Enzygnost HIV Integral 4

Transkript

1 Revizyon çubuğu, önceki versiyonda yapılan güncellemeleri göstermektedir. Kullanım Amacı İnsan serumundaki ve plazmasındaki HIV p24 antijeninin ve tip 1 ve 2 insan immün yetersizlik virüslerine karşı spesifik antikorların (HIV1 alt türü O virüsü de dahil HIV1 ve HIV2) kalitatif tespiti için enzim immün testi. Enzim immün testi ELISA işlemcileri, BEP III Sistemi, BEP 2000 Sistemi, BEP 2000 Advance Sistemi ve Quadriga Sistemleri kullanılarak işlenebilir. Testin otomatik olmayan şekilde çalışılması da mümkündür. İn-vitro tanı amaçlı kullanım içindir. Özet ve Açıklama Edinilmiş immün yetmezlik sendromu (AIDS) ilk önce kendi çağında klinik bir resim olarak 1981 yılında tanındı. İki farklı insan immün yetmezlik virüsü, HIV1 (eşanlamlısı: LAV/HTLV III) ve HIV2, nedensel patojenler olarak düşünülmektedir 1,2,3. HIV'ye karşı antikorların serolojik tespiti, hastalığın daha fazla yayılmasının önlenmesi için özellikle transfüzyon tıbbı alanında önemli bir rol oynamaktadır. Kan transfüzyonu veya kandan türemiş ürünler yoluyla bulaşmasını mümkün olduğunca geniş ölçüde önlemek için, kan bankaları ve plazma ürünü üreticileri rutin olarak HIV1 karşıtı ve HIV2 karşıtı antikorlar bakımından donörlere kan testi yapmaya başladılar yılında, yeni bir HIV alt türü olan, bugünkü testlerle bilinen HIV1 ve HIV2 izolatları ile birlikte spesifik olarak tespit edilen HIV1 alt türü O 4,5,6 türü tanımlandı. HIV enfeksiyonun görülmesi ile ilk serolojik tespit arasındaki diagnostik pencereyi daraltmak için, antikor testini bir HIV p24 antijen testi ile tamamlamak akla uygundu çünkü HIV p24 antijeni, bazı HIV serokonversiyon numunelerinde HIV antikorları tespit edilebilir olmadan önce saptanmıştı 7. HIV antikorlarının ve/veya antijeninin tespit edilmesi kan alınması sırasında kanda infeksiyöz HIV1 veya HIV2 olup olmadığı konusunda kesin bir sonuca varmaya olanak sunmasa da veya negatif bir sonuç HIV1 veya HIV2 varlığını kesinlikle hariç tutmasa da, birleşik antijen/ antikor testi halihazırda yüksek ihtimalle HIV bulaşmış donörleri saptamanın ve kan bağışlamalarını önlemenin en iyi serolojik yolunu sunmaktadır 7,8. Prosedürün Prensipleri Test numunesinde bulunan HIV'ya karşı spesifik antikorlar antijenleri HIV Integral 4 test plakasının reaksiyon kuyucuklarına ve buna göre test numunesindeki HIV p24 antijenini monoklonal HIV p24 karşıtı spesifik antikorlara bağlar. HIV Integral 4 Konjügat 1'in biyotinlenmiş bileşenleri (rekombinant HIV proteinleri veya sentetik peptidler sırasıyla monoklonal anti-hiv p24 karşıtı antikorlar) ikinci adımda bu spesifik antikorlara sırasıyla HIV p24 antijenine (antijen sandviçi sırasıyla antikor sandviçi) bağlanır. Üçüncü adımda, HIV Integral 4 Konjügat 2 (streptavidin/pod) bağlı biotin konjügatları ile reaksiyona girer. HIV Integral 4 Konjügat 2'nin enzim kısmı Kromojen Çalışma Solüsyonunu maviye dönüştürür. Bu reaksiyon Durdurma Solüsyonu POD ilave edilmesi yoluyla sonlandırılır ve rengin sarıya dönüşmesine sebep olur. Renk yoğunluğu, örnekte tespit edilen HIV'ye özgü antikorlarının ve HIV p24 antijeninin konsantrasyonunun immünokimyasal reaktifliğinin bir ölçütüdür. OPKRG03C48 Rev. 05 TR /13

