Kullanım amacı In Vitro Diagnostik Kullanım için testi, IDS-iSYS Multi-Discipline Otomatik Sisteminde insan serum veya plazmada 1,5 dihidroksivitamin D [1,5D] seviyelerinin belirlenmesi için tasarlanmıştır. 1,5-Dihydroxy Vitamin D nin test sonuçları, D vitamini yeterliliğinin değerlendirilmesinde kullanılır. Özet ve Açıklama D vitaminin iki şekli vardır: vitamin D 3 ve vitamin D. Vitamin D 3, cholecalciferol, doğal olarak meydana gelen D vitamini, güneşin ultraviyole radyasyonuna 1-7-dehidrokolesterol maruz kaldıktan sonra cilte üretilir. Vitamin D mayadan ergosterol ultraviyole ışınlama yoluyla üretilir. Her ikiside Vitamin D takviyesi olarak kulanılır. D vitamini bileşiği biyolojik olarak inaktif ama dolaşıma girer ve hastanın D vitamini durumunu belirlemek için kullanılan 5-hidroksi D [5D], karaciğerde hidroksillenir. Böbrekte, 5D, ayrıca biyolojik olarak aktif metaboliti üretmesi için hidroksillenir 1,5D 1 1,5D kalsiyum ve fosfat metabolizmasının önemli regülatörlerden biridir,bağırsak kalsiyum emilimini uyarıcı ve kemik erimesini artırır. 1,5D ayrıca paratiroid hormon (PTH) üretimini engeller, her ikiside paratiroid bezleri üzerine doğrudan eylem yoluyla ve dolaylı olarak serum kalsiyum seviyelerini yükselterek. 1,5D üretimi kendisi paratiroid hormonu (PTH) ile uyarılır, böylece etkin kontrol döngüsü sağlar. Kemikten salgılanan fibroblast büyüme faktörü 3 [FGF-3], böbrek ve ince bağırsak hücreleri tarafından bir sodyumfosfat ortak taşıyıcı özümsemesine ve ayrıca1,5d sentezini bastırılmasına neden olur. Sekonder hiperparatiroidizm olarak, paratiroid bir hastalık dışında paratiroid bezlerinin genişlemiş ve hiperaktif olmasına neden olur. Genellikle sorun olarak böbrek yetmezliğine neden olur, böbrek kandan vücut tarafından üretilen fosfor kalıntılarını temizlemez ve yeterli D vitamini yapmaz, özellikle 1,5D - vitamin D aktif formunu. Fosfor birikmesini, kanda düşük kalsiyum seviyelere yol açar, paratiroid bezlerini uyararak paratiroid hormonu (PTH)üretimini artırır, bezlerinin genişlemesine yol açar. Hastalık ilerledikçe, paratiroid bezleri artık normal kalsiyum ve Vitamin D tepkisini yanıtlamıyor. CKD doğrudan aktif D vitamini tedavisi gerekçesiyle ikincil hiperparatiroidizmin ilerlemesini yavaşlatmaktadır. 'Böbrek Hastalığı Sonuçları Kalite Girişimleri (KDOQI)' ve 'Böbrek Hastalığı olarak klinik uygulama kılavuzları: Geliştirilmiş 'Küresel Öğrenme Çıktıları (KDIGO), CKD hastalarının Aktif D vitamin tedavisi için tavsiye edilir. Metod Tanımlama The kiti IDS-ISYS Sistemi insan serum veya plazmasında 1,5 dihidroksivitamin D immün-içeren 1,5D kantitatif tayini için komple bir test sistemidir. 150 ul lipitlerden arınmış örnek, bir monoklonal anti-1,5d antikoru ihtiva eden bir jel içeren Immünkaosüllere eklenir. Serum içeren İmmünkapsüller, 90 dakika 1,5D nin monoklonal antikor jel arasında bağlantının sağlaması için 90 dakika boyunca döndürülür. Jel potansiyel hata maddelerin ve 1,5D giderilmesi için etanol akıtılarak yıkanır. Yıkantılar daha sonra 40 C'de, hafif bir azot akışı altında buharlaştırılır ve 00 ul test tamponu ile yeniden sulandırılır. Yeniden sulandırılımış immunopurified numuneler IDS-iSYS Sistem üzerine örnek rafa yerleştirilir. Çalışma sırasında sulandırılımış immunopurified numuneler yeniden 10 ul biyotinli koyun anti-1,5d Antikoru ile inkübe edilir 1,5 D-Acridinium Konjugatı, Antikor binding site le rekabet etmek için eklenir. Sonra streptavidin kaplı magnetik partiküller eklenir ve daha sonraki inkübasyon aşamasını takiben parçacıklar, bağlanmamış maddelerin çıkarılması için yıkanır. Trigger Reaktifler eklenmesi ile kemilüminesan reaksiyonu başlatır. Elde edilen ışık sinyali Relative Işık Birimleri (RLU) olarak