AlleisaScreen TM. Panel 22 Pedi TR (solunum ve gıda alerjenleri) 22 allerjenli 20 test membranı

Benzer belgeler
AllergyScreen. İnsan serumundaki spesifik IgE analizine yönelik immunblot. Panel 10 RESP E (solunum allerjenleri) 10 allerjenli 12 test membranı

(Alerjenik bileşim için ekteki uygun sertifikaya bakın)

ALERJİ XXIII. DÜZEN KLİNİK LABORATUVAR GÜNLERİ. Gönül GÜNGEN Ürün Müdürü Siemens Medical Solutions Diagnostics

BRCA 1/2 DNA Analiz Paneli

RTA DNA qpcr Probe Master Mix

RTA JEL / PZR Saflaştırma Kiti

Kistik Fibrozis DNA Analiz Paneli

attomol apo B-100 quicktype

ÜRÜN KULLANIM KILAVUZU

Mitokondrial DNA Analiz Paneli

RIDA qline Allergy. Ürün kodu: A6142 Panel 1 (20 farklı alerjenler) Ürün kodu: A6242 Panel 2 (20 solunum yoluyla alınan alerjenler)

RIDA qline Allergy. R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, D Darmstadt, Almanya, Tel.: +49 (0) / Faks: +49 (0)

RIDASCREEN Leishmania Ab

RIDASCREEN Echinococcus IgG

HASTABAŞI TEST CİHAZI KULLANIMI VE BAKIMI. Dr Sibel DEVECİ Biyokimya Uzmanı

attomol HLA-B*27 Sadece in vitro diagnostik kullanım içindir! 1.Giriş 2. Genel Açıklamalar

MAIA Pesticide MultiTest

%5 Her iki ebeveyn atopik

INNOTEST HIV Antigen mab Neutralization Reagents

ÜRÜN KULLANIM KILAVUZU

Klinik Mikrobiyoloji Laboratuarında Validasyon ve Verifikasyon Kursu 12 Kasım 2011 Cumartesi Salon C (BUNIN SALONU) Kursun Amacı:

Bornova Vet.Kont.Arst.Enst.

TANIMLAR. Dr. Neriman AYDIN. Adnan Menderes Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı

HASTA BAŞI TEST CİHAZI (glukometre) Uz.Dr.Fatma ÇORCU BARAN

KLOR (Cl2) ANALİZ YÖNTEMİ

ImmunoCAP ISAC - Alerjide daha büyük resme ihtiyaç duyduğunuzda

Klinik Mikrobiyoloji Testlerinde Doğrulama (verifikasyon) ve Geçerli Kılma (validasyon)

attomol lactose intolerance C>T quicktype

MOLEKÜLER BİYOLOJİDE KULLANILAN YÖNTEMLER II. ( WESTERN BLOTTING (WESTERN EMDİRİMİ) ve İMMÜNODETEKSİYON

QMS TOPIRAMAT. İmmün testi. Simgelerin Açıklamaları TOPIRAMATE KONTROLLERİ

IMMUN PEROKSİDAZ TESTİ (PEROXİDASE LİNKED ANTİBODY ASSAY-PLA)

QMS LAMOTRIGINE. İmmün testi. Simgelerin Açıklamaları LAMOTRİGİN KALİBRATÖRLERİ

FIN Turku Posta kutusu PO Box 10 Posta kodu ve posta adresi

ÜRÜN KULLANIM KILAVUZU

RTA Kandan Genomik DNA İzolasyon Kiti

RIDASCREEN Toxocara IgG

RIDASCREEN Mycoplasma pneumoniae IgA, IgG, IgM

RIDASCREEN Bordetella IgA, IgG, IgM

ANTİGLOBULİN TESTLER. Dr. Güçhan ALANOĞLU

ELEGANCE FSH ELİZA KİTİ

ELEGANCE PROLAKTİN ELİZA KİTİ

M47 MICROGEN STREP MICROGEN

Polycheck [RAST-compatible] Allergy Diagnostic Cassette-Format

P z o itif Nega g ti a f

RIDASCREEN Influenza A IgA, IgG

ALLERJİ AŞILARI. Prof. Dr. Ömer KALAYCI Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi Pediatrik Allerji ve astım Ünitesi