2 Reaktifler Reaktif Tanım Saklama Açıldıktan sonra stabilite c Sulandırmadan sonra stabilite test plağı MTP 96 kuyucuk HIV1 gp41, HIV1 (alt tür O) gp41, HIV2 gp36 ile HIV p24 karşı kaplanmış mikrotitrasyon plakasına karşı iki monoklonal antikor (fare) içeren rekombinant proteinlerinin karışımı (Escherichia coli) ile 2 8 C C kurutucu madde içeren torbada 28 gün 6x8 saat d Numune Tamponu DILUENT 5 ml veya 25 ml BSA ve TRITON X-100 ile fosfat tamponu; pembe renkli a 2 8 C C 28 gün 6x8 saat d Konjügat 1 Tamponu CONJUGATE 1 DILUENT 12,5 ml veya 75 ml T500 ve Casein olan SAPOGENAT TRIS/HCI tamponu a 2 8 C açıldıktan sonra hemen kullanın Konjügat 1 CONJUGATE 1 12,5 ml veya CONJUGATE 1 CONC 10 ml ml (son hacim 75) rekombinant (E. coli) HIV1-, HIV2- ve HIV1- ve HIV1 (alt tür O) sentetik peptidlerin ve HIV p24'e iki monoklonal antikorun (fare) liyofilizatı, biyotinlenmiş; mavi renkli b 2 8 C C 28 gün 6x8 saat d veya 24 saat e Konjügat 2 CONJUGATE 2 12,5 ml veya 75 ml TRIS/HCI tamponunda streptavidin/peroksidaze (POD) konjügat; sarı renkli a 2 8 C C 28 gün 6x8 saat d veya 24 saat e Kontrol, negatif CONTROL 2 ml HIV antijenleri ve HIV1, HIV2 ve HIV1 (alt tür O) antijenlerine karşı antikorlar olmayan stabilize insan serumu; yeşil renkli a 2 8 C C 20 C 28 gün 6x8 saat d 12 hafta Kontrol, pozitif CONTROL + 2 ml HEPES tamponunda HIV1 antijenlerine karşı antikorları olan ısıl işlem görmüş insan serumu; kırmızı renkli a 2 8 C C 20 C 28 gün 6x8 saat d 12 hafta a Koruyucu: fenol ( 1 g/l) b Koruyucu: PROCLIN 300 c her komponenti en geç son kullanma tarihine kadar kullanın d laboratuarda veya sistemler üzerinde açık bekleme süresinin döngü sayısı (ilk defa açılıp döngüler arasında 2 8 C'de kapalı olarak saklandıktan sonra 28 gün içerisinde kullanıldığında) e BEP 2000 Sistemi üzerinde Açılmadan ve 2 ile 8 C sıcaklıkta saklandığı takdirde, test kitinin tüm bileşenleri etiketlerin üzerinde belirtilen tarihe kadar kullanılabilir. 2/ OPKRG03C48 Rev. 05 TR

3 Uyarılar ve Önlemler İn-vitro tanı amaçlı kullanım içindir. Test, toplu örnekler için değil ayrı ayrı örneklerin test edilmesi için geliştirilmiştir. Uyarı! CONJUGATE 1, CONJUGATE 1 CONC H317: Alerjik cilt reaksiyonuna neden olabilir. P261, P272, P280, P363, P302 + P352, P333 + P313, P501: Toz/duman/gaz/buğu/ buhar/serpinti solumaktan kaçının. Kirlenmiş iş kıyafetinin işyeri dışına çıkarılmasına izin verilmemelidir. Koruyucu eldiven/koruyucu giysi/gözlük/maske kullanın. Kontamine olmuş giysiler tekrar giyilmeden yıkanmalıdır. CİLTLE TEMAS ETMESİ HALİNDE: Bol su ve sabunla yıkayın. Ciltte tahriş veya döküntü meydana gelirse: Doktora başvurun/tıbbi yardım alın. İçeriği ve kabı tüm yerel, bölgesel ve ulusal düzenlemelere uygun şekilde bertaraf edin. DİKKAT! POTANSİYEL BİYOLOJİK TEHLİKE Bağışlanan her kan ünitesi veya bağışçı, insan immün yetmezlik virüsü (HIV) 1 ve 2 (HIV Integral 4 Kontrol, pozitif hariç), hepatit B virüsü (HBV) ve hepatit C virüsü (HCV) için test edilerek, Avrupa Birliği In Vitro Direktifi veya FDA onaylı testlere uygunluk sağlayacak şekilde negatif oldukları saptanmıştır. Bilinen hiçbir test bulaşıcı etkenlerin var olmadığı konusunda tam güvence sunamayacağı için, insanlardan elde edilen tüm örneklerin gerekli dikkat ve özen gösterilerek kullanılması gerekmektedir. Güvenlik bilgi formları (MSDS/SDS) adresinden edinilebilir. Dikkat: Bu cihaz hayvan menşeli malzeme içermektedir ve potansiyel bir hastalık taşıyıcı ve bulaştırıcı olarak ele alınmalıdır. Test prosedürünün tamamı boyunca koruyucu gözlüklerin takılması tavsiye edilir. Kullanılan eldivenlerin maruz kalınan materyallere karşı koruma sağlama yeterliliği bilgisi için lütfen üretici talimatlarına uyun. Tehlikeli veya biyolojik olarak kontamine olmuş malzemeleri tesisinizin uygulamalarına göre atın. Tüm malzemeleri güvenli ve kabul edilebilir bir biçimde ve tüm kamu gereklilikleri ile uyumlu olarak atın. Katı bulaşıcı malzemelerin en az 1 saat 121 C'de otoklavlanması tavsiye edilir. Aspire edilen tüm sıvılar seri olarak bağlanmış iki kapta toplanmalıdır. Her iki kap içinde insan patojenlerini etkisizleştirebilecek dezenfektan bulunmalıdır. Üretici tarafından belirtilmiş