Kulak Burun Bogaz Ihtis Derg 2007;17(2):75-80 KL N K ÇALIfiMA Sensörinöral iflitme kayb olan kiflilerde mitokondriyal 12S rrna (MTRNR1) geninin taranmas Screening of the mitochondrial 12S rrna (MTRNR1) gene in probands with sensorineural hearing loss Dr. Yaprak E. ÇIRÇIR, 1,2 Dr. Arma an NCESULU, 3 Dr. Mustafa TEK N 1,2 Amaç: Aminoglikozit kullanma öyküsü bulunan ve bulunmayan sensörinöral iflitme kay pl olgularda mitokondriyal DNA 12S rrna (MTRNR1) genindeki mutasyonlar araflt r ld. Hastalar ve Yöntemler: Araflt rmaya sendromik olmayan sensörinöral iflitme kay pl 70 olgu (40 kad n, 30 erkek; yafl da l m 3-42) al nd. On bir bireyin öyküsünde iflitme kayb geliflmeden önce aminoglikozit kullan m oldu u ö renildi. Bütün olgularda önce GJB2 (connexin 26) geni tarand ve normal bulundu. m.1555a>g mutasyonunun araflt r lmas nda PCR-RFLP yöntemi kullan ld. Daha sonra MTRNR1 geni PCR-TTGE ile tarand. Bu taramada bant farkl l gösteren örneklere do rudan dizi analizi yap ld. Bulgular: Aminoglikozit kullan m öyküsü olan 11 hastan n birinde m.1555a>g mutasyonu bulundu. Aminoglikozit kullan m öyküsü olmayan ve sensörinöral iflitme kayb olan iki kiflide m.750a>g polimorfizmi saptand. Di er olgularda, patojenik olabilecek baflka bir baz de iflimine rastlanmad. Sonuç: Aminoglikozit ototoksisitesine yatk nl k yapan en önemli DNA de iflikli i olan m.1555a>g mutasyonu d fl nda Türkiye de yayg n bir mitokondriyal 12S rrna mutasyonu bulunamad. Ancak, bu genin genifl serilerde taranmas daha az görülen de iflikliklerin saptanmas n sa layabilir. Anahtar Sözcükler: Aminoglikozit; sensorinöral iflitme kayb /etyoloji; RNA/genetik. Objectives: We investigated mitochondrial DNA 12S rrna (MTRNR1) gene mutations as a cause of hearing loss in probands with or without a history of aminoglycoside use. Patients and Methods: The study included 70 patients (40 females, 30 males; age range 3 to 42 years) with nonsyndromic sensorineural hearing loss. Eleven probands had a history of aminoglycoside use before the onset of hearing loss. All cases were first screened and found to be negative for the GJB2 (connexin 26) gene mutations. The m.1555a>g mutation was screened using the PCR- RFLP technique. The entire 12S rrna gene was later screened with the PCR-TTGE technique followed by direct sequencing. Results: Of 11 patients with a history of aminoglycoside use, one patient was found to have the m.1555a>g mutation. Two probands with no history of aminoglycoside use exhibited the m.750a>g polymorphism. No pathogenic base substitutions were detected in the remaining patients. Conclusion: Apart from the common aminoglycoside ototoxicity-related DNA change, m.1555a>g, we could not identify a common mitochondrial 12S rrna mutation associated with hearing loss in Turkey. Screening of larger series may document rare alterations. Key Words: Aminoglycosides; hearing loss, sensorineural/etiology; RNA/genetics. 