1 İÇERİKLER 1 Kullanım amacı 2 Özet ve açıklama 3 Prensip 4 Reaktifler 5 Dikkat 6 Saklama ve stabilite 7 Örnek toplama ve hazırlama 8 Metodoloji Sayfa no. Beckman Coulter IMMAGE /IMMAGE 800 üstünde kullanım için Freelite İnsan Lambda Free Kit in-vitro diagnostik kullanım için Ürün Kodu: LK018.IM Ürün tarafından üretildi: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, UK. www.bindingsite.co.uk Telefon: +44 (0)121 456 9500 Fax: +44 (0)121 456 9749 e-mail: info@bindingsite.co.uk Avrupa ve ABD de, Freelite The Binding Site Group Ltd. tescilli markasıdır, Birmingham, UK. IMMAGE ve IMMAGE800 Beckman Coulter Inc. tescilli markalarıdır, Brea, California, USA. FDA (USA) Bilgi Analit İsmi Complexity Cat. Lambda Hafif Zincirler Moderate 9 Kalite kontrol 10 Sınırlamalar 11 Beklenen değerler 1 KULLANIM AMACI Bu kit Beckman Coulter IMMAGE / IMMAGE 800 üstünde serum ve idrarda lambda free hafif zincirlerin kantitasyonu için amaçlanır. Free hafif zincirlerin ölçümü, multiple myeloma, lenfositik neoplaziler, Waldenstrom s makroglobulinemia, AL amyloidosis, hafif zincir birikim hastalığı ve systemic lupus erythematosus gibi bağ doku hastalıklarının tanısı ve izlenmesinde diğer laboratuvar ve klinik bulgularla birlikte yardımcıdır. 12 Performans özellikleri 13 Bibliyografi Deutsch Français Español Português Siehe Seite Cf. page Página Veja páginas 2 ÖZET VE AÇIKLAMA Immunoglobulin molekülleri immunoglobulin sınıfını tanımlayan iki aynı ağır zincir (α, δ, ε, γ veya μ) ve iki aynı hafif zincirden (κ veya λ) oluşur. Her hafif zincir ağır zincire kovalent olarak bağlanır ve iki ağır zincir hinge bölgesinde kovalent olarak bağlanır. Sağlıklı bireylerde serumdaki hafif zincirin çoğunluğu bu formda bulunur, ağır zincire bağlanır. Ancak free hafif zincirin (FLC) düşük seviyeleri plazma hücreleri tarafından FLC aşırı üretimi ve salgılanmasından dolayı normal bireylerin serumunda bulunur. Serumda her iki hafif zincirin moleküler ağırlığı 22.5kD iken κ free hafif zincir (κ- FLC) ağırlıklı olarak monomer olarak bulunur ve λ free hafif zincir (λ-flc) 45kD moleküler ağırlıkla kovalent olarak bağlı dimer olarak bulunur. Bu κ-flc ve λ-flc için farklı glomerular filtrasyon oranına yol açar ve bağlı 2.0 κ - λ oranı ile kıyaslandığında serumda gözlenen oran 0.625 κ-flc - λ-flc açıklanabilir. İdrardaki FLC seviyeleri düşüktür. Sağlıklı böbrekte tubular hücreler seçici olarak tüm FLC tekrar absorbe eder bu nedenle idrardaki varlıkları muhtemelen idrar yoluna salgılamadan dolayıdır. Monoclonal FLC yükselen serum seviyeleri malignant plazma hücre çoğalması (ör. çoklu myeloma), AL amyloidosis ve light chain deposition hastalığı ile ilişkilidir. Polyclonal FLC artan serum seviyeleri SLE gibi otoimmun hastalıklarla ilişkili olabilir. İdrarda daha FLC seviyelerinin görünmesi böbrek hastalıkları veya çoklu myeloma gibi malignant lymphoproliferative hastalığının göstergesi olabilir. Lymphoid malignancy ile ilişkili monoklonal urinary FLC, Bence Jones proteini olarak adlandırılır. (1-13) 3 PRENSİP Turbidimetri ile çözünebilir antijenin konsantrayonunu değerlendirme reaksiyon kabında veya küvette uygun antikor içeren solüsyona test örneğinin eklenmesini içerir. Işık demeti küvetin içinden geçer ve antijen-antikor reaksiyonu devam ettiği için, küvetten geçen ışık çözülemeyen immun kompleksler oluştuğu için giderek dağılır. Işık dağılması ışık demeti olayının yoğunluğundaki azalma ölçülerek izlenir. Küvetteki antikor fazladır bu nedenle oluşan immun kompleksin miktarı antijen konsantrasyonu ile orantılıdır. Bilinen antijen konsantrasyonunun kalibratörlerinin serileri ilk olarak antijen konsantrasyonuna karşı ölçülen ışık saçılımının eğrisi üstünde bir kalibrasyon üretmek için test edilir. Bilinmeyen antijen konsantrasyonunun örnekleri sonra test edilebilir ve kalibrasyon eğrisinden sonuçlar okunabilir. Turbidimetrik testlerin duyarlılığı partikül artışının kullanılmasıyla arttırılabilir. (6) Bu, antijenantikor reaksiyonunun ilgili ışık-saçılım sinyalini arttıran uygun boyutta partikül için antikora bağlanma gerektirir. 