olan konsantrasyonlara ve reaksiyon sürelerine uyulmalıdır. Tampon/Substrat TMB, Kromojen Çalışma Solüsyonu ve Durdurma Solüsyonu POD un ağır metal iyonları ya da oksidasyon maddeleri ile temasından kaçınılmalıdır (sıvı ile doğrudan temasa geçen metal parçaları bulunan pipetler kullanmayın). Substrat reaksiyon aşamaları, hipoklorit içeren dezenfektanların yakınında gerçekleştirilmemelidir. Kromojen Çalışma Kromojen Solüsyonu test plağına aktarılmadan önce bir anda mavi renge dönerse solüsyon kontamine olmuş demektir; bu durumda temiz bir kap içinde yeni solüsyon hazırlanmalıdır. Yukarıda bahsedilen solüsyonların ciltle temas etmesinden kaçınılmalıdır. Reaktiflerin Hazırlanması Teste başlamadan önce tüm reaktiflerin ve test örneklerin 15 ile 25 C ye gelmesini sağlayın. Bu adımda test plaklarından folyo torbayı çıkartmayın. Reaktifler ile reaktif çalışma solüsyonlarının karıştırılması gerekiyorsa, köpük oluşmasını engelleyin. BEP III Sistem üzerinde çok sayıda örnek dizisiyle çalışırken sıklıkla şırınga değiştirmemek için 10 x 96 (Q) kiti tavsiye edilir. HIV Integral 4 test plakası: Testi işlemeye başlamadan önce gerekmeyen stripleri yuvadan çıkartın ve bunları daha sonra kullanmak üzere ambalajdaki polietilen torbaya koyun. HIV Integral 4 Konjügat 1 Tamponu: kullanıma hazır OPKRG03C48 Rev. 05 TR /13

4 Flakonun altındaki hafif beyazımsı çözelti, kullanmadan önce tamponun kısa çalkalanmasıyla çözülebilir. Çökelti testin performansını etkilemez ve mikrobiyal kontaminasyona neden olmaz. HIV Integral 4 Konjügat 1 (2x96 ve 10x96 Kit): Bir Konjügat 1 Tampon flakonu içeriğinin tamamını Konjügat 1 flakonuna aktarın. Liyofilizatı hafifçe çalkalayarak çözdürün ve 15 ile 25 C'de en az 15 dakika dengeleyin. HIV Integral 4 Konjügat 1 (10x96 (Q) Kit): Liyofilizatı 10 ml Konjügat 1 Tamponu ile hafifçe çalkalayarak sulandırın. Tüm içerikleri Konjüga 1 Tamponu flakonuna yeniden aktarın. Boşalmış Konjügat 1 Konsantrasyonu flakonunu şimdi mavi renkli olan solüsyonunun 10 ml ile durulayın ve hafif bir çalkalamadan sonra bunu Konjügat 1 Tamponu flakonuna aktarın. İyice karıştırın. Kullanmadan önce, Konjügat 1 Çalışma Solüsyonunu en az 15 dakika 15 ile 25 C'de dengeleyin. Sulandırılmış Konjügat 1 Konsantresinin Konjügat 1 Tamponuna eklenmesini tampon flakon etiketi üzerindeki onay kutusunu kullanarak belgelendirin. HIV Integral 4 Konjügat 2: kullanıma hazır HIV Integral 4 Numune Tamponu: kullanıma hazır HIV Integral 4 Kontrol, negatif: kullanıma hazır HIV Integral 4 Kontrol, pozitif: kullanıma hazır Örnek Toplama ve Kullanma Örneğin Alınması Uygun olan örnekler standart laboratuvar teknikleriyle elde edilmiş olan ayrı ayrı örneklerdir (insan serumları veya CPDA'lı/EDTA'lı/heparinize edilmiş/sitratlı plazma). Örneğin Saklanması Prosedür Örnekler 18 ile 25 C sıcaklıkta 3 günden veya 2 ile 8 C sıcaklıkta 8 günden fazla saklanmamalıdır. Örnekler bu süre içinde dondurulmuşsa, tekrarlanan dondurma çözdürme döngülerinden kaçınıldığı takdirde 20 C sıcaklığın altında 2 yıl 6 aya kadar saklanabilir. Sağlanan Materyaller İçerik REF Test Sayısı (Q) Bileşen OPKR MTP 2 5 ml 6 5 ml 2 25 ml DILUENT 2 12,5 ml 10 12,5 ml 2 75 ml CONJUGATE 1 DILUENT 2 12,5 ml 10 12,5 ml CONJUGATE ml f CONJUGATE 1 CONC 2 12,5 ml 10 12,5 ml 2 75 ml CONJUGATE ml 3 2 ml 3 2 ml CONTROL 2 2 ml 3 2 ml 3 2 ml CONTROL polietilen torba f nihai hacim: 75 ml, bkz. Reaktifleri Hazırlama Test plağı, konjugatlar, Konjugat 1 Tamponu, pozitif ve kontrol, pozitif ve kontrol, negatif her ambalajın üzerinde basılı olan ve her biri sırayla ekteki barkod değerler tablosunda belirtilen 6 haneli lot numarası kombinasyonu ile birlikte kullanılmalıdır. 4/ OPKRG03C48 Rev. 05 TR

