Kullanım talimatları Kullanım Amacı In Vitro Diagnostik Kullanım için DS-iSYS Insulin-like Growth Factor Binding Protein-3 (IGFBP-3) Testi IDS-iSYS Multi-Discipline Otomatik Sistemde (Sistem) insan serumu veya plazmasında IGFBP-3 kantitatif tespiti için amaçlanır. Sonuçlar doktora yardımcı olmak için diğer klinik ve laboratuar verileri ile birlikte kullanılır. IGFBP-3 büyüme bozukluklarının değerlendirilmesinde ve büyüme hormonu (GH) salgısının indikatörü olarak kullanılabilir. Özet ve Açıklama IGF sistem iyi şekilde karakterizedir ve normal ve habis hücrelerin büyümesi ve farklılaşmasında önemli bir rol oynar. IGF-I sistem bileşenleri Büyüme Hormonu (GH), IGF-I ve II, tip I ve II reseptörler, IGF binding proteinleri ve proteazlar içerir. Insulin-like growth factor binding proteinleri ilk olarak IGF-I ve IGF-II ile yüksek afinite etkileşimleri için belirlendi. Bir ortak görüş IGF-binding proteinleri (IGFBP s) için 6 üyesi olan (IGFBP-1-6) 1 isimlendirmeye vardı. IGFBP-3 dolaşımda bol bir IGFBP türüdür ve IGFBP-3, IGF-I ve asit-labile alt birimi (ALS) içeren 150kDa üçlü kompleks halinde dolaşımdaki IGF-I'in 75%-90%nını bağlar. IGFBP-3 264 amino asitten oluşan 28.7 kda moleküler ağırlığa sahiptir ve IGF I ve II aktivitesini modüle etmek ve onların yarı ömrünü arttırmak için hareket eder. It has been postulated that IGFBP-3'ün GH tarafından düzenlendiği ve bozulmuş karaciğer fonksiyonuna sahip hastalarda gözlenmiş düşük seviyeler halinde karaciğerde meydana geldiği öne sürülmüştür 2,3,4. IGFBP-3 değerleri büyüme hormonu eksikliğinin araştırılmasında (pediatrik ve yetişkin), akromegali, hipopitüitarizm araştırılmasında ve rhgh tedavisinin izlenmesi için kullanılır. GH eksikliği olan hastalar subnormal IGFBP-3 seviyelerine sahiptir ve IGFBP-3 konsantrasyonunun tespiti yüksek güven ile GH eksikliğinin tanısı için yeterlidir 5. Metod Tanımı IGFBP-3 testi kemiluminesan teknolojisine dayanır. Örnekler ve kalibratörler bir seyreltici içinde seyreltilir ve bunun bir kısmı bir süre için biyotinli anti-igfbp-3 monoklonal antikoruyla ve akridinyum etiketli anti-igfbp-3 antikoruyla inkübe edilir. Streptavidin kaplı magnetik partiküller sonra eklenir ve başka bir inkübasyon aşaması izlenir, bu partiküller bir magnet kullanılarak yakalanır. Bir yıkama aşaması ve tetikleyici reaktiflerinin eklenmesinden sonra akridinyum etiketi tarafından yayınlanan ışık direkt olarak orijinal örnekteki IGFBP-3 konsantrasyonuyla orantılıdır. Uyarılar ve Önlemler Binding Protein-3 (IGFBP-3) Testi sadece in vitro diagnostik kullanım içindir ve insanlar veya hayvanlarda dahili kullanım için değildir. Bu ürün nda belirtilen talimatlarla sıkı uyum içinde kullanılmalıdır (IFU). IDS Limited herhangi bir kayıp veya hasar için (tüzük gereği hariç) ve nasıl olursa olsun verilen talimatlara uyulmamasından kaynaklanan sebepten sorumlu tutulamaz. DİKKAT: Bu kit hayvan kaynaklı materyal içerir. Kit reaktiflerini bulaşıcı madde geçirme kapasitesine sahipmiş gibi kullanın. Uygun önlemler ve iyi laboratuar uygulamaları kit reaktiflerinin saklanması, kullanılması ve atımında kullanılmalıdır. Kit