RIDASCREEN Cryptosporidium

Transkript

1 RIDASCREEN Cryptosporidium Makale no.: C1201 R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, D Darmstadt, Almanya Telefon: +49 (0) / Fax: +49 (0)

2 1. Kullanım amacı İn vitro diagnostik kullanım içindir. RIDASCREEN Cryptosporidium insan dışkı örneklerinde Cryptosporidium parvum ve Cryptosporidium hominis kalitatif tespiti için enzim immunoassaydir. 2. Özet ve testin açıklaması Cryptosporidiosis Cryptosporidium cinsinden kaynaklı protozoan enfeksiyonudur. Bu parazit hayvanlarda yaygın bulunur ve evcil hayvanlar, özellikle buzağılarda patojenik mikrorganizma olarak önemli bir varlığı vardır. Bağışıklığı yeterli hastalarda bu hastalık self-healing gastroenteritler olarak gösterir. İshal 3 ila 10 gün sürer ve ateş ve bulantı ve giardiasis benzer ağrı (lambliasis) gibi gastrointestinal semptomlar görülebilir. Semptomlar ve etkiler, ishal gidişatının çok şiddetli ve sürekli olduğu yerde immün sistemi baskılanmış hastalarda önemli ölçüde daha şiddetlidir. Enfeksiyon kontamine su yoluyla insana bir hayvandan geçebilir ama ayrıca bir hasta ile kişisel temasta bulaşıcıdır. Geçmişte cryptosporidiosis tanısı için en sık kullanılan yöntem deneyimli personel mevcudiyeti gerektiren, dışkı ve/veya ince bağırsak bioptatlarının microskopik incelenmesinde ookistlerinin mikroskobik tespitiydi. Dışkı örneklerinde her iki patojenin eş zamanlı belirlenmesi için burada tanımlanan Cryptosporidium ELISA mikroskopik inceleme ile tanı için önemli bir alternatifdir. Mikroskopik incelemeye eşit olan duyarlılığı, parazitolojide özellikle eğitilmiş personel gerektirmeyen, basittir ve hızlı şekilde yapılabilir ve bu dışkı örneğinde intakt organizmaarın bulunmasına (kistler veya trofozoitler) bağlı değildir. 3. Test prensibi RIDASCREEN Cryptosporidium Testi sandviç-tip yöntemde spesifik antikorlar kullanır. Cryptosporidium parvum ve Cryptosporidium hominis için bu spesifik antikorlar mikrokuyu plağın kuyu yüzeyine bağlanır. Bir pipet oda sıcaklığında (20 25 C) inkübasyon için biyotinli anti- Cryptosporidium antikorları (Konjugat 1) ile birlikte mikrokuyu plağın kuyusuna incelenecek kontrol numuneleri ve dışkı örneğinin bir süspansiyonunu yerleştirmek için kullanılır. Yıkama aşaması sonrası, streptavidin poly-peroksidaz konjugat (Konjugat 2) eklenir ve tekrar oda sıcaklığında (20 25 C) inkübe edilir. Numunede Cryptosporidium antijenlerinin varlığıyla, hareketsiz antikorlar, Cryptosporidium antijeni ve konjuge antikor sandviç kompleksi oluşturur. Başka yıkama aşaması bağlanmamış streptavidin poly-peroksidaz konjugatı kaldırır. Substrat eklenmesinden sonra bağlanan enzim mikrokuyu plağın kuyularındaki önceden renksiz olan solüsyonun rengini eğer test pozitifse maviye dönüştürür. Durdurma reaktifinin eklenmesi rengi maviden sarıya dönüştürür. Ekstinksiyon numunede bulunan Cryptosporidium antijenlerinin konsantrasyonuyla orantılıdır. RIDASCREEN Cryptosporidium