5 Gerekli olan ancak sağlanmayan materyaller Madde Ek Reaktifler Enzygnost /TMB REF OUVP için Tanım Tampon/Substrat TMB Kromojen TMB Durdurma Solüsyonu POD Yıkama Solüsyonu POD yapışkan folyolar kromojen Çalışma Solüsyonu için boş şişe Kit boyutu ve bileşenleri hakkında ayrıntılı bilgi için ilgili Kullanım Talimatlarına bakın. BEP III Sistemi BEP 2000 / BEP 2000 Advance Sistemi Quadriga Sistemleri Pipetler örnekleri ve kontrolleri manuel olarak dağıttıktan sonra testin otomatik olarak işlenmesi ve değerlendirilmesi testin tam otomatik olarak gerçekleştirilmesi ve değerlendirilmesi için BEP III ile birlikte testin tam otomatik işlenmesi ve değerlendirilmesi için sabit veya değişken hacimli piston tipi pipetler veya hacmi ayarlanabilir hacimli tek veya çok kanallı pipetler İnkübatör Testin otomatik olarak işlenmemesi durumunda ek olarak aşağıdakiler de gereklidir: kaplanan su banyosu (37 ±1 C) veya benzer inkübasyon yöntemi Yıkama cihazı Fotometre mikrotitrasyon plak yıkayıcı mikrotitrasyon plakları için uygun fotometre, ölçüm dalga boyu 450 nm, referans dalga boyu 650 nm (uygun olduğunda 615 nm ile 690 nm arası). SURE ölçümler için dalga boyu 405 nm de gereklidir. Test Testte kullanılan tüm ekipman onaylanmış olmalıdır. Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü 1. Reaktifleri Hazırlama: Bkz. Reaktifleri Hazırlama. 2. Test şeması: Gereken test plağı kuyucuk sayısı, örnek sayısı alınarak ve HIV Integral 4 Kontrol, pozitif ve negatif tayini sayısı (n = 5) eklenerek belirlenir. 3. Tampon ön dağıtımı: Test plakasının gereken her bir kuyucuğuna 25 µl Örnek Tamponu dağıtın. 4. Örnekleri dağıtın: İlk 3 kuyucuğun (A1-C1) her birine 100 µl Kontrol, negatif, sonraki kuyucuğa (D1) 100 µl Kontrol, pozitif ve sonraki kuyucukların her birine 100 µl seyreltilmemiş örnek dağıtın. Serinin sonunda, test plağı sırasına göre, son kuyucuğu 100 µl Kontrol, pozitif ile doldurun. Kuyucuk içeriklerini karıştırmayın! Önemli: Kontrol, pozitifin ilk olarak örnek serilerinin başında ve sonunda verilen her iki pozisyona pipetlenmesine ve sonra örneklerin araya koyulmasına izin verilmez. Alternatif pipetleme şeması: İlk 3 kuyucuğun (A1-C1) her birine 100 µl Kontrol, negatif, sonraki 2 kuyucuğa (D1-E1) 100 µl Kontrol, pozitif ve sonraki kuyucukların her birine 100 µl seyreltilmemiş örnek dağıtın. Kuyucuk içeriklerini karıştırmayın! Her örnek, kendi pipet ucuyla pipetlenmelidir. Örnek Tamponu ve örnek için pipetleme adımları test plağı başına 30 dakika içinde gerçekleştirilmelidir. Pipetleme işleminin tamamlanmasından sonra test plağını folyo ile kapatın ve derhal inkübatöre koyun. Pipetleme kontrolü (isteğe bağlı): OPKRG03C48 Rev. 05 TR /13

6 Kontrollerin ve örneklerin doğru pipetlenmesi görsel olarak (HIV Integral 4 Kontrol, negatif (yeşil), HIV Integral 4 Kontrol, pozitif (kırmızı), örnek ve boş kuyucuklar (temiz)) veya 405 nm'e karşı 650 nm'de fotometrik ölçümle kalitatif olarak (SURE adlı fonksiyon) kontrol edilebilir. Ayrıntılar için bkz. BEP III Sistemi/ BEP 2000 Sistemi/ BEP 2000 Advance Sistemi SURE Teknik Özellikleri belgeleri. 5. Örnekleri inkübe edin: İnkübasyonu 37 ±1 C ısıda 30 ±2 dakika yapın, ardından derhal yıkama adımına geçin. 6. Yıkama: Folyoyu çıkartın ve tüm kuyucukları emdirin. Her kuyucuğa yaklaşık 300 µl seyreltilmiş Yıkama Solüsyonu POD doldurun, plakayı emdirin ve yıkamayı iki kez tekrarlayın. Yıkama işlemi tamamlandıktan sonra, bir sonraki reaktifin dağıtılması adımına geçin (aksi takdirde kuyucuklar kuruyabilir). 7. Konjügat 1'i dağıtın: Her bir kuyucuğa 100 µl Konjügat 1 Çalışma Solüsyonu pipetleyin. Ardından test plağını kullanılmamış bir folyo ile kapatın ve derhal inkübatöre yerleştirin. 