Meme Tümörlerinin Genetiği ve Klinik Önemi

Transkript

1 Meme Tümörlerinin Genetiği ve Klinik Önemi Prof. Dr. Ünal EGELİ Uludağ Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Biyoloji Anabilim Dalı

2 KANSERİN TANIMI Kanser, yapısal düzenlerinde meydana gelen özel değişikliler (transformasyon) sonucu, hücrelerin, organizmanın denetim mekanizmalarına tabi olmadan çoğalarak, bireyin varlığını tehdit eder hale gelmesi olarak tanımlanabilir.

3

4 KANSER GENLERİN HASTALIĞIDIR/ GENETİK BİR HASTALIKTIR

5 KANSERLEŞMEDE 4 TİP GEN SINIFI ETKİLİDİR; Onkogenler Tümör Baskılayıcı Genler DNA Tamir Genleri Mikro RNA genleri

6

7

8

9 MEME KANSERLERİNDE ETKİLİ ONKOGENLER c-erbb-2/neu/her-2 c-myc c-jun c-fos bcl-1 bcl-2 pik3ca EGFR PDGF H-ras ER

10 MEME KANSERLERİNDE ETKİLİ TÜMÖR SÜPRESSÖR GENLER BRCA1/2 PALB2 CHEK2 BRIP1 P53 PTEN NM23-H1 CDH1 STK11 FHIT WWOX/FOR2 Neurobachin(NBEA)

11 BRCA1 GENİ 1994 yılında klonlanmıştır. 24 Eksondan meydana gelen bir gendir. 17 q 21 de lokalize olmuştur. Sıklıkla 11. eksonunda mutasyonlar belirlenmiştir. 10 bin bp. uzunluğundadır. Transkripsiyon regülasyonunda rol oynar. Östrojen ile etkileşim gösterir. Antiproliferasyon ve tümör supressör fonksiyonu vardır. Hücre siklusunu regüle eden bir proteini kodlamaktadır. ATR geni ile birlikte DNA/genom stabilitesi ve DNA Tamirinden sorumludur.

12 BRCA2 GENİ 13 q de lokalizedir yılında klonlanmıştır. 27 eksondan meydana gelir bp. uzunluğundadır a.a. karşılığı vardır. Antiproliferasyon, tümör süpresör ve DNA tamiri özelliği vardır.

13 BRCA1/2 Herediter/Ailesel meme kanseri hastalarında %5-10 BRCA1/2 genlerinde germline mutasyonlar, Erken yaş veya aile hikayesi olmayan meme ve/veya over kanseri hastalarda mutasyon görülme olasılığı BRCA1 geninde %1-7; BRCA2 geninde %1-2 oranındadır. *Larsen ve ark. (2013) PLoS ONE 8(5).

14 NCCN Guidelines Version Meme Kanseri İçin Genetik Danışma Kriterleri BRCA1 ve BRCA2 genlerinin mutasyon analizleri için NCCN Kriterleri: Kanser tanısı almış ise; Ailede meme kanserine yatkınlık genlerinden birinde bilinen bir mutasyon varlığı Erken yaş meme kanseri olması (50 yaş ve altındaki bireyler) Triple negatif (ER-, PR-, HER-2 -) meme kanseri olması (60 yaş ve altı) 1., 2. ve 3. derece akrabalarında herhangi bir yaşta epitelyal over / fallop tüpü / primer peritoneal kanser olan en az 1 kişi olması Erkek meme kanseri olması Herhangi bir yaşta ikinci kez primer meme kanseri (Bilateral meme kanseri olması) Meme ve/veya over kanseri aile hikayesine sahip ise; Ailede meme kanserine yatkınlık genlerinden birinde bilinen bir mutasyon olması Bireyin kendisinin bilateral meme kanseri olması Kendi ailesinde iki veya daha fazla meme kanseri öyküsü olması 1., 2. ve 3. derece akrabalarında herhangi bir yaşta over kanseri veya erkek meme kanseri veya 45 yaş altında meme kanseri öyküsü olması Ailede aynı tarafta 2 veya daha fazla meme kanseri Herhangi bir yaşta meme kanseri ise; 1., 2. ve 3. derece akrabalarında 50 yaş altı meme kanseri öyküsü olması 1., 2. ve 3. derece akrabalarında over kanseri öyküsü olması 1., 2. ve 3. derece akrabalarında herhangi bir yaşta 2 veya daha fazla meme kanseri öyküsü olması 1., 2. ve 3. derece akrabalarında pankreas kanseri öyküsü olması