foto çoğaltıcı ile ölçülür ve numunedeki 1,5D mevcut miktarı ile ters orantılıdır. Uyarılar ve Önlemler kiti sadece in vitro diagnostik kullanım içindir ve insanlar veya hayvanlarda dahili kullanım için değildir. Bu ürün kesinlikle bu nda (IFU) belirtilen talimatlara uygun olarak kullanılmalıdır. Son kullanma tarihi geçmiş kit bileşenlerini kullanmayın ve farklı kit lotlu immunoextraction reaktifleri karıştırmayın. IDS Ltd. herhangi kayıp veya hasar için (tüzük gereği hariç) ve verilen talimatlara uyulmamasından kaynaklı ne olursa olsun sorumlu tutulamaz. DİKKAT: Bu kit hayvan kaynaklı materyal içerir. Kit reaktiflerini bulaşıcı madde geçirme kapasitesine sahipmiş gibi kullanın. Uygun önlemler ve iyi laboratuar uygulamaları kit reaktiflerinin saklanması, kullanılması ve atımında kullanılmalıdır. Kit reaktiflerinin atımı yerel mevzuata uygun olmalıdır. Sodyum Asit Kontroller sodyum asit (NaN3) >0.1% (w/w) (<1%) içerir. CLP kapsamında sınıflandırma: Akut Toks. 4. Aquatic Chronic 3. Tehlike Açıklamaları EUH03 Asitlerle temasında çok toksik gaz çıkarır. H30 Yutulması halinde zararlıdır. H41 Uzun süren etkilerle aquatic yaşam için zararlıdır. Önlem Açıklamaları: P64 Kullandıktan sonra elleriniz iyice yıkayın. P70 Bu ürünü kullanırken, içecek, yiyecek veya sigara kullanmayın. P73 Çevreye bırakmaktan kaçının. P301 +310. Yutulduğunda: İvedilikle ilgili SAĞLIK BİRİMİNE veya doktora başvurun. P330 Ağızınızı çalkalayın. P501 Atıkları Tehlikeli konteyner veya özel atık toplama noktasında bertaraf edin. Bu kit içindeki bazı reaktifler yüksek patlayıcı metal asitleri oluşturmak için kurşun, bakır veya brass tesisatıyla reaksiyona girebilen koruyucu olarak sodyum azid içerir. Atımda büyük hacimlerde su ile yıkayın asit birikmesini önlemek için. Elüsyon Rakttif: Elüsyon reaktif Etanol içerir. CLP kapsamında sınıflandırma: Akut Toks. 4 Aquatic Chronic 3. Flam. Liq. Tehlike Açıklamaları EUH03 EUH03 Asitlerle temasında çok toksik gaz çıkarır. H5 Sıvı ve buhar son derece yanıcı. H30 Yutulması halinde zararlıdır. H41 Uzun süren etkilerle aquatic yaşam için zararlıdır. Önlem Açıklamaları: P43 Statik boşalmaya karşı önlem alın. P64 Kullandıktan sonra elleriniz iyice yıkayın. Sayfa 1/7
P70: Bu ürünü kullanırken, içecek, yiyecek veya sigara kullanmayın. P73 Çevreye bırakmaktan kaçının. P Koruyucu eldiven/koruyucu giysi/göz koruyucu/yüz koruyucusu kullanın. P301 +310. Yutulduğunda: İvedilikle ilgili SAĞLIK BİRİMİNE veya doktora başvurun. P303+361+353: Cilt temasında (veya saç temasında): Derhal tüm bulaşmış olan kıyafetleri çıkarın. Cildinizi su ile yıkayın. P330 Ağızınızı çalkalayın. P370+378: Yangın durumunda: Söndürme için sprey kullanın. P403 Iyi havalandırılan bir yerde saklayın. Kullanım Önlemleri Liyofilize olan kalibratörlerin dışında kit içinde sağlanan reaktifler kullanıma hazırdır. Sulandırma metodolojisi için prosedürün kalibratör kısmına bakın. Sisteme yeni kartuş yüklenmeden önce, tempolu rotasyon hareketi ile içerdiği manyetik parçacıkları karıştırın. Bu nakil ve depolama esnasında yerleşmiş manyetik tanecikleri yeniden süspanse eder. Kartuş reaktiflerin hiçbir köpük oluşumu olmadığından emin olun. Bu meydana gelirse köpüklenme ok olana kadar, kartuşu dik bir pozisyonda karanlıkta - 8 C de saklayın; reaktifler yerleşene kadar 4 gün sürebilir. Reaktiflerin Raf Ömrü ve Saklanması İlk kullanımda önce, kartuş ve kalibratörleri -8 C de karanlıkta dik pozisyonda saklayın. Kartuşu dondurmayın Reaktif raf ömrü Kartuş Kalibratörler -8 C de açılmadan önce Kartuş -8 C de açıldıktan sonra IDS-iSYS * cihaz üzerinde Kalibratörler, sulandırdıktan sonra -8 C de Kalibratörler, sulandırdıktan sonra -0 C de veya Kablibratörler, Donma / çözülme * Sürekli