1 Ankara Üniversitesi T p Fakültesi Pediatrik Moleküler Patoloji ve Genetik Bilim Dal ( 1 Department of Pediatric Molecular Pathology and Genetics, Medicine Faculty of Ankara University); 2 Ankara Üniversitesi Biyoteknoloji Enstitüsü ( 2 Ankara University, Institute of Biotechnology); 3 Ankara E itim Hastanesi 2. Kulak Burun Bo az Hastal klar Klini i ( 3 Department of Otolaryngology, Ankara Training Hospital), both in Ankara, Turkey. Dergiye gelifl tarihi - 10 Haziran 2005 (Received - June 10, 2005). Düzeltme iste i - 11 fiubat 2006 (Request for revision - February 11, 2006). Yay n için kabul tarihi - 7 Nisan 2006 (Accepted for publication - April 7, 2006). letiflim adresi (Correspondence): Dr. Mustafa Tekin. Birlik Mah., 65. Sok., No: 20/7, 06610 Çankaya, Ankara, Turkey. Tel: +90 312-362 30 30 Faks (Fax): +90 312-320 14 33 e-posta (e-mail): mtekin@medicine.ankara.edu.tr 75
Do ufltan iflitme kayb yaklafl k 800 canl do umda bir görülür. leri ve çok ileri derecedeki iflitme kayb n n en az yar s nda genetik faktörlerin bulundu u ortaya konmufltur. flitme kayb bulunan bir kiflide ek bir klinik veya laboratuvar bulgusu varsa ve bulgular bir sendrom tan s koymaya yetiyorsa sendromik iflitme kayb oldu u söylenir. E er ek bir bulgu saptanamazsa sendromik olmayan iflitme kayb ndan bahsedilir. Sendromik olmayan ve do- ufltan veya dil geliflimi öncesi ortaya ç kan iflitme kayb büyük ço unlukla sensörinöral iflitme kayb fleklinde görülmektedir. nsan hücreleri çekirde inde yer alan kromozomlar üzerinde bulunan ve yaklafl k üç milyar baz uzunlu undaki genomik DNA da bugüne kadar 100 den fazla bölge ve 40 tan fazla gendeki de iflikliklerin sendromik olmayan iflitme kayb yapabildi i gösterilmifltir. [1,2] Çok daha küçük olan (yaklafl k 15 bin baz uzunlu unda) mitokondriyal DNA da ise 12S rrna (MTRNR1) geni baflta olmak üzere bir grup gendeki mutasyonlar sendromik olmayan sensörinöral iflitme kayb yla sonuçlanabilir. [3,4] Mitokondriyal 12S rrna (MTRNR1) genindeki mutasyonlar di er mitokondriyal mutasyonlara benzer flekilde maternal kal t m gösteren iflitme kayb yapabilecekleri gibi, Mendel in tan mlad otozomal kal t m biçimlerinden birine uyan, genellikle az say da bireyin etkilendi i, ailelerde de bulunabilir. Bu mutasyonlar aile öyküsünde hiç iflitme kayb olmayan kiflilerde de iflitme kayb nedeni olabilir. [4] MTRNR1 genindeki de iflimlerden iflitme kay plar nda en s k rastlanan m.1555a>g mutasyonu hekimlik uygulamalar s ras nda bilinmesi gereken özel bir öneme sahiptir. Bu mutasyon baflka hiçbir faktör olmadan iflitme kayb yapabilece i gibi, aminoglikozit kullan m na ba l iflitme kay plar n n da önemli bir nedenidir. [3] MTRNR1 genindeki di er bir de iflim olan m.961deltcins(n) de yine aminoglikozit ototoksisitesiyle iliflkili olarak tan mlanm flt r. [5] Yak n bir zamanda Çinli bir ailede tan mlanan ayn gendeki m.1494c>t mutasyonunun da aminoglikozit ototoksisitesiyle iliflkili oldu u bildirilmifltir. [6] Bu mutasyonlar d fl nda, MTRNR1 geninde iflitme kayb yla iliflkili olabilecek ancak büyük olas l kla aminoglikozit ototoksisitesi nedeni olmayan az say da de ifliklik bildirilmifltir. [4,7] flitme kayb nedeni olan mitokondriyal DNA de- iflikliklerinin s kl toplumlar aras nda belirgin de- ifliklik göstermektedir. Örne in m.1555a>g mutasyonu Yunanistan da ve ngiltere de çok nadir saptan rken Uzak Do u ülkeleri ve spanya da bir halk sa l sorunu olarak ortaya ç kmaktad r. [4] Türkiye de do ufltan veya dil geliflimi öncesi bafllayan sensörinöral iflitme kay pl çocuklarda