4 REAKTİFLER 4.1 Lateks reaktif: polistiren lateks üstüne kaplı polyklonal monospesifik antikordan oluşur. Koruyucular: %0.05 ProClin *, %0.1 E-amino-n-caproic asit (EACA) ve %0.01 benzamidin. 4.2 Standart ve kontroller: lambda free hafif zincir içeren insan serumu içerir. Stabilize sıvı formda sağlanır ve koruyucu olarak %0.099 sodyum azid, %0.1 EACA ve %0.01 benzamidin içerir. 4.3 Ek reaktif: koruyucu olarak %0.099 sodyum azid içerir. *ProClin Rohm and Haas Corp. markasıdır, Philadelphia, PA. 5 DİKKAT Insert Code: SIN054, Version: 7 th May 2013, Page 1 of 18 Bu kitte sağlanan insan serumunun tüm donorleri serum test edilmiştir ve hepatit B yüzey antijeni (HBsAg) ve insan immunodeficiency virüs (HIV1 ve HIV2) ve hepatit C virüsü için antikorlar için negatif bulunmuştur. Kullanılan testler FDA (USA) tarafından onaylıydı veya AB de in vitro diagnostik kullanım için açıklanmıştı (Direktif 98/79/EC, Ek II); ancak bu testler bulaşıcı maddelerin yokluğunu garanti edemez. Uygun kullanım ve atma yöntemleri tüm potensiyel olarak bulaşıcı materyaller için olduğu gibi belirlenmelidir, her zaman uygun koruyucu ekipman ve giysi giyen kullanıcılar dahil (ancak bunlarla sınırlı değil). Sadece bu tip yöntemlerde tam olarak eğitim alımış personel bu prosedürleri gerçekleştirmek için izinli olmalıdır.
Bu ürün sodyum azid ve ProClin 300 içerir ve dikkatle kullanılmalıdır. Yutmayın veya cilt (özellikle bozulmuş cilt veya açık yaralar) veya mukoza ile temasına izin vermeyin. Eğer temas meydana gelirse bol su ile yıkayın ve acil tıbbi yardım alın. Patlayıcı metal azidler kurşun ve bakır ile sodyum azidin uzun süreli teması halinde oluşabilir; reaktifin atımında azid birikimini önlemek için bol su ile yıkayın. Bu ürün sadece Kullanım Amacında belirtilen amaçlar için uygun eğitimli personel tarafından kullanılmalıdır. Bu talimatlara sıkı bağlılık her zaman esastır. Eğer parametreler kullanılan talimatlarda belirtilenlerin dışında ise sonuçlar muhtemelen geçersizdir. Farklı parti numaralı kitlerin reaktifleri değiştirilebilir DEĞİLDİR. Eğer çok sayıda test yapılıyorsa tüm reaktiflerin aynı gruptan olmasının sağlanmasına dikkat edilmelidir. 6 SAKLAMA VE STABİLİTE 8.4.1.3 Üzerinde listelenen protokol bilgisinden chemistry ismini ve istenen birimleri (ör. mg/l) girin. Immage üstünde: Reaktif lot numarasını (altı numarayı takiben bir harf) ve UDR Kartuşun arkasında belirtildiği gibi seri numarasını (üç numarayı takiben bir harf) girin. Immage 800 üstünde: Reaktif lot numarasını, Kartuş lot numarasını (altı numarayı takiben bir harf) ve Kartuş seri numarasını (üç numarayı takiben bir harf) UDR Kartuşun arkasında belirtildiği gibi girin. Kalibratörler, tekrarlar ve konsantrasyonların sayısının girildiği Sayfa 2 dahil aşağıda listelenen parametreleri girin (her kalibratör değeri ürün veri kağıdında (SIN054.DS) belirtilir). Bu kalibratörler artan sırada girilmelidir, ör. en düşük konsantrasyon birinci. Reaktif son kullanma tarihi reaktif şişe etiketinde belirtilir. Parametreler girilirken örnek dilüsyonu kalibratör dilüsyonu ile aynı şekilde otomatik olarak girilir. Bu nedenle kalibratörün farklı seyreltmesinde bir örneği çalıştırmak için, chemistry ilk kalibre edimeli ve onaylanmalıdır. Ancak ondan sonra örnek seyreltme aşağıdaki gibi girilebilir. (8.4.5. Örnekleri Programlama kısmına bakın). Lot/Seri numarası kartuştan kullanılan 300 testten önce silinirse tekrar programlanamayabilir (ör. bir kez silinen bir kartuş tekrar kullanılamaz). 