cihaz üzeri stabilite. Örnek Toplama ve Saklama Son kullanma tarihine 56 kadar Gün (8 hafta) 49 Gün (7 hafta) 3 saat 6 saat 8 Gün Testler serum (standart örnek tüpleri veya serum ayırıcı jel içeren tüpler) veya plasma (lityum heparin, sodyum heparin, potasyum EDTA) örnekleri kullanılarak yapılmalıdır. Örnekler toplandıktan sonra mümkün olan en kısa sürede ayrılmalıdır. Örneklerin Depolama stabilitesi Oda sıcaklığı - 8 C -0 C de veya daha düşük Donma / çözülme döngüleri Süre 4 saat 7 Gün.5 Ay Olası buharlaşma etkilerini azaltmak için, sulandırılmış kalibratörler Sistemi yerleştirildikten sonra 3 saat içinde ve sulandırılmış immunopurified örnekler 90 dakika içinde ölçülmelidir. IDS-iSYS 1,5D kiti için aşağıdaki tüp tipleri aşağıdaki korelasyon verdi: Serum Ayırıcı Tüpler: Y = 0.99 x (serum) + 1.54 pg/ml; R = 0.99 Dipotayum EDTA Plazma Tüpler: Y = 1.01 x (serum) + 0.4 pg/ml; R = 0.99 Lityum Heparin Plazma Tüpleri: Y = 1.00 x (serum) + 0.99 pg/ml; R = 0.99 Sodyum Heparin Plazma Tüpleri: Y = 1.00 x (serum) 0.7 pg/ml; R = 0.99 i. Piyasada mevcut bazı örnek toplama tüpleri özel durumlarda test sonuçlarını etkileyebilir. ii. iii. Özellikle birincil tüplerdeki işlem örneklerinde tüp üreticisinin talimatlarının izlenmesi tavsiye edilir. Yukarıda belirtilen numunelerin ' saklama ve stabilite bilgileri laboratuvarlarının ayarları çeşitli kullanım için genel önerilerde bulunmaktadır. Her laboratuvar yerel, eyalet gereklsinlerini takip ederek ve / veya federal düzenlemeleri veya akreditasyon kuruluşlarına yönelerek kendi örnek kullanım ve saklama kosullarını belirlemeli. Uygun uygulamalar hakkında rehberlik için, CLSI GP44-A4, Taşıma ve Ortak Laboratuvar Testleri Kan Örneklerinin İşleme Yöntemleri; onaylı Kılavuza- Dördüncü Bask bakın. Prosedür Malzemeler Immunoextraction Kit sunulmuştur SORB Monoklonal antikor 1.5D ihtiva eden Immünkapsülleri D vitamini bağlayıcı protein inhibitörü, 100 Bağışıklık capsullü süspansiyon içinde katı faz parçacıklarına bağlantılı REAKT. 1 Lipitlerden arındırma Reaktifi, dekstran sülfat ve magnezyum klorür çözeltisi, 1 şise, şişe başına 6 ml. REAKT. Yürütme reaktifi, etanol, şişe, şişe başına 5 ml. TAM P. Kit tamponu, MOPS tampon sığır serumu albümini içerir % 0.01 sodyum asit, 1 şişe, şişe başına ml Reaktif Kartuşu MP Koruyucu olarak sığır serum albümini ve sodyum asit (<% 0,1) ihtiva eden bir fosfat tamponu içinde streptavidin ile kaplanmış manyetik partiküller, 1 kartuş flakon, flakon başına.6 ml. KONJ Konjugat, 1,5D,koruyucu olarak sodyum asit (<% 0.1) ile birlikte bir fosfat tamponu içeren sığır serum albümin, bir akridinyum ester türevi ile etiketlenmiş,1 kartuş flakon, flakon başına 9.6 ml. Ab-BIOT Antikor-Biotin, koruyucu madde olarak% 0.01 sodyum asit ile koyun proteinleri ihtiva eden bir fosfat tamponu içinde biotin ile etiketlenmiş anti-1,5d poliklonal antikor,1 kartuş flakon, flakon başına 13mL. BUFD Yıkama tamponu, PBS asit içinde% 1 özel deterjan, 1 kartuş flakon, flakon başına 35 ml. Kalibratörler KAL A KAL B Sığır albümünü içeren liyofilize MOPS tamponu, 1,5D ve koruyucu olarak sodyum asit (<% 1.0), ye konsantrasyon seviyeleri, 1. ml, Sayfa /7
Mini CD IDS-iSYS 1,5D reaktifler için IFU içerir ve CRY dosyaları. Gerekli ama sağlanmayan materyaller IDS-iSYS Multi-Discipline Otomatik Analizör: IS-310400 IDS-iSYS 1,5 Dihydroxy Vitamin D Kontrol Set: IS-430 DS-iSYS SeyrelticiA IS-10DA IDS-iSYS Küvetleri: IS-CC100 IDS-iSYS Sistem Sıvısı (Syst l): IS-CS100 IDS-iSYS Yıkama Solüsyonu (Wash S): IS-CW100 IDS-iSYS Tetikleyiciler Set IS-CT100 IDS-iSYS Kartuş Kontrol Sistemi (CCS): IS-6010 Tek kullanımlık 1 x 75 mm veya 13 x 75 mm tüpler Tek kullanımlık polipropilen ml, 10.8 mm çap, Konik üssü etekli, vidalı kapaklı mikro tüpler, ve O-ring ile vidalı kapak [Sarstedt 7.664 ve 65,716 veya eşdeğeri.] Dağıtmak için hassas pipetler 150 ul, 00 ul, 1 ml. Multi-tüp vorteks veya eşdeğeri. End-over-end veya rulo mikser. Vakum santrifüj buharlaştrıcı olarak, buharlaşma cihazı veya 40ºC ısıtma bloğu / su banyosu ve azot kaynağı ve manifold veya diğer buharlaştırma ekipmanları. 