8. Konjügat 1'in inkübasyonu: İnkübasyonu 37 ±1 C ısıda 30 ±2 dakika yapın, ardından derhal yıkama adımına geçin. 9. Yıkama: Adım 6 da açıklandığı gibi. 10. Konjügat 2'i dağıtın: Her bir kuyucuğa 100 µl Konjügat 2 pipetleyin. Ardından test plağını kullanılmamış bir folyo ile kapatın ve derhal inkübatöre yerleştirin. 11. Konjügat 2'in inkübasyonu: İnkübasyonu 37 ±1 C ısıda 30 ±2 dakika yapın, ardından derhal yıkama adımına geçin. 12. Yıkama: Folyoyu çıkartın ve tüm kuyucukları emdirin. Her kuyucuğa yaklaşık 300 µl seyreltilmiş Yıkama Solüsyonu POD doldurun, plakayı emdirin ve yıkamayı üç kez tekrarlayın. Yıkama işlemi tamamlandıktan sonra, bir sonraki reaktifin dağıtılması adımına geçin (aksi takdirde kuyucuklar kuruyabilir). 13. Substratın dağıtılması: Her kuyucuğa 75 µl Kromojen Çalışma Solüsyonu pipetleyin ve mikrotitrasyon plağını yeni folyo ile kapatın. 14. Substratın inkübasyonu: Substrat ekleme adımından hemen sonra 18 ile 25 C oda sıcaklığında ışıktan koruyarak 30 ±2 dakika inkübe edin. 15. Reaksiyonun durdurulması: Folyoyu çıkartın. Substratın dağıtılması adımındaki ile aynı zamanlamayla kuyucukların her birine 75 µl Durdurma Solüsyonu POD ilave edin. 16. Ölçüm: Test plağını bir saat içerisinde 450 nm de okuyun. Önerilen referans dalga boyu 650 nm'dir (veya gerekli durumlarda 615 ve 690 nm arasıdır). BEP III Sistemi için prosedür BEP III kullanılırken test plakları örnek dağıtma adımına kadar hazırlanmalıdır ( Otomatik Olmayan Test Prosedürü bölümünde adım 1 ile 4 arası). Kısmen yüklü test plaklarının en az yarı plağa kadar suyla doldurulmuş strip (6 test stribi) ile desteklenmesini sağlayın. Hemen ardından açık test plaklarını, yani folyo ile kapatılmamış olanları BEP III içine yerleştirin. Takip eden tüm işlem adımları analiz cihazı tarafından otomatik olarak gerçekleştirilir (bkz. BEP III Kullanım Kılavuzu). BEP III yazılımındaki inkübasyon süresi ayarları, Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürleri nde tarif edilen sürelerden teknik nedenlerden farklı olabilir (sistem hızı), ancak bunlar BEP III üzerinde Enzygnost için doğrulanmıştır. Tam otomatik Sistemler için prosedür (BEP 2000 ve Quadriga ) Örnek dağıtma adımları ve bunu takip eden işlemler analiz cihazı tarafından tamamen otomatik olarak yapılır (bkz. ilgili Kullanım Kılavuzu). Kısmen yüklü test plaklarının en az yarı plağa kadar suyla doldurulmuş stripler (6 test stribi) ile desteklenmesini sağlayın. Örneklerin BEP 2000 ve Quadriga System ile çalışılması Otomatik Çalışılmayan Test Prosedürü altında verilen bilgiden farklı olsa da ilgili sistem üzerinde Enzygnost için doğrulanmıştır. Kalite Kontrolünün Yapılması Testin değerlendirilmesi için aşağıdaki kriterler karşılanmış olmalıdır: 6/ OPKRG03C48 Rev. 05 TR

7 Sonuçlar 1. HIV Integral 4 Kontrol, negatif: -0,010 A 0, HIV Integral 4 Kontrol, pozitif: 0,900 A 2,700 Eğer üç HIV Integral 4 Kontrol, negatif absorbans değerlerinden biri tanımlamaların dışındaysa bu değer sayılabilir. Tüm HIV Integral 4 Kontrol, pozitif absorbans değerleri ilgili tanımlamalar ile uyumlu olmalıdır. Bu şartlar karşılanmadığı takdirde test değerlendirme için geçerli değildir. Bu durumda BEP III, BEP 2000 ve Quadriga yazılımı geçersiz test sonucu uyarısı verir. Geçersiz işleme yol açan nedenler araştırıldıktan sonra test tekrar edilmelidir. Değerlendirmeler BEP III, BEP 2000 ve Quadriga Sistemleri ile otomatik olarak yapılır. Lütfen ilgili Kullanım Kılavuzuna başvurun. Yazılım desteği olmadan değerlendirme işlemi yapılmaktaysa, aşağıda belirtilen noktalar dikkate alınmalıdır. Cut-off değeri kullanarak değerlendirme Cut-off değerini hesaplamak için, HIV Integral 4 Kontrol, negatif geçerli absorbans değerlerinin