reaktiflerinin atılması yerel yönetmeliklere uygun olmalıdır. Sodyum Azid Bu kit içindeki bazı reaktifler oldukça patlayıcı metal azidler oluşturmak için kurşun, bakır veya brass tesisatıyla tepkiyebilen sodyum azid <0.1 % (w/w) içerir. Atımında azid birikimini önlemek için bol suyla akıtın. CLP altında sınıflandırma. Akut Tox. 4. Akuatik Kronik 3 Tehlike ifadeleri: EUH032: Asitlerle temas çok zehirli gaz salabilir. H302: Yutulduğunda zararlı. H412: Uzun ömürlü etkilerle sudaki yaşam için zararlı. Önlem ifadeleri: P264: Kullandıktan sonra ellerinizi iyice yıkayın. P270: Ürünü kullanırken birşey yemeyin, içmeyin veya sigara içmeyin. P273: Çevreye yayılmasını önleyin. P301+310: YUTULURSA: Derhal bir ZEHİR MERKEZİ veya doktora başvurun. P330: Ağzı durulayın. Kullanım Önlemleri Reaktifler kullanıma hazırdır. Yeni kartuşu Analizöre yüklemeden önce magnetik partikül kabının tempolu bir dönme hareketi ile operatör tarafından karıştırılması gerekir. Bu nakliye esnasında yerleşmiş magnetik partikülleri tekrar süspanse eder. Herhangi köpük oluşumundan kaçınılması çok önemlidir. Raf Ömrü ve Reaktiflerin Saklanması İlk kullanımdan önce kartuş ve kalibratörleri 2-8 C de karanlıkta dik pozisyonda saklayın. Kartuşu dondurmayın. Reaktif raf ömrü Kartuş Kalibratörler 2-8 C de açılmadan önce Son kullanma tarihine kadar Kartuş, 2-8 C de açıldıktan 28 gün N/A sonra -20 C de sulandırma N/A 4 hafta sonrası kalibratörler On board Analizör (*) 14 gün 3 saat (*) Devamlı on board stabilitesi. Örnek Toplama ve Saklama Bu test serum (standart örnekleme tüpleri veya serum ayırıcı jel içeren tüpler) veya plazma (lityum heparin, sodyum heparin ve potasyum EDTA) örnekleri kullanılarak yapılmalıdır. Örnekler toplama sonrası en kısa sürede ayrılmalıdır. Uzun süreli saklama için, -20 C de saklayın. Örneklerin tekrar tekrar dondurulup çözdürülmesinden kaçının. Sayfa 1/5
Partiküler madde içeren örnekler testi yapmadan önce santrifüjlenmelidir. Isı ile inaktive edilmiş örnekleri kullanmayın. Olası buharlaşma etkilerini minimize etmek için, örnekler, kalibratörler, ve kontroller analizör üzerine yerleştirildikten sonra 3.0 saat içinde ölçülmelidir. Testten önce örnekler, kalibratörler ve kontrollerin oda sıcaklığında (20-25 C) olduğundan emin olun (20-25 C). Not: Prosedür Piyasada mevcut bazı örnek toplama tüpleri özel durumlarda test sonuçlarını etkileyebilir. Özellikle birincil tüplerde örnekleri işlerken tüp üreticisi talimatlarının izlenmesi önerilir. Sağlanan materyaller Reaktif Kartuşu MPS3 Magnetic particles coated with Streptavidin in a phosphate buffer containing sodium azide as preservative (<0.1%), 1 bottle, 2.7 ml. CONJ Anti-IGFBP-3 labelled with an acridinium ester derivative, in buffer containing bovine proteins with sodium azide as preservative (<0.1%), 1 bottle, 4.25 ml. Ab-BIOT Anti-IGFBP-3 labelled with biotin, in buffer containing bovine and mouse proteins with sodium azide as preservative (<0.1%), 1 bottle, 4.25 ml. Diluent A phosphate BSA buffer containing bovine proteins and sodium azide as preservative (<0.1%), 1 bottle, 40 ml. Kalibratörler