İÇERİK TABLOSU. In vitro diagnostik medikal gereç. Lot numarası. Katalog numarası. İle Kullanım. Kullanım bilgileri. Sıcaklık sınırlamaları

Transkript

1

2 İÇERİK TABLOSU Kullanılan Semboller... 5 Türkçe Kullanım Amacı... 8 Test Prensibi... 8 Klinik Özgeçmiş... 9 Reaktifler... 9 Tanımlama,kullanım için hazırlama ve saklama koşulları.. 9 Kit içeriğinde olmayan gerekli materyaller Güvenlik ve Çevre Koşulları Örnekler Beyanat ve Önlemler Yıkama Talimatı Test Prosedürü Sonuçlar Validasyon Sonuçların Ölçülmesi Sınırlamalar Test performansı Özgünlük Belirleme limiti Kesinlik Kullanılan Semboller Üretici In vitro diagnostik medikal gereç Lot numarası Katalog numarası İle Kullanım Kullanım bilgileri Sıcaklık sınırlamaları < X > testi için yeterli miktarı içerir Kaplı Plate Kontrol 1 Kontrol 2 Inkübasyon Reaktifi Standart 0 mu/l (hplap Blank) Standart 100 mu/l Standart 1000 mu/l Substrat (PNPP tablet) Substrat Buffer

3 Örnek Diluent Yıkama Solusyonu 25x Kullanım Amacı INNOTEST hplap serum ve heparinize plazmada insan Plasental Alkaline Phosphatase (hplap) kantitatif belirlemesi için bir enzim immunotesttir. Test Prensibi INNOTEST hplap solid fazda bağlı bir spesifik anti-hplap monoklonal antikoru tarafından yakalanan hplap enzimi kullanan bir solid faz enzim immunotesttir. Test örneklerinin inkübasyonu ve substrat solusyonunun eklenmesinden sonra pozitif örneklerin test kuyucuğunda sarı renk oluşur. Absorbansları 450 m de okunur. Kuyucuklarda oluşan renk miktarı, örnek veya standart solusyonu içindeki hplap miktarı ile orantılıdır. Klinik Özgeçmiş İkinci trimersterden sonra hamile bayanların serumunda hplap görüldüğü bilinmektedir. Bu izoenzimlerin orijini plasental trofoblasttır. W.H. Fishman grubu tarafından erkek kanser hastalarının serum ve tümoral dokularında hplap keşfi onkogelişimsel biyoloji alanının başlangıcını oluşturmuştur (1). Bundan sonra, kapsamlı araştırmalar göstermiştir ki; hplap çeşitli tipte kanser hastalarının serumlarında görülmektedir. hplap spesifik monoklonal antikor uygulaması diğer alkaline phosphatase (AP) izoenzimleri ile karışıklık olmadan hplap ölçümünü olası kılmıştır (2-4). Geçmişte, bazen serumda hplap determinasyonu ciddi bir şekilde değerinin altında ölçülmekteydi (5). INNOTEST hplap içinde kullanılan reaktifler bu sınırlamayı ortadan kaldırmaktadır. hplap önemi ve uygulaması iyi yapılmalıdır. Büyük merkezlerdeki denemelerin sonuçları (6) bir kanser markırı olarak INNOTEST hplap ın yararını göstermiştir: hplap testi malignite tanısı konmuş hastaların izlenmesinde büyük bir öneme sahiptir (7-10). hplap seviyesinin sürekli artışı ilerleyici malignant hastalık ya da tedaviye zayıf cevap ile ilişkili olabilir, buna karşılık hplap seviyesinin düşüşü tedaviye olumlu cevap ya da iyileşmeye işaret edebilir. hplap testi tanının onaylanmasında ve kanser hastalarının, seminomalı bazı hastaların, testiküler ve ovaryan kanser ve bazı diğer malignant hastalıkların izlenmesinde ek bir yöntemdir (6-12). Sigara içicilerinde serum hplap konsantrasyonları, yüksek sayıda bireyler-arası varyasyon ile aratabilir. Sonuç olarak, Sigara içicisi kişilerin serum hplap seviyeleri