000 x g ulaşma yeteneği ile soğutmalı santrifüj. Distile ve deionize su. Talep üzerine Mevcut Malzemeler Analiz sertifikası Lipitlerden Arınma Prosedür: 1. Reaktifler kullanmadan önce oda sıcaklığına ulaşmasını sağlayın.. IDS-iSYS 1,5D Kontrol Set (IS-430) kullanın, talimatlara göre hazılayın. 3. Her bir cam / plastik tüpleri, her bir numune / için tek etiketleyin Kontrol Kalibratör/Kontrolleri lipitlerden arındırmayın. 4. 500 μl numune/ Etraction Kontrol uygun etiketlenmiş tüplere pipetleyin. 5. Her tüpe 50 μl lipitlerden arınma reaktifinden ekleyin. Tüm tüpleri vorteksleyin. 6. Tüm tüpleri 15 dakika 000x g santifüjleyin. Lipitlerden arınış örnekleri işlerken topağı zedelemeyin. Eğer topağa zarar verilmiş ise veya numune bulanıklaşmıs ise santifüj işlemini tekrarlayın. Alternatif Numune Hazırlama Mevcut örnek hacmi 500 ul daha az olduğu zaman. 1. Konik plastik tüpler veya mikro tüpler, her bir örnek için etiketleyin.. Uygun etiketlenmiş tüplere numune( ie.g. 300 μl) ilave edin. 3. Her tüpe lipitlerden arınma reaktifi (örneğin 30 ul) 0,1 x numune hacmi ekleyin. Bütün tüpleri vorteksleyin. 4. Tüm tüpleri 15 dakika 000x g santifüjleyin. Immün Prosedür 1. Her numune / Kontrol için etiketli Immünkapsülleri. Kalibratör/Kontrolleri lipitlerden arındırmayın. Sızıntı veya yanlış hacmi belirtileri gösteren eğer bir Imünkapsülü mevcut ise SAKIN KULLANMAYIN.. Immünkapsillerini vorteksleyin. Katı fazin yerleşmesine izin verin. Immünkapsülleri 3-5 dakika verilen karton dolguların içinde dik tutun. 3. Her Immünkapsüllerin vidalı kapağını çıkarın. Her Immünkapsüllere 150 μl lipitlerden arınmış numune / Kontrolü ilave edin. Güvenli bir şekilde kapaklarını yerleştirin. 4. Immünkapsülleri karton dolgulara yerleştirin, 90 dakika oda sıcaklığında (18-5 C) end- over end'de 5-0 devirde/dak. döndürün. 5. Jel'in yerleşmesi için Immünkapsülleri 3-5 dakika dik tutun. a. Vidalı kapakları yapışan jel çıkarmak için hafifçe vurun. b. Jel'i 1- dakika süreyle oturmaya bırakın. 6. Vidalı kapağını çıkarın; Her Immünkapsüllere gelen stoper ( bükmeden) kırın. a. Her Immünkapsülleri bir plastik / cam tüp içine yerleştirin. b. Yaklaşık 1 dakika boyunca düşük hızda (500-1000 x g) 7. Her Immünkapsüllere 500 μl distile veya deionize su ilave edin. Immünkapsüllerin dışına sıçramayacak şekilde katı fazı dikkatlice ekleyin. a. Yaklaşık 1 dakika boyunca düşük hızda (500-1000 x g) b. Yukarıdaki adımı tekrarlayın, bir başka iki () defa 3 yıkama döngüleri toplam. 8. Her Immünkapsül için ml'lik polipropilen konik kapaklı mikrotüpleri, vidalı kapak mikro tüpler, etiketleyin. Immünkapsülleri ayrılan etiketli mikro tüplere aktarın. 9. Tüm Immünkapsüllere 150 ul yürütme reaktifi ekleyin. Reaktifleri emmesi için 1 - dakika bekletin. a. Düşük devirde (500-1000 x g) yaklaşık 1 dakika santrifüj edin, yürütmeyi toplamak için. b. Yukarıdaki adım iki kez daha tekrarlayın. Toplanan toplam yürütme hacmi her numune / Kontrolü için 450 ul. 10. Immünkapsülleri atın. 40 C'ye ayarlanmış bir ısıtma bloğu ya da su banyosu içine mikro tüpler yerleştirin. 11. Azot gazı, yaklaşık olarak hafif bir akış altında -4 psi yürütmeleri buharlaştınn. Yürütmelerin sıçramasını önleyin.. Buharlaşma yaklaşık 45 dakika sürmelidir. Yürütmeler tamamen kuru olmalıdır. Alternatif Buharlaşma Cihazları Bu tür bir vakum santrifüj lü bir buharlaşmada gbi başka buharlaşma ekipman kullanımı için kabul edilebilir Adım 11. Laboratuvar kendi ekipman için en iyi ayarları sağlamak için prosedürü doğrulaması gerekir. 