Kapiler Reaktif REF 5506 KULLANIM AMACI İlk standart tek aşamalı protrombin zamanı testi 1935 yılında Dr. Armand Quick tarafından geliştirilmiştir 1-2. Oral antikoagülan tedavisinin izlenmesi ve indüksiyonu için kullanılır 3,4 ve kronik veya akut karaciğer hastalıklarında karaciğerin protein sentezleyebilmesini değerlendirmek için kullanılabilir. Helena BioSciences Kapiler Reaktif tavşan beyin kökenlidir ancak düşük Uluslararası Hassasiyet İndeksinde (ISI) insan BCTsine benzer. Kapiler Reaktifinin ISI değeri yaklaşık 1.1 dir (manuel kalibrasyon teknikleri kullanılarak) ve WHO uluslararası referans hazırlamaya karşı kalibre edilir 5. Kapiler Reaktif özellikle oral antikoagülan tedavinin izlenmesi için uygundur. Doku tromboplastin, kalsiyum iyonlarının varlığında, koagülasyon ekstrinsik pathway başlatan bir aktivatörüdür. Doku tromboplastin ve kalsiyum iyonlarının karışımı kapiller veya sitratlı kan eklenince, fibrin pıhtılaşmasına neden olan pıhtılaşma mekanizmasını etkinleştirilir. Eğer bir eksiklik ekstrinsik pathway içinde varsa, pıhtı oluşumu için gerekli zaman eksikliğinin şiddetine bağlı olarak uzun süreli olacaktır. UYARILAR VE ÖNLEMLER Sadece in-vitro diagnostik kullanım içindir-yutmayin. Tüm kit bileşenlerini kullanırken eldiven giyin. Risk, güvenlik koşulları ve atım bilgisi için ürün güvenlik kağıdına başvurun. BİLEŞENLER 1. Kapiler Reaktif (10 2.5ml) Her şişe tavşan beyin tromboplastin süspansiyon içerir. Hazırlanışı: Şişe içeriği kullanım sırasında ve öncesinde iyi karıştırılmalıdır. 2. Kalsiyum Klorür (10 2.5ml) Her şişe 0.010M kalsiyum klorür içerir. 3. Diğer Kit Bileşenleri Her kit Kullanma Talimatı ve lota spesifik referans değerleri eki içerir. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ Açılmamış şişeler, şişe veya kit etiketi üzerinde belirtilen koşullar altında saklandığında verilen son kullanım tarihine kadar stabildir. 1. Kapiler Reaktif Açılmamış şişeler: 2...6 C de 1 ay ve 15...30 C de 5 gün stabildir. Çalışma reaktifi (kalsiyum klorür ile karışık) 2...6 C de 10 gün veya 15...30 C de 5 gün boyunca stabildir. DONDURMAYIN. Bozulma belirtileri: Reaktif tavşan beyin dokusunun ince bir süspansiyonudur. Beklenen değerlerin değişimi veya partiküllerinin büyük kümeleri ürünün bozulduğunu gösterebilir. 1
2. Kalsiyum Klorür Açılmamış şişeler: 2...6 C de 1 ay ve 15...30 C de 5 gün stabildir. Bozulma belirtileri: Reaktif berrak, renksiz bir solüsyondur. Beklenen performansda partikül kirliliği, bulanıklılık ya da bir değişim ürünün bozulduğunu gösterebilir. GEREKLİ FAKAT SAĞLANMAYAN ÖĞELER REF 90.200.0001 CoaDATA 501WB Fibrin Timer or any other whole blood coagulometer ÖRNEK ALMA VE HAZIRLAMA Prosedürü boyunca, tüm deney tüpleri, şırıngalar ve pipetler plastik ya da cam silikonize olmalıdır. Venöz kan 9 kısım kan + 1 kısım sodyum sitrat - % 3.2 sodyum sitrat içine alınmalıdır. Kapiler kan uygun derinlikte bir deri ponksiyondan üretilen kanın ilk damlasından alınmalıdır. Venöz kan üzerinde test edilecek örnek 4 saat içinde tamamlanmalıdır ve örnek oda sıcaklığında tutulmalıdır 6. ADIM-ADIM PROSEDÜR Doğru INR raporlama için, kullanılan test sistemi ile reaktifin laboratuar spesifik ISI değeri belirlenmelidir. Helena BioSciences Kalibrant Plazma Set (REF 5519) bu amaç içindir 7-8. Bu her yeni reaktif lot için yapılmalıdır. Helena BioSciences INR Referans Set (REF 5490) laboratuar sıcaklığındaki değişiklikleri ile diğer yerel varyanslardan dolayı yerel sistem ISI kaymalarını kontrol etmek için kullanılmalıdır. CoaDATA 501 WB için çalışma talimatları: 1. Cihaz kullanılmadan önce 37 C ye dengeye getirilmelidir. 