15 Uludağ Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Biyoloji AD Kanser Genetiği Laboratuvarı

16 MEME/OVER KANSERLİ HASTALARDA VE YAKINLARINDA BRCA1/BRCA2 GEN MUTASYON TESTLERİ NİÇİN GERÇEKLEŞTİRİLMELİ? HASTALARDA TEDAVİNİN DAHA ETKİN YAPILMASI İÇİN YAKINLARDA ERKEN TANI VE DÜZENLİ TAKİP AMACI İLE Patojenik mutasyon belirlenen hastalara bilateral mastektomi işlemi uygulanmaktadır. Bilateral mastektomi uygulanan hastaların %95 i sağlığına kavuşmaktadır. Bu hastaların %100 ü overleri nin alınmasını kabul etmekte ve uygulatmaktadır. Overleri alınan hastaların %100 ünde kanser gelişmemektedir. Mutasyon taşıyan triple negatif meme kanserli ve over kanserli hastalara PARP inhibitörleri uygulanmakta ve bu hastalar tedaviye iyi cevap vermektedir. BRCA1 mutasyonu taşıyan hastalar etoposide, bleomycin ve cisplatin gibi ilaçlara hassas iken paclitaxel ve vinorelbine gibi ilaçlara dirençlidir. Bu nedenle bu hastaların genetik yapısının bilinmesi tedavinin etkinliği ve yan etkileri açısından büyük önem arz etmektedir. BRCA1 ve BRCA2 mutasyonu taşıyan hastalar radyoterapiye daha hassaslardır ve bu hastalara daha düşük doz radyasyon verilerek ve daha kısa süreli bir kür ile tedavi edilebilirler. Böylece bu hastalar gereksiz radyasyon alımından ve radyasyonun yan etkilerinden (sekonder kanserler vs) kurtulabilirler. Mutasyon belirlenmeyen hastaların psikolojik (ankisiyete)durumu düzelmektedir.

17

18

19

20

21

22

23 Erken Yaş ve/veya Ailesel Meme Kanseri Hastalarında Genetik Yatkınlığın Önemi: Uludağ Üniversitesi Tıp Fakültesi Genel Cerrahi-Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı Verileri Gülşah Çecener, Gamze Güney Eskiler, Şehsuvar Gökgöz, Ünal Egeli, Berrin Tunca, İsmet Taşdelen (Sözel bildiri ikincilik ödülü)

24 Erken evre ve/veya ailesel meme kanserli hastalarda BRCA1/2 genlerinde bulunan değişimler (327 hastanın bulguları) Gene Ekzon Nükleotit Kodon Baz değişimi Aminoasit değişimi Mutasyon tipi Etki BIC T G Gys Gly Missense Patojenik A G Gln Arg Missense Patojenik delc Pro Stop Frameshif Fs(Stop) dela Gln Arg Frameshift Fs(Stop) A G Glu Gly Missense Patojenik - BRCA1 BRCA A G Lys Arg Missense Patojenik A G Ser Gly Missense Patojenik InsT Lys Stop Frameshift Fs(Stop) InsC Gln Pro Frameshift Fs(Stop) A C Asn His Missense Patojenik + int TTTT AAAG - Noncoding Patojenik InsC Gln Pro Frameshift Fs(Stop) - 27A InsG Lys Stop Frameshift Fs(Stop) - BRCA insc BRCA inst