m.1555a>g mutasyonu s kl yaklafl k %1.5 olarak bildirilmifltir. [8] Yine m.961deltcins(n) mutasyonuna Türkiye de nadir olarak rastlanm flt r. [9] Ancak, Türkiye de di er MTRNR1 mutasyonlar n n bulunup bulunmad ve varsa s kl klar konusunda bir veri bulunmamaktad r. Bu araflt rman n hipotezi, daha önce mutasyonlar n n iflitme kayb yapt gösterilen MTRNR1 geninde iflitme kayb yla iliflkili baflka de iflikliklerin bulundu udur. Bu hipotezi test etmek için sendromik olmayan sensörinöral iflitme kayb bulunan ve aminoglikozit kullanma öyküsü bulunan/bulunmayan bir grup insanda MTRNR1 geninin tamam incelenmifltir. HASTALAR VE YÖNTEMLER Bu çal flmaya sensörinöral iflitme kayb olan ve birbiriyle akraba olmayan 70 hasta (40 kad n, 30 erkek; yafl da l m 3-42) al nd. Olgular n hiçbirinde bir sendrom tan s konulmas n sa layacak klinik ve/veya laboratuvar bulgusu yoktu. Olgular n iflitme kayb fliddetleri orta-çok ileri dereceler aras nda de ifliyordu. Olgular n 11 inde aminoglikozit kullan m öyküsü vard. Biri hariç tüm hastalarda do- ufltan veya prelingual bafllang çl iflitme kayb bulunurken, 42 yafl ndaki bir erkek olguda iflitme kayb n n 24 yafl nda aminoglikozit kullan m sonras bafllad ö renildi. Bu olguda tüberküloz tan s sonras birkaç doz streptomisin sonucu ç nlama ile bafllayan ve ilac n kesilmesine yol açan iflitme kayb öyküsü vard. Aminoglikozit kullan m öyküsü olan di- er 10 olguda amikasin, tobramisin gibi bakteriyel enfeksiyonlarda k sa süreli kullan lan ve iflitme kayb ile do rudan iliflkilendirilemeyen kullan m öyküleri al nd. Yetmifl olgu aras nda 21 inin aile öykülerinde iflitme engelli baflka bireyler vard. ki ailede vertikal kal t m örne i varken, hiçbir ailede belirgin mitokondriyal (maternal) kal t m örne i gösterilemedi. Aminoglikozit kullan m öyküsü olan 11 olgudan ikisinin ailesinde iflitme engelli baflka bireyler vard. Di er dokuz hastan n ailelerinde iflitme engelli birey yoktu. Olgulardan veya anne babalar ndan, çal flmaya bafllamadan önce 22.10.2001 tarih ve 10-2001/141 say l Ankara T p Fakültesi Etik Kurulu onayl bilgilendirilmifl onam al nd ktan sonra antikoagülanl 76
tüplere al nan periferik kan örneklerinden fenol-kloroform yöntemiyle DNA elde edildi. Bütün olgularda önce GJB2 (connexin 26) geninin kodlayan ve kodlamayan eksonlar taranarak [10,11] mutasyon olmad gösterildi. MTRNR1 geni m.1555a>g mutasyonu daha önce tan mlanan flekilde PCR-RFLP yöntemiyle tarand. [3,8] Daha sonra MTRNR1 geni birbiriyle örtüflen dört bölge halinde PCR ile ço alt larak PCR-TTGE (Temporal Temparature Gradient Gel Electrophoresis) ile tarand (bu yöntemde kullan lan primer dizileri dileyenlere gönderilebilir). Bu taramada bant farkl l gösteren örneklere do rudan dizi analizi yap ld. TTGE daha önce yap lan çal flmalarda mitokondriyal DNA de iflikliklerinin saptanmas nda duyarl - l ve homoplazmi-heteroplazmi ay rma gücü yüksek, kolay ve ucuz bir teknik olarak bildirilmifltir. [12,13] Tüm PCR reaksiyonlar nda son konsantrasyonlar 0.6 pikomol/μl olacak flekilde primer çiftleri kullan ld. Di er PCR bileflenleri son konsantrasyon 0.2 mm olacak flekilde deoksinükleotittrifosfatlar [datp, dgtp, dctp, dttp (Fermentas, Litvanya)], Taq DNA Polimeraz (Fermentas, Litvanya), 10 mm