CAL A CAL B A phosphate BSA matrix containing IGFBP-3 and sodium azide as preservative (<0.1%), 1 each of 2 concentration levels, 1.0 ml. Mini CD IDS-iSYS reaktifleri, kontrol aralıkları ve CRY dosyaları için IFU içerir. Gereken ama Sağlanmayan Materyaller IDS-iSYS Multi-Discipline Automated System : IS-310400 Binding Protein 3 (IGFBP-3) Control Set: IS-4430 IDS-iSYS Cuvettes: IS-CC100 IDS-iSYS System Liquid (Syst. l): IS-CS100 IDS-iSYS Wash Solution (Wash S): IS-CW100 IDS-iSYS Trigger Set: IS-CT100 IDS-iSYS Cartridge Check System (CCS): IS-6010 Sample Cups (500 µl): IS-CSC105 için mevcuttur (IDS- isys Kullanım Kılavuzuna bakın). Reaktif tepsisinde kartuşu yükleyin ve testi başlatmadan önce en az 40 dakika bekleyin. Kartuş reaktif tepsisinden çıkartılırsa kartuşu karanlıkta 2 8 C de dik olarak saklayın. Kalibratörler IGFBP-3 kalibratörleri liyofiizedir. Kullanımdan hemen önce sulandırın. Her şişeye 1.0mL distile veya deiyonize su ekleyin. Stopper değiştirin. Arasıra hafifçe elle karıştırarak sulandırma için 10 dakika bekletin. Köpük oluşumunu önleyin. Kalibratörler birden fazla kullanılıyorsa porsiyonlanmalı ve 15 dakikalık sulandırma içinde -20 C veya daha düşük sıcaklıkta saklanmalıdır. Donmuş kontroller yeniden kullanılırken oda sıcaklığında çözün ve iyice karıştırın. Makineye yerleştirmeden önce kontrollerin oda sıcaklığında olduğundan emin olun. Kontroller 30 dakikalık çözünme içinde makineye yerleştirilmelidir. Porsiyonlar dondurulmamalıdır. Kalibratörlerden yaklaşık 200 μl örnek cup içine pipetleyin ve makine üstünde yerleştirin. Kullanımdan sonra örnek cup içindeki materyali atın. Materyali geri kalibratör şişesine KOYMAYIN. Analizör Kalibrasyonu İki IGFBP-3 kalibratörü master eğri ayarlamasını yapmak için gereklidir. Bu kalibratörler kit ile birlikte sağlanır ve başka lottan kalibratörler kullanılmamalıdır. Ana eğri ayarlaması yapmak için kontroller kalibratörler gibi aynı zamanda çalışılmalıdır. Kartuş grubunun kalibrasyonu için gereken tüm veri mini CD de bulunabilir. Analizör üstünde reaktifler için master eğri ayarlamak için kalibratör seviyeleri A ve B kullanın. IGFBP-3 kartuşunun varlığını ve veritabanındaki kartuş master eğrisinin mevcudiyetini kontrol edin. Kalibratörlerin lotu için veri analizör üstünde yoksa kalibratörle sağlanan mini CD kullanarak veriyi girin. IDS-iSYS Kullanım Kılavuzuna göre IDS-iSYS Analizöründe immunoassay kalibrasyonu başlatın. Bu kalibrasyon 3 kez yapılır. Bir tekrar kalibrasyon gerekliliklerini karşılamak için çıkartılabilir. Yukarıda belirtildiği gibi kontroller çalışılmalıdır. Kalibrasyon penceresinde görüntülenen kalibrasyon durumuna göre kalibrasyonu doğrulayın ve onaylayın ve kullanımdan sonra örnek tepsisinden kalibratörü atın. Kalibrasyon IDS-iSYS IGFBP-3 Referans Materyali Insulin-Like Growth Factor Binding Protein-3 NIBSC kodu: 93/560 için kalibre edilir. Kalibrasyon Sıklığı Yeni bir kalibrasyon şu hallerde gerekir: Kartuşların her yeni bir lotu yüklendiğinde Trigger veya küvetlerin her yeni lotu kullanıldığında Test Prosüdürü Reaktif Kartuşu Kartuş içinde sağlanan reaktifler kullanıma hazırdır. Bu analizör homojeniteyi korumak için magnetik partiküllerin karışımını otomatik olarak yapar. Analizöre yeni kartuş yüklemeden önce tempolu dönüş hareketiyle magnetik partikül kabını karıştırın. Köpük oluşumunu önleyin. Barkod, kartuş reaktif bölmesine yüklendiğinde okunur. Etiket analizör barkod okuyucusu tarafından okunamıyorsa manuel prosedür barkod verisini girmek Sayfa 2/5