25 Değişim bulunan hastaların klinik özellikleri Mutasyon Tanı Grade 1.Derece 2.Derece 3.Derece ER PR HER2 yaşı aile hikayesi aile hikayesi aile hikayesi c G>A c.181 T>G c.1186a>g c.1643delc c.1643delc c.3364dela c.4956 A>G c.5366inst c.5382insc c.9099_9100 insc ??? %13 Grade1, %53 Grade 2, %20 Grade 3 %80 1.derece, %20 2. derece, %13 3. derece aile hikayesi %54 Triple negatif (%28.5 mutasyon +) Toplam= kişi (%10)

26

27

28 Patients Control Cancer type 33 (3 male) - Subtypes BC, OC, BC+OC - Mutation Scanning of BRCA1 gene Exon 11 Mutation Scanning of BRCA2 gene Family History Early onset Other Mutation frequency Exons 10, Reference Balci et al. (1999) 50 (10 male) - BC, OC, BC+OC - Exon 2,5,10,11,13,20, 24 Exon patients 27 patients - BRCA1 4% BRCA2 33% Ozdag et al. (2000) BC, OC, BC+OC - Exon 2, 11, 14, 20 and all exons*(24 patients) Exon 10,11 53 patients 52 patients - BRCA1 15.1% BRCA2 5.8% Yazici et al. (2000) 83 (10 male) - BC,OC, BC+OC - Three Ashkenazi Jewish mutation and Exon 2,11 All coding exons 23 patients 18 patients 10 males BC, 1 patient OC, 1 patient with BC+OC, 30 sporadic BRCA1/2 10% Manguoglu et al. (2003) 68 families - BC,OC, BC+OC, HNPCC - BRCA1 mutation 185delAG - 5 family 47 family 13 family CA, 3 family Li Fraumeni syndrome, 1 family HNPCC. BRCA1/2 14.7% Guran et al. (2005) 87 - BC,OC, BC+OC - All coding & non-coding exons All coding & noncoding exons + + BRCA1/2 10.5% Egeli et al. (2006) 156 (3 male) 50 BC, OC, BC+OC, PCa - All coding & non-coding exons All coding & noncoding exons 65 patients 91 patients - BRCA1/2 ~9% Manguoglu et al. (2010) BC,OC, BC+OC ER +(60.6%) ER (39.3%) PR +(47.8%) PR (52.1%) CerbB2 +(29%) TNBC (28.2%) All coding & non-coding exons All coding & noncoding exons 56 patients 61 patients - BRCA1 14% Cecener et al. (2014)

29 PALB2 PALB2 gen mutasyonlarının 50 yaşa kadar meme kanseri riskini %14, 70 yaşa kadar %35 arttırdığı bilinmektedir. 40 yaşın altında meme kanseri riskini 8 kat, yaş arasında 6-8 kat ve 60 yaştan sonra ise 5 kat arttırdığını belirtilmiştir. *Antoniou (2014) N Engl J Med. 371(6)

30 Anabilim Dalımıza başvuran 229 BRCA1/2 negatif meme kanserli hastada saptanan PALB2 değişimleri ve klinik özellikleri Mutasyon Tanı Grade 1.Derece aile 2.Derece aile 3.Derece aile ER PR HER2 yaşı hikayesi hikayesi hikayesi c.271g>a c.404c>a 32 -??? c.1194g>a c.2014g>c c.2816t>g c. 2981T>A c.2993g>a %12.5 Grade 1, %50 Grade 2, %25 Grade 3 %44 1. derece, %44 2. derece aile hikayesi %19 triple negatif (%17.7 mutasyon +) Toplam= kişi (%7.42)

31

32 CHEK2 Checkpoint kinase 2 (CHEK2, Chk2), DNA tamirinde önemli rol oynayan ve DNA da meydana gelen çift zincir kırıklarında ATM proteini tarafından aktive olan bir serintreonin kinazdır. CHEK2, hem DNA tamirinde BRCA genlerinin fonksiyonunu düzenleyen hem de G2 kontrol noktasında hücre döngüsünün ve apoptozun kontrolünde görev alan tümör süpresör bir gendir. Bu gende meydana gelen mutasyonların meme kanseri riskini kat arttırdığı tahmin edilmektedir. Ayrıca meme kanseri aile hikayesine sahip kadınlarda sahip olmayanlara göre, meme kanserine yakalanma riski yaşam boyunca %25 daha fazladır. CHEK2 de belirlenen mutasyonlar arasında 1100delC nin bu riski 2.7 kat arttırdığı gösterilmiştir. 1100delC mutasyonu taşıyan ve güçlü aile hikayesi olan bireyler aynı mutasyonu taşıyan fakat aile hikayesi olmayan bireylere göre daha fazla risk taşıdığı tespit edilmiştir.

33 Mevcut çalışmada, 95 hastanın CHEK2 geninin 10. ekzonunun mutasyon analizlerinde; diğer toplumlarda sıklıkla belirlenen 1100delC mutasyonu belirlenmedi. Ancak, erken yaş ve aile öyküsüne sahip bir hastada patojenik etkiye sahip heterozigot 1103A>G (p.asp368gly) mutasyonu saptandı.

34 FRAJİL GENLER Common frajil bölgelerde ya da yakınında lokalize olmuşlardır. Evrim boyunca korunmuş genlerdir. Karsinojenlere hassas genlerdir. Oldukça geniş yer kaplayan genlerdir (10 Mb ın üzerinde). Hüre bölünmesinden, kanser gelişiminden, kansere genetik yatkınlıktan,dna stabilitesi ve tamirinden, apoptosisden(fhit,wwox), nörolojik gelişim ve fonksiyonundan (Parkin,RORA,GRID2,Neurobeachin) sorumlu genlerdir.

35 FHIT VE WWOX GENLERİ

36 FHIT GENİNİN ÖZELLİKLERİ 10 Eksondan meydana gelmiştir. Evrim boyunca korunmuştur. Histidin triad gen ailesindedir. Karsinojenlere hassas bir gendir. Tümör gelişiminde, karsinojenlerden etkilenerek Mutasyonlara uğraması rol oynar. Genelde delesyon ile inaktive olur. Tümör hücrelerinde homozigot kayıpları gösterilmiştir.

37 FHIT Geninde Mutasyon Belirlenen Akciğer Kanserleri Baş-boyun Kanserleri Kolorektal Kanserler Gastrik Kanserler Beyin Tümörleri Meme Kanserleri Serviks Kanserleri Ovaryum Kanserleri Böbrek Tümörleri Pankreatik Adenokarsinomalar Lösemiler Kanser Tipleri

38

39

40

41

42 * *

43 MEME KANSERLERİNDE ETKİLİ DNA TAMİR GENLERİ BRCA1/2 CHEK2 Ku70 Ku80 Ligase IV hmlh1 hmsh2 XPA ATM ATR PARP MGMT RAD50 RAD51 RAD52 RAD53 RAD54 ERCC1 XRCC1 XRCC2 XRCC3 XRCC4 APEX1

44 Aziz Sancar Teorisi: Hücre siklusunun ve DNA tamir mekanizmalarının direkt/indirekt olarak sirkadiyen saat genlerinin kontrolünde olduğu, şayet günün hangi saat diliminde kanser hücrelerinin hangi siklusta yoğunlaştığı ve bu zaman diliminde DNA tamir mekanizmalarının yavaş/hızlı çalıştığı belirlenebilirse daha etkin bir kemoterapi tedavisinin (kronokemoterapi) gerçekleştirilebileceği belirtilmektedir.

45 MİKRO RNA GENLERİ Bu genler, bir kısmı onkogen (mir- 17,miR372,miR373), bir kısmı tümör supressör (let-7,mir-15a,mir-16-1) aktivitesi gösteren genlerdir. Yarısından fazlası frajil bölgelerde lokalize olmuşlardır. Translasyonal baskılama yolu ile gen ekspresyonunu kontrol ederler Hücre farklılaşmasının kontrolü, apoptosis,immünite ve splicing işleminden sorumlu genlerdir.

46 MEME KANSERLERİNDE ETKİLİ mirna GENLERİ let-7a mir-335 mir-200c Mir-1266 mir-125b mir-155 mir-143 mir-195 mir-100 mir-10a mir-10b mir-33a mir-22 mir-26 mir-126a mir-210 mir-342

47

48

49

50

51 Periferik Kandan Meme Ca Takibi/ Tümör Markerları

52 Meme Kanserleri Meme tümörlerinde gen ekspresyon profillerinin diagnozda kullanımı: Tümörde değerlendirilen gen ekspresyon profilleri: Diagnoz: BRCA1 Genetik yatkınlık belirteci BRCA2 Genetik yatkınlık belirteci ER Diagnostik CDH1(E-kaderin) EGFR Lobuler meme karsinomu Genetik yatkınlık Triple negatif ve core basal fenotiplerinin ayırımında (tiplendirme)

53 Meme Kanserleri Meme tümörlerinde gen ekspresyon profillerinin prognozda kullanımı: Tümörde değerlendirilen gen ekspresyon profilleri: Her-2/neu/c-erbB2 EGFR CK19 CK20 Survivin BCL2 c-myc MKI67(ki67) PDGF Nm23-H1 Rb-E2F p53 GSTP1 mir-125b mir-155 Prognoz: Kısa survi Kötü prognoz Kötü prognoz Lenf nodu metastazı Lenf nodu metastazı Kötü prognoz Kötü prognoz Kötü prognoz Kısa survi Kötü prognoz Kısa survi Kötü prognoz Kötü prognoz Kötü prognoz Kötü prognoz Kötü prognoz Kötü prognoz Kötü prognoz

54

55 Meme Kanserleri Meme tümörlerinde gen ekspresyon profillerinin ilaç tedavisininde kullanımı: Tümörde değerlendirilen gen ekspresyon profilleri: Tedavide kullanılan ilaç: Tedaviye verilen yanıt: BRCA1 Cisplatin ve benzeri DNA hasarı yapan ilaçlara hassasiyet artar BRCA2 Cisplatin ve benzeri DNA hasarı yapan ilaçlara hassasiyet artar Her-2/neu/c-erbB2 PTEN Herceptin (Trastuzumab) Herceptin (Trastuzumab) Kemoterapi ve Hormonal terapiye yanıt alınamaz İlaç direnci MGMT Alkilleyici ajanlar İlaç direnci let-7 Cyclin D Radyoterapiye yanıt alınamaz Endokrin tedaviye yanıt alınmaz TGFB1 Taxane İlaç direnci ER Bortezomid İlaç tedavisi planlanır

56

57 KATI LİPİD NANOPARTİKÜLLER Taramalı elektron mikroskop (SEM) Cu(II) metal kompleks A B C Floresans mikroskop MCF-7 (Meme kanseri hücresi) Cu(II)-KLN Control Cu(II) complex Cu(II) complex KLN Current drug delivery (Minor revision) Tamoksifen yüklü KLN uygulanmış MCF-7 hücreleri (Meme kanseri hücresi)

58 TIBBİ BİYOLOJİ AD RUTİN/ARAŞTIRMA LABORATUVARLARI *Moleküler Genetik Laboratuvarı *Kanser Genetiği Laboratuvarı *Nörogenetik Laboratuvarı *Gen ekspresyonu Laboratuvarı *İlaç Direnci Analiz Laboratuvarı *Gen Tedavi Laboratuvarı *Doku ve Kök Hücre Kültürü Lab. *Protein Analiz Laboratuvarı

59 Rutin Hasta Hizmetlerimiz

60 Meme Kanserleri Konusundaki Tamamlanan Projelerimiz 1. Meme kanserli hastalar ve yakınlarında BRCA1 ve BRCA2 mutasyonlarının araştırılması. Devlet Planlama Teşkilatı, Proje No: 2000/27 2. Meme kanserli hasta ve yakınlarının periferik kan lenfosit kültürlerinde Aphidicolin indüksiyonunun BRCA1 ve BRCA2 genlerinin exon 11 bölgesine etkisinin ve kansere genetik yatkınlığın araştırılması, Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu Proje No: 2001/4. 3. MCF7 Hücre hattında Vitis Vinifera Çekirdeği ve Olea europaea yaprağının sitotoksik etkilerinin incel enmesi Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu Proje No: 2010/1. 4. Meme Tümörlerinde MikroRNA Gen Ekspresyon Profillerinin Değerlendirilmesi. Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu Proje No: UAP(T)-2011/1 5. Meme Kanserinde HOXB13 ve IL17BR Genlerinin ve Bu Genler ile ilişkili mirna ların Prognostik Ve Prediktif Önemi. Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu Proje No: UAP(T)-2011/6. 6. Viscum album L. Özütünün, İnsan Meme Kanseri Hücre Hattı MCF 7 Üzerine Sitotoksik Etkisinin Araştırılması Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu HDP(T)-2012/5. 7. Meme Kanseri Gelişiminde Risk Faktörü Olarak BRCA1 ve BRCA2 Genlerinin mirna Bağlanma Bölgelerindeki Genetik Varyasyonların Değerlendirilmesi Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu UAP(T)-2012/3.

61 Devam eden projelerimiz 1. Meme Kanseri Gelişiminde FHIT Genini Hedef Alan mirna ların Rollerinin Transfeksiyon Yöntemi ile Araştırılması. Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu, UAP(T)-2011/7. 2. Meme Kanseri Gelişiminde mirna-195 in Diagnostik ve Prognostik Önemi, Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu UAP(T)-2012/4. 3. Meme Kanseri Kök Hücrelerinde Mir-143 ün Rolünün Transfeksiyon Yöntemi İle Araştırılması Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu, KUAP(T)-2013/ Meme Kanserli Hücrelerde Chk2 ve P38 in Fhit inaktivasyonu ile ilişkisinin Araştırılması. Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu, HDP(T)-2013/ Tamoksifen yüklü katı lipid nanopartiküllerin tamoksifene karşı gelişen ilaç dirençliliği mekanizmasına etkisinin araştırılması Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu OUAP(T)-2014/ Erken yaş meme kanserli hastalarda CHEK2 genindeki genetik varyasyonların değerlendirilmesi, Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu KUAP(T)-2015/3. 7. BMN-673 (Talazoparib)'in triple negatif meme kanseri hücrelerinde sitotoksik etkisinin belirlenmesi, Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu, HDP(T)- 2015/2. 8. Meme kanserli HCC-1937 hücre hattında BMN-673'ün apoptotik etkisinin görüntülenmesi, Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu HDP(T)- 2015/4. 9. Taşıyıcı Bir Sistem Olan Katı Lipid Nanopartikül (KLN) lerin Meme Kanseri Gen Tedavisinde Kullanılması, Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu, BUAP(T)-2015/ İleri Evre Meme Kanserinde Mir-216b nin Prognostik Rolünün Transfeksiyon Yöntemi İle Araştırılması Uludağ Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Fonu, KUAP(T) 2015/ İleri Evre Meme Kanseri Kök Hücre Tedavisinde Let-7a Ve mir-335 Temelli Yenilikçi Yaklaşımlar, Tübitak 115Z701.

62 Sonuç Olarak.. Kanserde/meme kanserinde multidisipliner genetik çalışmaların gerçekleştirilmesi: Kanserleşme sürecindeki moleküler yolakların aydınlatılmasına, Kanser tanı ve takibinde kullanılabilecek biyomarkerların belirlenmesine, Hedefe yönelik ilaçların(nanoteknoloji) geliştirilmesine ve uygulanmasına, Gen/Hücre terapi uygulamalarının gerçekleştirilmesine, Tüm bu yazılanların ışığında kanserin en efektif şekilde tedavisine katkı sağlayabilir.

63 TIBBİ BİYOLOJİ ANABİLİM DALI Prof. Dr. ÜNAL EGELİ Prof. Dr. BERRİN TUNCA Prof. Dr. GÜLŞAH ÇEÇENER Dr. Gülçin TEZCAN Arş. Gör. Seçil AK Arş. Gör. Gamze GÜNEY Arş. Gör. Adem ALEMDAR Arş. Gör. Işıl Ezgi ERYILMAZ YL Öğrencisi: Hilal DEMİRCİ YL Öğrencisi: Havva TEZCAN YL Öğrencisi: Beste YURDACAN Bio. Ayten HACIEFENDİ Lab. Ayça Mine SEVİNCER

64 Teşekkürler