8.4.1.4 Tüm parametreler girildiğinde Save F9 seçin. Bu parametreler Print F10 ve sonra Definition Report seçilerek yazdırılabilir. OK seçin. 8.4.1.5 Chem. Config.F9 seçin ve serbest bir pozisyonda tıklayarak ve önceden parametrelere girilen chemistry ismini yazarak testin Configuration Pozisyonunu seçin. IMMAGE Parametreler: CHEM: Lambda Free Reaktif Lot Numarası: Reaktif Seri Numarası: PROTOKOL BİLGİSİ Birimler: mg/l Protokol: Non-Competitive NIPIA Reaktif Son kulanma tarihi: Örnek veya Dilüsyon Hacmi: 5 L Gain: 1 Reaksiyon Buffer Hacmi: 195 L Kal Dilüsyonu: 1:1 Bölme A Hacmi: 5 L Örnek Dilüsyonu: 1:10 Bölme B Hacmi: 60 L Reaksiyon Süresi: 10.0 Dakika Açılmamış kit 2-8 C de saklanmalıdır ve kit kutusunun etiketinde gösterilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir. DONDURMAYIN. Lateks reaktif, kalibratör ve kontrol KALİBRASYON BİLGİSİ buharlaşma ve kontaminasyonu önlemek için önlemler alınması şartıyla açıldıktan sonra üç Seviyeler: 6 Kal Seviyesi Kal Setpoint aya kadar 2-8 C de saklanabilir. Tekrarlar: 1 1 # 2 # 3 # 4 # 5 # 6 # 7 ÖRNEK TOPLAMA VE HAZIRLAMA # - ürün veri kağıdında verilen değeri girin Taze veya derin donduruulmuş serum veya idrar örnekleri kullanın. Serum venipunktür yoluyla alınmalıdır, pıhtılaşmaya izin verilmelidir ve sonra hemolizi önlemek için en kısa sürede ayrılmalıdır. Örnekler 21 güne kadar 2-8 C de saklanabilir, daha uzun süreli saklama için -20 C veya aşağısında dondurulmuş tutulmalıdır. Tekrarlanan dondurma /çözdürme döngülerinden kaçınılmalıdır.. Mikrobiyel olarak kontamine idrar veya serum örnekleri, partiküler madde içeren örnekler ve lipemik veya hemolize olmuş serum örnekleri kullanılmamalıdır. 8 METODOLOJİ Not: sonuçların tam yorumlanmasını sağlamak için free kappa/lambda oranları tanımlanmalıdır; bu nedenle örnekler ayrıca The Binding Site s Freelite Kappa Free kit (LK016.IM) kullanılarak test edilmelidir. 8.1 Sağlanan materyaller 8.1.1 2 x 3.5mL İnsan Lambda Free Reaktif 8.1.2 1 x 3.0mL Lambda Free Ek Reaktif 8.1.3 1 x İnsan Lambda Free Kalibrator Set (6 x 1.0mL) 8.1.4 8.1.5 1 x 1.5mL İnsan Lambda Free Kontrol 1 x 1.5mL İnsan Lambda Free High Kontrol IMMAGE 800 Parametreler: CHEM: Lambda Free PROTOKOL BİLGİSİ Reaktif Lot Numarası: Birimler: mg/l Kartuş Lot Numarası: Protokol: Non-Competitive NIPIA Kartuş Seri Numarası: Reaktif Son kulanma tarihi: Kartuş başına test: AGXS Limiti: AGXS Enabled: Buffer: BUF 10 Seyreltici: DIL 10 Örnek veya Dilüsyon Hacmi: 5 L Gain: 1 Reaksiyon Buffer Hacmi: 195 L Kal Dilüsyonu: 1:1 Bölme A Hacmi: 5 L Örnek Dilüsyonu: 1:10 Bölme B Hacmi: 60 L Reaksiyon Süresi: 10.0 Dakika CAKALİBRASYON BİLGİSİ Seviyeler 6 Kal Seviyesi 8.2 Gerekli ama sağlanmayan materyaller Tekrarlar: 1 1 # 2 # 8.2.1 Test örneklerinin toplanması ve hazırlanması için ekipman ör. örnek tüpleri, Update Level: 3* 3 # santrifüj vs. Tekrarlar: 1* 4 # 8.2.2 Tamamen operasyonel ve donanımlı Beckman Coulter IMMAGE / IMMAGE 800 5 # analizör. 6 # 8.2.3 Beckman Coulter IMMAGE Kullanıcı Tanımlı Reaktif Kartuşları (Beckman Coulter part numarası: 447250). 8.2.4 Beckman Coulter IMMAGE Diluent 1 (Beckman Coulter part numarası: 447640). 8.2.5 Mikro-örnek kabları 0.5mL (Beckman Coulter part numarası: 663773). 8.2.6 IMMAGE örnek rakları (Beckman Coulter part numarası: 470719 ve 470720). 8.3 Reaktif hazırlama Yüklemeden önce, reaktif aspirasyonuna müdahele edebileceğinden köpük ya da kabarcık oluşmamasını veya yüzeyde kalmamasını sağlayarak ters çevirerek hafifçe karıştırın. 