RTA Plazmid DNA İzolasyon Kiti

α1-antitrypsin quicktype

RTA Viral DNA İzolasyon Kiti Kullanma Kılavuzu Yayın Tarihi

DOKUZ EYLÜL ÜNİVERSİTESİ

İÜ ONKOLOJİ ENSTİTÜSÜ KALİTE KONTROL ve TEST KALİBRASYON PROSEDÜRÜ

RTA Bakteriden Genomik DNA İzolasyon Kiti

SANTRİFÜJ TEKNİKLERİ VE SANTRİFÜJLER

Laboratuar ortamındaki kullanımı

RIDASCREEN VZV IgA, IgG, IgM

ÜRÜN KULLANIM KILAVUZU

1.5 Kalite Kontrol Bölüm Fiziksel Kalite Kriterleri Bölüm Mikrobiyolojik Kalite Kriterleri Mikrobiyal Kontaminasyon

RTA Mayadan Genomik DNA İzolasyon Kiti

ELISA. Dr. Serkan SAYINER -

ANALĐZ ĐÇĐN GEREKLĐ EKĐPMANLAR. Mikro pipet (1000 µl) Ependorf tüpü (1.5 ml) Cam tüp (16X100 mm)

METAL ANALİZ YÖNTEMİ (ALEVLİ ATOMİK ABSORPSİYON SPEKTROMETRE CİHAZI İLE )

ÜRÜN KULLANIM KILAVUZU

Et, Süt ve ürünlerinde ph ölçümü

TEMEL ARAŞTIRMA TEKNİKLERİ II

KLİNİK BİYOKİMYA UZMANLARI DERNEĞİ EKSTERNAL KALİTE KONTROL PROGRAMI IMMUNOASSAY TALİMATI

Solunum Sistemi Allerjik Hastalıklarının Tanısında Mast-Cla, Deri Testleri ve Allerjik Semptomlar Arasındaki İlişki

RTA Dokudan ve Parafine-Gömülü Dokudan Genomik DNA İzolasyon Kiti

Protokolü PD S Reaksiyon

TRANSFÜZYON MERKEZİ HASTALARDA KULLANILAN MİKROBİYOLOJİK TARAMA TESTLERİ TALİMATI

ÜRÜN KULLANIM KILAVUZU


QMS LAMOTRIGINE. İmmün testi. Simgelerin Açıklamaları LAMOTRİGİN KONTROLLERİ

ÜRÜN KULLANIM KILAVUZU

Düzen Laboratuvarlar Grubu ALLERJEN SPESİFİK IgE TEST LİSTESİ

8-Biyolojik İzleme. Volkan Dündar

VERİFİKASYON. Dr. Tijen ÖZACAR. Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji AD - İZMİR

EN ÇOK KULLANDIĞIMIZ TIBBİ ALET

LBX-0612 EV&ARABA İÇİN BİBERON ISITICISI.

RTA Viral Nükleik Asit İzolasyon Kiti

Avian Flu Screening&Typing H5, H7

Kabini boyama. Kabin dış plastik parçaları. Bu belge kabinin plastik ve metal parçalarının boyanması hakkında bilgiler içermektedir.

RIDASCREEN Biotin Makale No.: H 1601

ÜRÜN KULLANIM KILAVUZU

ÜRÜN KULLANIM KILAVUZU

DOKUZ EYLÜL ÜNİVERSİTESİ

Etkin Madde Klorheksidin glukonat (%1)tır. Yardımcı madde olarak; Kuş üzümü aroması, Kiraz aroması ve Nane esansı içerir.

KISA ÜRÜN BİLGİSİ. 1. BEŞERİ TIBBİ ÜRÜNÜN ADI Droser Burun Damlası. 2. KALİTATİF VE KANTİTATİF BİLEŞİM Etkin madde:

5.) Aşağıdakilerden hangisi, kan transfüzyonunda kullanılan kan ürünlerinden DEĞİLDİR?

Laboratuvarda çalışılan tüm test ve uygulamaları içeren rehber hazırlanmalıdır. Test ve uygulama rehberi;

INNO-LIA HIV I/II Score

İÇERİK TABLOSU. In vitro diagnostik medikal gereç. Lot numarası. Katalog numarası. İle Kullanım. Kullanım bilgileri. Sıcaklık sınırlamaları

KLİNİK BİYOKİMYA UZMANLARI DERNEĞİ EKSTERNAL KALİTE KONTROL PROGRAMI

Listeria Monocytogenes Real time PCR Tespit Kiti

Kullanım Talimatları SAS-3 SERUM PROTEIN. Katalog No:

KABUKLULAR FINDIK WHEAT BUĞDAY YUMURTA YER PEANUT FISTIĞI SOYA

KULLANIM KILAVUZU. LCD Array Kit. Süt ID 2.0. Customized LCD-Array Kit. Kod: A

İÇERİK TABLOSU. Kullanılan Semboller Üretici. In vitro diagnostik medikal gereç. Lot numarası. Katalog numarası. ile Kullanım. Kullanım bilgileri