ölçülürken sebepleri araştırılmalıdır (12). Reaktifler Tanımlama,kullanım için hazırlama ve saklama koşulları - Tüm test reaktifleri orjinal ambalajında, 2-8 C de saklanırsa son kullanma tarihine kadar bozulmaz. Son kullanım tarihi geçmiş reaktifleri kullanmayınız. Seyreltilmemiş reaktifleri dondurmayınız. - Kullanılmayan test kuyucukları plastik poşetinde silikajel ile 2-8 C de 8 hafta saklanabilir. Açıldıktan sonra, Substrate Buffer ve hplap Blank solusyonu son kullanma tarihine kadar saklanabilir. Açıldıktan sonra, Örnek Diluent, Standart solusyonu (100mU/L ve 1000mU/L), Kontrol I ve II ve Inkübasyon Reaktifi 2-8 C de 8 hafta saklanabilir. - Tüm reaktifler ve alüminyum folyo poşetlerindeki stripler kullanımdan yaklaşık 30 dakika önce oda sıcaklığına (18-30 C) getirilmiş olmalı ve kullanımdan hemen sonra buzdolabına (2-8 C) kaldırılmalıdır.. Kuyucuklarda su yoğunlaşmasından kaçının, alüminyum folyo oda ısısında bekletilirken sıkıca kapatılmış olmalıdır. İçeriğindeki Reaktifler: Komponent Miktar Ref. Açıklama Kaplı Plate 1 x kapalı paket strip-tutucu ile 12 x 8 anti-hplap kaplı test kuyucukları içerir. Içine kurutucu madde olarak silikajel torba eklenmiştir. Kontrol 1 1 x 2.0 ml Koruyucu olarak 0.1% NaN 3 içeren delipidize insan serumu (tam etkisi etiketin üzerinde yer alır). Kontrol 2 1 x 2.0 ml Koruyucu olarak 0.1% NaN 3 içeren delipidize insan serumu (tam etkisi etiketin üzerinde yer alır). Inkübasyon Reaktifi 1 x 15 ml Koruyucu olarak 0.1% NaN 3 içeren solusyon. Standart 0 mu/l 1 x 3 ml Kullanıma hazır hplap Standart solusyonu, 0 mu/l konsantrasyonda. (hplap Blank) Stabilize proteinler, koruyucu olarak 0.1% NaN 3 ve renklendirici olarak Brilliant Black içeren phosphate buffer. Standart 100 mu/l 1 x 2.0 ml Kullanıma hazır hplap Standart solusyonu, 100 mu/l konsantrasyonda. Stabilize proteinler, koruyucu olarak 0.1% NaN 3 ve renklendirici olarak Brilliant Black içeren phosphate buffer.

4 Standart 1000 mu/l 1 x 2.0 ml Kullanıma hazır hplap Standart solusyonu, 1000 mu/l konsantrasyonda. Stabilize proteinler, koruyucu olarak 0.1% NaN 3 ve renklendirici olarak Brilliant Black içeren phosphate buffer. Substrat 2 şişe Bir şişe substrat buffer içinde çözülmüş bir PNPP substrat tablet içeriri. Kullanmadan önce iyice karıştırınız. Yeniden düzenlenen substrat kullanıldıktan hemen sonra dondurulmalıdır ve -20 C de 4 hafta saklanabilir. Eğer substrat solusyonu koyu sarı bir renk oluşturyorsa, daha fazla kullanılamaz ve taze çalışma substratı hazırlanmalıdır. Substrat Buffer 2 x 30 ml (ethylamino)ethanol buffer, Substrate PNPP çözdürülmesi için kullanılır. Örnek Diluent 1 x 15 ml Stabilize proteinler ve koruyucu olarak 0.1% NaN 3 içeren phosphate buffer. Yıkama Solusyonu 2 x 25 ml Koruyucu olarak 1.2% Tween 20 ve 0.1% NaN 3 içeren phosphate buffer, distile su içinde 25x seyreltilmiştir. Herbir test kuyucuk stripi için en az 50 ml seyreltilmiş yıkama solusyonu hazırlayın. Konsantre TMB kristalize olabilir ve kullanılmadan önce tamamen eritilmelidir (erime sıcaklığı 18 C). Seyreltilmiş yıkama solusyonu 2-8 C de 8 hafta saklanabilir. Plate kaplayıcı Minigrip poşet 1 - Kullanılmamış