ortalamasını kullanın ve 0,180 değerini ekleyin: Ā neg + 0,180 = cut-off değeri Cut-off değerine dayanarak örnekler aşağıda belirtildiği gibi sınıflandırılmıştır: HIV negatif A < cut-off değeri HIV reaktif A cut-off değeri Oran kullanarak değerlendirme Test sonuçlarının yorumlanması A örneği katsayısı ve cut-off değerini hesaplayarak da mümkündür: A örneği oran = cut-off değeri Oran BEP III, BEP 2000 ve Quadriga Sistemleri ile otomatik olarak hesaplanır. Bu yöntem ile farklı çalışmalara ait sonuçlar standart ve birbirleriyle karşılaştırılabilir bir hale getirilebilir. Değere dayanarak örnekler aşağıda belirtildiği gibi sınıflandırılmıştır: HIV negatif oran < 1,0 HIV reaktif oran 1,0 Sonuçların Değerlendirilmesi Reaktif test örnekleri (absorbans cut-off değeri, sırasıyla oran 1) ikinci defa tekrar test edilmelidir. Eğer en az bir tekrar ölçümün absorbans değeri cut-off değeri, sırasıyla oran 1,0 ise bir örnek tekrar reaktif olarak değerlendirilmelidir. Eğer tüm tekrar ölçümlerinin absorbans değeri < cut-off değeri sırasıyla oran < 1,0 ise, örnek test kriterlerine göre HIV negatif olarak kabul edilir. Tüm reaktif numuneler tanınmış doğrulama yöntemleri uyarınca (örn. immunoblot, nükleik asit amplifikasyon testi) netleştirilmelidir. İki hafta sonra bir takip numunesinin analiz edilmesi tavsiye edilmektedir. Sonuçlar her zaman hastanın tıbbi geçmişi, klinik durumu ve diğer bulgularla birlikte yorumlanmalıdır. Sınırlamalar 1. Antikoagülanlar (sitrat, CPDA, EDTA, heparin) test sonuçlarını etkilemez. 2. Hamile kadınlardan alınan örnekler ve aşağıdaki potansiyel etkileşim maddelerini içeren örnekler araştırılmıştır: HBsAg, E. coli antikorları, HBc, HCV, CMV, HTLV-I, HTLV-II, HAV, HHV-8, HSV-2, PCP ile Frengi ve Toksoplazmoz pozitif numuneler. Bu örneklerin test sonuçlarını etkilediği gözlenmemiştir 3. Isıl işlem görmüş numuneler kullanılmamalıdır. OPKRG03C48 Rev. 05 TR /13

8 4. Yetersiz şekilde koagüle olmuş serumlar ve mikrobiyolojik olarak kontamine olmuş örnekler kullanılmamalıdır. Örnekteki herhangi bir katı parçacık bileşeni (örneğin fibrin pıhtıları, eritrositler) test öncesinde örnekten çıkarılmalıdır. 5. Daha önce dondurulmuş numuneler ve pıhtı içerisinde saklanmış numuneler yüksek spesifik olmayan reaktivite gösterebilir. 6. Eritilmiş örnekler kullanılırken materyalin iyice homojen hale geldiğinden emin olun. 7. Reaksiyonun durdurulması sırasında, yüksek düzeyde reaktif örneklerde boya çökelebilir. Bu durum fotometrik değerlendirmeyi etkilemez. 8. Kontrol serumları, doğal insan serumundan hazırlanmıştır. Bu nedenle bulanıklık meydana gelebilir, ancak bunun test sonucu üzerinde hiçbir etkisi tur. 9. Bu ürün ölüm sonrası alınan örneklerle kullanım için amaçlanmamıştır. 10. Hasta numuneleri, immün testlerle reaksiyona girerek hatalı yüksek veya düşük sonuçlar verebilecek heterofilik antikorlar içerebilir. Bu test heterofilik antikorların enterferansını en aza indirmek üzere tasarlanmıştır. Yine de, enterferansın hasta numunelerinden tamamen çıkarılması garanti edilememektedir. 11. Maternal IgG (HIV bulaşmış annelerden) ve aktif enfeksiyonun antikorları birbirinden ayırmak mümkün olmadığından, 2 yaşından küçük çocukların test edilmesi için tavsiye edilmemektedir. 