TrisHCI (25 C ph: 8,8), 50 mm KCI, %0.8 Nonidet P40 ve 1.5 mm MgCI 2 dir. Toplam hacim 25 μl ye ddh 2 0 ile tamamlanarak PCR yap ld. PCR-TTGE de yap lan PCR reaksiyonlar için protokol 95 C de 5 dk denatürasyon; bunu izleyen 35 siklusta 94 C de 1 dk, 56 C de 1 dk, 72 C de 1 dk'd r. Son siklus 72 C de 10 dk olarak gerçeklefltirildi. PCR ürünleri %1 lik agaroz jele 5 μl yüklenerek agaroz jel elektroforezinde kontrol edildi. Bu çal flmada gerçeklefltirilen enzimle kesim analizleri için reaksiyon tüpü bafl na 10 ünite BsmAI (Fermentas, Litvanya) restriksiyon endonükleaz enzimi kullan ld. PCR ürünleriyle enzimlerin reaksiyon süreleri 16 saatte, 55 C de (optimum s cakl k de eri) gerçekleflti. PCR ürünleri TTGE elektroforezi yap lmadan önce 95 C de 30 saniye denature edildi ve 45 dakikal k bir periyotta 1.1 C/dk h z nda 45 C ye kadar yavafl yavafl so utuldu. [12] PCR ürünleri eflit hacimde 2X yükleme boyas ile boyanarak %8 lik poliakrilamidli 6 mol/l üre içeren jellere yüklendi. Alt -sekiz saat 130 voltta 1~2 C aras nda de iflen sabit bir s cakl k art fl ile yürütüldü (yaz l m program WinMelt 2.0.13 ten yararlan larak s cakl k aral hesapland ). Gümüfl boyama ile boyanan jellerde bant farkl l gösteren örnekler yeniden PCR ve pürifikasyon sonras well-red ile iflaretli cycle sequencing kitleri (Beckman Coulter, California, ABD) kullan larak dizi analizine sokuldu. Dizi analizi için Beckman Coulter CEQ 2000XL cihaz kullan ld ve sonuçlar Beckman Coulter 4.3.9 yaz l m kullan larak okundu. BULGULAR Yetmifl iflitme engelliden birinde m.1555a>g mutasyonu pozitif bulundu (fiekil 1). Mutasyon tafl yan örnekte agoroz jelde yaln zca mutant DNA ya ait bantlar gözlemlendi i için, bu mitokondriyal genom homoplazmik olarak kabul edildi. Bu olgu 24 yafl nda tüberküloz tan s yla streptomisin kullanmaya bafllam fl; ancak, ilk birkaç dozdan sonra iflitme kayb nedeniyle b rakmak zorunda kalm flt (fiekil 2). Aminoglikozit kullan m öyküsü olmayan ve sensörinöral iflitme kayb olan iki hastada PCR-TTGE 1604bç 1398bç 1113bç 285bç 206bç M U 1 2 3 4 5 6 7 8 9 fiekil 1 - MTRNR1 deki 1555A>G mutasyonunun BsmAI restriksiyon endonükleaz ile gösteren agoroz jel elekroforezi görüntüsü. lk kuyucuktaki örnek marker (ΦX174 HaeIII), ikinci kuyucuktaki örnek BsmAI enzimi ile muamele edilmemifl (Uncut) PCR ürünü (1604 bç), 1, 2 ve 4-9. örnekler m.1555a>g mutasyonunu tafl mayan 1113, 285, 206bç lik üç bant veren bireyleri, 3. örnekte bu mutasyonu tafl yan 1398 ve 206bç lik iki bant veren bireyin PCR ürünü. Pozitif ve negatif kontrol örnekleri bu jelin sa k sm nda kalm fl olup görüntülenmemifltir. 77
yöntemiyle bant de iflikli i saptand. Daha sonra DNA dizi analiziyle bu de iflikli in 750. pozisyonda A>G polimorfizmi oldu u bulundu (fiekil 3). Di er örneklerde MTRNR1 geninde baflka bir de iflikli e rastlanmad. TARTIfiMA Bu araflt rmada m.1555a>g mutasyonu 70 iflitme engelli aras nda bir bireyde (%1.43) bulunmufltur. Araflt rmaya kat lan tek postlingual bafllang çl iflitme kayb olan ve aminoglikozitle do rudan iliflkilendirilebilen kiflide bu mutasyona rastlanmas ilgi çekicidir. Türkiye de böyle bireylerin taranmas halinde büyük olas l kla daha fazla mutasyon tafl y c ya ulafl labilece i düflünülmüfltür. Bu