EKOKAT -SP 201- YALITIMLI TERAS ŞAPI

ÇÖZÜNMÜŞ OKSİJEN TAYİNİ

Cakepop pişirme kalıbı

Transkript:

AlleisaScreen TM İnsan serumundaki spesifik IgE analizine yönelik immunoblot Kod. No.: A 135 Kod. No.: A 136 Kod. No.: A 137 Kod. No.: A 142 Panel 22 Mix TR (solunum ve gıda alerjenleri) 22 allerjenli 20 test membranı Panel 22 Resp TR (solunum alerjenleri) 22 allerjenli 20 test membranı Panel 22 Food TR (gıda alerjenleri) 22 allerjenli 20 test membranı Panel 22 Pedi TR (solunum ve gıda alerjenleri) 22 allerjenli 20 test membranı in-vitro test, IVD medikal ürün kılavuzu 98/79/EG kod. 10 2-8 C de saklayınız MEDIWISS Analytic GmbH, Uerdinger Straße 3 D-47441 Moers

1. Kullanım Amacı AlleisaScreen-Test, insan serumunda bulunan allerjen-spesifik immünglobulin E (IgE) in yarı-kantitatif tespiti için kullanılan bir immunoblot testtir. 2. Genel E sınıfı immünglobulinler, ilk olarak 1964 yılında tanımlanmış olup Tip I allerjik reaksiyonların tetiklenmesinde önemli bir rol oynamaktadır. B-limpositler, plazma hücrelerindeki dönüşüm sonrasında salgılarda, bağışıklıktan sorumlu ve kanda dolaşan değişik antikorlar salgılar. B-limpositlerin, antikor salgılayan plazma hücrelerindeki dönüşümü, yardımcı ve baskılayıcı hücreler(t-limpositın bir alt sınıfı) tarafından düzenlenir. Bu düzenleme başarısızlığa uğrarsa, bir B-limposit, zararsız bir antijenede dönüşebilir. Plazma hücreleriyle sonuçlanması Immünglobulin E sınıfı antikorlarını üretir. Bu immünglobulinler, kan dolaşımı yoluyla basofilik granülositlere ve Fcbölgeleri yoluyla spesifik reseptörlere bağlı olan mast hücrelerine doğru ilerler. Organizmanın spesifik alerjenle başka teması varsa bu ilerleme doğrudan IgE antikorlarına doğru olur ve komşu iki molekülü antijen bağlı fab bölgesi vasıtasıyla birbirine bağlar. Bu bağ formasyonu farklı vazoaktif aminleri, özellikle histamini, mast hücrelerinden bağımsızlaştırır ki diğer yüksek aktif medyatörlerle birlikte ürtikasyon, ürtiker(kurdeşen), dermatit, rinit (nasal mukoza enflamasyonu) ateş, astım ve anaflaktik şok gibi Tip I allerjik semptomlara neden olabilir. 3. Test prensibi Spesifik allerjenler, panelde bulunan nitroselüloz membran yüzeyine bağlıdır. Hasta serumu panel içerisine pipetlenip oda ısısında inkübe edilir. Bu sure zarfında allerjen spesifik IgE antikorları allerjenlerle reaksiyona girer ve allerjen vasıtasıyla nitroselüloz membranlara bağlanır. Bağlanmayan material yıkamayla uzaklaştırılır. Ardından, biotinli anti-human IgE antikor çifti ilave edilir ve oda ısısında inkübe edilir. Bu, ilk inkübasyonadan itibaren test al nındaki ilgili spesifik IgE ye bağlanır. Bağlanmayan dedektör antikorları yıkamayla uzaklaştırılır. Daha sonra alkalin fosfatla konjüge edilen streptavidin ilave edilir ve oda ısısında inkübe edilir. Bu, ikinci inkübasyondan itibaren test alanındaki biotine ve pozitif kontrole bağlanır. Bağlanmayan streptavidin konjugatı, yıkamayla uzaklaştırılır. Substrat ilavesi ve oda ısısında inkübasyon sonrasında, test membranlarındaki çökelti oluşumuyla sonuçlanan alkalin fosfat, spesifik bir enzimatik renk reaksiyonu oluşturur. Renklenme, doğrudan serum numunesinin spesifik antikor içeriğiyle orantılıdır. Değerlendirme, test membranının tamamıyle kurumasından sonra, membranın fotoğrafını çeken bir CCD kamera ile (OfficeReader) yapılır. 4. Sağlanan Raktifler Her bir AlleisaScreen test kiti şunları içerir: 2 x 10 test stripleri plastik reaksiyon çukurları, 22 test alanları üzerinde alerjen malzeme ile kaplı nitroselüloz membranlar 2 x konsantre yıkama bufferı (TRIS/NaCl, 0.099% NaN 3 içerir), verim 1 x 500 ml yıkama bufferı, ph = 7,5 (20 ml) 1 x dedektör antikor (beyaz kapaklı şişe), biotin konjuge anti-insan IgE antikorları ile kullanıma hazır, (8 ml) mono/poliklonal 0.099% NaN 3 içerir 1 x streptavidin-konjugat (kırmızı kapaklı şişe), (8 ml) 0.02% methilisotioazolinon ve 0.02% bromonitrodeksan içeren alkalin fosfataz ile konjuge streptavidin kullanıma hazır 1 x substrat (siyah kapaklı şişe), kullanıma hazır (8 ml) BCIP / NBT (bromokloroindolil fosfate/ Nitro Mavi Tetrazolium), 1 x Kullanım manueli - 2 -