8.4 Test prosedürü Kullanıcı test prosedürlerini yapmaya başlamadan önce User Defined Reagents (UDR) seçeneği ile aşina olmalıdır. User Defined Chemistry çalıştırmak için reaktifler UDR Kartuşu içine yerleştirilmelidir. Her reaktif kartuşu analizör tarafından belirlenen özgün bir barkoda sahiptir, sadece aspire edilecek 300 çekim reaktife olanak sağlar. Kartuş sonra atılmalıdır. 8.4.1 Programlama parametreleri 8.4.1.1 Setup ve sonra Option No.18 - User Defined Chemistries seçin. 8.4.1.2 Bir blank kanalı seçin ve Define Edit F1 seçin. Kal Setpoint # - ürün veri kağıdında verilen değeri girin * - bu parametreler single point kalibrasyonla kullanım içindir, müşterilerin SADECE tam kalibrasyon eğrisi çalışmasını şiddetle öneririz. 8.4.1.6 Rgts/Cal ve sonra Buffer/Diluent F3 seçin. Boş Reagent Carousel poziyonu yanındaki bir oka tıklayın. BUF10 seçin ve analizörde Reagent Carousel pozisyonuna Beckman Diluent 1 şişesini yerleştirin. Sonra boş Sample Carousel pozisyonu yanındaki bir oka tıklayın. DIL10 seçin ve analizörde Sample Carousel pozisyonunda başka Beckman Diluent 1 şişesi yerleştirin. OK seçin. 8.4.2 QC parametrelerini programlama 8.4.2.1 QC seçin, mevcut bir kontrol numarası seçin ve Define/Edit F2 üstüne tıklayın. 8.4.2.2 İlişikteki Ürün Veri kağıdında (SIN054.DS) belirtildiği gibi Kontrol ismi ve lot numarasını girin. Örnek tipi için serum seçin. 8.4.2.3 Add/Del Chems F1 seçin ve Configured Chemistries listesinden Lambda Free seçin. 8.4.2.4 Belirlenen ortalamayı girin, SD ( SIN054.DS Ürün Veri kağıdından). 8.4.2.5 Control ID F2 seçin ve kontrol ismini girin. 8.4.3 Kalibrasyon eğrisi çalışma 8.4.3.1 Lateks reaktifi UDR kartuşun bölme B sine ve ek reaktifi bölme A ya aktarın. 8.4.3.2 Rgts/Cal seçin, UDR kartuşu reaktif carousel üstüne yerleştirin böylece bölme A carousel dışında olur. Read Reagent F1 seçin. OK seçin. Cihaz reaktif carousel üstündeki kartuşların barkodlarını okuyacaktır. Chemistries, kalan test sayıları ve kalibrasyon durumuyla ekranda görünür. 8.4.3.3 UDR Ana Ekrana dönün (Setup, 18). 8.4.3.4 Request Cal F4 seçin. Kalibrasyon gereken chemistry (veya chemistries) üstüne tıklayın ve OK seçin. 8.4.3.5 100 L her kalibratörden 0.5mL mikro-örnek kabına aktarın ve onları artan sırada örnek rakına yerleştirin (ör. en düşük konsantrasyon birinci). Kalibratörler için rak numarasını sonra rak üzerinde pozisyonları yanına kalibratör isimlerini girin. Örnek rakı örnek carousel üstünde herhangi bir yere yerleştirilebilir. Save seçin. Her chemistry örnek pozisyonu başına ayrı ayrı kalibratör isimleri gerektirir. 8.4.3.6 Programlanmış kalibratör pozisyonları UDR ana ekranından UDR Cal Ld List F6 seçilerek görüntülenebilir. 8.4.3.7 Ana Ekrana dönün ve Run üstüne tıklayın. 8.4.3.8 Kalibrayon süreci Status ve sonra Sample Carousel Status seçilerek görüntülenebilir. 8.4.3.9 Kalibrasyon tamamlandığında ve sistem standby olduğunda, Setup ve UDR Ana Ekrana dönün (Setup, 18). Uygun chemistry ve sonra Approve Cal F5 seçerek kalibrasyon eğrisini görüntüleyin. 8.4.3.10 Dört eğri fitting seçenekleri görüntülenir, Third Order Polynomial eğri fit görüntülenene kadar eğrinin yanındaki okların üstüne tıklayın. Eğrinin bir çıktısı klavye üzerinde kontrol ve P basarak elde edilebilir. 8.4.3.11 Select Model F1 üstüne tıklayarak kullanılacak eğri fit seçin. 3 Third Order Polynomial üstüne tıklayın ve sonra OK basın. Insert Code: SIN054, Version: 7 th May 2013, Page 2 of 18
8.4.3.12 Kalibrasyon ve curve fit bir özetini yazdırmak için Print Report F8 seçin. 8.4.3.13 UDR Main F10 seçin ve clr UDR Cal Rack F8. Kalibrasyon eğrisi için kullanılan rak sayısını girin ve OK seçin. 8.4.4 QC Çalışma 1/10 a test dilüsyonunu değiştirmek için, UDR Ana Menu dönün. İstenen chemistry numarasını seçin ve Define Edit F1 seçerek parametreleri görüntüleyin ve sonra OK. 1/10 a örnek dilüsyonunu değiştirin ve sonra Save F9 seçin. Örnek dilüsyonu değiştirilince kalibrasyon eğrisi tekrar görüntülenemez. 8.4.4.1 100 L Lambda kontrol ve Lambda High kontrolü 0.5mL mikro- örnek kaplarına aktarın ve bir örnek rakına yerleştirin. 8.4.4.2 Samples ve Select control F5 seçeneğini seçin. 8.4.4.3 Uygun kontrol seçin ve rack numarası ve pozisyonu girin. 8.4.4.4 Save/Next F10 basın. 8.4.4.5 Her iki Lambda Free test kontrolleri için programı tekrarlayın. 8.4.5 Örnekleri Programlama Örnekler Beckman Coulter chemistries için olduğu gibi tam olarak programlanır. 8.4.5.1 Samples seçin. 8.4.5.2 Örneğin rak ve pozisyon numarasını girin. Örnek ID girin her örnek kendine özgü kimliğe sahip olmalıdır. Örneklerin kendisine karşı test edilecek uygun chemistry veya chemistries seçin. Save/Next F10 basın. 8.4.5.3 Alternatif olarak, bir örnek grubu programlanabilir. Örneklerin kendisine karşı test edilecek uygun chemistry veya chemistries seçin. Sonra Program Batch F4 seçin. Rak numarası(larını) ve programlanacak örneklerin sayısını girin ve OK basın. Örnek ID lerini girin ve End Batch basın. 8.4.5.4 Programlanan örnekler ve pozisyonları Load List F9 seçilerek görüntülenebilir. 8.4.5.5 Uygun örnek raklarını örnek carousel üstünde herhangi bir yere yerleştirin. Main Menu dönün ve Run basın. 8.4.5.6 Örnek sonuçları otomatik olarak yazdırılır. 8.4.5.7 Aralık dışı örnekler farklı örnek dilüsyonları kullanılarak tekrar çalışılmalıdır. Ölçüm aralığından az olan sonuçlara sahip örnekler 1/5 dilüsyon kullanılarak tekrarlanmalıdır. Ölçüm aralığından sonuçların olduğu yerde örnekler 1/25 manuel ön-dilüsyon ve 1/10 cihaz dilüsyonu ile tekrar çalışılmalıdır (daha fazla bilgi için kısım 8.4.6. bakın). 8.4.5.8 Tekrar örnekleri programlanmadan önce daha önce belirtildiği gibi örnek dilüsyonu değiştirilmelidir ve test parametrelerinde kaydedilmelidir. Örnekler Rerun Samples F6 seçilerek ve ID girilerek veya örneğin rak pozisyonu seçilerek ilk rak pozisyonundan tekrar çalışılabilir. 8.4.6 Ölçüm aralığı Tüm örnekler ilk olarak standart 1/10 test dilüsyonunda test edilmelidir, yaklaşık ölçüm aralığı 4.8 162 mg/l vererek. Bu neat idrar örneklerinde 1/5 örnek dilüsyonu ve 0.48mg/L kullanılarak serum örneklerinde 2.4mg/L duyarlılık sağlar. 1/10 cihaz dilüsyonu ile eğrinin üst sınırı üzerinde ölçülen örnekler için aşağıdaki dilüsyon serileri reaktif kullanımını en aza indirmek için kullanılmalıdır. Genel Analizör Yaklaşık Manuel ön-dilüsyon Dilüsyon Dilüsyonu Aralık (mg/l) 1/1 (urine only) 1/1-0.48 16.2 1/5 1/5-2.4 81 1/10 1/10-4.8 162 1/250 1/10 1/25 120 4050 1/500 (1/25 Önceden 1/5000 1/10 2400-81000 kullanılanın 1/20 dilüsyonu ) 40µL örnek alarak 1/25 manuel ön-dilüsyon yapın ve 960µL sistem örnek seyreltici ekleyin. Analiz için 1/25 seyreltilmiş örnek verin. Sonucu x 25 çarpın. 40µL örnek alarak 1/500 manuel ön-dilüsyon yapın ve başlangıçtaki 1/25 dilüsyonu elde etmek için 960µL sistem örnek seyreltici ekleyin. Bundan 50µL bu dilüsyondan alın ve son 1/500 dilüsyonu sağlamak için 950µL sistem örnek seyreltici ekleyin. Analiz için 1/500 seyreltilmiş örnek verin. Sonucu x 500 çarpın. Spesifik olmayan çökelme neat serum testleriyle oluşabilir, yapay olarak yükseltilmiş veya flagged sonuçlar vererek. 9 KALİTE KONTROL Sağlanan kontroller yapılan tüm test çalışmalarında olmalıdır. Lambda free konsantrasyonu ilişikteki Ürün Veri Kağıdında (SIN054.DS) belirtilir. Çalışma esnasında elde edilen sonuçlar sadece elde edilen kontrol sonuçları belirtilen konsantrasyonların %±20 içindeyse kabul edilmelidir. Saklı eğri ile test edildiğinde kontrol ölçümü aralık dışıysa test tekrar kalibre edilmelidir. Eğer tekrar kalibrasyonda yeni eğri ile ölçülen kontrol değerleri hala aralık dışıysa, testi tekrarlamadan önce cihaz ve test parametreleri kontrol edilmelidir. Sorunlar sürerse, tedarikçiye başvurun. 10 SINIRLAMALAR ve/veya karşıt hafif zincir konsantrasyonu quoted aralığın altında olacaktır ve/veya free kappa/free lambda oranı quoted aralığın dışında olacaktır (0.26-1.65). Örnekler, aşağıdaki durumlardan herhangi biri ile karşılaşılırsa antijen fazlalığını tespit etmek için 1/25 manuel öndilüsyon ile her iki başlangıç dilüsyonunda test edilmelidir (kısım 8.4.6 bakın): a) free hafif zincir konsantrasyonu veya free kappa/free lambda oranını quoted aralığın dışında gösteriyorsa, b) Önceden antijen fazlalığı göstermiş bir hastaya ait örnek, veya c) diğer klinik veya laboratuvar bulgularıyla uyuşmayan örnek sonucu. 10.5 Her monoklonal FLC özgün amino asit kombinasyonları içerir. Bu nedenle beklenenin altında ölçümlere yol açarak immunoassay tarafından saptanamayan olmak için belli monoklonal proteinler için teorik olarak mümkündür. Özellikle bu Freelite test ile son derece nadiren oluşur. Şüpheli örnekler önce antijen fazlalığı için test edilmeli (yukarıda kısım 10.3 bakın) daha sonra diğer laboratuvar yöntemleri ile incelenmelidir (immunofixation ve serum protein elektroforez). 10.6 Monoklonal proteinlerin doğası potansiyel olarak tutarsız sonuçlara yol açarak immunoassaylerde doğrusal olmayan yanıta sebep olabilir; bu örnekleri her zaman 1/10, 1/250, 1/5000 sırada test ederek önlenebilir (kısım 8.4.6 bakın). Bir seyreltme adımı atlamaktan veya alternatif dilüsyonlar kullanmaktan kaçınılmalıdır. 10.7 Monoklonal proteinlerin çok değişken doğasından dolayı, farklı reaktif grupları bazı hasta örneklerinde FLC epitopları için biraz farklı tepkiyebilir. Bu durumlarda örnek sonuçları multiple gruplar kullanılarak test edildiğinde değişebilir. Çoklu reaktif lotları karşısında hastalar izlenirken dikkat edilmelidir. Mümkün olan her durumda önceki ve şimdiki örneklerin yeni reaktif lotlarında test edilmesini ve sonuçların kıyaslanmasını öneririz. 10.8 Lateks reaktiferin uzun süreli kullanımı poor eğri shape ve poor hassasiyetle sonuçlanarak IMMAGE reaksiyon küvetlerinde artan opasiteye yol açabilir. Reaksiyon küvetlerinin her 1200 Freelite testten sonra değiştirlmesi önerilir. Daha fazla detay için yerel Binding Site distribütörünüzden mevcut olabilir. 11 BEKLENEN DEĞERLER Sağlanan aralıklar sınırlı sayıda örnekten elde edilmiştir ve sadece rehberlik amaçlı tasarlanmıştır. Mümkün olan her durumda yerel aralıkların oluşturulması şiddetle önerilir, 11.1 Yetişkin serum aralıkları 20 den 90 yaşa kadar 282 normal subjects BN II* için Binding Site Freelite testleri kullanılarak test edildi(11). Sonuçlar aşağıdaki tabloda gösterilmiştir. Normal yetişkin serum Ortalama kons. Medyan kons. 95 Yüzdelik aralık Free kappa 8.36 (mg/l) 7.30 (mg/l) 3.30-19.40 (mg/l) Free lambda 13.43 (mg/l) 12.40 (mg/l) 5.71-26.30 (mg/l) Ortalama Medyan Toplam aralık Kappa/Lambda oran 0.63 0.60 0.26-1.65 BNII ve IMMAGE testleriyle elde edilen normal aralığın denkliğini göstermek için BNII ve IMMAGE Freelite testleriyle 20 den 60 yaşına kadar normal UK donörlerden 100 normal örnek üstünde ve 43 hastalık durum serum üstünde test ettik. Regresyon analizinin sonuçları aşağıdaki gibidir: kappa testi için, y=1.04x + 26.7, r=0.97, ve lambda testi için y=0.97x 2.1, r=1.00 (y = IMMAGE değeri, x = BNII değeri). Bu Mayo Klinikte üretilen daha kapsamlı verinin IMMAGE testleri için uygulanabilir olduğunu gösterir. *BN Siemens Healthcare Diagnostics markasıdır, Inc. 11.2 Normal idrar aralıkları Bu aralıklar 66 sağlıklı UK yetişkin donörlerden sağlanan idrarların hafif zincir konsantrasyonları ölçülerek elde edildi (5). 95 yüzdelik κ/λ oran & 95 Normal yetişkin idrar Ortalama kons. SD aralık yüzdelik aralık Free kappa 5.40 (mg/l) 4.95 (mg/l) 0.39 15.1 (mg/l) 1.852 Free lambda 3.17 (mg/l) 3.30 (mg/l) 0.81 10.1 (mg/l) 0.461 4.00 12 PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Aşağıdaki veri Beckman IMMAGE kullanılarak elde edildi. 12.1 Çalışma içi hassasiyet Farklı seviyelerde free lambda içeren üç serum hazırlığı test edildi. Verilen her değer aynı test çalışmasında yapılan 10 ölçümden hesaplandı. Tüm konsantrasyonlar mg/l dir. Serum 1 Serum 2 Serum 3 Ortalama 13.1 25.5 138.2 CV% 2.2 2.0 6.8 12.2 Çalışma arası hassasiyet Farklı seviyelerde free lambda içeren üç serum hazırlığı tek bir gruptan kitler kullanılarak 10 ayrı test çalışmasında test edildi. Tüm konsantrasyonlar mg/l dir. Serum 1 Serum 2 Serum 3 Ortalama 11.9 27.99 190.9 CV% 7.19 7.19 11.65 10.1 Turbidimetrik testler derecede lipemik veya hemolize olmuş örnekler veya seviyede dolaşan immun kompleksler (CICs) içeren örneklerin, bu örnek tiplerinin oluşturabileceği spesik olmayan dağılımın öngörülemeyen derecesinden dolayı ölçümü için uygun değildir. Beklenmeyen sonuçlar alternatif test yöntemi kullanılarak onaylanmalıdır. 10.2 Nadir durumlarda belli monoklonal IgM proteinlerinin spesifik olmayan saçılıma ve yapay olarak yükseltilmiş sonuca yol açarak küvette reaksiyon koşulları altında çökebileceği belirlenmiştir. Beklenmedik şekilde sonuçlar mümkünse alternatif bir yöntemle onaylanmalıdır. 10.3 Sadece free hafif zincir ölçümlerine dayanarak tanı yapılamaz ve tedavi verilmemelidir. Klinik geçmiş ve diğer laboratuvar bulguları dikkate alınmalıdır 10.4 Antijen fazlalığı: Free kappa veya free lambdanın konsantrasyonlarını içeren hasta örneklerinin küçük bir bölümü antijen fazlalığından dolayı involved hafif zincir için yanlışlıkla düşük sonuç verebilir. Bağımsız bir B hücre klonu tarafından üretilen hafif zincirin aminoasit bileşimi Freelite test ile örneğin antijen fazlalığı gösterebileceği seviyede etkileyecektir. Hemen hemen her durumda ilgili hafif zincirin konsantrasyonu hala quoted normal aralığın üstünde olacaktır (free kappa için 3.30-19.40mg/L ve free lambda için 5.71-26.30mg/L) Insert Code: SIN054, Version: 7 th May 2013, Page 3 of 18
12.3 Özgüllük Bu testin özgüllüğü saflaştırılmış tam immünoglobulinlerin ölçülmesiyle gösterilmiştir (IgG, IgA ve IgM). Her durumda çapraz reaktivite çok azdı (5). 12.4 Doğrusallık Bu testin doğrusallığı seri olarak seyreltilmiş serum örneği kullanılarak onaylandı, regresyon plot y = 0.997x + 6.74 (mg/l) verdi, r = 0.99. (y = ölçülen free lambda konsantrasyonu, x = teorik konsantrasyon). 12.5 Müdahale Bilirubin, hemoglobin ve trigliserid ile minimal test müdahalesi gösterilmiştir. Romatoıd faktör ile ılımlı müdahale vardı (5) Insert Code: SIN054, Version: 7 th May 2013, Page 4 of 18
12.6 Kıyaslama Serum: 48 serum (10 normal, 38 bilinen multiple myeloma veya amyloid hastalarından) Freelite IMMAGE kappa ve lambda kitleriyle ve ticari olarak mevcut immunofixation elektroforez (IFE) kitlerinde test edildi. Free kappa Normal serum (10) 10 normal Kappa myeloma/ amyloid serum (20) Lambda myeloma/ amyloid serum (18) Freelite sonuçlar Free Free κ/λ lambda oran Özet IFE sonuçlar 7 normal 3 borderline düşük 10 normal 10 normal 10 normal 20 monoklonal bant(lar) gösterir 20 4 normal 20 monoklonal 20 16 düşük kappa 16 normal 2 düşük 18 18 düşük 18 monoklonal lambda 17 monoklonal bant gösterir Tüm anormal serum hafif zincir konsantrasyonları daha az duyarlı IFE yöntemleri ile 1 tane kaçırılmışken Freelite testleriyle tespit edildi. İdrarlar: 30 idrar (10 normal, 20 bilinen/şüpheli myeloma hastalarından) Freelite kappa ve lambda kitleriyle ve ticari olarak mevcut immunofixation elektroforez (IFE) metodunda test edildi. Freelite sonuçlar Free Free Free κ/λ IFE sonuçlar Özet kappa lambda oran Normal idrar (10) Kappa myeloma idrar (10) Lambda myeloma idrar (10) 8 normal 2 borderline 9 normal 1 borderline 10 4 normal 6 9 normal 1 borderline 8 2 normal 8 10 9 düşük 2 normal 1 normal 10 normal 10 normal 9 monoklonal kappa 9 monoklonal lambda 1 normal Bu veri idrar örneklerinde paraproteinlerin tespiti için iki yöntem arasında mükemmel uyum gösterir. 13 BİBLİYOGRAFİ 9 monokl. bant(lar) gösterir 9 monokl. bant gösterir 1. Cole PW, Durie BGM, Salmon SE. (1978) Immunoquantitation of free light chain immunoglobulins: Application in multiple myeloma. J. Immunol. Meth. 19: 341-349. 2. Pescali E, Pezozoli A, (1988) The clinical spectrum of pure Bence-Jones proteinuria. Cancer 61: 2408-2415. 3. Solling K, Solling J, Romer FK. (1981) Free light chains of immunoglobulins in serum from patients with rheumatoid arthritis, sarcoidosis, chronic infections and pulmonary cancer. Acta. Med. Scand. 209: 473-477. 4. Drayson MT, Tang LX, Drew R, Mead GP, Carr-Smith HD and Bradwell AR. (2001) Serum free light chain measurements for identifying and monitoring patients with non-secretory multiple myeloma. Blood 97: 2900-2902. 5. Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP, Tang LX, Showell PJ, Drayson MT and Drew RL. (2001) Highly sensitive, automated immunoassay for immunoglobulin free light chains in serum and urine. Clin. Chem. 47:4, 673-680. 6. Tang LX, Showell P, Carr-Smith HD, Mead GP, Drew R and Bradwell AR. (2000) Evaluation of F(ab )2-based latex-enhanced nephelometric reagents for free immunoglobulin light chains on the Behring Nephelometer TM II. Clin. Chem 46:6, Suppl. 2000, 705, pa181. 7. Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP, Harvey TC and Drayson MT. (2003) Serum test for assessment of patients with Bence Jones myeloma. Lancet 361: 489-491. 8. Abraham RS, Katzman JA, Clark RJ, Bradwell AR, Kyle RA and Gertz MA. (2003) Quantitative Analysis of Serum Free Light Chains: A new marker for the diagnostic evaluation of primary systemic amyloidosis. Am. J. Clin. Pathol. 119:(2): 274 278. 9. Lachmann HJ, Gallimore JR, Gillmore JD, Carr-Smith HD, Bradwell AR, Pepys MB and Hawkins PN. (2003) Outcome in systemic AL amyloidosis in relation to changes in concentration of circulating immunoglobulin free light chains following chemotherapy. Brit. J.Haem. 122: 78-84. 10. Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP and Drayson MT (2002) Serum free light chain immunoassays and their clinical application. Clinical and Applied Immunology Reviews 3: 17 33. 11. Katzmann JA, Clark RJ, Abraham RS, Bryant S, Lymp JF, Bradwell, AR and Kyle RA. (2002) Serum reference intervals and diagnostic ranges for free kappa and free lambda immunoglobulin light chains: relative sensitivity for detection of monoclonal light chains. Clin. Chem. 48: 1437-1444. 12. Bradwell AR (2009). Serum Free Light Chain Analysis, 5 th Edition, Publ. The Binding Site Ltd, Birmingham, UK. 13. Mead GP, Carr-Smith HD, Drayson MT, Morgan GJ, Child JA and Bradwell AR (2004). Serum free light chains for monitoring multiple myeloma. Brit. J. Heamatol. 126, 348-354. Insert Code: SIN054, Version: 7 th May 2013, Page 5 of 18