanelli, C., Fabbri, A.A., Della Rosa, V., Maddau, L., Marras, F., and Reverberi, M., (2002). Molecular genetic analysis of two taxa of the Pleurotus eryngii complex: P. eryngii (DC. Fr.) Quel. var. eryngii and P. eryngii (DC. Fr.) Quel. var. ferulae. Biological Journal of the Linnean Society, (75) 125-136. 6. Zhang, J.X., Huang, C.Y., Ng, T.B., and Wang, H., (2006). Genetic polymorphism of ferula mushroom growing on Ferula sinkiangensis. Applied Microbiol Biotechnol, (71) 304-309. 7. Zadrazil, F., (1978). Cultivation of Pleurotus. In: The Biology and Cultivation of Edible Mushrooms.Chang, S.T., Hayes, W.A. (eds), Academic Press, New York, pp:521-557. 8. Akyüz, M., (2005). Sellülozik Atıkların P. eryngii (DC. ex Fr.) Quel. in Kültüründe Değerlendirilebilme Olanaklarının Araştırılması. Yüksek Lisans Tezi, 48 s, Dicle Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, Diyarbakır. 9. Erkel, İ., (1986). Değişik besi ortamlarının A. bisporus ta spor çimlenmesi ve misellerin gelişmesine etkisi üzerinde araştırma. Tarım Orman ve Köy İşleri Bakanlığı, Proje ve uygulama genel müdürlüğü mantar araştırmaları projesi sonuç raporu, Yalova. 10. Arkan, O., (1992). A. bisporus (Large) Sing. vegetatif miselyumuna mısırözü ve fındık yağı etkileri. Doğa Türk Biyoloji Dergisi, (16)16-32. 11. Yıldız, A., (1993). Pleurotus florida favose nin çeşitli evrelerindeki gelişimi ve verimi üzerine bazı besi ortamlarının etkileri. Doktora Tezi, Dicle Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, Diyarbakır. 12. Yıldız, A. ve Saya, Ö., (1996). Diyarbakır ili ve çevresinde doğal olarak yetişen Pleurotus türlerinin saptanması ve kültüre alma çalışmaları üzerine bir araştırma. Tr. J. of Biology, (20) 65-71. 13. Öztürk, C., (1988). A. bitorquis (Quel.) Sacc. ın misel gelişmesine etki eden besiyerlerinin araştırılması. Selçuk Üniversitesi Fen Dergisi, 8, 275-289. 14. San Antonio, J.P. and Hanners, P.K., (1984). Using Basidiospores of the Oyster Mushroom to Prepare Grain Spawn for Mushroom Cultivation. Hortscience, (19) 648-686. 4
15. Manu-Tawiah, W. and Martin, A.M., (1986). Cultivation of Pleurotus ostreatus Mushroom in Peat. J. the Sci. Food. Agric., (37) 833-838. 16. Yıldız, A., (1994). Pleurotus florida favose misellerinin buğday ve arpa taneleri üzerinde üretilmesi. XII. Ulusal biyoloji kongresi, 6-8 Temmuz, Edirne. 17. Yıldız, A., (1998). Farklı katkı maddelerinin değişik oranlarının Pleurotus florida favose nin Misel gelişimi basidiokarplarının oluşum ve gelişim süreleri ile Verim miktarı üzerine etkileri. Tr. J of Biology, (22) 127-142. 18. 18.Günay, A. ve Abak, K., (1976). Yemeklik mantarın botanik özellikleri ve tarımı. Türkiye I. Yemeklik Mantar Kongresi, 23-24 Kasım, Ankara. 5