3 4. Sağlanan reaktifler Kit içindeki reaktifler 96 tespit için yeterlidir. Plak 96 Mikrokuyu plak, strip tutucuda 12 mikrokuyu strip (bölünebilen); Cryptosporidium parvum ve Cryptosporidium hominis antijenleri için spesifik antikorlarla kaplı Seyreltici ml Örnek dilüsyon buffer, protein-buffered NaCl solüsyonu; kullanıma hazır;mavi renkli Yıkama 100 ml Yıkama buffer, fosfat-buffered NaCl solüsyonu (konsantre 10-kat); 0.1% thimerosal içerir Kontrol + Kontrol - Konjugat 1 Konjugat 2 2 ml 2 ml 13 ml 13 ml İnaktif Cryptosporidium antijeni; kullanıma hazır Negatif kontrol (örnek dilüsyon buffer);kullanıma hazır Stabilize protein solüsyonunda Cryptosporidium spesifik antijenleri için biyotin konjuge antikorlar;kullanıma hazır;mavi renkli Stabilize protein solüsyonunda streptavidin poly- peroksidaz konjugat; kullanıma hazır; turuncu renkli Substrat 13 ml Hidrojen peroksit/tmb; kullanıma hazır Durdurma 8 ml Durdurma reaktifi; 1 N sülfürik asit;kullanıma hazır 5. Reaktifler ve onların saklanması Tüm reaktifler 2 8 C de saklanmalıdır ve etikette basılı tarihe kadar kullanılabilir. Seyreltilmiş yıkama buffer 2 8 C de saklanması şartıyla maksimum 4 hafta için kullanılabilir. Mikrobiyel kontaminasyon önlenmelidir. Son kullanma tarihinden sonra kalite garantisi artık geçerli değildir. Alüminyum çanta kilit parçalanmayacak şekilde makasla açılmalıdır. Gerekmeyen herhangi mikrokuyu strip hemen alüminyum çantaya konulmalı ve 2 8 C de saklanmalıdır. Renksiz substratın ayrışmasını veya oto-oksidasyon nedeniyle maviye dönmesini önlemek için direkt ışıktan korunmalıdır. Birkez substrat maviye dönmüşse kullanılmamalıdır. 6. Ek gerekli reaktifler ve gerekli ekipman 6.1. Reaktifler - Distile veya deiyonize su RIDASCREEN Cryptosporidium

4 6.2. Ekipman Test tüpleri Tek kullanımlık pipetler (Makale no.: Z0001) Vorteks karıştırıcı (isteğe bağlı, 9.3. bakın) µl ve 1 ml hacimleri için mikropipet Ölçüm silindiri (1000 ml) Kronometre Mikrokuyu plaklar veya çok kanallı pipetler için yıkama cihazı (300 µl) Mikrokuyu plak için fotometre (450 nm ve referans filtre nm) Filtre kağıdı (laboratuvar havlusu) 0.5% hipoklorit solüsyonu içeren atık kabı 7. Kullanıcılar için önlemler Bu test sadece eğitimli laboratuvar personeli tarafından yapılmalıdır. Medikal laboratuvarlardaki çalışma kuralları takip edilmelidir. Her zaman bu test için kullanıcı talimatlarına sıkıca bağlı kalın. Numuneler veya reaktifler ağızla pipetlenmemeli ve yaralı cilt veya mukoz membranlarıyla temas önlenmelidir. Numuneleri kullanırken kişisel koruyucu donanım (Uygun eldivenler, laboratuvar ceketi, koruyucu gözlük) giyin ve test bittikten sonra ellerinizi yıkayın. Örneklerin işlendiği alanlarda sigara içmeyin veya birşey yiyip içmeyin. Daha fazla detay için da Malzeme Güvenlik Bilgi Formuna (MSDS) bakın. Bu kit inaktif Cryptosporidium antijeni içeren bir pozitif kontrol içerir. Kontrol ve dışkı örnekleri olası bulaşıcı materyal gibi işlenmeli ve uluslararası güvenlik düzenlemeleri ile uyumlu kullanılmalıdır. Yıkama buffer koruyucu olarak 0.1 % thimerosal içerir. Bu maddenin cilt veya mukoz membranlarıyla teması önlenmelidir. Kullanımdan sonra tüm reaktiflerin ve materyallerin uygun ve sorumlu şekilde atımını sağlayın. Atım için lütfen ulusal düzenlemelere bağlı kalın. 8. Numune toplama ve saklama Kullanılıncaya kadar test materyalini 2 8 C de saklayın. Eğer materyal üç gün içinde test için kullanılamıyorsa -20 C veya daha soğukta saklanmasını öneririz. Numunenin tekrar tekrar dondurulup çözdürülmesinden kaçının. Dışkı örnekleri, koruyucular, hayvan serumları, metal iyonlar, oksitleyici maddeler veya deterjanlar içeren taşıma ortamıyla taşıma kaplarında toplanmamalıdır, bunlar RIDASCREEN Cryptosporidium Testine müdahale edebilir. Rektal swablar kullanılacaksa dışkı materyali hacminin test için yeterli olduğundan emin olun (yaklaşık 100 mg). RIDASCREEN Cryptosporidium