2. Uygun pozisyonda örnek kaplarını (karıştırıcı dahil) önceden ısıtın. 3. Reaktif ve kalsiyum klorürü 1 + 1 oranında karıştırın ve cihaz üzerinde reaktif kuyusunu içinde önceden ısıtın. 4. Cihaz çalışma sıcaklığında ısıtıldığında, Esc basın; ekran <1PT-WB> gösterecektir. 5. Enter basın, ekran cuv in gösterecektir. 6. Kanal içine önceden ısıtılmış kaplarını koyun (150μl reaktif içerir) ve Start basın. 7. İnkübasyon için bekleyin ve 1 saniyeye ayarlayın. 8. Go-S komutunda ölçülen kanal içindeki kapa 25μl kan (15μl plazma) ekleyin ve eş zamanlı olarak Start basın. 9. Pıhtı zamanı/inr için bekleyin. 10. Sonuçların kaydedilmesinden sonra kapı alın ve Reset basın. Thrombostat için çalışma talimatları: 1. Cihaz kullanılmadan önce 37 C ye dengeye getirilmelidir. 2. Reaktif ve kalsiyum klorürü 1 + 1 oranında karıştırın ve 5 dakika reaktif için inkübasyon pozisyonunda önceden ısıtın. 3. i) Thrombostat 1 kullanıcıları: Bir kez sıcaklığa ulaştığında Thrombostat bir PT çalışmaya hazırdır. ii) Thrombostat 2 kullanıcıları: 'PT test' seçilene kadar 'Test' basın. 4. Örnek(ler) için inkübasyon pozisyonuna küvet(leri) yerleştirin ve her birine 1 bilye dağıtın. 5. Tam Kan Yöntemi: a. Küvet(ler) içine önceden ısıtılmış Reaktif ve Kalsiyum Klorür (1+1) karışımının dan 150μl pipetleyin. 2 dakika boyunca inkübe edin: i) Thrombostat 1 kullanıcıları: Zamanı başlatmak için 'Reset/Incubation' basın. ii) Thrombostat 2 kullanıcıları: Zamanlayıcı etkinleştirmek için küvetler basın, Thrombostat inkübasyon sonunda bipleyecektir. b. İnkübasyonun ardından ölçülen kanal konumu için küvet (ler) transfer edin. c. i) Thrombostat 1 kullanıcıları: 'Start' basın. 2
ii) Thrombostat 2 kullanıcıları: 'Reset/Start' basın. Cihaz ölçüm başlatmak için aşağı doğru sayacaktır (Thrombostat 2 kullanıcıları: kanal 1). Ölçüme başlamadan önce küvet içine 25μl tam kan pipetleyin. d. Thrombostat 2 kullanıcıları: Çalışmaya başlamak için kanal 2 de ölçüme başlamak için tekrar 'Reset/Start' çift basın. 6. Plazma Yöntemi: a. Küvet(ler) içine 50μl plazma pipetleyin. 2 dakika boyunca inkübe edin: i) Thrombostat 1 kullanıcıları: Zamanı başlatmak için 'Reset/Incubation' basın. ii) Thrombostat 2 kullanıcıları: Zamanlayıcı etkinleştirmek için küvetler basın, Thrombostat inkübasyon sonunda bipleyecektir. b. İnkübasyonun ardından ölçülen kanal konumuna küvet (ler) transfer edin c. i) Thrombostat 1 kullanıcıları: 'Start' basın. ii) Thrombostat 2 kullanıcıları: 'Reset/Start' basın. Cihaz ölçümü başlatmak için aşağı doğru sayacaktır (Thrombostat 2 kullanıcıları: kanal 1). Ölçüme başlamadan önce küvet içine 250μl Reaktif ve Kalsiyum klorür (1+1) karışımı pipetleyin. d. Thrombostat 2 kullanıcıları: Çalışmaya başlamak için kanal 2 de ölçüme başlamak için tekrar 'Reset/Start' çift basın. NOT: Eğer başlatma pipeti kullanılırsa, ölçüm zamanı otomatik olarak 'Start' or 'Reset/Start' basmaya gerek kalmadan adımında başlatılır. 7. Pıhtı zamanı/inr için bekleyin. 8. i) Thrombostat 1 kullanıcıları: Sonuçları kaydedin, küveti alın ve önceki testin sonuçlarını silmek için 'Reset/Incubation' basın. Cihaz sonraki test için hazırdır. ii) Thrombostat 2 kullanıcıları: Sonuçları kaydedin, küveti alın ve önceki testin sonuçlarını silmek için 'Reset/Incubation' basın. Cihaz sonraki test için hazırdır. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Sonuçlar en yakın 0,1 saniye için rapor edilmelidir ve çift çalışmada % 5 içinde karar vermelidir. INR değerleri aşağıdaki formül kullanılarak hesaplanabilir: INR = (PT Zamanı Hasta) / (Ortalama Normal PT Time) ISI % PT değerleri log-log grafik kağıdı üzerinde çizildiğinde noktadan-noktaya birleştirilmiş olan kalibrasyon grafiğinden (% PT ölçülen pıhtı zamanına karşı PT Kalibrasyon Plazma) bulunmalıdır. KALİTE KONTROL Her bir laboratuar bir kalite kontrol programı oluşturmalıdır. Normal ve anormal kontrol plazmalar cihaz yeterliliğini ve işlem performansını sağlamak için hasta numunelerinin her bir lotu öncesi test edilmelidir. Eğer kontroller beklenildiği gibi yapılmazsa, hasta örnekleri geçersiz kabul edilir. Helena BioSciences aşağıdaki kontroller bu ürünle birlikte kullanılmak için sağlanmıştır: REF 5186 / 5499 Norm-Trol 1 REF 5187 Ab-Trol 2 REF 5183 Ab-Trol 3 REFERANS DEĞERLERİ Referans değerleri kullanımda sistemler ve tekniklere bağlı laboratuarlar arasında değişebilir. Bu nedenle her bir laboratuar kendi referans aralıklarını belirlemelidir. Bu, özellikle yerel ISI kalibrasyonu için önemlidir. CoaDATA 501WB kullanarak, 19.5-29.0 saniye arasında değişen normal değerler çeşitlidir. 3
Terapötik Aralıkları Hematoloji 9 için İngiliz Toplumuna çeşitli klinik durumlar için aşağıdaki INR aralıkları öneririz: PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Helena BioSciences veya temsilcilerine bir kılavuz olarak aşağıdaki performans özelliklerini belirlemiştir. Her laboratuarda kendi performans verilerini oluşturmalıdır. Presizyon PT tespitinin hassasiyeti kullanılan yöntem ve tekniğe bağlıdır. Çalışma içi ve çalışma arasındaki presizyonun değerleri şunlardır: Yöntemi Karşılaştırma: Helena Kapileri Reaktif ve diğer üç piyasada bulunan reaktifler kullanılarak belirlenen INR değerlerinin karşılaştırılması aşağıdaki korelasyon denklemleri vermiştir: BIBLIYOGRAFYA 1. Quick, A.J. A Study of the Coagulation Defect in Hemophilia and Jaundice, Am. J. Med. Sci., 1935; 190: 501. 2. Biggs, Rosemary (Ed.), Human Blood Coagulation, Haemostasis and Thrombosis, 2nd Edition, Blackwell Scientific Publications, London, 1976 3. Hirsh, J., Poller, L., Deykin, D., Levine, J. and Dalen, J.E., Optimal Therapeutic Range for Oral Anticoagulants, Chest, 1989, 95: 5S-11S 4. Poller, L. Laboratory Control of Anticoagulant Therapy, Sem. Thromb. Haemostasis, 1986; 12: 13-19. 5. World Health Organisation. Expert Committee on Biological Standards 1984. Technical Series 700:19 6. World Health Organisation. Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. 2002; 99.1, Rev.2. 7. Poller, L., Triplett, D.A., Hirsh, J., Carroll, J. and Clarke, K. The value of plasma calibrants in correcting coagulometer effects on International Normalised Ratios (INR): An international multicentre study Amer. J. Clin. Pathol., 1995,103 : 358-365. 8. Poller, L., Triplett, D.A., Hirsh, J., Carroll, J. and Clarke, K. A comparison of lyophilised artificially depleted plasmas and lyophilised plasmas from warfarin treated patients in 4
correcting for coagulometer effects on International Normalised Ratios Amer. J. Clin. Pathol., 1995, 103 : 366-371. 9. The British Society for Haematology, Guidelines on Oral Anticoagulation: Second Edition, J. Clin. Pathol., 1990; 43 : 177-183. 5