Kontrol değerleri tanımlı aralıklar içine düşmediğinde Kalibrasyon süresi sona erdiğinde Analizör servisinden sonra. Kalibrasyon doğrulama otomatiktir ve Analizör tarafından yönetilir. Kalite Kontrol IDS-iSYS IGFBP-3 Control Set kalite kontrol için kullanın. değişik seviyelerde IGFBP-3 ile en az üç kontrolde sonuçların geçerliliğini sağlamak için ölçülmelidir. Diğer uygun kontrol materyali IDS-iSYS IGFBP-3 Control Setine ek olarak kullanılabilir. Kontroller hasta örnekleri içeren her çalışmanın başında (veya yakınında) ve ayrıca kalibrasyonlar esnasında veya yerel düzenlemelere göre test edilmelidir. Kontrollerin rutin olarak iki kez çalışılması önerilir. Laboratuvarlar vardiya başına en az bir kez kontrolleri test etmelidir. Hazırlama ve kullanım talimatları için IDS-iSYS IGFBP-3 Control Set IFU bakın. Örnek IGFBP-3 seviyelerinin tespiti IDS-iSYS Kullanıcı Kılavuzuna göre örnekleri işleyin. Sonuçların Hesaplanması Her örneğin IGFBP-3 konsantrasyonu otomatik olarak hesaplanır. Konsantrasyonların görüntülenmesi (ekran veya basılı) kullanıcı isteği üzerine üretilir. IDS-iSYS IGFBP-3 Testi IGFBP-3 konsantrasyonlarını hesaplamak için 4-parametre lojistik eğrifit (4PL) kullanır. Ölçüm Aralığı (Raporlanabilir Aralık) Testin raporlanabilir aralığı 80-10,000 dir. 80 altında okunan herhangi değer < 80 olarak raporlanmalıdır. Dilüsyon Raporlanabilir aralığın üstünde IGFBP-3 konsantrasyonlarına sahip örnekler 2 içinde 1 oranında düşük konsantrasyon örnek insan serum örneğiyle manuel olarak seyreltilmelidir. Seyreltilmiş örnekler için sonuçlar dilüsyon faktörü 2 ile çarpılmalı ve düşük örneğin konsantrasyonu için düzeltilmelidir. Olası Müdahele Edici Madde Eşik Konsantrasyonu Lipid 3000 mg/dl Bilirubin 200 mg/l Hemoglobin 500mg/dL Biyotin 300 nmol/l RBC 0.4% 4. Hook etkisi 100,000 ye kadar IGFBP-3 konsantrasyonları kullanılarak test edildi. Hook etkisi gözlenmedi. Beklenen Değerler Her laboratuvar yerel popülasyonu için aralıkları belirlemelidir. Aşağıdaki aralık IDS-iSYS Insulin-like Growth factor binding protein-3 (IGFBP-3) Testi kullanılarak belirlendi ve sadece bilgi için sağlanmaktadır. Normal Yetişkinler Erkek Yaş n 2.50% 25% (ng/ml) medyan 75% 97.50% 0-5 141 1177 1789 2352 3016 4171 5-10 298 1995 2964 3387 3871 4904 10-15 436 2472 3637 4298 4803 5920 15-20 285 2210 3734 4340 4830 6490 30-35 75 3126 3739 4262 4813 5915 35-40 151 3264 3853 4184 4684 5968 40-45 154 2919 3771 4298 4833 5868 45-50 152 2805 3606 4205 4800 6121 50-55 155 2654 3588 4239 4741 5839 55-60 168 2155 3521 4063 4653 5683 60-65 179 2437 3390 3914 4665 6077 65-70 289 1851 3154 3752 4332 5912 70-75 244 1915 2898 3413 3998 5316 75-80 257 1837 2567 3263 3800 5128 80-85 119 1691 2483 2955 3571 4793 >85 53 1466 2508 2851 3221 4311 Kullanım Sınırlamaları 1. Herhangi diagnostik prosedür durumunda olduğu gibi sonuçlar hastanın klinik görünümü ve doktor için mevcut diğer bilgilerle birlikte yorumlanmalıdır. 2. Bu testin performans özellikleri pediatrik popülasyonda belirlenmemiştir. 3. Aşağıdaki maddeler aşağıdaki tabloda verilen konsantrasyonlar belirtilen eşiğin altında olduğunda IDS-iSYS IGFBP-3 Testine müdahele etmez. Sayfa 3/5