5 Kontakt izleme asemptomatik taşıyıcıları belirlemek amacıyla klinik semptomlar göstermeyen kontakt kişilerden alınan dışkı örneklerini içermelidir. 9. Test prosedürleri 9.1. Genel bilgi Tüm reaktifler ve mikrokuyu Plak kullanımdan önce oda sıcaklığına (20 25 C) getirilmelidir. Bu mikrokuyu stripler oda sıcaklığına erişene kadar alüminyum çantadan çıkartılmamalıdır. Bu reaktifler kullanımdan hemen önce iyice karıştırılmalıdır. Kullandıktan sonra mikrokuyu stripler (kapalı çantalarda yerleşik) ve reaktifler tekrar 2 8 C de saklanmalıdır. Birkez kullanıldığında mikrokuyu stripler tekrar kullanılmamalıdır. Bu reaktifler ve mikrokuyu stripler paketleme zarar görmüşse veya şişelerden sızıntı varsa kullanılmamalıdır. Çapraz kontaminasyonu önlemek için örneklerin kit bileşenleriyle direkt teması önlenmelidir. Bu test direkt güneş ışığında yapılmamalıdır. Buharlaşma kayıplarını önlemek için mikrokuyu plağın kaplanmasını veya üstüne plastik wrap yerleştirilmesini öneririz Yıkama buffer hazırlama 9 kısım distile suyla 1 kısım yıkama buffer konsantreyi Yıkama karıştırın. Konsantre içinde bulunan herhangi kristali 37 C de su banyosunda ısıtılarak önceden çözülmüş olmalıdır. 9.3 Örnekleri hazırlama Etiketli bir test tüpü alın ve 1 ml RIDASCREEN örnek dilüsyon buffer Seyreltici 1 ile doldurun. Sadece ikinci çıkıntının üstüne ince dışkı örneğini aspire etmek için (yaklaşık 100 µl) ve süspansiyon yapmak için test tüpünde buffera eklenmesi için tek kullanımlık bir pipet kullanın (makale no. Z0001). Katı dışkı örneğiyle bir süspansiyon yapmak için spatula veya tek kullanımlık aşılama döngüsü ile eşit miktar (yaklaşık mg) ekleyin. İçine aspirasyon ve tek kullanımlık pipetten ejeksiyon ile dışkı süspansiyonunu homojenize edin veya alternatif olarak Vorteks karıştırıcıda karıştırın. İri dışkı partiküllerinin çökelmesi için kısa süre süspansiyonu beklemeye bırakın ve dışkı süspansiyonunun bu netleşmiş supernatantı testte direkt olarak kullanılabilir. Eğer test prosedürü otomatik ELISA sisteminde yapılıyorsa supernatant partikülsüz olmalıdır. Bu durumda 5 dakika 2,500 G da örneğin santrifüj edilmesi önerilir. Not: Seyreltici 1 içinde seyreltilen dışkı örnekleri RIDASCREEN ELISA içinde kullanılabilir. Seyreltici 1 is kullanılması şartıyla tüm 9.4. İlk inkübasyon Strip tutucuda yeterli sayıda kuyu doldurulduktan sonra, 100 µl pozitif kontrol Kontrol +, negatif kontrol Kontrol -, veya dışkı süspansiyonunu kuyulara eklemek için bir pipet kullanın. Daha RIDASCREEN Cryptosporidium