çal flmada mutasyon saptanan kiflinin ailesinde iflitme kay pl baflka birey bulunmamaktad r. Ancak mutasyon mitokondriyal DNA da bulundu u ve anneden kal t ld için bireyin annesi ve kardefllerinde de ayn mutasyonun bulundu u kesindir. m.1555a>g mutasyonunun aminoglikozit kullan m oldu unda 30 yafl nda penetrans n n %97 oldu u, aminoglikozit kullanmaks z n ise %40 oldu u bildirilmifltir. [14] Bu nedenle bu ailede m.1555a>g mutasyonu tafl yanlarda aminoglikozitle karfl laflma olmasa da yafl ilerledikçe iflitme kayb ortaya ç kma riski bulunmaktad r. Ancak bundan çok daha önemlisi bu mutasyonlar tafl - yanlar n aminoglikozitle karfl laflmas mutlaka önlenmelidir. 0 10 20 250 500 Saf ses odyogram (Hz) 1000 2000 4000 8000 Araflt rmam zda m.1555a>g mutasyonu d fl nda iki iflitme engellide m.750a>g polimorfizmi oldu u görülmüfltür. Bu polimorfizm ilk kez 1992 de Brown ve ark. [15] taraf ndan tan mlanm flt r. 12S rrna geninin de aralar nda bulundu u RNA genleri, evrimsel aç dan yüksek derecede korunmufl bölgelerde bulunmaktad r. Fakat, m.750a>g de ifliminin de içinde oldu u nadir görülen 21 polimorfizm, protein kodlamayan genlerde kontrol gruplar nda da tan mlanm flt r. Bu de iflime, önemli polimorfik s kl klar incelenirken farkl etnik kökenli gruplar n kontrol grubunda da rastlanm flt r. [16] Bu yüzden, bu de iflimin bir nötral polimorfizm oldu u ve hastal k yap c bir etkisinin olmad söylenebilir. Bizim m.750a>g buldu umuz olgulardan biri sporadik bir olgudur ve aminoglikozit kullan m öyküsü yoktur. Yine aminoglikozit kullanma öyküsü olmayan di er olgunun aile a ac nda baflka iflitme engelliler olsa da DNA daki de iflimin kal t m iflitme kayb yla birlikte gitmemektedir. Araflt rma sonunda, aminoglikozit ile iliflkili veya iliflkisiz yukar da tan mlananlar d fl nda MTRNR1 de iflikli i bulunamam flt r. Bu durum Türk toplumunda m.1555a>g d fl nda yayg n bir MTRNR1 de iflikli inin bulunmad n düflündürmüfltür. Ancak daha fazla aminoglikozit kullanma öyküsü olan iflitme kay pl bireyin araflt r lmas yla yeni mutasyonlar n bulunabilmesi olas d r. Bu çal flmada aminoglikozit kullan m öyküsü olan bir olguda m.1555a>g de iflimi bulundu undan bu konuda biraz bilgi verilmesinin uygun olaca- n düflünüyoruz. Aminoglikozitler yüksek dozda verildi inde neredeyse tüm memeli türlerinde iflitme kayb ortaya ç karabilmektedir. Ancak k sa süre- flitme seviyesi (db) 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 750 1500 3000 6000 fiekil 2 - m.1555a>g mutasyonu saptanan hastan n 42 yafl nda yap lan saf ses odyogram. fiekil 3 - m.750a>g polimorfizminin dizi analizi görüntüsü. Mutasyon noktas okla iflaretlenmifltir. 78
li ve normal dozda aminoglikozit kullan m ile iflitme kayb geliflebilece i bu antibiyotiklerin insanlarda kullan lmaya bafllanmas ndan k sa bir süre sonra anlafl lm flt r. Bu tür ototoksisiteye genetik bir yatk nl k olabilece i ve bu genetik de iflikli in mitokondriyal DNA içinde olma olas l ilk kez 1989 da ortaya at lm flt r. [17] ki y l sonra Çin in bir bölgesinde 763 iflitme engellinin 167 sinde (%22) aminoglikozit kullan m öyküsü oldu u görülmüfl ve iflitme engelli ailelerde tart flmaya yer b rakmayacak flekilde anneden (mitokondriyal) kal t m oldu u gösterilmifltir. [18] Bu