1. Her tüpe, 00 ul test tamponu ekleyin. Artıkları çözmek için en az 5 saniye vorteksleyin.. İmmünpurifiye örnekleri / Kontrolleri artık tahlil için hazır. 13. IDS-iSYS System üzerine immünpurifiye numuneleri/ Kontrolleri yükleyin.. Buharlaşma olasılığını azaltmak için 90 dakika içinde IDS- ISYS Sistemi tarafından yüklenmeyen ve ölçülmeyen Immünpurifiye örnekleri / Kontrolleri Cap lere. Immünpurifiye Örnekleri Saklama ve Stabilite Immünpurifiye numuneler IDS-iSYS System üzerine sulandırıldıktan sonra 90 dakika içersinde yüklenmeli ve ölçülmelidir. Aksi halde, numuneler mikrotüplerde ve dik bir pozisyonda saklanmalı. Immünpurifiye numuneler Sistem üzerine yüklemeden önce oda sıcaklığında olduğundan emin olun. Sayfa 3/7
Immünpurifiye Numuneler Saklama IDS-iSYS * cihaz üzerinde - 8 C -0 C de veya daha düşük Donma / çözülme döngüleri * Sürekli cihaz üzeri stabilite. Test Prosedürü Sulandı rma 4 saat 1 gün Sulandırma sonrası 90 dakika Gün Gün IDS-iSYS Multi-Discipline Otomatik Analizör: IDS-iSYS Systemin otomatik validasyon sonuçları devre dışı bırakılmalıdır. Örnek tanımlaması (ID) Immünpurifiye olmamış numunelerde 1,5D ölçme potansiyelini azaltmak için, laboratuvar 1,5D testleri için benzersiz bir örnek kimliği atama düşünebilir. Reaktif Kartuşu Kartuştaki reaktifler kullanıma hazırdır. Sisteme yeni kartuş yüklenmeden önce, tempolu rotasyon hareketi ile içerdiği manyetik parçacıkları karıştırın. Kartuş reaktiflerin hiçbir köpük oluşumu olmadığından emin olun. Bu meydana gelirse köpüklenme ok olana kadar, kartuşu dik bir pozisyonda karanlıkta - 8 C de saklayın; reaktifler yerleşene kadar 4 gün sürebilir. Kartuş reaktif tepsisine yüklendiğinde barkod okunur. Eğer etiket analizör barkod okuyucusu tarafından okunamıyorsa, barkod verilerinin girmek için manuel prosedür mevcuttur (IDS-ISYS kullanım kılavuzuna bkz.). Kartuş reaktif tepsisine bir zamanlar girdiyse, sistem otomatik olarak homojenliğini korumak için manyetik parçacıkların karıştırılmasını gerçekleştirir. Kartuş tahlil başlamadan önce en az 40 dakika boyunca reaktif tepsisinde yüklü olmalıdır. Kartuş reaktif tepsisinden çıkartılırsa kartuşu -8 C de dik olarak karanlıkta saklayın. Kalibratörler 1,5D kalibratörleri liyofilizedir. Kullanmadan önce sulandırın. Her düzeyde bir şişeye 1. ml distile su veya deiyonize su ekleyin Stopper geri takın. Sulandırılması için 10 dakika bekletin. Kalibratörleri -3 saniye vorteksleyin, köpük oluşumunu önleyin. ml polipropilen konik taban mikrotüpü etekli yaklaşık 500 μl (her tekrar 10 μl) kalibratör pipetle, sulandırdıktan sonra 15 dakika içinde cihazın üzerine yerleştirin. IDSiSYS Kullanıcı Kılavuzu talimatlarına göre devam edin. Eğer Kalibratörler birden fazla kullanılacak ise, orijinal şişe içinde sulandırıldıktan sonra 15 dakika içinde -0 C veya altında bir sıcaklıkta saklanmalıdır. Dondurulmuş kalibratör şişeleri yeniden kullanılacak ise, kullanmadan önce oda ısısına getirin, -3 saniye vorteksleyin, köpük oluşumundan sakının. Kalibratörlerin, ml polipropilen konik mikrotüplerin içine yaklaşık 500 ul kalibratör pipetlenmesinden önce, oda sıcaklığında olduğundan emin olun ve cihaza yerleştirin. Çözülmüş kalibratörler oda sıcaklığına ulaştıktan sonra 15 dakika içinde Sistem üzerine yerleştirilmelidir. i. Kullanımdan sonra örnek cup içindeki materyali atın. ii. Kalibratör şişesine materyali GERİ KOYMAYIN. iii. Kalibratörleri immünpurifiye etmeyin. iv. Kullanılmayan kalibratörleri kendi orijinal şişelerinde -0 C veya daha düşükte saklayın. v. Çözülmüş Kalibratörleri -3 saniye vorteksleyin, köpük