6 sonra 100 μl biyotin-konjugatlı antikor Konjugat 1 ekleyin ve karıştırın (plağın kenarına hafifçe vurarak); sonra oda sıcaklığında (20 25 C) 30 dk inkübe edin Yıkama Dikkatli yıkama doğru sonuçların elde edilmesi için önemlidir ve bu nedenle talimatlara göre ilerleyin. Kuyularda inkübe edilen madde atık kabına boşaltılmalı ve yerel düzenlemelere uygun olarak atılmalıdır. Bundan sonra kalan nemi uzaklaştırmak için emici kağıt üstüne plağa vurarak çıkartın. Sonra her defasında 300 µl yıkama buffer kullanılarak 5 kez plağı yıkayın. Emici kağıdın hala kuru ve kullanılmamış olan kısmında her yıkama sonrası vurup çıkartarak tamamen kuyuların boşaldığından emin olun. Mikroplak yıkayıcı veya tam otomatik ELISA kullanıyorsanız makinenin doğru şekilde ayarlandığından emin olun; gerekirse üreticiden ayarları isteyin. R-Biopharm tarafından verilen aletler valide ayarlar ve iş protokolleri ile zaten programlanmıştır. Yıkama iğnelerinin tıkanmasını önlemek için, sadece partikülsüz dışkı süspansiyonları dağıtılmaldır (bakın 9.3.,Önekleri hazırlama). Ayrıca tüm sıvının her yıkama aşamasında aspire edildiğinden emin olun İkinci inkübasyon Kuyulara 100 µl streptavidin poly-peroksidaz konjugat Konjugat 2 doldurmak için bir pipet kullanın sonra oda sıcaklığında (20 25 C) 15 dk inkübe edin Yıkama Kısım 9.5 de belirtildiği gibi yıkayın Üçüncü inkübasyon Tüm kuyuları 100 µl substrat Substrat ile doldurun. Sonra oda sıcaklığında karanlıkta (20 25 C) 15 dk plağı inkübe edin. Daha sonra reaksiyonu durdurmak için 50 µl durdurma reaktifi Durdurma ile tüm kuyuları doldurun. Plağın kenarına hafifçe vurarak dikkatlice karıştırdıktan sonra 450 nm de ekstinksiyon (isteğe bağlı: 450/620 nm) ölçün. Havada yani mikrokuyu plak olmadan sıfır noktasını ayarlayın. Not: Yüksek-pozitif hasta örnekleri substratın siyah renkli çökeltilerine sebep olabilir. RIDASCREEN Cryptosporidium