ailelerden üçü ve büyük bir Arap- srail ailesinde mitokondriyal DNA incelendi inde iflitme kayb olan tüm bireylerde 12S rrna (MTRNR1) geninde 1555. pozisyonda adenin nükleotidinin guanine dönüfltü ü bulunmufltur. [3] Aminoglikozitler etkilerini bakterilerdeki küçük ribozomal RNA ya ba lan p protein sentezini de ifltirerek veya durdurarak yaparlar. Mitokondriyal DNA dizisi bakteriyel DNA ya benzerlik göstermektedir. m.1555a>g mutasyonu insan mitokondriyal DNA s nda olufltu u zaman bu benzerlik artmakta ve aminoglikozitler daha kolay ba land klar RNA molekülü üzerinde mitokondriyal protein sentezini azaltmakta veya durdurmaktad r. [19] Bu flekilde ortaya ç kan enerji üretiminde azalma iflitmenin normal fizyolojisinin bozulmas na yol açmakta ve geri dönüflsüz bir hasarla sonuçlanmaktad r. Daha sonraki y llarda yine mitokondriyal MTRNR1 geninde m.1494c>t mutasyonunun Çinli bir ailede aminoglikozit ototoksisitesine yatk nl k yapt gösterilmifltir. [6] Ayn gendeki 961delTinsC (n) ve m.1095t>c mutasyonlar n n da aminoglikozit ototoksisitesiyle ilgili oldu u öne sürülmüfl, ancak henüz ispatlanmam flt r. [4] Ancak her durumda bugüne kadar tan mlanan mitokondriyal mutasyonlar n aminoglikozit ototoksisitesine yatk nl k yapan genetik de iflikliklerin tamam oldu u söylenemez. Aminoglikozit kullan m na ba l iflitme kayb n n en s k görüldü ü ülkelerden olan Çin de yap lan bir araflt rmada mitokondriyal kal t m gösteren ve hepsinde iflitme kayb n n aminoglikozit kullan m yla ilgili oldu u gösterilen 34 ailenin yaln zca 16 s nda bir mitokondriyal mutasyon gösterilebilmifltir. [6] Bu araflt rman n sonunda aminoglikozit ototoksisitesine genetik yatk nl k yapan mitokondriyal m.1555a>g mutasyonunun Türkiye de bulundu u bir kez daha gösterilmifltir. Aminoglikozit kullan lmas gereken bir hastada aile öyküsünde aminoglikozitle iliflkili veya iliflkisiz, do ufltan veya daha sonradan ortaya ç km fl, progresif veya progresif olmayan, her türlü fliddette ve frekansta sensörinöral iflitme kayb olup olmad sorulmal d r. Ancak bu araflt rman n sonucu da göstermektedir ki, bu flekilde al nan öykü negatif bile olsa o bireyde aminoglikozit ototoksisitesine yatk nl k yapan bir DNA de- iflikli i bulunabilir. Aminoglikozit kullanmadan önce bu genetik de iflikliklerin k sa sürede tespiti gündeme gelebilir. Mutasyon bulunmas hastada ve anne taraf ndaki akrabalar nda aminoglikozit kullan m için kesin bir kontrendikasyon oluflturmal d r. Henüz bu tür de iflikliklerin tamam bilinmedi inden mutasyon sonucunun negatif ç kmas di er de ifliklikler konusunda bilgi veremez. Bu nedenlerle aminoglikozit kullan m ndan mümkün oldu unca kaç nmak ve çok zorunlu hallerde iflitmenin çok yak ndan izlenmesi tek seçenek olarak kalmaktad r. Teflekkür Bu araflt rmada M.T. Türkiye Bilimler Akademisi taraf ndan TÜBA-GEB P kapsam nda desteklenmifltir (MT/TUBA-GEBIP/2001-2-19). Bu çal flma Y.E.Ç. nin Ankara Üniversitesi Biyoteknoloji Enstitüsü Yüksek Lisans tezi olarak sunulmufltur. KAYNAKLAR 1. Tekin M, Arnos KS, Pandya A. Advances in hereditary deafness. Lancet 2001;358:1082-90. 2. Smith RJ, Bale JF Jr, White KR. Sensorineural hearing loss in children. Lancet 2005;365:879-90. 