12. Ürün performansını optimize etmek ve ürün özelliklerini karşılamak amacıyla Siemens Healthcare Diagnostics çeşitli analizörlerde bu reaktiflerin kullanımını onaylamıştır. Kullanıcı tarafından belirlenen değişiklikler system performansını ve test sonuçlarını etkileyebileceği için Siemens tarafından desteklenmemektedir. Reaktiflerin Siemens Uygulama Kitapçıklarında veya prospektüslerde belirtilenler dışındaki analizörlerde kullanımı veya kullanım talimatlarında yapılan değişikliklerin geçerliliği kullanıcı tarafından onaylanmalıdır. Performans Özellikleri Özgüllük Özgüllüğü saptamak için 8419 HIV negatif serum, iki değerlendirme tesisinde araştırılmış ve %99,90 (ilk test) ve yeniden test edildikten sonra %99,93 oranında özgüllük elde edilmiştir. Plazmadaki özgüllüğü saptamak için 8306 EDTA plazmaları, iki değerlendirme tesisinde araştırılmış ve %99,95 (ilk test) ve yeniden test edildikten sonra %99,96 oranında özgüllük elde edilmiştir. Özgüllük çalışmalarına ait sonuçlar aşağıdaki tabloda özetlenmiştir. Tesis Örnek Örnek sayısı İlk reaktif numuneleri (%'de özgüllük) Tekrar test reaktif numuneleri (%'de özgüllük) A Kan donörleri serum ,91 99,91 B Kan donörleri serum ,89 99,96 B Kan donörleri EDTA plazma ,89 99,93 C Kan donörleri EDTA plazma ,98 99,98 Hastaneye yatırılan kişiler - İnterferans olasılığı bulunan maddeler içeren örnekler serum ve EDTA plazma serum ve çeşitli plazma türleri ,62 99, ,82 99,82 Örnek popülasyonu, test prosedürü ve diğer faktörler ile ilgili in vitro diagnostik tıbbi cihazlar için Ortak Teknik Tanımlamalar (CTS) ile uyumlu olması gereken farklı değerler elde edilebilir. 8/ OPKRG03C48 Rev. 05 TR

9 Duyarlılık Teşhise yönelik hassasiyet 1504 HIV pozitif örneği kullanılarak saptanmıştır. Tüm örnekler reaktif olarak test edilmiştir. Alt türlere dair ayrıntılı bilgi 1504 HIV pozitif numunenin 690'u için mevcuttur ve aşağıdaki tabloda özetlenmektedir. Örnek popülasyonu Örnek sayısı Reaktif numunelerinin sayısı Grup Alt tür HIV-1 M A B C D F G H 8 8 J 2 2 K 3 3 CRF01_AE CRF02_AG CRF03_AB 3 3 CRF06_cpx 2 2 CRF07_BC 2 2 CRF09_cpx 1 1 CRF13_cpx 1 1 CRF14_BG 1 1 CRF01_AE/CRF15_01B 1 1 G/CRF02_AG 1 1 K/CRF09_cpx 1 1 A/AD (rekombinant) 1 1 A2C (rekombinant) 1 1 B/F (rekombinant) 1 1 HIV-1 O HIV Serokonversiyon örnekleri ile reaktivitenin test edilmesi 59 serokonversiyon paneli kullanılarak araştırılmıştır. 'ün serokonversiyonları saptamada benzer testlerle kıyaslanabilir veya bunlardan daha iyi hassasiyet gösterdiği kanıtlanmıştır. Yine de test geniş bir ölçekte kullanıldığında tekli örneklerin taramadan kaçamayacaklarına dair bir kural oluşturulamaz. Bir çalışma sırasında, HIV 1 p24 Antijeni kullanılarak için 0,29 IU/mL ortalama analitik hassasiyet saptandı (WHO, 1992 tarihli 1. Uluslararası Referans Reaktifi 9 ). Genellikle, 'ün analitik duyarlılığı < 0,50 IU/mL'dir. OPKRG03C48 Rev. 05 TR /13

10 Hassasiyet HIV-1 Antijeni Standardına (BioRad) göre için ortalama analitik hassasiyet 6,10 pg/ml olmuştur. Genellikle, 'ün analitik hassasiyeti < 12 pg/ml'dir. Tekrarlanabilirliği ve cihaz içi varyasyon katsayılarını (CV) saptamak üzere farklı HIV'ye özgü reaktifler ile 10 numune test edilmiştir (5 çalışmada 8 kat eşleme). Hesaplama varyans analizi kullanılarak gerçekleştirilmiştir. BEP III kullanılarak dahili bir çalışmadan elde edilen örnek sonuçlar aşağıda özetlenmiştir. Örnek Durum Ortalama Absorbans (A) Tekrarlanabilirlik CV (%) Cihaz içi CV (%) FP03 FP04 FP05 FP06 FP07 düşük reaktif (cut-off değerine yakın) düşük reaktif (cut-off değerine yakın) düşük reaktif (cut-off değerine yakın) düşük reaktif (cut-off değerine yakın) düşük reaktif (cut-off değerine yakın) 0,329 5,9 14,4 0,392 5,2 5,2 0,327 6,8 8,4 0,385 6,8 13,4 0,389 4,6 4,8 FP08 reaktif 1,387 4,3 7,2 FP09 reaktif 1,757 5,6 5,7 FP10 reaktif 1,458 4,0 4,0 FP11 reaktif 1,685 5,5 8,5 FP12 reaktif 1,487 2,3 3,6 Enterferans Aşağıdaki maddeler belirtilen konsantrasyonlarda numunelerde bulunduğunda test sonuçlarını (HIV negatif numunelerinin hatalı pozitif reaktivitesi, sırasıyla HIV pozitif numunelerinin sinyal azalması) etkilemez. Enterferant Bilirübin Hemoglobin Trigliseritler Romatoid faktörler Biotin HAMA enterferans mg/l 10 g/l 8 g/l IU/mL 32 µg/l 90 µg/l 10/ OPKRG03C48 Rev. 05 TR