7 10. Kalite kontrol reaktif süresi bitiminin belirtileri Kalite kontrol amaçları için, testin doğru şekilde yapılmış olması ve reaktiflerin stabil olmasını sağlamak için pozitif ve negatif kontroller her test yapıldığında kullanılmalıdır. Negatif kontrol için ekstinksiyon oranı (OD) 450 nmde 0.2 den küçükse (450/620 nm de dan küçük) ve pozitif kontrol için ölçülen değer 450 nm veya 450/620 nm de 0.8 den büyükse test doğru yapılmıştır. Negatif kontrol için 0.2 den (0.160) büyük değer yıkamanın yetersiz olmuş olabileceğini gösterir. Olması gereken değerlerden sapma, bir bulanıklık veya kuyulara doldurulmadan önce renksiz substratın mavi renklenmesi reaktiflerin süresinin bittiğini gösterebilir. Öngörülen değerler karşılanmazsa, aşağıdaki noktalar testi tekrarlamadan önce kontrol edilmelidir: - Kullanılan reaktiflerin son kullanma tarihi - Kullanılan ekipmanın işlevselliği (ör. kalibrasyon) - Doğru test prosedürü - Kontaminasyon veya sızıntılar için kit bileşenlerinin görsel kontrolü maviye dönen substrat solüsyonu kullanılmamalıdır. Testi tekrarladıktan sonra hala şartlar yerine getirilmediyse, lütfen üretici veya yerel R-Biopharm distribütörünüzle temasa geçin. 11. Değerlendirme ve yorumlama Cut-off hesaplama Cut-off oluşturmak için 0.15 ekstinksiyon birimleri negatif kontrol için ölçülen ekstinksiyona eklenir. Cut-off = negatif kontrol için ekstinksiyon Test sonuçları Ekstinksiyon oranı hesaplanan cut-off değerinden %10 daha fazlaysa numunenin değerlendirilmesi pozitiftir. Ekstinksiyon oranı cut-off değerinden %10 az ve %10 fazlası aralığındaysa numunenin değerlendirilmesi marjinaldir. Tekrar taze dışkı örneğiyle yeniden inceleme giri bölge içine düşüyorsa örneğin değerlendirilmesi negatifdir. Hesaplanan cut-off altında %10 dan fazla ekstinksiyonlara sahip örnekler negatif düşünülmelidir. 12. Yöntem sınırlamaları RIDASCREEN Cryptosporidium Testi Cryptosporidium parvum ve Cryptosporidium hominis antijenlerini belirleyebilir. Klinik belirtilerin ortaya çıkması ya da şiddeti için ekstinksiyonun belir- RIDASCREEN Cryptosporidium

8 lenen seviyesiyle ilişkilendirmek mümkün değildir. Elde edilen sonuçlar her zaman klinik tablo birlikte yorumlanmalıdır. Pozitif sonuç başka bulaşıcı patojenlerin varlığını ekarte etmez. Negatif sonuç Cryptosporidium enfeksiyon olasılığını ekarte etmez. Böyle bir sonuç parazitin aralıklı atılımından veya örnekteki antijen miktarının çok küçük olabilmesinden kaynaklanabilir. Hasta anamnezi Cryptosporidium ile enfeksiyon şüphesini destekliyorsa inceleme başka dışkı örneğiyle tekrarlanmalıdır. Marjinal sonuç dışkı örneğindeki parazitlerin homojen olmayan dağılımından kaynaklanabilir. Bu durumda inceleme aynı örnekten ikinci bir süspansiyonla veya incelenmesi gereken başka dışkı örneğiyle tekrarlanmalıdır. 13. Performans özellikleri 13.1 Analitik duyarlılık RIDASCREEN Cryptosporidium ELISA analitik duyarlılığını belirlemek için blank sınırı (LoB) Seyreltici 1 in 270 ölçümünde analiz edildi ve tespit sınırı (LoD) 90 ölçümde analiz edildi. Bu çalışmanın sonuçları Tablo 1 de gösterilmektedir. Tablo 1: RIDASCREEN Cryptosporidium ELISA için analitik duyarlılık sonuçları MV [OD 450/620] Kistler /.Reaksiyon LoB 0,031 - LoD 0, x Klinik kıyaslama çalışması Büyük Britanya'da klinik inceleme toplam 240 dışkı örneğiyle RIDASCREEN Cryptosporidium Testini değerlendirdi (prospektif ve körleştirilmiş retrospektif çalışmalar). Cryptosporidia için mikroskopinin belirlenmiş Britanya yöntemleri (auramine-phenol ve Ziehl-Neelsen stain) ve farklılaştırarak real-time PCR ile bir kıyaslama vardı. Bu çalışmanın sonuçları Tablo 2 de özetlenmektedir. Tablo.2: Mikroskop ve real-time PCR ile RIDASCREEN Cryptosporidium ELISA kıyaslaması Mikroskopi Real-time PCR # Pozitif Negatif Pozitif Negatif RIDASCREEN Cryptosporidium Pozitif Negatif RIDASCREEN Cryptosporidium

9 Duyarlılık (CI): 92 % (64 100) 96 % (78 100) Özgüllük (CI): 95 % (91 98) 100 % (97 100) # İki dışkı örneğinde materyalin yetersiz miktarı CI: % cinsinden güven aralığı Çapraz reaktivite Bağırsak kanalından patojenik mikroorganizmaların çeşitliliği RIDASCREEN Cryptosporidium Testiyle Campylobacter coli hariç tutularak incelendi ve çapraz reaktivite göstermedi. Bu çalışmalar ml başına organizma konsantrasyonları gösteren seyreltilmemiş bakteri veya virüs süspansiyonlarıyla yapıldı. Bu çalışmanın sonuçları Tablo 3 te listelenmektedir. Tablo 3: Patojenik mikroorganizmalarla çapraz reaktivite Organizma Köken OD [450/620] Ortalama değer Adenovirus Hücre kültür supernatant 0,011 Aeromonas hydrophila Kültür -0,001 Arcobacter butzleri Kültür 0,012 Astrovirus Hücre kültür supernatant -0,001 Bacillus cereus Kültür 0,006 Bacteroides fragilis Kültür -0,005 Campylobacter coli Kültür 0,181 Campylobacter jejuni Kültür 0,034 Candida albicans Kültür 0,016 Citrobacter freundii Kültür 0,008 Clostridium difficile Kültür 0,009 Clostridium perfringens Kültür 0,016 Clostridium sordellii Kültür 0,003 Cryptosporidium muris Kültür 2,782 E. coli EPEC Kültür 0,031 E. coli ETEC Kültür 0,002 E. coli STEC Kültür 0,017 Entamoeba histolytica Kültür -0,003 Enterobacter cloacae Kültür 0,007 Enterococcus faecalis Kültür 0,001 Giardia lamblia Dışkı -0,004 Klebsiella oxytoca Kültür 0,030 Proteus vulgaris Kültür 0,016 Pseudomonas aeruginosa Kültür 0,037 Rotavirus Hücre kültür supernatant 0,009 Salmonella enteritidis Kültür 0,018 Salmonella typhimurium Kültür 0,010 Serratia liquefaciens Kültür 0,005 RIDASCREEN Cryptosporidium

10 Shigella flexneri Kültür 0,013 Staphylococcus aureus Kültür 0,020 Staphylococcus epidermidis Kültür 0,018 Vibrio parahaemolyticus Kültür 0,019 Yersinia enterocolitica Kültür 0, Kesinlik İntra-test tekrarlanabilirliğini bellirlemek için negatif-yüksek-pozitif aralığında tam ölçümü temsil ederek 6 referansın 40 tekrarı test edildi. Ortalama değerler ve varyasyon katsayıları (VC) kitlerin üç lotu için belirlendi. İnter- test tekrarlanabilirliği için 10 farklı çalışma gününden elde edilen referanslar gün başına iki çalışmayla iki kez test edildi. Ölçümler kitlerin üç lotu için üç teknisyen tarafından belirlendi. İnter-lot tekrarlanabilirliği kitlerin tüm üç lotu için belirlendi. Çalışmanın sonuçları Tablo 4 de gösterilmektedir. Tablo 4: RIDASCREEN Cryptosporidium ELISA tekrarlanabilirliği/kesinliği Referans Intra-test Inter-test Inter-lot MV [OD 450/620] ,262 2,584 2,562 1,729 2,163 1,926 1,939 VC (%) 6,00% 7,36% 4,75% 17,34% 15,94% 11,19% 18,47% MV [OD 450/620] 1,391 1,636 1,508 1,000 1,275 1,158 1,144 VC (%) 5,81% 6,94% 5,93% 14,94% 18,02% 11,26% 19,20% MV [OD 450/620] 1,050 1,083 1,262 0,759 1,012 0,891 0,887 VC (%) 8,17% 8,15% 7,67% 17,72% 18,02% 13,20% 22,23% MV [OD 450/620] 0,675 0,706 0,766 0,413 0,562 0,511 0,495 VC (%) 4,93% 7,33% 7,97% 18,15% 20,13% 13,03% 23,01% MV [OD 450/620] 0,461 0,487 0,479 0,259 0,357 0,320 0,312 VC (%) 5,60% 9,69% 7,49% 25,29% 26,51% 22,13% 29,03% MV [OD 450/620] 0,228 0,287 0,268 0,148 0,214 0,194 0,185 VC (%) 6,96% 9,71% 6,67% 26,68% 25,63% 20,87% 30,12% RIDASCREEN Cryptosporidium

11 13.5. Müdahale edici maddeler Aşağıdaki maddelerin belirlenen konsantrasyonlarda pozitif ve negatif dışkı örneklerinin supernatantlarına karıştırıldığında test sonuçlarına etkisi görülmedi: baryum sülfat (X-ray kontrast ortam, 18.5 % w/w), loperamid (antidiarrheal ilaç; 0.02 % w/w), Pepto-Bismol (antidiarrheal ilaç, 6.6 % v/w), sodyum siklamat (yapay tatlandırıcı, 1.3 % v/w), insan kanı (5.0 % v/w), stearik asit / palmitinik asit (dışıdaki yağlar, karışım 1:1, 40.0 % w/w), diklofenak (analgesic ilaç, 0.1 % v/w). Metronidazol (0.5) (antibiyotik, 3.0 % v/w) ve mükinler (5.0 % w/w) durumunda olası doz etkisi ilişkileri incelenmiştir. Ancak metronidazol ile seri dilüsyonun araştırılması konsantrasyon ve OD değerleri arasında bir ilişki göstermedi. Test edilen tek istisna en yüksek konsantrasyondur ancak ilk analizde zaten test edilmiş "en kötü durum" konsantrasyonundan bile daha yüksektir (üç kez günlük doz). Metronidazol kaynaklı müdahale bu nedenle imkansız olarak düşünülebilir. OD değerleri sürekli çok düşük olduğunda ve örneklerin değişmiş değerlendirmeleri tüm seri dilüsyonlarda tekrar tekrar göründüğünden, mukinlerle testler ilk analizi doğruladı. Mukinler bu nedenle müdahale edici maddeler olarak görülür. RIDASCREEN Cryptosporidium

12 Ek Teste özgü semboller: Plak Seyreltici 1 Yıkama Kontrol + Kontrol - Mikrokuyu plak Örnek dilüsyon buffer Yıkama buffer Pozitif kontrol Negatif kontrol Konjugat 1 Konjugat 1 Konjugat 2 Konjugat 2 Substrat Durdurma Substrat Durdurma reaktifi RIDASCREEN Cryptosporidium

13 Bibliyografi 1. Clavel, A.: Evaluation of the optimal number of fecal specimens in the diagnosis of cryptosporidiosis in AIDS and immunocompetent patients. Eur. Journal Clin. Microbiol. Infect. Dis. 14, (1995). 2. Current, W. L., Garcia, L. S.: Cryptosporidiosis. Clinics in Laboratory Medicine 11 (No. 4), (1991). 3. Current, W. L., Garcia, L. S.: Cryptosporidiosis. Clin. Microbiol. Rev. 4 (No. 3), (1991). 4. Flanigan, T. P.: Human immunodifeciency virus infection and cryptosporidiosis: Protective immune responses. Am. J. Trop. Med. Hyg. 50 (5) Suppl., (1994). 5. Guarino, A. et al.: Human intestinal cryptosporidiosis: secretory diarrhea and enterotoxic activity in Caco-2 cells. J. Infect. Dis. 171, (1995). 6. Hayes, E. B. et al.: Large community outbreak of cryptosporidiosis due to contamination of a filtered public water supply. New. Engl. J. Med. 320 (No. 21), (1989). 7. Le Chevallier, M. W. et al.: Giardia and Cryptosporidium spp. in filtered drinking water supplies. Appl. Environ. Microbiol. 57 (No. 9), (1991). 8. Mc. Anulty, J. M. et al.: A community wide outbreak of cryptosporidiosis associated with swimming at a wave pool. Jama 272 (No. 20), (1994). RIDASCREEN Cryptosporidium