oluşumunu önleyin. Sistem Kalibrasyon Master Kalibrasyon eğrisini oluşturmak için iki 1.5 D kalibratör gereklidir. Bu kalibratörler kit ile temin edilir; başka lota sahip kalibratörler kullanılmamalıdır. IDS-iSYS 1,5D Kontrol Set'in (IS-430) tüm kontrol seviyeleri, Kalibrasyon Master eğrisi ayarı yapmak için aynı anda iki nüsha halinde ölçülmesi gerekir. Cihaz üzerindeki reaktiflerin Master kalibrasyon eğrisi için Kalibratör A ve B kullanın. Reaktif tepsisinde 1,5D kartuşun varlığını ve veritabanı kartuş ana eğrisinin varlığını kontrol edin. Kalibratörlerin lotu için veri analizörde mevcut değilse, kalibratörle sağlanan mini CD kullanarak veriyi yükleyin. IDS-iSYS Kullanıcı Kılavuzuna göre IDS-iSYS Analizöründe immunoassay kalibrasyonu başlatın. Kalibrasyon, üçlü kopya halinde yapılır. Bir kopya kalibrasyon gereksinimlerini karşılamak için uzaklaştırılabilir. Yukarıda belirtildiği gibi kontrollerin de çalışılması gerektiğini lütfen unutmayın. Kalibrasyon pencerelerinde görüntülenen kalibrasyon durumuna göre kalibrasyonu doğrulayın ve onaylayın ve kullanımdan sonra örnek tepsisinden kalibratörü atın. Kalibrasyon Halen, hiçbir sertifikalı standart referans maddesi veya 1,5- dihidroksivitamin D için kararlaştırılmış bir referans ölçüm metodu vardır IDS-iSYS 1,5D testi referans standartlarına karşı standardize edilmiştir. Kalibrasyon Sıklığı Yeni bir kalibrasyon gereklidir: Her seferinde yeni kartuş lot sisteme yüklenir. Tetikleyici veya küvetlerin her yeni lotu kullanıldığında. Kontrol değerleri belirtilen aralıklar içine düşmediğinde. 1 günlük kalibrasyon aralığı dolduğunda. Servis sonrasında. Kalibrasyon doğrulama otomatiktir ve IDS-iSYS Analizör tarafından yönetilir. IDS-iSYS Sistem Sıvısı: Kalite Kontrol IDS-iSYS 1,5 Dihydroxy Vitamin D Kontrol Set (IS-430) kalite kontrolü için gereklidir. Tüm Test Kontrol seviyeleri Sistem üzerine immünpurifiye edilmemiş numuneleri / Kontrolleri yüklenmeden önce ölçülmelidir. Her ikisi, kullanım ve her Kalibrasyon sırasında, Sistem ve reaktif kartuşunun bütünlüğünü sağlamak için yapılır. Örnek sonuçlarının geçerliliğini doğrulamak için, her düzeyde immünpurifiye kontrolleri,hasta numuneleri ile aynı zamanda ölçülmüş olmalıdır. Immünpurifiye ekstraksiyon kontrollerin tüm düzeyleri her hasta örneklerini içeren çalışmada ya da yerel, eyalet ve / veya federal düzenlemelere veya akreditasyon gerekliliklerine ve laboratuar kalite prosedürüne göre ölçülmelidir. Immünpurifiye ekstraksiyon kontrolleri IDS-isys Kullanıcı Kılavuzunda verilen talimatlara göre diğer kontrol malzemelerine benzer bir şekilde tespiti zorunlu. Hazırlanması ve taşıma işlemleri için Kullanım I IDS-iSYS 1,5D Kontrol Seti (IS-430) Talimatına bakın Örnek 1,5D düzeylerinin belirlenmesi IDS-iSYS Kullanıcı Kılavuzu talimatlarına göre devam edin. Sonuçların Hesaplanması Her numunenin 1,5D konsantrasyonu otomatik olarak hesaplanır. Konsantrasyonları görüntüleme (ekran veya basılı) kullanıcı isteği üzerine elde edilir. Sonuçları SI birimlerine dönüştürmek için: pmol / L = pg / ml x.4 Sayfa 4/7
IDS-iSYS 1,5D, 1,5D konsantrasyonlarını hesaplamak için 4 parametreli bir lojistik eğri (4 PL) kullanır. Numune Sonuçların Doğrulaması Immüno Kontrol değerleri tanımlanan aralıklar dahilinde değilse, numune sonuçları geçersizdir Bu durumda, numuneyi lipitlerden arınmayı ve immünolojik saflaştırmayı tekrarlayın, ve prosedüre kullanarak 1,5D düzeylerinin belirlenmesi öncesinde ekstraksiyonu kontrol edin. Performans Verisi Temsili performans verileri gösterilmektedir. Her bir laboratuvarlarda elde edilen sonuçlar değişiklik gösterebilir. Duyarlılık Blank sınırı (LoB), tespit sınırı (LoD) ve kantitasyon sınırı (LoQ) 60 blank ve 1 düşük seviyeli örnek