11 Numune Hazırlama Hakkında Bilgi Not Performans Özellikleri bölümünde sunulan veriler aşağıdaki şekilde santrifüj uygulanan numunelerden oluşturulmuştur: Zaman (dakika) Santrifüj hızı (x g) Testin belirli performans özellikleri için belirtilen değerler tipik sonuçları gösterir ve özellikleri olarak düşünülmemelidir. Referanslar 1. Barré-Sinoussi F, Chermann JC, Rey F, et al. Isolation of a T-lymphotropic retrovirus from a patient at risk for Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). Science 1983;220: Gallo RC, Salahuddin SZ, Popovic M, et al. Frequent detection and isolation of cytopathic retroviruses (HTLV-III) from patients with AIDS and at risk for AIDS. Science 1984; 224: Clavel F, Guétard D, Brun-Vézinet F, et al. Isolation of a new human retrovirus from West African patients with AIDS. Science 1986;233: De Leys R, Vanderborght B, Vanden Haesevelde M, et al. Isolation and partial characterization of an unusal human immunodeficiency retrovirus from two persons of West-Central African origin. J Virol 1990; 64: Gürtler LG, Hauser PH, Eberle J, et al. A new subtype of human immunodeficiency virus type 1 (MVP-5180) from Cameroon. J Virol 1994; 68: Charneau P, Borman AM, Quillent C, et al. Isolation and envelope sequence of a highly divergent HIV-1 isolate: Definition of a new HIV-1 group. Virology 1994;205: Brust S, Duttmann H, Feldner J, et al. Shortening of the diagnostic window with a new combined HIV p24 antigen and anti-hiv-1/2/o screening test. J Virol Methods 2000; 90: Polywka S, Feldner J, Duttmann H, Laufs R. Diagnostic evaluation of a new combined HIV p24 antigen and anti-hiv 1/2/O screening assay. Clin Lab 2001;47: WHO Expert Committee on Biological Standardization. Forty-third report. Geneva: World Health Organization. Tech Rep Ser 1994;840:7. OPKRG03C48 Rev. 05 TR /13

12 Simgelerin Tanımı Tekrar kullanmayınız YYYY-MM-DD Son kullanma tarihi LOT Lot Numarası REF Katalog Numarası Dikkat, ekteki dokümanlara başvurunuz Üretici EC REP Avrupa Birliği Yetkili Temsilcisi <n> sayıda test için yeterlidir Biyolojik Tehlikeler IVD In Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz Saklama derecesi Kullanım talimatlarına başvurunuz Steril değil CE İşareti CONTENTS İçindekiler Sulandırma hacmi LEVEL Seviye Isı ve güneş ışığından uzak tutun BEP, BEP 2000 Advance, Enzygnost ve Quadriga, Siemens Healthcare Diagnostics firmasının ticari markalarıdır. TRITON, Merck firmasının ticari markasıdır. SAPOGENAT, Clariant firmasının ticari markasıdır. PROCLIN, Rohm and Haas Company Corporation firmasının ticari markasıdır Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH. Tüm hakları saklıdır Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH Emil-von-Behring-Str Marburg/Germany 12/ OPKRG03C48 Rev. 05 TR

13 Tablo 2 Test Prosedürü Reaktiflerin hazırlanması 25 µl/kuyucuk Numune Tamponu dağıtın Transfer: 3 x 100 µl Kontrol, negatif 1 x 100 µl Kontrol, pozitif 100 µl seyreltilmemiş numune 1 x 100 µl Kontrol, pozitif İnkübasyon: 30 ±2 dakika (37 ±1 C) Yıkama 3 x 100 µl Konjugat 1 Çalışma Solüsyonu kısmen doldurulmuş plaklar olması halinde plakları yarım doldurmak için su dolu stripleri ekleyin İnkübasyon: 30 ±2 dakika (37 ±1 C) Yıkama 3 x 100 µl Konjugat 2 BEP 2000/ Quadriga tam otomatik test işleme İnkübasyon: 30 ±2 dakika (37 ±1 C) Yıkama 4 x BEP III otomatik test işleme 75 µl Kromojen Çalışma Solüsyonu İnkübasyon (ışıktan korunarak): 30 ±2 dakika (18 25 C) 75 μl Durdurma Solüsyonu (maksimum 60 dak. sonra) Ölçüm: 450 nm ye karşı 650 nm Test sonucu OPKRG03C48 Rev. 05 TR /13