Normal Yetişkinler Kadın Yaş n 2.50% 25% (ng/ml) medyan 75% 97.50% 0-5 229 1078 1769 2430 2966 4329 5-10 713 1674 3040 3655 4240 5411 10-15 408 2321 3684 4411 4962 6195 15-20 189 2999 3926 4678 5261 6170 30-35 86 2995 3993 4441 5001 5701 35-40 170 3105 3833 4251 4734 5868 40-45 182 2888 3776 4228 4645 5852 45-50 160 2916 3589 4091 4484 5715 50-55 190 2929 3585 4022 4693 6779 55-60 199 2558 3575 4137 4722 5959 60-65 173 2793 3558 4063 4682 6129 65-70 277 2381 3467 4018 4577 5947 70-75 257 2074 3311 3846 4474 5616 75-80 222 2049 3137 3658 4237 5394 80-85 120 2247 3022 3525 4012 5048 >85 56 1815 2892 3280 3937 5319 Performans Verisi Temsili performans verisi gösterilmektedir. Her bir laboratuvarda elde edilen sonuçlar değişebilir. Duyarlılık Blank sınırı (LoB), tespit sınırı (LoD) ve kantitasyon sınırı (LoQ) 72 blank ve 147 düşük seviyeli örnek kullanılarak CLSI EP17-A rehberliğinde belirlendi,''tespit Limitleri ve Kantitasyon Limitlerinin Tespiti için Protokoller''. LoB LoD LoQ 30 50 80 Kesinlik Kesinlik CLSIEP-5A2 dayalı protokole uygun olarak değerlendirildi, Kantitatif Ölçüm Yöntemlerinin Kesinlik Performansının Değerlendirilmesi. Beş serum kontrolü üç Analizör üstünde 20 gün için gün başına iki kopya halinde iki kez reaktiflerin 3 lotu kullanılarak test edildi. Kontrol n ortalama Çalışma-içinde Toplam () SD CV% SD CV% 1 80 754 16.6 2.2 43.6 5.8 2 80 2042 54.0 2.6 141.0 6.9 3 80 3675 51.9 1.4 213.2 5.8 4 80 4682 83.3 1.8 295.4 6.3 5 80 7686 122.4 1.6 550.9 7.2 Geri kazanım Geri kazanım testten önce örneklere IGFBP-3 eklenmesiyle test edildi. Örnek Kons. Tahmin edilen Konsantrasyon () IGFBP-3 eklenen 894 1788 894 1788 Ölçülen 3641 4506 7074 7958 Ölçülen Konsantrasyon () Geri kazanım 892 1757 1056 1940 Ortalama Varyasyon Geri kazanım % 100% 98% 118% 109% 106% Doğrusallık Doğrusallık CLSIEP-6A dayalı değerlendirildi, 5 Kantitatif Ölçüm Prosedürlerinin Doğrusallığının Değerlendirilmesi: Bir İstatistiksel Yaklaşım. IGFBP-3 çeşitli konsantrasyonlarını içeren örnekler 2 kez test edildi. Elde edilen ortalama konsantrasyonlar tahmin edilen konsantrasyonlarla karşılaştırıldı. Örnekler testten önce düşük hasta örneğiyle yüksek hasta örneği seyreltilerek hazırlandı. () % 152 136-15.7-10% 1193 1137-56.1-5% 2235 2142-92.5-4% 3276 3202-74.0-2% 4317 4250-67.4-2% 5359 5595 236.2 4% 6400 6535 134.8 2% 7442 7633 191.3 3% 8483 8511 27.9 0% 9525 9499-25.5 0% 10566 10307-259.0-2% Metod Kıyaslama IDS-iSYS IGFBP-3 Testi CLSI EP-9A2 izlenerek, ''Metod Kıyaslama ve Hasta Örnekleri Kullanılarak Bias Tahmini'', IGFBP-3 (X) kantitatif tespiti için tanımlı immunoassay karşı kıyaslandı. Toplam 136 örnek, geniş aralıkta IGFBP-3 