kullanılarak CLSI EP17, Tespit Sınırları ve Kantitasyon Sınırları Belirlenmesi için Protokoller kaynaklı rehberlik ile belirlendi. LOQ konsantrasyonu % 0 CV elde ederek olarak tanımlandı. Ölçüm Aralığı (Raporlanabilir aralık) Bu testin raporlanabilir aralığı 7.5 10.0 pg/ml (18.0 504.0 pmol/l)dır. 7,5 pg/ml (18.0 pmol/l) altında okunan herhangi değer < 7,5 pg/ml ( < 18.0 pmol/l ) olarak raporlanmalıdır. En yüksek raporlanabilir değer, seyreltme olmadan, 10.0 pg / ml (504,0 pmol/l). Kesinlik LoB LoD LoQ.8 pg/ml 5.5 pg/ml 7.5 pg/ml 6,7 pmol/l 13, pmol/l 18,0 pmol/l (pmol/l) Numune Sulandırma Sonuçlar 10 pg / ml (504,0 pmol / L) aştığı zaman örnekleri seyreltmek için IDS-isys Seyreltici A kullanın. Hazırlama ve kullanım prosedürleri için IDS-iSYS Diluent A (IS-10DA) Kullanım Talimatına bakın. Kullanım Sınırlamaları 1. Herhangi bir teşhis durumda, sonuçlar hastanın klinik ve doktorun verdiği diğer bilgilerle birlikte yorumlanması gerekir.. Bu testin performans özellikleri pediatrik popülasyonda belirtilmemiştir. 3. Hemolizli numuneleri bu testte kullanılmamalıdır. 4. Aşağıdaki maddeler, aşağıdaki tabloda verilen konsantrasyonlar belirtilen eşiğin altında olduğunda IDS-iSYS Intakt PINP Testinde müdahale etmez. Olası Müdahale edici Madde Trigliserid Haemoglobin Bilirubin Albumin Kırmızı kan Hücreleri Kolesterol Biotin HAMA Romatoid Faktör Sınır Konsantrasyonu 1000 mg/dl 00 mg/dl 0 mg/dl 9,1 g/dl 0.4% 300 mg/dl 300 nm 1000 ng/ml 079 IU/ml. Kesinlik, CLSI EP-5A, Kantitatif Ölçüm Metodlarının Kesinlik Performansının Değerlendirilmesi dayalı değiştirilmiş bir protokole uygun olarak değerlendirildi. Serum numuneleri ve kit kontroller (iki Deneyi Kontroller ve iki kontrol) bir Reaktif lotu kullanarak 0 gün süre ile günde iki defa, iki kopya halinde analiz edilmiştir. Numune ID Numune 1 Numune Numune 3 Numune 4 Test CTL1 Test CTL CTL3 CTL4 Numune ID Numune 1 Numune Numune 3 Numune 4 Test CTL1 Test CTL CTL3 CTL4 Ortala ma (ng/ml) 17,0 60,9 17,8 147,9 37, 98,6 44,9 106,4 Ortala ma (pmol/l) 40,8 146,1 306,6 355,0 89, 36,6 107,7 55,4 n 76 n 76 Çalışma- Topla SD CV% SD m CV%,1 4, 6,5 6,,4 3,9 3,3 5,9 1.% 6.9% 5.1% 4.% 6.3% 3.9% 7.4% 5.5% 3,1 6,6 13,6 16,3 3,3 7,1 5,3 10,9 18.0% 10.8% 10.6% 11.0% 8.8% 7.% 11.9% 10.% Çalışma- Topla SD CV% SD m CV% 5,0 10,1 15,7 15,0 5,7 9,3 8,0 14,1 1.% 6.9% 5.1% 4.% 6.3% 3.9% 7.4% 5.5% 6.6 8 pmol/l (n = 119) 7,3 15,9 3,6 39,1 7,8 17,1 1,8 6,1 18.0% 10.8% 10.6% 11.0% 8.8% 7.% 11.9% 10.% Beklenen Değerler 1,5 dihydroxy vitamin D değerleri, bilinen sağlıklı ve D vitamini yeterli yetişkin ABD'den Kafkasyalılar IDS-iSYS 1,5D testi kullanılarak belirlendi. Her laboratuvar yerel popülasyonu için aralıkları belirlemelidir. Aşağıdaki aralık sadece bilgi için sağlanır. Aşağıdaki gruplar için 95% referans aralığı NCCLS kılavuzu C8-A, Klinik Laboratuvarda Referans Aralıklarının Belirlenmesi ve Tanımlanması izleyen parametrik olmayan metod ile hesaplandı. Normal Yetişkinler: 6.1 95,0 pg/l (n = 119) Sayfa 5/7
Doğrusallık Doğrusallık CLSI EP-6A, Kantitatif Ölçüm Prosedürleri Doğrusallığının Değerlendirilmesi: İstatistiksel Yaklaşım dayalı değerlendirildi. 1,5D değişen konsantrasyonlarda içeren örnekler ikişer kez tahlil edildi. Ortaya çıkan ortalama konsantrasyonlar tahmin edilen konsantrasyonlarla karşılaştırıldı. Örnekler test öncesi düşük hasta örneğiyle yüksek hasta örneği seyreltilmesiyle hazırlandı. Beklenen konsantrasyonlara karşılık gözlenen konsantrasyonlarının doğrusal gerilemesi ise: Gözlenen = 1.01 x (Beklenen) + 1.67 R = 1.00. Yöntem karşılaştırma IDS-iSYS 1,5D tahlili, CLSI EP-9A ardından 1,5D kantitatif tayini için IDS 1,5-Dihidroksi D vitamini (AA-54) radyoimünotahlili ile karşılaştırılmıştır, "Hasta Örnekleri kullanma ve Önyargı Tahmini Yöntem Karşılaştırma ". Toplam 11 örneklerin 1,5 D konsantrasyonları[10.7 197.5 pg/ml (5.7 474.0 pmol/l)], geniş bir aralığı temsil etmek için her bir yöntem ile tahlil edilmiştir. Sayfa 6/7