5. Gerekli fakat sağlanmayan malzemeler 5.1. Reaktifler Distile veya de-iyonize su. 5.2. Aksesuarlar Vorteks mikser; silindir ölçme (500 ml), 500 ml laboratuar yıkama şişesi, 10 reaksiyon çukuru için yıkama tutucusu; karanlıkta inkübasyon için inkübasyon kutusu (inkübasyon kutusu ve yıkama tutucusundan oluşan sistem MEDIWISS Analitik den elde edilir); ScreenShaker; ticari olarak uygun saç kurutma makinesi (opsiyonel), konva siyonel, ölçüm cihazı (OfficeReader) ve yazıcı. BeeBlot 12 veya BeeBlot 36 (Bee Robotics) otomatik bir işlem için de kullanılabilir. 6. Uyarılar ve önlemler Mevcut kit insan serumunda spesifik IgE-antikorları belirlenmek için in-vitro diagnostik testler içerir. Bu nedenle hasta numuneleri muhtemel enfeksiyonlu olarak dikkate alınarak uygun emniyet önlemleri alınmalıdır. AlleisaScreen dedektör antikor ve AlleisaScreen yıkama buffer koruyucu olarak sodyum azid içerir (0.0995). Cilt veya mukoza membranı ile temasından kaçınılmalıdır. Kurşun veya bakır çubuklarla temas patlayıcı metal azidler oluşturabilir. AlleisaScreen streptavidin konjugat koruyucu olarak methilisotioazolinon ve subtoksik konsantrasyonları içinde br monitrodeksan içerir. Kullanımdan sonra, kullanıcı kişisel olarak kitin tüm bileşenlerinin uygun biçimde atılmasından sorumludur. Muhtemel enfeksiyonlu numunelerle temas eden tüm reaktifler ve materyaller uygun dezenfektanlara tabi tutulmalı veya en az bir saat 121oC de otoklavlanmalıdır. Kit unsurlarının, başka lot numaralı bir kitinkilerle değiştirilmesi veya birleştirilmesi mümkün değildir. Dış ambalaj tahrip olduğunda bütünlüğü sağlamak için tek unsurlar test edilmelidir. Tahrip olmuş kit unsurları veya sızıntı bulunan şişeler kullanılmamalıdır. 7. Saklama Koşulları Reaksiyon çukurunda test stripleri, kuru, serin ve karanlık koşullar altında plastik ambalajda saklanmalıdır. Tüm reaktifler 2-8 C'de muhafaza edilmelidir ve her zaman etiket üzerinde yazılı son kullanım tarihinden önce kullanılmalıdır. Mikrobiyal kontaminasyon önlenmelidir. Son kullanma tarihini geçtikten sonra kalite garanti edilemez. Dilüe edilmiş yıkama bufferı kullanımdan önce en fazla 8 hafta 2-8 C'de saklanabilir. Substrat solüsyonunun (AllergyScreen substrat) streptavidin konjugat solüsyonuyla (AllergyScreen streptavidin konjugat) kontaminasyonu, substrat renklenmesine neden olacağı için önlenmelidir. Benzer şekilde substrat, kendiliğinden oksidasyonla bozulma veya renklenmeye neden olacağı için direkt günışığından uzakta tutulmalıdır. Substrat renklenirse kullanım için uygun olmaz. 8. Reaktiflerin bozulma veya stabilitelerinin bozulması Substratın, panele ilave edilmeden once mor renk alması veya bulanıklaşması reaktifin bozulduğunu gösterir. 9. Numune toplama ve saklama AllergyScreen, insan serum numunelerinde test edilmek için geliştirilmiştir. Kan numuneleri, topuktan alınarak elde edilmeli ve serum, koagülasyondan sonra (30 40 dakika) 4000 g de 10 dakika santrifüjlemeyle ayrılmalıdır. Numunelerin tekrar tekrar dondurulup çözündürülmesinden ve mikrobiyal kontaminasyondan her aşamada kaçınılmalıdır. Isıtılarak inaktif hale getirilmiş, lipemik, hemolitik, sarılık taşıyan veya bulanıklaşmış numuneler hatalı sonuçlara neden olabilir. Test hemen yapılmayacaksa, numune 2-8 C de bir hafta kadar saklanabilir. Numuneler -20 C veya daha düşük ısıda daha uzun süre saklanabilir. - 3 -

