YÜKSEK BASINÇLI SIVI KROMATOGRAFİSİ YÖNTEMİ İLE İNSÜLİN PREPARATLARINDA FENOL VE KREZOL TAYİNİ

Ebat: px

Şu sayfadan göstermeyi başlat:

Download "YÜKSEK BASINÇLI SIVI KROMATOGRAFİSİ YÖNTEMİ İLE İNSÜLİN PREPARATLARINDA FENOL VE KREZOL TAYİNİ"

Hakan Doğan
5 yıl önce
İzleme sayısı:

1 16, , 1991 Key words Başvuru Tarihi Kaul Tarihi BiLiMSEL ARAŞTIRMALAR 203 Insulin, Phenol, Cresol, HPLC , , 1991 Gönül ÜSTÜN(*) (*) Refik Saydam Hıfzıssıhha Merkezi Başkanlığı, İlaç ve Kozmetik Araştırma Müdürlüğü - Ankara, TÜRKiYE FABAD Farm. Bil. Der. FABAD J. Pharm. Sci. YÜKSEK BASINÇLI SIVI KROMATOGRAFİSİ YÖNTEMİ İLE İNSÜLİN PREPARATLARINDA FENOL VE KREZOL TAYİNİ Pınar BULUT(*) Mürüvvet N1GDEL!OGLU(*) Özet: Bu çalışmada insülin preparatların da fenol ve krezol tayini çin HPLC yöntemi uygulanmıştır. Yönteme göre moil faz içinde yaklaşık 50 µg/ml fenol ve 120 µg/ml krezol içeren çözeltiler hazırlanmıştır. Çalışmada RP-8 kolon kullanılmış, moil faz (Su: M KH2 P04 (3.2 g/l derişık fosforik asit içeren) : Asetonitril) (600: 100:300) ile hazırlanmıştır. Dalga oyu 270 nm ve akış hızı 1 ml/ dak olarak ayarlanmış ve 50 µ1 enjekte edilmiştir. DETERMINATION OF PHENOL AND CRESOL IN INSULIN PREPARATIONS BY HIGH PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHIC METHOD Summary: In this study, the HPLC method is carried oul for the determination of phcnol and cresol in insulin preparations. According to the method, the sarnple and reference solutions containing 50 µg/ml phenol and 120 µg/ml cresol are diluted with moil phase. Moil phase is prepared with watcr, molar KH2. P04 containing 3.2 g/l concentrated phosphoric acid and acetonitrile (600:100:300). The asorance wavelength is 270 nm, flow rate is 1 ml/min and injcction volume is 50 µ1. RP-8 column was used.

2 Fenol \. Şekil 1 - Fenol ve Krezol'ün HPLC K.romatogramı 204 BULUT ve Ark. GİRİŞ: Enjektal insülin preparatlannda ko- ' ruyucu olarak fenol vem-krezol komine veya tek olarak kullanılmaktadır. Literatürde fenol miktar tayini için yüksek asınçlı sıvı kromotografisi yöntemi (1-4), gaz kromatografisi (5, 6) ve demir (III) klorür ile kolorimetrik yöntem (7) ildirilmiştir. Ayrıca aşılarda fenol tayini için 4-arninoantipirin ile koloriınetrik yöntem farmakopelerde yer almakıadu (8, 9). GEREÇ VE YÖNTEM: Gereçler: Sıvı Kromotagrafi: Shimadzu LC-6 A. Cihazın SPD-6 A Model UV Spektrofotometrik Dedektörü ve C-R3A Model integratörü vardu. Referans Standart olarak fenol (Merek) distile edildikten sonra kullarulmıştır. m Krezol (Kai, Lot 48939) l!taş firmasından sağlanmıştır. Kimyasal maddeler ise analitik saflıktadu. Yöntem: Yaklaşık 50 µg/ml fenol ve 120 µg/ mi krezol içerecek şekilde moil faz ile hazırlanan çözeltilerdcn 50 µl enjekte edilmiştir. İşlemde aşağıdaki HPLC koşulları uygulanmıştır: Kolon : RP- 8 (Lichrospher 100 RP-8) Moil Faz : Su: Molar KH2 P04 (3.2 g/l derişik fosforik asit içeren): Asetonitril (600: 100: 300) Dalga Boyu: 270 nm Akış hızı : 1 ml/dakika BULGULAR: 1 - HPLC Kromatograrn: Referans çözeltinin kromatograrnı alınmış ve tutulma süreleri fenol için 4.9 dakika, krezol için 6.6 dakika ulunmuştur (Şekil 1). Resolusyon ise yaklaşık 0.8 olarak hesaplanmıştır. l(rezol

3 BULUT ve ark Fenol ve Krezol Kalirasyonu: Fenol için yaklaşık µg/ml, krezol için yaklaşık µg/ml konsantrasyonlar arasında hazırlanmış 5 ayrı çözeltinin HPLC kromatogramları alınmış ve integratörde hesaplanan alanın konsantrasyona göre doğrusal olarak değiştiğini gösteren konsantrasyon-alan denklemleri ulunmuştur (Şekil 2 ve 3). 3 - Sentetik Karışımlarda Fenol ve Krezol Tayini: Hazırlanan sentetik karışımlarda yapılan fenol ve krezol tayinlerinin sonuçlan Talo l'de verilmiştir y x r = r oı'""'~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ o c (mcg/ml) Şekil 2 - Fenol Konsantrasyon - Alan Grafiği y x o!.<:::~~~~~~~~~~..ı;_'-"'-"'""--'-''-"--'-l.."""-"--' o c (mcg/ml) Şekil 3 - Krezol Konsantrasyon - Alan G_rafiği

4 Stielk Kııııın X ±SE s Preparat Al (1) A2 (1) A3 (1) Bl (2) B2 (2) c1 (3) C2 (3) C3 (3) Dl (4) iımlı µg/wl. % tayin edilmiş ve formülünde elirtilen 1: Nordisk: 2: Lilly 3: Hoechst 4: Organon ± ± ± ± 0.5 %.5± ± ± ± ± ± ± ± BULUT ve ark. Talo 1 Sentetik Karışımlarda İnsülin Preparatlarmda Fenol Fenol ve Krezol Tayinleri.(n = 2j ve Krezol Tayini: lnsülin preparatlarında elirtilen ümı yöntem ile fenol ve/veya krezol miktarları Fenol Krezol Fenol Krezol miktarlar ile karşılaştırılmıştır (Talo 2) TARTIŞMA VE SONUÇ B 100.S Yöntemin uygulanması sonucunda insülin preparaılarında koruyucu olarak 67.S kullanılan fenol ve krezol miktarları has sas olarak tayin edilmiştir. Süspansiyon tipi lnsülin preperatları moil faz ile karıştırıldığında tamamen errak ir çözelti elde edilmiştir. Yöntemde kul !anılan moil fazın u avantajından aşka sçntetik karışımlar üzerinde yapılan tayin ± ± !erde geri kazanım fenol için % 100.0, krezol için % ulunmuş, yöntemin standart sapması ve değişme katsayısı ise fenol için % 0.7, krezol için % 0.5 ulun- OJ 05 muştur. lnsülin preparatlarında yapılan Talo 2: Preparatlarda Fenol ve Krezol Tayinleri (n = 3) Formülasyon Bulunan mg/ml %±SE Fenol Krezol Fenol Krezol ± ± o ± 0.2 ı o 2 o 3 o 4 o 5 o

5 Burtschen, E., Binden, H., "Seperation of Pheıiols, Phenolic Aldehydes, Keıones and Acids y HPLC", J. Chromatogr. 252, 167, Douglas, C.C., ".Gas Chromatographic Detell}lination of Phenolic Compounds in Drug Preparations", J. Assoc. Offic. Ana/. Chem. 55, 610, Das gupta, V., Quantitative Determination of Phenol in Phenolated Calamine Lotion USP'', J. Pharm. Sci. 64, 1199, British Pharmacopoeia 1988, "Vaccines", 1045, Küçük ~ylere 8ereğinden çok önem verenler, elinden üyük İ{> 8elmeyenlerc:lir. Eflatun 6. United States Pharmacopeia XXII/ National Fonnulary XVJI, "Antimicroial Agents-Content", 1530, Europıüsche Pharmakopöe, Band II, "Phenol in sera und lmpfstoffen'', 38, BULUT ve ark. fenol ve krezol tayinlerinin sonucunda ise standart hataların oldukça küçük oldukları görülmüştür. Deney sonuçlan ve istatistik veriler gözönüne alındığında yöntemin çauk ve pratik olması yanında doğru ve tekrarlanailir ir yöntem olduğu anlaşılmaktadır. KAYNAKLAR 1. Musto, J.D., Sane, J.N., Warren, V.D., : "Quantitative Determinations of Phenol y HPLC"; J. Pharm. Sci. 66, 1201, Das gupta, V. "Quantitative Determinatioa of Phenol and Recorcinol in Pharmaceutical Dosage Forms y HPLC", J. Pharm. Sci., 65, 1706, Orazio, C.E., Kapila, S., Manahan, S.E., "High Performance Liquid Chromatographic Detennination of Phenols as Phenolates in a Complex Mixture", J. Chromatogr. 262, 434,

Benzer belgeler

KATATER KAYDIRICI JELLERDE YÜKSEK BASINÇLI SIVI KROMATOGRAFİSİ İLE VE KLORHEKZİDİN TAYİNİ

-- ---- -----------------------~ BiLiMSEL ARAŞTIRMALAR 11 FABAD Farm. Bil. Der. 17, 11-16,1992 FABAD J. Pharm. Sci. 17, 11-16, 1 992 KATATER KAYDIRICI JELLERDE YÜKSEK BASINÇLI SIVI KROMATOGRAFİSİ İLE VE