striplerin saklanması içindir. Kit içeriğinde bulunmayan gerekli materyaller - Tek kullanımlık eldivenler. - Dereceli silindirler (10, 25, 50 ve 100 ml). - Distile ya da deiyonize su µl ve 200 µl kalibre edilmiş pipetler ve tek kullanımlık pipet uçları µl kalibre edilmiş çok kanallı pipet. - Vorteks mikser. - Mikrotiter shaker C inkübatör, 37 C sıcak su banyosu (tabanındaki kuyucuklar su ile direk temasta olmalıdır) ya da karşılaştırılabilir direk ısıtıcı sistem. - Mikroplate yıkayıcı (alternatif olarak 0.3 ml volümde bir şırınga ve aspirasyon cihazı ile yıkama manuel yapılabilir). - Emici dokular. - Fotometrik Okuyucu: mikroplate okuyucu, 405 nm filtreli ve linear absorbans aralığı olan. - Zamanlayıcı. Güvenlik ve Çevre Koşulları - Lütfen Material Safety Data Sheet (MSDS) ve potansiyel tehlikeli komponentler içeren işaretli ürün bilgilerini inceleyiniz.. En son güncellenen MSDS versiyonu websitesinde yer almaktadır. R22-32, S7-23 Zararlı! (Xn) Bu solusyonların yenmesi zararlıdır. Çok toksik gazların oluşumunu önlemek için, sodium azid ile asitlerin temas etmesini önleyiniz. Sodyum azid içeren: Kontrol 1 ve 2, Inkübasyon Reaktifi, Standartlar, Örnek Diluent ve Yıkama Solusyonu. - Örneklerin potansiyel enfeksiyon ajanı olduğu göz önüne alınarak kullanılmalıdır. Tüm biyolojik materyallerinin potansiyel enfeksiyon ajanı olduğu göz önüne alınarak kullanılmalıdır. Kontrollerin hazırlanması için kullanılan serum HbsAg, HCVAb, anti-hiv-1 ve HIV-2 için negative bulunmuştur. Sadece yeterince tecrübesi olan personel bu testi çalışmalıdır. Tüm biyolojik materyaller güvenlik koşullarına uygun olarak atılmalıdır. 121 C de 15 dakika otklavlanmalıdır. Tek kullanımlık materyaller yakılmalıdır. Sodyum hipokloritli miks likit atıkların son konsantrasyonu ± 1% sodyum hipoklorit olmalıdır. Atmadan önce bir gece bekletiniz. ÖNLEM: asit içeren likitlere sodium hipoklorit eklemeden önce nötralize ediniz. - Tehlikeli ya da enfeksiyonlu ajanlar ile çalışılırken koruyucu giysiler; eldiven ve koruyucu gözlük kullanılması gereklidir. - Atıklar hastanelerin atılım talimatlarına göre yok edilmelidir. Kamusal ve çevresel düzenlemelere uyulmalıdır. Örnekler - Testi çalışırken serum ya da heparinli plazma kullanın. NOT: plazma örnekleri in house geçerli testlerde çalışılmamış olmasına rağmen, literatürler heparinli plazma örneklerinde hplap belirlemenin mümkün olduğunu göstermiştir (4, 7). Ayrıca literatürler, lipemik (5) ve ikterik (13) örneklerin hplap tespitinde etkileşime neden olmadığını göstermiştir. - Bir seri örnek tarafından hastaların izlenmesi için, izleme programının gidişatı boyunca aynı örnek, serum ya da plazma kullanılması tavsiye edilir. - Test yapılmadan önce örneklerin çözülmemiş kısımları santrfüj ile ortadan kaldırılmalıdır. - Devamlı dondurup çözdürülmüş örnekler hatalı sonuçlara neden olabilir. - Saklamadan önce, serum ya da plazmadan santrifüjle kan pıhtısı ve kan hücreleri ayrılmış olmalıdır. - Örnekler eğer 1 saat içinde kullanılacaksa 25 C de saklanmalıdır. Örnekleri eğer 72 saat içinde kullanacaksanız 2-8 C de saklayın. 1 haftadan uzun saklanacaksa, alikuatlayarak -20 C de dondurunuz.

5 - OD 405 değeri yüksek standartın üzerinde olan örnekler örnek diluent ya da tercihen hplap negatif örnek ile sulandırılmalıdır. Beyanat ve Önlemler - Farklı lot numarasındaki reaktifleri birbirine karıştırmayınız. - Tek kullanımlık laboratuvar materyallerini tekrar kullanmayınız. - Reaktiflerin mikrobiyal kontaminasyonundan kaçınınız. - Herbir örnek için yeni bir pipet ucu kullanın. Steril paketli, aerosol-resistant, tek kullanımlık pipet uçları önerilir. - Substrat solusyonu hazırlamak için kullanılan tüm kanallar en son distile su ile yıkanarak temizlenmelidir. - Kontaminasyonu önlemek için plate kenarlarına dokunmayınız. - Kontaminasyonu önlemek için örnek ya da konjugat yüklerken kuyucukların kenarlarına pipet ucu ile değmeyiniz. - İnkübasyon ya da saklama sırasında Substrat Solusyonunu güçlü ışık altında açıkta bırakmayın. - Hava baloncuklarını pleyte hafifçe vurarak yok ediniz. - Yıkama sonrasında eğer kuyucuklar hemen konjugat ya da substrat ile doldurulmamış ise, emici doku üzerine ters çevrilmeli, 15 dakikadan uzun olmayacak şekilde Yıkama Solusyonu ile ıslatılmalıdır. Yıkama Talimatı Uygun olmayan yıkama işlemi sonuçları olumsuz etkileyecektir. Yıkama solusyonu ve yıkayıcının kontaminasyonu ciddi problemlere yol açabilir. Bir problem oluştuğunda, yıkama şişesi ve yıkayıcıyı uygun dezenfeksiyon solusyonu ile geceboyu dezenfekte ediniz. Bu nedenle: - Tercihen taze hazırlanmış yıkama solusyonu kullanın. - Seyreltilmiş yıkama solusyonu ile yıkayıcıya ön yıkama yaptırınız. - Gün sonunda yıkayıcıyı distile su ile yıkayın. Bir sonraki kullanıma kadar bu solusyonları yıkayıcıdan ayırın. IAşağıda manual yıkama adımları bulunmaktadır: 1. Tüm kuyucuklardaki sıvıyı tamamen aspire edin, aspiratörün ucu ile kuyucukların dibinde kalanları da çekin. Kuyucuk yüzeyine zarar vermemeye dikkat edin. 2. Herbir aspirasyondan sonra pleyti ters çevirin ve emici dokular üzerinde sertçe vurun. Kuyucukları 300 µl seyreltilmiş Yıkama Solusyonu ile doldurun. 1. En az 30 saniye ıslanması için bekleyin ve sıvıyı aspire edin. 2. Bu adımları 3 kez tekrarlayın. 3. Yıkama tamamlandıktan sonra pleyti ters çevirin ve emici dokular üzerinde sertçe vurun. Test Prosedürü Lütfen teste başlamadan önce Beyanat ve Önlemler kısmını okuyunuz, inkübatör ısısını 37 C ye getirin. Tüm örnek ve test materyallerinin kullanmadan önce oda sıcaklığına (20-25 C) getirilmiş olduğundan emin olunuz. 1. Gerekli sayıda stribin üzerindeki koruyucuları alın, herbir test çalışması için 3 standart ve 2 kontrol kuyucuğu içermelidir. Standartlar, kontroller ve örnekler iki kopya olarak çalışılmalıdır. Kullanılmayan stripler plastik minigrip poşetinin içinde silikagel kurutucu ile saklanmalıdır. Test çalışması sırasında, strip, plyet çerçevesi içinde olmalı ve sıkıca tutturulmalıdır. 2. Standart solusyonları için : Kuyucuklara 200 µl standart solusyonu ekleyin. Kontroller ve örnekler için: Test kuyucuklarına 100 µl kontrollerden ya da örneklerden ekleyin. Herbir test kuyucuğuna 100 µl inkübasyon reaktifi ekleyin. Mikrotiter pleyti çalkalayıcıda en az bir dakika 1000 rpm de karıştırın. 3. Stripleri yapışkan kaplayıcı ile kapatın. 37 C de 3 saat inkübe edin. (NOT: inkübasyon sırasında yıkama solusyonu ve substrat solusyonunu hazırlayın, bakınız Reaktifler). 4. Herbir kuyucuğu 300 µl seyreltilmiş yıkama solusyonu ile 3 kez yıkayın (Reaksiyonlar ve yıkama talimatına bakınız). 5. Herbir kuyucuğa 200 µl hazırlanmış substrat solusyonu ekleyin. 6. Stripleri yeni bir yapışkan kaplayıcı ile kaplayın. 37 C de karanlıkta 2 saat inkübe edin. 7. Dikkatlice yapışkan kaplayıcıyı çıkarın. Blank okutun (havaya karşı) ve 405 nm de kuyucuklardaki solusyonların absorbanslarını okutun mu/l ve 1000 mu/l hplap standartların absorbanslarının validasyon kriterlerine uyup uymadığını kontrol edin (Sonuçlar, Validasyona bakın). Eğer kriterler uyumlu değilse, 37 C maksimum 1 saat bekletilmelidir. Sonuçlar Validasyon - Blank standartın 405 nm de ortalama absorbansı den düşük olmalıdır.

6 - 100 mu/l ve 1000 mu/l hplap Standartların 405 nm ortalama absorbansı en az ve OD Blank Standart üzerinde olmalıdır. - Çift değerler ortalama absorbansın 10% içinde olmalıdır. - Kontrol 1 ve 2 konsantrasyonları (Sonuçların hesaplanmasına bakın) onların etiketlerindeki kadar kadar olmalıdır. Sonuçların Hesaplanması Standart solusyonların ve bilinmeyen örneklerin ortalama absorbanslarını ölçünüz. OD değerleri 10% den fazla farklı ise testi tekrar ediniz. hplap standart solusyonların her biri dikey (Y) aksiste ve ilişkili hplap konsantrasyonlarının yatay (X) aksiste olduğu ortalama absorbans değerleri grafiğinden standart eğriyi işaretleyiniz. Bu noktalardan en iyi uygun eğriyi çiziniz. Ortalama absorbans değerleri kullanılarak Kontrol 1 ve 2, herbir örnek test edilmiştir, ilişkili hplap standart eğriden mu/l olarak belirlenir. NOT: - hplap standart solusyonları kullanıma hazırdır ve onların OD değerleri 1000 ve 100 mu/l ın hplap konsantrasyonları ile ilişkilidir. Eğer örnekler seyreltilmiş ise standart eğrisinden okunan değerler dilusyon faktörü ile çarpılmalıdır. Eğer absorbanslar standart eğri limitleri içinde ise örneklerin konsatrasyonları belirlenebilir. Değerlerin uygunluğu, standart eğrinin en yüksek noktasından uzanan, anormal hesaplanmış konsantrasyonları yönetebilir. Bu örnekler seyreltilmiş olmalıdır (Örneklere bakın). Sınırlamalar - INNOTEST hplap test prosedürü serum ya da plazma içn dizayn edilmiştir. Diğer vucüt sıvıları ve dokular ile test performansı hakkında yeterli bilgi bulunmamaktadır. Bu nedenle, bu örneklerin çalışılması önerilmez. - Aşırı yüksek örneklerin (> 800 U/l) total alkaline phosphatase aktivitesi non-spesifik reaksiyona girer. Bu örnekler, hplap hariç diğer AP izoenzimlerin inaktivasyonu için kullanılmadan önce 65 C de 10 dakika inkübe edilmelidir. Test Performansı Özgüllük INNOTEST hplap sistemi hplap için spesifiktir. Diğer AP izoenzimleri, anti-hplap antikorları ile 0.1% den düşük çapraz reaksiyon gösterir. Belirleme Limiti INNOTEST hplap belirleme limiti 30 mu/l hplap den düşüktür ve 98% güvenli limitte sıfır standarttan ayırt edilebilir konsantrasyonlarda ölçülür. Kesinlik Kesinlik, 338 mu/l ve 1069 mu/l ortalama konsantrasyonları ile 2 farklı kalite kontrol örneği kullanılarak belirlenmiştir. Lot-içi değişkenlik (%CVr) 15 den az olmalıdır. Lotlar-arası değişkenlik (%CVR) 15 den az olmalıdır.