konsantrasyonlarını [615-7030 ] temsil etmek için seçilmiş, her metod ile değerlendirildi. Passing-Bablok analizi karşılaştırmalı veriler üstünde yapıldı: IDS-iSYS = 0.98(X) +12.7 (eğim 95% CI ve kesişim sırasıyla 0.93-1.02, ve -144 to 194 dü); korelasyon katsayısı (r) = 0.97. Özgüllük Özgüllük aşağıdaki analitlerle değerlendirildi. Analit Çapraz-Reaktivite Insulin <0.1% IGF-I <0.2% IGF-II <0.1% IGFBP-1 <0.1% IGFBP-2 <0.1% IGFBP-4 <0.1% IGFBP-5 <0.1% IGFBP-6 <0.1% Sayfa 4/5
Bibliyografi 1. Ballard J, Baxter R, Binoux M, Clemmons D, Drop S, Hall, K, Hintz R, Rechler M, Rutanen E, and Schwander J. On the nomenclature of the IGF binding proteins. Acta Endocrinol 121: 751 752, (1989). 2. Phillips LS, Pao CI, Villafuerte BC. Molecular regulation of insulin-like growth factor-i and its principal binding protein, IGFBP-3. Prog Nucleic Acid Res Mol Biol 60:195 265, (1998). 3. Albiston AL, Saffery R, Herington AC. Cloning and characterization of the promoter for the rat insulinlike growth factor-binding protein-3 gene. Endocrinology 136:696 704, (1995). 4. Blum WF, Ranke MB Use of insulin-like growth factor binding protein 3 for the evaluation of growth disorders. Horm Res 34 (Suppl):31-37,(1990). 5. Ranke MB, Schweizer R, Elmlinger MW, Weber K, Binder G, Schwarze CP, Wollmann HA. Significance of Basal IGF-I, IGFBP-3 and IGFBP-2 Measurements in the diagnostics of short stature in children. Horm Res 54:60-68, (2000). Immunodiagnostic Systems Limited, 10 Didcot Way, Boldon Business Park, Boldon, Tyne & Wear, NE35 9PD, UK Tel.: +44 191 519 0660 Fax: +44 191 519 0760 e-mail: info.uk@idsplc.com www.idsplc.com Immunodiagnostik Sistemler UK Immunodiagnostic Systems Limited, 10 Didcot Way, Boldon Business Park, Boldon, Tyne & Wear, NE35 9PD, UK Tel.: +44 191 519 0660 Fax: +44 191 519 0760 e-mail: info.uk@idsplc.com www.idsplc.com Teknik Destek: Tel: +44 0 191 519 6153 ABD Immunodiagnostic Systems (IDS) Inc, 948 Clopper Road, Gaithersburg, MD 20878, ABD. Tel.: +1 (877).852.6210 Fax: +1 (301).990.4236 e-mail: info.us@idsplc.com web: http://www.idsplc.com Almanya Immunodiagnostic Systems GmbH (IDS GmbH), Mainzer Landstrasse 49, 60329 Frankfurt am Main. Tel.: +49 69 3085-5025 Fax: +49 69 3085-5125 e-mail: info.de@idsplc.com www.idsplc.com Teknik Destek: Tel: +49 69 3085-5025 Fransa Immunodiagnostic Systems (IDS), 153 Avenue d Italie, 75013 Paris, Fransa Tel.: (0)1 40 77 04 50 Fax : (0)1 40 77 04 55 e-mail: info.fr@idsplc.com www.idsplc.com Teknik Destek: Tel: (0)1.40.77.04.70 İskandinavya Immunodiagnostic Systems Nordic a/s (IDS Nordic a/s), International House, Center Boulevard 5, 2300 København S, Danimarka Tel:+45 44 84 0091 e-mail: info.nordic@idsplc.com www.idsplc.com Belçika Immunodiagnostic Systems S.A., Rue Ernest Solvay 101, 4000 Liège, Belçika Tel.: +32 4 252 26 36, Fax : +32 4 252 51 96 e- mail: info.be@idsplc.com www.idsplc.com Brezilya IDS Brasil Diagnósticos Ltda.Rua dos Pinheiros, 610 - conj 41Edificio Win Work Pinheiros São Paulo - SP Brezilya CEP : 05422-001 Tel: +55 11 37406100, Fax: + 55 11 37406105 Email: info.br@idsplc.com Sayfa 5/5