Bir Passing Bablok analizi karşılaştırmalı veriler üzerinde yapıldı: IDSiSYS = 1.00 x (IDS RIA) -.8. (eğim ve kesişim 95% CI sırasıyla 0.93-1.07 ve -6.3-0.4 di); korelasyon katsayısı (r) = 0.95. Özgünlük Analit 1,5(OH) D 3 1,5(OH) D 1,4,5(OH) D 3 5(OH)D 3 5(OH)D Epi-5(OH)D 3 4,5(OH) D 3 4,5(OH) D Alfacalcidol Çapraz-Reaktivite 98% 75% 9% 0.0015% 0.0009% <0.0015% 0.006% 0.005% 0.04% Bibliyografi 1. Holick MF. D vitamini eksikliği. N Engl J Med 007;357:66-81.. Shimada T et al. FGF-3 D vitamini ve fosfat homeostazının güçlü bir düzenleyicisidir. J Bone Miner Res 004;19:49-35. 3. K/DOQI Kronik böbrek hastalığında kemik metabolizması ve hastalığı için klinik uygulama kılavuzları. Am J Kidney Dis 003; 4:Suppl 3:S1-S01. 4. Kidney Disease: Küresel Sonuçlar (KDIGO) CKD- MBD Çalışma Grubu Geliştirilmesi. KDIGO kronik böbrek hastalığı-mineral ve kemik bozukluğu (CKD-MBD) tanısı, değerlendirme, önleme ve tedavisi için klinik uygulama kılavuzları. Kidney Int. 009;76 (Suppl 113): S1-S130. Immunodiagnostic Systems Limited, 10 Didcot Way, Boldon, Tyne & Wear,NE35 9PD, England Tel.: +44 191 519 0660 Fax: +44 191 519 0760 E-mail: info.uk@idsplc.com www.idsplc.com Immunodiagnostik Sistemler UK Immunodiagnostic Systems Limited 10 Didcot Way, Boldon, Tyne & Wear,NE35 9PD, England Tel.: +44 191 519 0660 Fax: +44 191 519 0760 E-mail: info.uk@idsplc.com www.idsplc.com ABD Immunodiagnostik Sistemler Inc. 948 Clopper Road, Gaithersburg, MD 0878, USA Tel.: 1 877.85.6190 Fax: 1 301.990.436 E-mail: info.us@idsplc.com www.idsplc.com Almanya Immunodiagnostik Sistemler GmbH (IDS GmbH), Mainzer Landstrasse 49, 6039 Frankfurt am Main. Tel.: +49 69 3085-505 Fax: +49 69 3085-515 e-mail: info.be@idsplc.com www.idsplc.com Fransa Immunodiagnostik Sistemler (IDS), 153 Avenue D Italie, 75013 Paris, Fransa Tel.: (0)1 40 77 04 50 Fax : (0)1 40 77 04 55 e-mail: info.fr@idsplc.com www.idsplc.com Scandinavia Immunodiagnostic Systems Nordic a/s (IDS Nordic a/s), International House, Center Boulevard 5, 300 København S Denmark Tel.: +45 44 84 0091 E-mail: info.nordic@idsplc.com www.idsplc.com Belgium Immunodiagnostic Systems S.A., Rue E. Solvay 101, 4000 Liège, Belgium Tel.: +3 4 5 6 36, Fax : +3 4 5 51 96 e-mail: info.be@idsplc.com www.idsplc.com Brazil IDS Brasil Diagnósticos Ltda.Rua dos Pinheiros, 610 - conj 41 Edificio Win Work Pinheiros São Paulo - SP Brasil CEP : 054-001 Telefon: +55 11 37406100, Fax: + 55 11 37406105 Email: info.br@idsplc.com Sayfa 7/7
IDS-iSYS 1,5-Dihydroxyvitamin D Immunopurification Prosedürü Akış Şeması Lipitlerden arındırma Prosedür Tüp # Açıklama Numune/ 1 3 4 5 6 7 8 kontrol 3 kontrol 4 Numune 1 Numune Numune 3 Numune 4 Numune 5 vs. Lipitlerden arındırma Reaktifi 500 μl pipetle 50 μl ilave et Vorteks Santrifüj 000 x g devirde 15 dakika Immuno Prosedür Kapsül # Açıklama Immuno 1 3 4 5 6 kontrol 3 kontrol 4 Numune 1 Numune Numune 3 Numune 4 Kapsüller. Vorteks Jel yerleşmek için izin ver; 3-5 dak. Numune/ Ekstraksiyo n 150 μl lipitlerden arınmış örnek. Ucuna doğru döndürün 90 min 5-0 rpm Jel yerleşmek için izin ver; Dik tut 3-5 dak. Kapağı ve alt stoper çıkarın. Kapsülü bir tüp içine yerleştirin. 1 dak. @ 500-1000 x g DI su 500 μl 1 dak. @ 500-1000 x g x tekrarlayın. Kapsüller i 150 μl.luk tüplere aktarın. Yıkama Reaktif 150 μl Islatın 1- dak. 1 dak. @ 500-1000 x g x tekrarlayın. Atın kapsülleri. Sıvı kısımlar N altında buharlaşır @40 C. Tahlil Tampon 00 μl Vortex 5 sn. 7 Numune 5 8 vs. PL V10 03 Haziran 015 İnglizce Sayfa 7/7 Cihaz kodu: