FREE TESTOSTERON ELISA

DCM015-14 Ed. 10/2013 EE TTOSTERON ELISA rutin analiz için İnsan serumu veya plazmasında Free Testosteronun direkt immunoenzimatik tespiti IVD LOT Bakın dış etiket Σ = 96 test REF DKO015 KULLANIM AMACI İnsan serumu veya plazmasında Free Testosteron konsantrasyonunun kantitatif tespiti için rekabetçi immunoenzimatik kolorimetrik yöntemdir. Free Testosteron kiti sadece laboratuvar kullanımı için amaçlanır. 1. KLİNİK ÖNEM Testosteron androjen gruptan bir steroid hormondur. Testosteron az miktarda böbreküstü bezleri tarafından salgılanmasına rağmen esas olarak erkeklerin testislerinde ve kadınların yumurtalıklarında salgılanır. Başlıca erkek seks hormonudur ve bir anabolik steroiddir. Erkeklerde ve kadınlarda sağlık ve mutluluk için anahtar rol oynar. Sulu solüsyonlarda çözülemediği için Testosteronun büyük kısmı taşıma proteinlerine bağlı olarak kanda dolaşır. Dolaşan Testosteronun sadece küçük bir yüzdesi (< 1%) bağlanmamış veya free Testosteron halinde bulunur. Çoğunlukla yaklaşık olarak %60, yüksek affiniteyle SHBG bağlanır, geri kalan gevşek bir şekilde albumine bağlanır. Albumin-bağlı ve free kısımlar biyolojik olarak aktif olabilir, SHBG ise etkin bir şekilde Testosteron eylemini engeller. Testosteron etkileri virilize ve anabolik etkiler olarak sınıflandırılabilir. Anabolik etkiler kas kütlesi ve gücünde büyümeyi, kemik yoğunluğu ve gücünde artışı ve doğrusal büyüme ve kemik olgunlaşmasının uyarılmasını içerir. Virilize etkiler seks organlarının olgunlaşmasını içerir. Testosteron seviyeleri erkeklerde yaşla birlikte kademeli olarak düşer. Serum Testosteronun free veya bağlanmamış kısmının ölçümü fizyolojik olarak biyoaktif hormon tahmini için bir araç olarak ileri sürülmüştür. Free Testosteron seviyeleri polikistik over hastalığının olması veya olmamasında hirsutizm ile ilgili olarak hiperandrogenizm ile kadınlarda artar. Ek olarak, free Testosteron ölçümleri SHBG arttığı veya azaldığı durumlarda (ör. hipotiroidizm ve obezite) toplam Testosterondan daha faydalı olabilir. 2. PRENSİP Kandaki testosteron SHBG (60%) ve az miktarda diğer proteinlere (örneğin albumin) bağlanır. Sadece Free Testosteron ölçümü (<1% Toplam Testosteron) biyolojik olarak aktif hormonun tahminine izin verir. Örnekteki Free Testosteron (antijen) mikroplak üstünde kaplı anti-testosteron antikorlarına bağlanması için Konjugatta bulunan horseradish peroksidaz (HRP) ile konjuge antijenik Testosteronla rekabet eder (katı faz). Proteinlere bağlı Testosteron bu reaksiyonda yer almaz bu nedenle yıkama aşaması esnasında uzaklaştırılır (toplam Testosteron ölçümü için ELISA Diametra Testosteron kiti mevcuttur). İnkübasyon sonrası bağlı/free ayrılma basit bir katıfaz yıkamasıyla yapılır. Bağlı-kısımdaki enzim HRP, Substrat (H 2 O 2 ) ve TMB Substratıyla tepkir ve Durdurma Solüsyonu eklendiğinde (H 2 SO 4 ) sarıya dönüşecek olan mavi bir renk geliştirir. Renk yoğunluğu örnekteki Free Testosteron konsantrasyonuyla ters orantılıdır. Örnekteki Free Testosteron konsantrasyonu bir kalibrasyon eğrisiyle hesaplanır. 3. REAKTİFLER, MATERYALLER VE ALETLER 3.1. Kit içinde sağlanan reaktifler ve materyaller 1. Kalibratörler (6 şişe, her biri 1 ml) REF KAL0 REF DCE002/1506-1 KAL1 REF DCE002/1507-1 KAL2 REF DCE002/1508-1 KAL3 REF DCE002/1509-1 KAL4 REF DCE002/1510-1 KAL5 DCE002/1511-1 2. Kontrol (1 şişe, 1 ml) Kontrol konsantrasyonu lot-spesifiktir ve Analiz Sertifikasında belirtilir REF DCE045/1503-0 3. Konjugat (1 şişe, 15 ml) Horseradish peroksidazla (HRP) konjuge testosteron REF DCE002/1502-1 4. Kaplı Mikroplak (1 kırılabilir mikroplak) Mikroplak üstünde adsorbe Anti Testosteron antikoru REF DCE002/1503-1

5. TMB Substratı (1 şişe, 15 ml) H 2 O 2 -TMB (0.26 g/l) (cilt temasını önleyin) REF DCE004-0 6. Durdurma Solüsyonu (1 şişe, 15 ml) Sülfürik asit 0.15 M (cilt temasını önleyin) REF DCE005-0 7. 10X Kons. Yıkama Solüsyonu (1 şişe, 50 ml) NaCl 160 g/l; Tween-20 10 g/l; 0.2M Fosfat buffer, ph 7.4 REF DCE054-0 3.2. Sağlanmayan gerekli reaktifler Distile su. 3.3. Yardımcı materyaller ve aletler Otomatik dağıtıcı. Mikroplak okuyucu (450 nm, 620-630 nm) Not Tüm reaktifleri karanlıkta 2 8 C de saklayın. Reaktif 4 çantasını (Kaplı Mikroplak) sadece oda sıcaklığında olduğunda açın ve kullandıktan hemen sonra kapatın. Birkez açıldığında mikroplak kitin son kullanma tarihine kadar stabildir. 4. UYARILAR Bu kit sadece profesyonel kişiler tarafından in vitro kullanım için amaçlanır. İnsanlarda veya Hayvanlarda dahili veya harici kullanım için değildir. Verilen reaktiflerle çalışırken uygun kişisel koruyucu ekipman kullanın. Kan ürünlerini kullanmak için İyi Laboratuar Uygulamalarını (GLP) izleyin. Bazı reaktifler koruyucu olarak az miktarda Proclin 300 R içerir. Cilt veya mukoza ile teması önleyin. TMB Substratı solunduğunda, yutulduğunda ya da deri yoluyla emildiğinde zararlı olabilen bir tahriş edici içerir. Yaralanmayı önlemek için, solumayı, yutmayı veya cilt ve gözlerle temasını önleyin. Durdurma Solüsyonu seyreltilmiş sülfürik asit solüsyonu içerir. Sülfürik asit zehirleyici ve aşındırıcıdır ve yutulursa toksik olabilir. Kimyasal yanıkları önlemek için cilt ve gözlerle temasını önleyin. TMB/H 2 O 2 reaktifinin direk güneş ışığına, metallere veya oksidanlara maruz kalmasını önleyin. Solüsyonu dondurmayın. Bu metod 0.06 pg/ml - 100.0 pg/ml aralığında Free Testosteron tespitine izin verir. Hasta kortizon veya doğal veya sentetik steroid ile işlemden geçirildiyse Free Testosteron tespitinin klinik önemi geçersiz olabilir. 5. ÖNLEMLER Bu protokolde verilen pipetleme aşamalarının sırasına lütfen sıkıca bağlı kalın. Burada gösterilen performans verisi bu Kullanım Talimatında listelenen spesifik reaktifler kullanılarak elde edildi. Tüm reaktifler orjinal kabında 2-8 C de soğutulmuş saklanmalıdır. İstisnalar açıkça belirtilmektedir. Bu reaktifler belirtildiği gibi kullanıldığında ve saklandığında son kullanma tarihine kadar stabildir. Tüm kit bileşenleri ve numunelerin oda sıcaklığına (22-28 C) erişmesine izin verin ve kullanımdan önce iyi karıştırın. Farklı lotlardan kit bileşenlerini değiştirmeyin. Kutu ve şişelerin etiketlerinde basılı son kullanma tarihleri dikkate alınmalıdır. Son kullanma tarihi geçmiş kit bileşenini kullanmayın. Otomatik cihaz kullanılıyorsa, kullanıcı kitin uygun şekilde test edildiğinden emin olmalıdır. ELISA otomatik sistemlerinde kitin performansını arttırmak için yıkayıcı sayılarının arttırılması önerilir. Kuyulardan eksik veya yanlış sıvı uzaklaştırması test kesinliğini ve/veya arka plan artışını etkileyebilir. Tekrarlanabilir sonuçlar için reaksiyon süresinin her kuyuda sabit tutuması önemlidir. Örneklerin pipetlenmesi test kaymasını önlemek için 10 dakikayı aşmamalıdır. 10 dakikadan fazlası gerekirse aynı dağıtım sırasını izleyin. Bir plaktan fazlası kullanılıyorsa her plakta doz yanıt eğrisinin tekrarlanması önerilir. TMB Substrat solüsyonunun eklenmesi, Durdurma Solüsyonunun eklenmesiyle bitecek olan bir kinetik reaksiyon başlatır. Bu nedenle TMB Substratı ve Durdurma Solüsyonu reaksiyon esnasında herhangi bir zaman sapmasını ortadan kaldırmak için aynı sırada ilave edilmelidir. Kontrolleri ve/veya havuzlanmış serumları test ederek medikal laboratuvarlarda kalite kontrol yapmak için yönergelere uyun. Maksimum kesinlik reaktiflerin sulandırılması ve dağıtılması için gereklidir. Mikrobiyolojik olarak kontamine örnekler, oldukça lipemik veya hemolizli örnekler testte kullanılmamalıdır. Plak okuyucuları dikey ölçer. Kuyuların dibine dokunmayın. 6. PROSEDÜR 6.1. Kalibratörlerin Hazırlanması (C 0 C 5 ) Kullanımdan önce dönen bir karıştırıcı ile 5 dk karıştırın. Kalibratörler kullanıma hazırdır ve aşağıdaki Testosteron konsantrasyonuna sahiptir: C 0 C 1 C 2 C 3 C 4 C 5 pg/ml 0 0.2 1.0 4.0 20.0 100.0 Birkez açıldığında Kalibratörler 2-8 C de 6 ay stabildir. 6.2. Örnek Hazırlama Free Testosteron tespiti insan serumu veya plazmasında yapılabilir. Eğer tespit örneğin toplandığı aynı gün yapılmayacaksa numuneyi -20 C de saklayın. Örneklerin tekrarlanan dondurma ve çözdürmelerinden kaçının. Kontrol kullanıma hazırdır. 6.3. Yıkama Solüsyonu Hazırlama Kullanmadan önce son hacim 500 ml için distile suyla şişe 10X Kons. Yıkama Solüsyonu içeriğini seyreltin. Daha küçük hacimler için 1:10 dilüsyon oranına uyun. Seyreltilmiş yıkama solüsyonu

2 8 C de 30 gün stabildir. Konsantre yıkama solüsyonunda kristallerin görülmesi mümkündür, bu durumda kristaller tamamen çözülene kadar oda sıcaklığında karıştırın; daha fazla doğruluk için kristallerin aktarımına dikkat ederek 500 ml için konsantre yıkama solüsyonunun tüm şişesini seyreltin sonra kristaller tamamen çözülene kadar karıştırın. 6.4. Prosedür Tüm reaktiflerin en az 30 dakika oda sıcaklığına erişmesine (22-28 C) izin verin. Testin bitiminde reaktifleri hemen 2-8 C de saklayın: oda sıcaklığına uzun süreli maruziyeti önleyin. Kullanılmamış kaplı mikrokuyu stripler kurutucu içeren folyo kılıfta güvenli şekilde bırakılmalıdır ve 2-8 C de saklanmalıdır. Olası mikrobiyel ve/veya kimyasal kontaminasyonu önlemek için kullanılmamış reaktifler asla orjinal şişelerine aktarılmamalıdır. Test sonuçlarının doğruluğunu arttırmak için tespitin iki kez yapılması gerekir, kalibrasyon eğrisinin her noktası için (C 0 -C 5 ) iki, her Kontrol için iki, her örnek için iki, Blank için bir kuyu hazırlayın. Reaktif Kalibratör C 0 -C 5 Örnek/ Kontrol Kalibratör 20 µl Örnek/ Kontrol 20 µl Konjugat 100 µl 100 µl Blank 1 saat 37 C de inkübe edin. Her kuyudan içeriği uzaklaştırın; 300 µl seyreltilmiş yıkama solüsyonuyla 3 kez kuyuları yıkayın (otomatik ekipman kullanıyorsanız, en az 5 kez kuyuları yıkayın). Önemli not: her yıkama aşaması esnasında,5 saniye plağı hafifçe sallayın ve emici kağıt havlu üstünde başaşağı plağa vurarak fazla solüsyonu uzaklaştırın. TMB Substratı 100 µl 100 µl 100 µl Karanlıkta 15 dk oda sıcaklığında (22 28 C) inkübe edin. Durdurma Solüsyonu 100 µl 100 µl 100 µl Mikroplağı hafifçe sallayın. 450 nm referans dalgaboyu 620-630 nm veya Blank karşı 5 dk içinde 450 nm de absorbansı (E) okuyun. 7. KALİTE KONOL Her laboratuvar test performansını izlemek için Free Testosteronun normal, yüksek ve düşük seviye aralığında kontrollerini test etmelidir. Bu kontroller bilinmeyenler olarak ele alınmalıdır ve her test prosedüründe belirtilen değerler yapılmalıdır. Kalite kontrol çizelgeleri sağlanan reaktiflerin performansını izlemek için korunmalıdır. İlgili istatistiksel yöntemler eğilimleri tespit etmek kullanılmalıdır. Her bir laboratuvarın kabul edilebilir test performans sınırlarını ayarlaması gerekir. İzlenmesi gereken diğer patametreler run-to-run tekrarlanabilirlik için kalibrasyon eğrisinin 80, 50 ve 20% kesişimlerini içerir. Ek olarak maksimum absorbans geçmiş deneyim ile tutarlı olmalıdır. Belirlenmiş performanstan önemli sapma, deneysel koşullarda farkedilmeyen değişikliği veya kit reaktiflerinin degradasyonunu gösterebilir. Taze reaktifler varyasyonların nedenini belirlemek için kullanılmalıdır. 8. SONUÇLAR 8.1. Ortalama Absorbans Kalibrasyon eğrisinin (C 0 -C 5 ) her noktası için absorbansın (Em) ve her örneğin ortalamasını hesaplayın. 8.2. Kalibrasyon eğrisi Konsantrasyona karşı Kalibratörlerin (C 0 -C 5 ) absorbansının (Em) ortalama değerini çizin. Çizelgelenen noktalarla best-fit eğriyi çizin (es: Dört Parametre Lojistik). 8.3. Sonuçların hesaplanması pg/ml de ifade edilen konsantrasyonların ilgili değerlerini elde etmek için kalibrasyon eğrisinde örneklerin değerlerini interpole edin. 9. REFERANS ĞERLERİ Free Testosteronun serum konsantrasyonları aşağıdaki aralıklar içindedir: Medyan Ortalama ± 1SD pg/ml Aralık pg/ml Erkek 14 13,0 ± 7,0 4,5-42 Kadın Ovulasyon 1,3 1,4 ± 0,9 ND - 4,1 Oral kontraseptifler Postmenopozal 0,9 1,1 ± 0,6 0,3-2,0 0,8 0,9 ± 0,5 0,1-1,7 Verilen yöntemde normal popülasyon için beklenen değerler aralığının tespitinin, kullanılan metodun özgüllüğü ve duyarlılığı ve araştırma altındaki popülasyonun tipi gibi birçok faktöre bağlı olduğu gerçeğine lütfen dikkat edin. Bu nedenle her laboratuvar genel bir gösterge olarak Üretici tarafından verilen aralığa dikkat etmelidir ve laboratuvarın çalıştığı yerli popülasyona dayalı kendi beklenen değerler aralığını oluşturmalıdır.

10. PERFORMANS VE ÖZELLİKLER 10.1. Kesinlik 10.1.1. Intra Test Varyasyonu Çalışma içi varyasyon aynı testte üç farklı serum örneği ölçümünün tekrarlanmasıyla (15x) belirlendi. Test içi değişkenlik 10% dur. 10.1.2. Inter Test Varyasyonu Çalışma arası varyasyon 10 farklı testte varyasyon beş farklı kontrol serumu ve iki serum örneği ölçümünün tekrarlanmasıyla belirlendi. Test arası değişkenlik 10% dur. 10.2. Duyarlılık Free Testosteronun Kalibratör 0 dan ayırt edilebilen en düşük tespit edilebilir konsantrasyonu 0.06 pg/ml dir. 10.3. Özgüllük Özgüllük aşağıdaki olası çapraz-reaktif analitleri ve müdahele edici maddeler (antikoagülanlar) için testin görünür yanıtı ölçülerek değerlendirildi. Abraham a göre 50% de hesaplanan antikorun çapraz reaksiyonu tabloda gösterilmektedir: BİBLİYOGRAFİ McCann D, Kirkish L. J. Clin. Immunoassay 8:234-6 (1985) EkinsRP., J. Clin. Immunoassay 1984; 7(2): 163 80 Paulson JD, et al., Am. J Obst. Gynecol 1977;128:851-7 Odlind V. et al., Clin. Endocrinology 1982;16:243-49 Green PJ., Clin Chem 1982;28:1237 Wu CH., Obstet Gynecol. 1982;60:188-94 Ed. 10/2013 DCM015-14 DiaMetra S.r.l. Headquater: Via Garibaldi, 18 20090 SEGRATE (MI) Italya Tel. +39-02-2139184 Fax +39-02-2133354. Fabrika: Via Pozzuolo 14, 06083 SPELLO (PG) Italya Tel. +39-0742-24851 Fax +39-0742-316197 E-mail: info@diametra.com Analit % Çapraz reaktivite Testosteron 100 DHT 0,00008 Androstenedion 0,0043 Androsteron 0,00029 DHEA-S 0,00007 Kortizol < 0,00001 Kortizon < 0,00001 17β Estradiol 0,00005 Estron < 0,00001 Prednizon < 0,00001 17α Etinilöstradiol < 0,00001 Norgestrel 0,00001 Danazol < 0,00001 Aldosteron < 0,00001 Sodyum Sitrat < 0,00001 EDTA < 0,00001 Heparin < 0,00001 10.4. RIA ile ilişkisi Diametra Free Testosteron ELISA piyasada mevcut Free Testosteron RIA (DPC-Coat a Count) kitiyle kıyaslandı. 24 kadın ve 17 erkeğin serum örnekleri her iki test sistemine göre analiz edildi. Lineer regresyon eğrisi hesaplandı (FT Diametra) = 0.957*(FT RIA) + 0.953 r 2 = 0.937 11. ATIK YÖNETİMİ Reaktifler yerel yönetmeliklere uygun olarak elden çıkarılmalıdır.

DiaMetra Ambalaj Bilgi Formu Mod. PIS000-1 IVD In vitro Diagnostikum Producto sanitario para diagnóstico In vitro Dispositif medical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostik Medikal Cihaz Dispositivo medico-diagnostico in vitro Dispositivos medicos de diagnostico in vitro Hergestellt von Elaborado por Fabriqué par Üretici Produttore Produzido por Achtung, Begleitdokumente Precaución, consulte los documentos adjuntos Attention, veuillez consulter les documents d'accompagnement Dikkat, beraberindeki belgelere başvurun Attenzione, consultare la documentazione allegata Atenção,consultar os documentos de acompanhamento yyyy-mm Herstellungs datum Fecha de fabricacion Date de fabrication Üretim tarihi Data di produzione Data de produção yyyy-mm-dd Verwendbar bis Establa hasta (usar antes de último día del mes) Utiliser avant (dernier jour du mois indiqué) Tarafından kullanım (ayın son günü) Utilizzare prima del (ultimo giorno del mese) Utilizar (antes ultimo dia do mês) Biogefährdung Riesco biológico Risque biologique Biyolojik risk Rischio biologico Risco biológico Gebrauchsanweisung beachten Consultar las instrucciones Consulter le mode d emploi Kullanım talimatlarına başvurun Consultare le istruzioni per l uso Consultar instruções para uso LOT Chargenbezeichnung Codigo de lote Numero de lot Grup kodu Codice del lotto Codigo do lote Σ = xx Ausreichend für n Tests Contenido suficiente para n tests Contenu suffisant pour n tests n test için yeterlidir Contenuto sufficiente per n saggi Contém o suficiente para n testes CONT Inhalt Contenido del estuche Contenu du coffret Kit içerikleri Contenuto del kit Conteúdo do kit Min Max Temperaturbereich Límitaciôn de temperatura Limites de température de conservation Sıcaklık sınırlaması Limiti di temperatura Temperaturas limites de conservação REF Bestellnummer Nûmero de catálogo Réferéncès du catalogue Katalog numarası Numero di Catalogo Número do catálogo Vor direkter sonneneinstrahlung schützen Mantener alejado de la luz solar Tenir à l'écart de la lumière du soleil Güneş ışığından uzak tutun Tenere lontano dalla luce solare Mantenha longe da luz solar

DiaMetra Ambalaj Bilgi Formu Mod. PIS000-1 SORUN GİRME OLASI HATA NENLERİ / ÖNERİLER Kolorimetrik reaksiyon yok - ekleme sonrası konjugat pipetleme reaksiyonu yok - konjugatların ve/veya substratın kontaminasyonu - test prosedürü yapılırken hatalar (ör. yanlış sırada veya yanlış şişeden reaktiflerin kazara pipetlenmesi, v.b.) Çok düşük reaksiyon (çok düşük ODs) - yanlış konjugat (ör. orjinal kitten değil) - inkübasyon süresi çok kısa, inkübasyon sıcaklığı çok düşük Çok yüksek reaksiyon (çok yüksek ODs) - yanlış konjugat (ör. orjinal kitten değil) - inkübasyon süresi çok uzun, inkübasyon sıcaklığı çok yüksek - yıkama buffer için su kalitesi yetersiz (düşük dereceli deiyonizasyon) - yetersiz yıkama (konjugatlar uygun şekilde uzaklaştırılmadı) Açıklanamayan aykırı değerler - pipetler, uçlar veya konteynırların kontaminasyonu yetersiz yıkama (konjugatlar uygun şekilde uzaklaştırılmadı) çok yüksek çalışma-içi - reaktifler ve/veya stripler kullanımdan önce CV% Oda Sıcaklığına önceden ısıtılmadı - plak yıkayıcı doğru yıkama yapmıyor (öneri: temiz yıkayıcı başlığı) Çok yüksek çalışma-arası inkübasyon koşulları sabit değil (süre, CV % sıcaklık) - Kontroller ve örnekler aynı anda dağıtılmadı (aynı aralıklarla) (pipetleme sırasını kontrol edin) - Şahsınızla ilgili varyasyon