PODOSİT HÜCRE MODELİNDE PROTEİNÜRİDE, SLİT DİYAFRAM PROTEİNLERİ GENLERİNİN EKSPRESYONU VE FARMAKOLOJİK MODÜLASYONU Mesude Angın 1, Ender Hür 1, Çiğdem Dinçkal 1, Cenk Gökalp 1, Afig Berdeli 1, Soner Duman 1 1 Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi
GİRİŞ Glomerüler Bazal Membran, glomerüler filtrasyonda bariyer görevi yapar. Podositler bunun dış parçasını oluşturur Podositlerin ayaksı çıkıntıları arasında filtrasyon yarıkları olan, çok ince bir membran olarak Slit-Diyafram(SD) bulunur
GİRİŞ SD proteinleri; Nefrin, Podosin, Transiyent Reseptör Potansiyel Katyon Kanal 6 (TRPC6) Aktin iskeleti proteinleri; ACTN-4, ACTB Bunları kodlayan genlerin mutasyonuyla aktin hücre iskeletinde yeniden yapılanma ve ayaksı çıkıntıların bozulmasıyla geçirgenlik artışına bağlı proteinüri gelişir
GİRİŞ
Hedefe Yönelik İlaçlar Etki Mekanizması Glukokortikoid Podosit apoptozisini azaltır Podosit sağkalım süresini uzatır Aktin filamentleri dengeler Siklosporin Rituksimab Oktreotid Aktin filamentleri dengeler T hücre aracılı sitokin üretimini azaltır SMPDL-3b m üzerinden B hücrelerinin büyüme inhibisyonu Genel inhibitör etkili Abatacept B7-1 sinyalizasyonunu bloke eder
AMAÇ Çalışmamızda podosit hücre kültürü ortamında Adriyamisin le oluşturulan Nefrotik Sendrom modelinde, Glukokortikoid, Siklosporin, Rituksimab, Oktreotid, Abatacept in tedavideki etkinliklerini araştırmayı planladık
GEREÇLER VE YÖNTEM Podosit hücreleri, %10 fetal bovin serum(fbs), 100U/mL penisilin/streptomisin ve 10U/mL fare rekombinant r- interferon içeren RPMI-1640 ortamında 33 C'de inkube edildi.daha sonra r-interferonun çıkarılmasıyla farklılaşma için 37 C lik inkübatöre kaldırıldı.iki hafta sonra tipik olgun podosit hücreleri elde edildi. Adriyamisin le indüklenen podosit hasarına belirlenen ilaçların etkisini incelemek amacıyla 12 gün süreyle yetiştirilen podositler %10FBS li ortamla 1μmol/L ilaçların varlığında inkübe edildi.
GEREÇLER VE YÖNTEM Adriyamisinin neden olduğu podosit hasarlanma mekanizmasını belirlemek için, Podosit hücreleri 50μg/mL konsantrasyonunda Adriyamisin e maruz bırakıldı İlaçların varlığında veya yokluğunda Adriyamisin ile 48saat inkübasyonun ardından 8, 24 ve 48 saat süreyle gözlendi ve üçer kez tekrarlandı.
GEREÇLER VE YÖNTEM Proliferasyon deneyi yaparak uygun hücre sayısı belirlendi Sitotoksisite deneyleri ile uygun ilaç dozları belirlendi Her inkubasyon sonrası hücre kültür ortamından podosit kökenli proteinlerin mrna ekspresyonunu tayin etmek için RNA izolasyonu yapılmıştır
UYGULANAN İLAÇLAR Adriyamisin: 50 μg/ml Dexametazone: 1 µmol/l Siklosporin: 1 µmol/l Rituximab: 100 μg/ml Octreotid: 10 mikro M Abatacept: 10 μg/ml
DEĞERLENDİRME Sonuçlar Comparative Ct yöntemi ile değerlendirilmiştir Nefrin, Podosin ve TRPC6 gen ekspresyonları ACTB genine göre rölatif olarak hesaplanmıştır Kontrol grubuna göre kaç kat artış olduğu belirlenmiştir
SONUÇLAR Podosit hücre kültüründe Adriyamisin sonrasında kontrol grubuyla karşılaştırıldığında anlamlı olarak Nefrin ve Podosin gen ekspresyonunda azalma TRPC6 da artma ile Nefrotik Sendrom modeli oluşturulmuştur
SONUÇLAR
SONUÇLAR
SONUÇLAR
SONUÇLAR
SONUÇLAR Glukokortikoidler ile Nefrin ve Podosin gen ekspresyonu anlamlı olarak artmış TRCP6 gen ekspresyonu da beklendiği gibi azalmıştır. Podosit stabilizasyonu yaptığı bilinen Siklosporin le gen ekspresyonlarında olumlu sonuçlar alınmıştır. Rituksimab ile Nefrin ve Podosin gen ekspresyonlarında artma ve TRPC6 gen ekspresyonunda azalma izlenmemiştir. Çalışmamızdaki NS modelinde Rituximab ın etkinliği gösterilememiştir
SONUÇLAR Oktreotid ile nefrin ve podosin ekspresyonunda anlamlı olmayan hafif bir artış izlense de TRCP6 gen ekspresyonunda azalma izlenmemiştir Abatacept, Podosin gen ekspresyonunda daha fazla olmak üzere Nefrin gen ekspresyonunda artma TRPC6 gen ekspresyonunda da azalma ile NS modeli hücrelerde anlamlı etkinlik gösterdiği bulunmuştur
ÇIKARSAMA RA tedavisinde kullanılan Abatacept CD28'in T hücreleri ve plazma hücreleri üzerine bağlanmasını engelleyerek etki eder CD28'den 20 kat daha yüksek afinite ile B7-1'i bağlar Abatacept, Podosit B7-1'e bağlanarak hücre içi fonksiyon değişikliğiyle Aktin ve integrinin podosit kontraksiyonundaki rollerini değiştirebilir
ÇIKARSAMA Mevcut çalışmamızda Abatacept, Adriamisin ile oluşturulan deneysel NS modelinde, tedavide umut verici etkinlik göstermiştir Elimizde ulaşılabilen yeni tedavi modaliteleri ile podositlerin yaşamı, farklılaşması, yapısal düzenlenmesi ve hücre sinyali üzerinde etkili olabilir
«BÜYÜK İŞLER, MÜHİM TEŞEBBUSLER, ANCAK MÜŞTEREK MESA-İ İLE MÜMKÜNDÜR.» Mustafa Kemal ATATÜRK