10. Test prosedürü 10.1. Genel bilgi Kullanımdan once tüm reaktifler ve paneller oda ısısına (20-22 C) getirilmelidir. Reaktifler kullanımdan once iyice karıştırılmalıdır. Sonuçların tekrarlanabilirliği, kesin pipetleme, inkübasyon süreleri ve ısılarına kesin olarak riayet edilmesi ve test membranlarının aynı şekilde yıkanmasına bağlıdır. Daha yüksek ısılar verilmekteyse, substratın gelişim zamanı(son aşama) C başına (> 25 C) (genel kural) ½ dakika azaltılmalıdır. Testi çalışılırken doğrudan günışığından sakınılmalıdır. Panellerin, inkübasyon sırasındaki buharlaşmadan kaynaklanan kaybı önlemek için kapalı tutulması tavsiye edilir. Paneller sadece elle tutulmalıdır. Reaksiyon yüzeyiyle temastan kaçınılmalıdır. Hasta verileri (laboratuvar numarası gibi) sabit kalem kullanılarak panel üzerine yazılmalıdır. Şart koşulan inkübasyon zamanı ve ısısından sapma hasta serumu için hatalı sonuçlara neden olur. Substrat inkübasyonu (dördüncü inkübasyon Bölüm 10.9 a bakınız) substratın kendiliğinden renklenmesini önlemek için karanlıkta yapılmalıdır. Test, sadece deneyimli personel tarafından yapılmalıdır. Lütfen, tıbbi laboratuvarlardaki emniyet kurallarına bakınız. Test protokolü sıkı biçimde takip edilmelidir. 10.2. Yıkama bufferı hazırlama Herbir konsantre AllergyScreen yıkama solüsyonu şişesinin muhteviyatı 500 ml lik ölçülü silindire boşaltılır, çözündürülür ve distile suyla 500 ml yapılır ve laboratuvar yıkama şişesine nakledilir. Eğer gerekliyse konsantre içerisindeki kristalleri, 37 C de önceden ısıtılan su içerisinde çözündürün. 10.3. İlk inkübasyon Test için gerekli sayıda panel paketten çıkartılır, yıkama şişesi içerisindeki dilüe yıkama solüsyonu ile bir kaç saniye lavaboda yıkanır ve 300 μl hasta serumu pipetlenir. Her serum için yeni bir pipet kullanılmalıdır! Ardından, paneller oda ısısında (20-22 C) 45 dakika boyunca ScreenShaker üzerinde inkübe edin. 10.4. Yıkama Paneller, hazırlanmış yıkama solüsyonu(yıkama şişesi) kullanılarak 5 saniye lavaboda yıkanır. Paneller aşağıya doğru çapraz tutulur. Stripler bir kaç defa yıkama solüsyonuyla yıkanmalıdır. Paneller içerisindeki solüsyon birkaç saniye çalkalanırsa yıkama etkisi artar. Bu işlemde 10 çukura eklenen veya otomatik Western Blot analizörü kullanan yıkama tutucusunu basitleştirebilir(beeblot 12 or BeeBlot 36, Bee Robotics). 10.5. İkinci inkübasyon Sonra, her panele 300 μl AlleisaScreen tespit antikoru koyun. Panelleri, 45 dakika boyunca oda sıcaklığında ScreenShaker da inkübe edin. 10.6. Yıkama Bölüm 10.4 de açıklandığı gibi yıkayın 10.7. Üçüncü inkübasyon Bundan sonra her panele, 300 µl AlleisaScreen streptavidin konjugatı koyun. Panelleri shaker da oda ısısında 20 dakika inkübe edin. 10.8. Yıkama Bölüm 10.4 de açıklandığı gibi yıkayın. - 4 -

10.9. Dördüncü yıkama Sonra, her panele 300 μl AlleisaScreen substrat koyun. Panelleri ScreenShaker üzerinde oda sıcaklığında 20 dakika boyunca karanlıkta inkübe edin. İnkübasyon tamamlandıktan sonra, test stripleri akan su altında kısa bir süre durulayarak renk reaksiyonunu sonlandırın. Stripler, hava veya kurutma işlemini hızlandıracak bir saç kurutma makinesiyle kurutulur. Test stripleri kuruduğunda mavi-mor arkaplan rengi kaybolur. Test stripleri tamamen kuruyuncaya kadar test değerlendirmesi yapılmamalıdır. Test prosedürünün özeti A. Reaktifleri oda sıcaklığına getirin (20 22 C). B. Konsantre AlleisaScreen yıkama buffer 1:25 oranında dilüe edin. C. Panellerdeki membranları yıkama bufferı ile nemlendirin. Alerjen stripleri ile yüklü ilgili panele 300 μl serum numunesini pipetleyin. Oda sıcaklığında 45 dakika boyunca ScreenShaker üzerinde inkübe edin. D. Yıkama için, paneli çapraz tutarken dilüe yıkama solüsyonunu yıkama şişesinden test stripleri üzerine akıtın. Buffer ile birkaç kez panelleri doldurun ve çukur içindeki solüsyonu birkaç saniye boyunca elle çalkalayın. E. 300 μl AlleisaScreen dedektör antikoru ekleyin; ScreenShaker üzerinde 45 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. F. Yıkama (nokta D bakın.) G. 300 µl AlleisaScreen streptavidin konjugat ekleyin; ScreenShaker üzerinde 20 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. H. Yıkama (nokta D bakın.) İ. 300 µl AlleisaScreen substrat ekleyin; ScreenShaker üzerinde 20 dakika boyunca oda sıcaklığında karanlıkta inkübe edin. J. Akan su altında kısa bir süre yıkayarak substrat reaksiyonunu durdurun. K. Membranları tamamen kurutun ve OfficeReader içinde değerlendirin. 11. Analizler 11.1. Strip konfigürasyonu Panel 22 Mix TR Panel 22 Resp TR Panel 22 Food TR Panel 22 Pedi TR Control Control Control Control Derm. pteron. (d1) Derm. pteron. (d1) Milk (f2) Mite mixture (dx) Derm. farinae (d2) Derm. farinae (d2) Egg white (f1) Cockroach (i6) Grass pollens, early (gx1) Grass pollens, early (gx1) Tomato (f25) Birch (t3) Grass pollens, late (gx2) Grass pollens, late (gx2) Hazelnut (f17) Mixed grasses (gx) Flower pollens (wx4) Grain pollens (gx4) Peanut (f13) Olive pollen (t9) Mixed grasses (gx) Rye (g12) Sea fish (fx3) Mugwort (w6) Rye (g12) Latex (k82) Chicken (f83) Parietaria (w19) Mugwort (w6) Tree pollens, early (tx1) Red meat (fx8) Cat (e1) Ragweed (w1) Tree pollens, late (tx2) Sesame (f10) Dog (e5) Cat (e1) Herb pollens 1 (wx1) Cacao (f97) Alternaria (m6) Horse (e3) Herb pollens 3 (wx3) Casein (f78) Milk (f2) Dog (e5) Flower pollens (wx4) Gluten (f79) α-lactoalbumin (f76) Egg yolk (f75) Plantain (w9) Egg yolk (f75) β-lactoglobulin (f77) Egg white (f1) Sheep wool (b21) Peach (f53) Casein (f78) Milk (f2) Cage birds (ex7) Banana (f29) Egg white (f1) Peanut (f13) Mould fungi 1 (mx1) Strawberry (f44) Egg yolk (f75) Hazelnut (f17) Mould fungi 5 (mx5) Cherry (f73) Soybean (f14) Carrot (f31) Mould fungi 9 (mx9) Potato (f35) Carrot (f31) Wheat flour (f4) Cat (e1) Green Bean (f132) Wheat flour (f4) Soybean (f14) Cockroach (i6) Orange (f33) Hazelnut (f17) Red meat (fx8) Bee venom (i1) Wheat flour (f4) Peanut (f13) Sea fish (fx3) Wasp venom (i3) Soybean (f14) Cod fish (f3) Alerjenlerin dizisi Şekil 1 gösterilir. - 5 -

Strip AlleisaScreen Panel 22 Mix TR (Art. No. A 135) aşağıdaki 22 alerjenleri içerir: Pozitif kontrol, Ev tozu akarı I (Dermatophagoides pteronyssinus), ev tozu akarı-ii (Dermatophagoides farinae), erken çıkan çim polenleri, geç çıkan çim polenleri, çiçek polenleri, karışık çimen, çavdar, pelin, ambrosia, kedi, at, köpek, yumurta sarısı, yumurta akı, süt, fıstık, fındık, havuç, buğday unu, soya, kırmızı et, balık Strip AlleisaScreen Panel 22 Resp TR (Art. No. A 136) aşağıdaki 22 alerjenleri içerir: Pozitif kontrol, Ev tozu akarı I (Dermatophagoides pteronyssinus), ev tozu akarı-ii (Dermatophagoides farinae), erken çıkan çim polenleri, geç çıkan çim polenleri, hububat polenleri, çavdar, lateks, erken ağaç polenleri, geç ağaç polenleri, ot polenleri 1, ot polenleri 3, çiçek polenleri, muz, koyun yünü, kafes kuşları, küf mantarları 1, küf mantarları 5, küf mantarları 9, kedi, hamam böceği, arı zehiri, yaban arısı zehiri Strip AlleisaScreen Panel 22 Food TR (Art. No. A 137) aşağıdaki 22 alerjenleri içerir: Pozitif kontrol, süt, yumurta akı, domates, fındık, fıstık, balık, tavuk, kırmızı et, susam, kakao, kazein, glüten, yumurta sarısı, şeftali, muz, çilek, vişne, patates, yeşil fasulye, portakal, buğday unu, soya Strip AlleisaScreen Panel 22 Pedi TR (Art. No. A 142) aşağıdaki 22 alerjenleri içerir: Pozitif kontrol, Mite karışımı (Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae), hamamböceği, huş, karışık çimen, zeytin polen, pelin, Parietaria, kedi, köpek, Alternaria, süt, α-lactoalbumin, β-lactoglobulin, kazein, yumurta beyazı, yumurta sarısı, soya, havuç, buğday unu, fındık, fıstık, morina balığı Negatif kontrol test striplerinin yüzeyi alerjen ile (ilgili son allerjen aşağıdaki alanda) kaplanmamıştır. Biotin- etiketli sığır serum albümin olumlu bir kontrol olarak (her test stripinin en sonunda) uygulanmıştır. 11.2. Serum bulguları Western-Blot çizgilerinin dijital fotografik değerlendirmesi software in geliştirme temelidir. Sistem bir CCD kamera ile test striplerinin fotoğraflarını çekerken bir yazılım programı allerjen hattının renklenmesini değerlendirir. Bu, dahili standart internal eğrili her membran çizgisinin ot polen standardı esasında hesaplanan integral yüzeyinde karşılaştırılarak ve bu sınıflar içerisinde gruplanarak elde edilir. Bu sınıflar, iu/ml deki spesifik IgE içeriği ile doğrudan ilgilidir. Stripler üzerindeki etkileşimler bir yuvarlak disk ve bir cut-off " değeri ile matematiksel olarak hesaba katılır. Ölçüm sonrasında alınan çıktı, kullanıcıya membran fotoğrafını sağlar, membranın densitometre eğrisi, sınıflar ve her alerjen bandı için konsantrasyon verileri iu/ml cinsindendir Her hastanın verileri sistem içerisinde saklanıp dokümante edilmektedir ve tekrar elde edilebillir. Her allerjen vakasında, test alanlarındaki renk yoğunluğu hasta serumunda bulunan spesifik IgE antikorlarının miktarıyla doğrudan orantılıdır. Ölçümü takiben membranlı panelin okuyucu içerisine konulmasıyla bilgi yöneticisi (OfficeReader) kullanılarak kantitatif değerlendirme yapılır. Bir bilgisayar bağlantısıyla analiz sonuçları yazdırılabilir ve Test Sınıfı 0-6 ya gore tespit edilir. Okunmuş sınıflar Tablo 1 kullanılarak her allerjenin IgE içeriğine çevrilebilir. Ölçüme başlarken allerjen paneline bağlı olarak önceden tanımlanmış doğru testin kullanılmasına dikkat edilmelidir. Fig. 2: AlleisaScreen de optik yoğunluk: Bir ELISA-sistemi ile karşılaştırıldığında insan serumunda ot IgE-antikor konsantrasyonu ile ot allerjen hattının korelasyonu - 6 -

Tablo1: Bulunan sınıflar ve hastanın serumunun spesifik alerjenlerinin IgE içeriği arasındaki ilişki iu/ml Sınıf Alerjen-spesifik IgE içeriği 11.3. Kalite Kontrol < 0.35 iu/ml 0 Yok yada çok az 0,35 0.69 iu/ml 1 Düşük 0.7 3,4 iu/ml 2 Artmış 3,5 17,4 iu/ml 3 Önemli ölçüde artmış 17,5 49.9 iu/ml 4 Yüksek 50 100 iu/ml 5 Çok yüksek > 100 iu/ml 6 Aşırı yüksek Pozitif bir kontrol her test stripi üzerinde sağlanmaktadır. Bu testi yaparken doğru yapılıp yapılmadığını kontrol etmek için kullanılır. Eğer bir sınıf değeri pozitif kontrol için <2,5 küçükse, test geçerli değildir. Bu durumda, testi tekrar etmeden önce lütfen aşağıdakileri kontrol edin: Reaktiflerin son kullanma tarihi. Kullanılan cihazın kalibrasyonu kalibrasyon dosyası doğru ile yapılıp yapılmadığı Tam test prosedürü. OfficeReader cihazına panelleri tam olarak yerleştirilip yerleştirilmediği Kit unsurlarının kontaminasyon, bozulma veya sızıntı belirtisine yönelik görsel incelemesi Subtrat, siyaha döndüyse kullanılmamalıdır Kontrol verileri karşılanmıyorsa test tekrarlanmalıdır, lütfen distribütörünüzle görüşünüz. 11.4. Dokümantasyon Test stripleri kuruduktan ve OfficeReader da değerlendirme tamamlandıktan sonra, bir cımbız ile paneller çıkarılabilir ve bir çalışma logunda belgelenebilir. Ölçüm verileri (test stripinin ve değerlendirmesinin fotografı) PC önceden seçilen dizinde sabit diske kaydedilir. Test edilen her serumun veri yazdırması PC'ye bağlı grafiksel olarak standart bir yazıcı kullanılarak yapılabilir: - 7 -

12. İstatistiki veriler: değişimler, duyarlılık, spesifite ve doğruluk Optik yoğunluğunun intra- test varyasyonu: ortalama değer 6,2 % Optik yoğunluğunun inter- test varyasyonu: ortalama değer 3,1 % Yöntemin duyarlılık ve özgüllüğünü belirlemek için cilt delme testi ve AllergyScreen arasında 737 karşılaştırma, 142 serumlu klinik bir çalışmanın (1) bir çerçevesi içinde yapıldı. Duyarlılık: 95.1 % Özgüllük: 80.2 % Doğruluk: 88.3 % Ayrıca 881 karşılaştırma AllergyScreen ve ELISA-tek test sistemi arasındaki bu çalışmada yapıldı. Duyarlılık: 84.3 % Özgüllük: 95.0 % Doğruluk: 90.6 % 13. Spesifik IgE tespitinin klinik önemi hakkında açıklamalar Alerji teşhisi sadece laboratuvar test sonuçlarına dayalı değildir. Klinik profil (farklı in-vivo ve in-vitro testlerinde alınan sonuçlar) ile Anamnesis (klinik geçmiş) birleştirilinceye kadar tüm görünümü elde etmek mümkün değildir. Bu test sistemi kullanılarak tespit edilen sınıflar, hastaların, incelenen ayrı ayrı allerjenlere olan hassasiyet derecesi hakkında bir yorum yapmayı olanaklı kılar. Spesifik antikorların mevcudiyetinin tespiti deri testi gibi in-vivo metodların pratik ve önemli bir ilavesini temsil eder. Ayrıca, in-vitro testi, tanımlanan Tipi 1 alerjen-spesifik duyarlılığının sık sık mümkün olan tek yoludur. AllergyScreen, bu şekilde, hasta serumundaki IgE antikorlarının spesifik immünolojik reaksiyonunundaki spesifik allerjen çizgi sonuçlarına karşı belirgin bir pozitif renklenme oluşturur. Yinede bu, eğer klinik ilgi olmaksızın sadece hassaslaştırma varsa hastanın uygun allerjene karşı olan gerçek klinik resmini göstermesi için gerekli değildir. 14. Literatür: Kersten, W. (2002) : Vergleich des AllergyScreen (MEDIWISS Analytic, Moers) mit dem Hauttest (HAL, Düsseldorf -in-vivo) und dem CAP- System (Pharmacia, Freiburg -in-vitro). Allergologie 25/4:203-208 Herzum et al. (2005) : Diagnostic and analytical performance of a screening panel for allergy. Clin Chem Lab Med 43(9): 963-966 Made in Germany MEDIWISS Analytic GmbH Gesellschaft für angewandte in-vitro Analytik mbh Uerdinger Straße 3 D-47441 Moers Tel.: +49 (0) 2841/88 90 470 Fax.: +49 (0) 2841/88 90 472 Pwahl@mediwiss-analytic.de - 8 -