KULLANIM AMACI ELEGANCE FSH ELİZA, insan serum ya da plazmasındaki folikül uyarıcı hormon (FSH) değerini bulmak için in vitro diyagnostik kantitatif ölçümlerde kullanılmak üzere üretilmiştir. ELEGANCE ELEGANCE ELİZA enzim bağlı immuno testtir. Numune antijeni, arasına, antikor mikro kuyucuğa bağlı antikor ve biotinlenmiş antikor reaktifi arasında sandviç haline gelir. Kuyucuklar, bağlanmayan materyaller için yıkanır. Streptavidin peroksidaz (Amplifikasyon reaktifi) eklenir ve çok yerde biotinlenmiş antikora bağlanır. Yıkamadan sonra, substrat solüsyonu her bağlı peroksidazla, numunedeki antijen miktarına doğru orantılı olarak, renk oluşturmak için reaksiyona girer. Oluşan kalibrasyon eğrisinden konsantrasyon hesaplanır. ELEGANCE SAĞLANAN REAKTİFLER, STABİLİTE VE SAKLAMA Kit ambalaj - 96 test. Kit ve tüm bileşenleri, açılmış ya da açılmamış olarak, miadı bitene kadar 2-8 C de saklanmalıdır.. FSH: Kaplı kuyucuklar 96 kuyucuk REF # FSA96 Anti-FSH antikoru ile kaplı kuyucuklarla dolu çerçeve.kullanıma hazırdır. FSH: Antikor Reaktifi 1 şişe REF # FSB96 Bovin serum albümini, immün olmayan hayvan serumu ve mavi boya içeren bufer solüsyonunun içinde, biyotinlenmiş Prolaktin antikoru içerir (5 ml). Sodyum azid, 0.2% w/v ve tiomersal, 0.01% w/v içerir. Kullanıma hazırdır. FSH: Amplifikasyon Reaktifi 1 şişe REF # FSP96 Bovin serum albümini ve leylak rengi boya içeren buffer solüsyonu içinde, streptavidin-peroksidaz (streptavidin S. avidinii den)( 10 ml) içerir. Bronidox L, 0.2% v/v ve tiomersal, 0.02% w/v içerir. Kullanıma hazırdır. Yıkama Konsantresi 1şişe REF # EWC96 50 ml 15 x konsantre yıkama solüsyonu. Thiomersal, 0.09% w/v içerir. Kullanmadan önce dilüe edilmelidir. Substrat Bufer 1 şişe REF # ESB20 Sitrat fosfat bufer içinde üre peroksidaz ( 20 ml). Tiomersal, 0.01% w/v içerir. Substrat Tabletleri 1 şişe REF # EST4 İnaktif maddelerle birlikte, ortho-phenylenediamine (OPD) içeren 4 x 4 mg tabletleridir. FSH: Kalibratörleri 6 şişe REF # EFSS1-6 İnsan serumu içinde 0.5 ml Kalibratör. Sodyum azid, 0.1% w/v. Liofilizedir. KULLANICILAR İÇİN ÖNLEMLER VE UYARILAR Numunelerin ve kitlerin, kullanımlarının, saklanmasının ve berteraf edilmesinin yolu bölgesel ya da ulusal güvenlik prosedürlerine göre olmalıdır. Numuneler ve Kalibratörler Kontrol ve standartlar Hepatit B, C ve HIV -1/2 (AIDS) e karşı test edildi ve güvenilir metotla sonucun negatif olduğu ispatlandı. Yine de tüm numunelerde bulaşıcı hastalık potansiyeli gibi davranılması önerilir. Koruyucular Kit koruyucu olarak, sodyum azid, tiomersal ve Bronidox L içerir.reaktifler toksik koruyucular içerdiğinden, solumaktan, yutmaktan ve deri ile temasından kaçının. Sodyum azid, potansiyel patlayıcı oluşturmak için kurşun ve bakır ile reaksiyona girebilir. Substrat Deri ile temasından sakınınız.
NUMUNE TOPLAMA VE SAKLAMA Numune hazırlamak için özel bir itina gerekmez. Test için uygun bir şekilde serum ya da plazma alınır. Serum tercih edilir, EDTA ya heparin kesin sonucu bozmaz.hemolitik, lipemik ve bulanık numunelerle çalışmayınız. Numuneler 2-8 C de 48 saat stabil kalır. -20 C de ya da altında daha uzun süre saklanır. Numuneler tekrar tekrar çözülüp saklanmamalıdır.çözülen numunelerde dibinde çökme olmuş mu diye kontrol edilip testten önce alt üst edilerek karıştırmalıdır. GEREKLİ OLAN AMA SAĞLANMAYAN MATERYALLER VE EKİPMANLAR * Distile su veya deiyonize su * 1M H 2 SO 4 * Presizyon pipetleri * Çoklu pipet * 1L mezür * emici bez (pamuksuz) * Saat * Vorteks mikser * Mikrotitre pleyt karıştırıcı * Mikrotitre pleyt yıkayıcı * Mikropleyt okuyucu sistem. PROSEDÜR NOTLARI Tüm reaktifleri oda ısısına( 20-25 C)getiriniz ve kullanmadan önce karıştırınız.çift çalışma önerilir.kontaminasyon testin performansının düşmesine sebep olur. Kalibrasyon eğrisi her çalışmadan önce çizilmelidir En yüksek kalibratörün konsantrasyonundan yüksek olduğu sanılan numuneler sıfırlık kalibratör ile dilüe edilip o şekilde test edilir. Testin tüm basamakları sırasıyla yapılmalıdır. Eğer kuyucuklar amplifikasyon reaktifiyle doldurulmazsa, amplifikasyon reaktifi için 15 dk, emici biz havlunun üzerine, kuyucuklar ters çevrilerek bırakılabilir. Kit kutusunun içindeki reaktifler bu kutuya özel lota sahiptir, diğer kutularla karışık kullanılmamalıdır. Fotometre ve tüm pipetler kullanılmadan önce kalibre edilmelidir. Yıkama Etkili yıkama Presizyon için çok gereklidir.kuyucuklar otomatik yıkayıcı kullanarak yıkanır. Bir kuyucuktan diğerine taşmasından sakınınız. Kalite kontrol Kontrol numuneleri çalışmayı doğrulamak için her seferinde çalışılmalıdır.test sonuçları onaylanmadan önce sınırların içinde bulunduğu görülmelidir TEST PROSEDÜRÜ Reaktifleri Hazırlama Yıkama solüsyonu Yıkama konsantresini 1/ 15 oranında dilüe ediniz. Yıkama solüsyonu oda sıcaklığında (20-25 C) 12 hafta stabil kalır. Substrat Solüsyonu Bu solüsyonun kullanım sırası geldiğinde hazırlanması tavsiye edilir.lütfen doğru sayıdaki tableti substrat bufer içine atınız. 5 ml substrat bufer + 1 tablet.tabletler tamamen çözüldüğünde (1-2 dakika) ve hava kabarcığı olmadığından emin olarak şişenin üzerine plastik tıpayı takıp alt üst ederek karıştırın. Güçlü ışıktan sakının.substrat solüsyonu hazırlandıktan 30 dk içinde kullanılmalıdır..
Kalibratörler Liofilize kalibratörleri, şişelerin üzerinde belirtilen miktar kadar deiyonize su ile çözünüz. Sulandırılan kalibratörleri bir yere çözülmeye bırakın(en az 30 dk) ve sonra yavaşça çalkalayınız. Tüm konsantrasyonlar lottan lota değişir kitin içindeki etikette belirtilmiştir.kit çözüldükten sonra kalibratörler -20 C de 4hafta saklanabilir. Protokol: 1. Test sayısı kadar gerekli kuyucuğu çerçeveye yerleştiriniz.kullanılmayan kuyucukları çantasına koyun ve 2-8 C de saklayınız.. 2. 50 µl numune (kalibratör, kontrol, numune) çift olarak uygun kuyucuğa yerleştiriniz. Numuneleme zamanı 20 dk yı geçmemelidir. 3. Her kuyucuğa 50µL FSH Antikor Reaktifi (mavi) pipetleyiniz. 4. Üzerini kapatıp karıştırıcı üzerinde oda sıcaklığında (20-25 C) 30 dk boyunca inkübasyona bırakınız. 5. 250 µl yıkama solüsyonu ile her kuyucuğu 4 defa yıkayınız.son yıkamadan sonra, emici bir bezin üzerine pleyti ters çeviriniz, kuyucularda hiç yıkama solüsyonu kalmamasına dikkat ediniz.kuyucuklarda hiçbir hava kabarcığı olmamasına dikkat ediniz. 6. Her kuyucuğa, 100 µl FSH Amplifikasyon reaktifi (leylak rengi) eklenir. 7. Üzerini kapatınız ve çalkalayıcı üzerinde 10 dakika oda sıcaklığında (20-25 C) inkübe ediniz. 8. İnkübasyondan sonra, yıkama adımını tekrar ediniz 9. Her kuyucuğa 100µL Substrat Solüsyonu ekleyiniz. İnkübasyon adımını substrat eklediğiniz ilk kuyucuğa göre yapınız. 10. Üzerini kapatınız ve sabit bir şekilde 5 dakika oda sıcaklığında (20-25 C) inkübe ediniz 11. 50 µl Stop Solüsyonunun (1M H 2 SO 4 )tüm kuyucuklara, substrat eklediğiniz ilk kuyucuktan başlayarak ilave ediniz. 12. Son nokta okumayı 490 nm de eliza okuyucunun kullanım kılavuzunda tarif edildiği gibi yapınız.bu okuma adımı stop reaktifi eklendikten sonraki 30 dakika içinde yapılmalıdır SONUÇLARIN HESAPLANMASI Hesaplamalar, otomatik data hesaplayıcı yoksa manuel olarak hesaplanır. Her kuyucuğun OD si tespit edilir.log-log grafik kağıdı kullanılarak kalibratör konsantrasyonlarıyla birlikte x ekseni OD lerden y ekseni oluşturularak grafik çizilir.eğri noktadan noktaya ya da, eğri oluşturma modellerinde birisi (örneğin: spline interpolasyonu )kullanılabilir. Numunelerin konsantrasyonları, OD değerleri eğriye girilerek bulunur. Her numunenin değeri miu/l FSH olarak raporlanır.elegance FSH ELIZA 0 150 IU/L aralığında okunur.ama maksimum konsantrasyon kullanılan okuyucunun performans karakterine bağlı olarak rapor edilir. Eğer en yüksek kalibratörün OD değeri fotometre OD değerini aşıyorsa bu kalibratör değeri kalibrasyon eğrisinden çıkarılır. MODEL HESAPLAMALARI Son nokta Data ID Ort OD FSH 0 0.046 2 0.102 5 0.175 15 0.460 50 1.313 150 2.898 Numune 1 0.166 4.7 Numune 2 0.289 9.1 Numune 3 0.891 31.2 KALİBRASYON Bu kit ile sağlanan kalibratörler, IU/L olarak ifade edilip ve WHO 1980 2nd IRP 78/549göre standardize edilmiştir SINIRLAMALAR Serum numunelerinde eğer yüksek hemoliz,lipemi ya da bulanıklık görüntüsü varsa yanlış sonuçlara sebep olabilir.
BEKLENEN DEĞERLER Her laboratuar ilgili numune popülasyonuna göre kendi referans değerini oluşturmalıdır. Aşağıdaki referans değerleri, sadece rehber olması için, sağlıklı kişilerden alınan serum numuneleri ile çalışarak bulunmuştur : n FSH Aralığı Kadın Foliküler 42 3.0-10.0 Midcycle 21 6.0-20.0 Luteal 43 1.0-8.0 Menopoz sonrası 11 > 30.0 Erkek 81 1.0-13.0 PERFORMANS KARAKTERLERİ Intra-test Presizyon Numune n Ortalama ± 2SD %CV 1 16 6.9 ± 0.5 3.4 2 16 6.7 ± 0.5 4.2 3 16 20.3 ± 1.7 4.2 Inter-test Presizyon Numune n * Ortalama ± 2SD %CV 1 35 7.6 ± 1.0 6.7 2 35 10.6 ± 1.7 8.2 3 35 36.7 ± 4.9 6.6 * çift çalışma Özgüllük Analit Testin konsantrasyonu Görünen FSH Sonucu hcg 280000 IU/L algılanamaz TSH 1150 miu/l algılanamaz LH 177 IU/L algılanamaz Kesinlik Düzeltme eksogenus analitin test öncesi ve sonrası eklenmesi ile hesaplandı. Numune FSH FSH % Sapma Bulunan Beklenen 1 8.5 8.0 106.3 2 12.9 12.6 102.4 3 22.4 22.5 99.6 4 31.6 32.5 97.2 Dilüsyon Bir numune sıfırlık kalibratöre kadar dilüe edildi, test edilip sapma hesaplandı. Numune FSH FSH % Sapma Bulunan Beklenen Neat 21.1 1/2 10.7 10.6 100.9 1/4 5.4 5.3 101.9 1/8 2.8 2.6 107.7 Yüksek doz- Hook Etkisi Testin yüksek doz hook etki karakterine göre, 1500 IU/L den büyük numunelerde sapkın sonuç görülebilir.en yüksek belirlenecek değer en yüksek kalibratörden düşük olmalıdır. Yüksek onlalar sıfırlık kalibratör ile dilüe edilmelidir.
Hassasiyet Testin hassasiyeti 0.5 IU/L den azdır. Hassasiyet, üç farklı testte 16 replikasyon ile sıfır kalibratörün ortalama doz cevabı belirlenmesinden bulunan OD ile 2 SD doz cevabının belirlenmesi ile ilgili analitin konsantrasyonu olarak tanımlanmıştır. Etkileşimler Test sonucu,250 mg/dl hemoglobine, 10 mg/dl bilirubine ve 970 mg/dl trigliserite kadar etkilenmez. SİPARİŞ BİLGİSİ ELEGANCE FSH ELİZA Bioclone Australia Pty Limited tarafından üretilir. 71-73 Railway Parade, Marrickville NSW 2204, AUSTRALIA. Telefon +61 (0) 2 9517 1966 Ücretsiz arama 1800 251 138 Fax +61 (0) 2 9517 2990 Email sales@bioclone.com.au Web www.bioclone.com.au TEKNİK SERVİS Tam teknik servise Bioclone on +61 (0) 2 9517 1966 ya da ücretsiz arama hattından 1800 251 138 ulaşabilirsiniz. GARANTİ Üretici, diyagnostik kitin, kullanım prosedürü dışındaki kullanımlar için hiçbir garanti vermez. Diyagnostik kitin amacı dışındaki kullanımlarda, kullanıcı kendi riskini kendisi alır. Üretici, kitin amacı dışında kullanıldığı durumunda da tüm ticari garantiyi reddeder.kitin kullanımında direktiflere göre çalışıldığında oluşan her türlü başarısızlık durumunda kit değişimi sınırlıdır. Bioclone Australia Pty Limited ve onun distribütörleri kitin değişimini ya da alınan kitin para iadesini sınırlandırır. Bioclone Australia Pty Limited, malın zarar görmesinden, üründen kaynaklana kişisel kaza ya da ekonomik kayıptan sorumlu değildir.. BÖLÜM No.: EKBFS Ed. 5 Revizyon tarihi: 1 Haziran 2006