3. Prezant TR, Agapian JV, Bohlman MC, Bu X, Oztas S, Qiu WQ, et al. Mitochondrial ribosomal RNA mutation associated with both antibiotic-induced and nonsyndromic deafness. Nat Genet 1993;4:289-94. 4. Tekin M. Aminoglycoside induced deafness. In: Fuchs J, Podda M, editors. Encyclopedia of diagnostic genomics and proteomics. New York: Dekker Publication; 2004. p. 57-61. 5. Casano RA, Johnson DF, Bykhovskaya Y, Torricelli F, Bigozzi M, Fischel-Ghodsian N. Inherited susceptibility to aminoglycoside ototoxicity: genetic heterogeneity and clinical implications. Am J Otolaryngol 1999;20: 151-6. 6. Zhao H, Li R, Wang Q, Yan Q, Deng JH, Han D, et al. Maternally inherited aminoglycoside-induced and nonsyndromic deafness is associated with the novel C1494T mutation in the mitochondrial 12S rrna gene in a large Chinese family. Am J Hum Genet 2004; 74:139-52. 7. Van Camp G, Smith RJ. Maternally inherited hearing impairment. Clin Genet 2000;57:409-14. 8. Tekin M, Duman T, Bogoclu G, Incesulu A, Comak E, Fitoz S, et al. Frequency of mtdna A1555G and A7445G mutations among children with prelingual deafness in Turkey. Eur J Pediatr 2003;162:154-8. 79
9. Duman T, Arican ST, Tokgoz-Yilmaz S, Kupka S, Pandya A, Akar N, et al. Mitochondrial DNA alterations involving position 961 are not sufficient to explain sensorineural hearing loss. Mediterr J Otol 2005;1:110-6. 10. Tekin M, Duman T, Bogoclu G, Incesulu A, Comak E, Ilhan I, et al. Spectrum of GJB2 mutations in Turkey comprises both Caucasian and Oriental variants: roles of parental consanguinity and assortative mating. Hum Mutat 2003;21:552-3. 11. Tekin M, Bogoclu G, Arican ST, Orman MN, Tastan H, Elsobky E, et al. Evidence for single origins of 35delG and dele120 mutations in the GJB2 gene in Anatolia. Clin Genet 2005;67:31-7. 12. Chen TJ, Boles RG, Wong LJ. Detection of mitochondrial DNA mutations by temporal temperature gradient gel electrophoresis. Clin Chem 1999;45(8 Pt 1):1162-7. 13. Wong LJ, Chen TJ, Tan DJ. Detection of mitochondrial DNA mutations using temporal temperature gradient gel electrophoresis. Electrophoresis 2004;25: 2602-10. 14. Estivill X, Govea N, Barcelo E, Badenas C, Romero E, Moral L, et al. Familial progressive sensorineural deafness is mainly due to the mtdna A1555G mutation and is enhanced by treatment of aminoglycosides. Am J Hum Genet 1998;62:27-35. 15. Brown MD, Voljavec AS, Lott MT, Torroni A, Yang CC, Wallace DC. Mitochondrial DNA complex I and III mutations associated with Leber s hereditary optic neuropathy. Genetics 1992;130:163-73. 16. Jun AS, Brown MD, Wallace DC. A mitochondrial DNA mutation at nucleotide pair 14459 of the NADH dehydrogenase subunit 6 gene associated with maternally inherited Leber hereditary optic neuropathy and dystonia. Proc Natl Acad Sci U S A 1994;91:6206-10. 17. Higashi K. Unique inheritance of streptomycin-induced deafness. Clin Genet 1989;35:433-6. 18. Hu DN, Qui WQ, Wu BT, Fang LZ, Zhou F, Gu YP, et al. Genetic aspects of antibiotic induced deafness: mitochondrial inheritance. J Med Genet 1991;28:79-83. 19. Hamasaki K, Rando RR. Specific binding of aminoglycosides to a human rrna construct based on a DNA polymorphism which causes aminoglycoside-induced deafness. Biochemistry 1997;36:12323-8. 80