96 adet MMÜNOENZ MAT K YÖNTEMLEHEPAT T B V RÜSÜNÜN "KOR" ANT JEN NE KAR IYÜRÜTÜLEN ÖZEL IgM'LER TARAMA K T

Transkript

1 Monolisa HBc IgM PLUS 96 adet MMÜNOENZ MAT K YÖNTEMLEHEPAT T B V RÜSÜNÜN "KOR" ANT JEN NE KAR IYÜRÜTÜLEN ÖZEL IgM'LER TARAMA K T malatçı kalite kontrolü Bio-Rad irketi tarafından imal edilen ve pazarlanan tüm ürünler, hammaddelerin teslim alınmasından nihai ürünlerin pazarlanmasına kadar bir kalite güvence sistemi kontrolündedir. Her nihai ürün partisi kalite kontrole tabi tutulur ve ancak kabul kriterlerine uydu u takdirde pazarlanır. Her partinin üretim ve kontrol dokümantasyonu irketimiz tarafından muhafaza edilir.

2 Ç NDEK LER 1. DOZAJ AMACI 2. KL N K ÖNEM 3. TEST PRENS B 4. K T N Ç NDEK LER 5. GEREKL OLAN ANCAK ÜRÜNLE B RL KTE VER LMEYEN MALZEMELER 6. ÖNLEMLER 7. H JYEN VE GÜVENL K TAL MATLARI 8. REAKT FLER N YEN DEN OLU TURULMASI 9. SAKLAMA - SON KULLANMA TAR H 10. NUMUNELER 11. ÇALI MA ARTLARI 12. DEVELOPMAN SOLÜSYONU ÇÖZELT S N N SPEKROMETR 13. HESAPLAMALAR VE SONUÇLARIN DE ERLEND R LMES 14. PERFORMANSLAR 15. TEST L M TLER 16. KAYNAKÇA 2

3 1 - DOZAJ AMACI Monolisa HBc IgM PLUS, Hepatit B virüsünün "kor" antijenine kar ı yürütülen IgM sınıfı antikorların nitel olarak belirlenmesine yönelik "sandviç" tipi bir immünoenzimatik tekniktir. 2 - KL N K ÖNEM Anti-HBc antikorları Hepatit B virüsünün yol açtı ı bir enfeksiyon sırasında ortaya çıkan ilk antikorlardır ve sıklıkla HBs antijeni ile birlikte enfeksiyonun ilk a amasından tespit edilirler. Viral primo-enfeksiyonlar sırasında IgM sınıfı antikorlarını sonrada IgG sınıfı antikorları sentez ederler. IgM sınıfı bu antikorlar genellikle bir kaç haftadan bir kaç aya arasında devam ederler ve nekahat sırasında a amalı olarak azalırlar. IgG sınıfı antikorlar hatalı ın iyile mesinden sonra birçok yıl dayanabilirler. HBc antijeninin özgül IgM sınıfı antikorlarının tespiti akut Hepatiti B'nin te hisinin düzenlenmesine olanak sa lar ve HBs anigenemisi dindi inde ve özelliklede anti HBS antikorları artık görünmedi ine yaralı olurlar. Bazı durumlarda kronik hepatit sırasında zayıf sıfatlı IgM anti HBc antikorlarını tespit etmek mümkündür. 3 - TEST PRENS B Monolisa HBc IgM PLUS, katı safha üzerinde konjugat (maya kökünki HBc antijeninin rekombinant proteini ve perosikdaz ile birliktedirler) eklenmesinden sonra IgM serum antikorlarının yakalamasıyla iki zamanlı "sandviç" tip bir immünoennzimatik tekniktir. Katı safha keçi antiigm insan antikoruna duyarlı 8 kaplı 12 eritten olu ur. HBc antijeni do rudan peroksidaz ile birliktedir. Dozaj a a ıdaki a amaları içerir: 1. Anti-IgM insan antikorları ile yüz yüze kontrol ve numunelerin serum inkübasyonu katı fazda hareketsizle tirilmi tir. 2. Yıkama ardından peroksidaz ile birlikte HBc antijeninyle çözünmez kılınmı komplekslerin inübasyona tabi tutulması 3. Yıkama yoluyla, serbest kalan konjugatın elimine edilmesi, ardından substrat ilavesi ile katı safha ile ba lantılı enzimatik faaliyetin developmanı. 4. Reaksiyonun durdurulması; ardından, 450/620 nm'de optik yo unlukların okunması ve sonuçların yorumlanması. 3

4 4 - K T N Ç NDEK LER Tüm reaktifler "in-vitro" te his amacıyla kullanılmaya yöneliktir. Reaktifler 1 ila 12 arasında ba ımsız 96 i lemeyi gerçekle tirmek için yeterli miktarda sa lanmı lardır. ET KETLEM REAKT FLER N N TEL SUNUM E R1 Mikroplak a: Anti-IgM insan antikorları ile duyarlı8 kaplık 12 erit. 1 plaka R2 R3 R4 R5 R6 R7 R8 R9 R10 Konsantre yıkama solüsyonu (20X): Tampon Tris, NaCl ph 7,4 Koruyucu: ProClin 300 (%0,04) Negatif kontrol serumu ( nsan): Önceden sulandırılmı görünün altında sa lanmı tır. Kullanıma hazır. Anti-HIV1 ve anti-hiv 2, anti-hcv antikorları, Koruyucu: Sodyum azid (< 0,1%) Pozitif kontrol serumu ( nsan): Önceden sulandırılmı görünün altında sa lanmı tır. Kullanıma hazır. Ag HBs, Ag HBe'deki pozitif insan serumu ve anti-hbc halinde, anti HIV1 ve anti-hiv2 antikorlarında negatif ve anti-hcv antikorlarında foto kimyasal olarak etkisizle tirilmi tir. Koruyucu: Sodyum asid (< 0,1 %) Numunelerin sulandırıcısı: Tampon Tris, NaCl ph: %0,1 oranında Tween 20 ve %1 oranından serum albümin bovine eklenmi 7,4 Koruyucu: Sodyum azid (< 0,1%) Boya: Fenol kırmızı Dondurarak kurutulmu konjugat: Peroksidaz ile birllikte rekombinant HBc antijeni Konjugat sulandırıcısı: Tampon Tris, NaCl ph: %0,1 oranında Tween 20 eklenmi 7,4 Koruyucu: % 0,1 sodyum mertiolat Boya: Fenol kırmızı Substrat tamponu: %0.015oksijenli su ve %4 dimentisülfoksit (DMSO) içeren ph 4.0 sitrik asit ve sodyum asetat solüsyonu. Kromojen: Tetrametilbenziden (TMB) içeren solüsyon Durdurma solüsyonu: Sülfürik asit solüsyonu 1 N 70 ml 2,5 ml 2,5 ml 100 ml 2 i e qsp 2 x 6 ml 12 ml 60 ml 5 ml 28 ml 5 - GEREKL OLAN ANCAK ÜRÜNLE B RL KTE VER LMEYEN MALZEMELER Damıtık veya tamamen demineralize su. Sodyum hipoklorit (çama ır suyu) ve sodyum bikarbonat. Emici kâ ıt. Tek kullanımlık eldivenler. Tek kullanımlık (12 x 75 mm) polistiren borular. 10 l, 100 l, 1000 l ve 1 ml'lik hacimler da ıtabilen ayarlanabilir veya sabit, otomatik veya yarı otomatik pipetler 10 ml, 200 ml et 1000 ml'lik dereceli deney tüpleri. Vorteks tipi çalkalayıcı Kontamine atık konteyneri Mikroplakalar* için otomatik, yarı otomatik veya manüel yıkama sistemi 37 ± 1 C* termostatlı ben mari veya kuru inkübatör Mikroplaka okuma* cihazı (450/ nm filtrelerle donatılmı ) (*) Teknik servislerimiz tarafından onaylanan cihazlar konusunda tam bilgi edinmek için bize danı ınız. 4

5 6 - ÖNLEMLER Elde edilecek sonuçların kalitesi a a ıdaki laboratuar uygulamalarına tam olarak uyulmasına ba lıdır: Test ismi ve test özel tanıtım numarası her mikroplaka çerçevesinin üzerinde belirtilmi tir. Bu özel tanıtım numarası her eridin üzerinde de yer alır. Monolisa HBc IgM PLUS: Özel Tanıtım Numarası = 57 Bu tanıtım numarası her kullanımdan önce kontrol edilmelidir. Test numarası bulunmayan veya gerçekle tirilen testin numarasından farklı olan her erit, kullanılmamalıdır. Son kullanma tarihi geçmi reaktifler kullanmayın. Aynı deney sırasında farklı partilere ait reaktifleri birbirine karı tırmayın. D KKAT: Aynı deney boyunca hep aynı lotu kullanmak kaydıyla, kitte teslim edilenlerden farklı yıkama solüsyonu (etiketin üzerindeki ye il 20X ibaresi ile tanıtılan, R2), substrat tamponu (mavi TMB buf. ibaresi ile tanıtılan, R8), kromojen (menek e rengitmb 11X. ibaresi ile tanıtılan, R9) ve durdurma solüsyonu (kırmızı 1N ibaresi ile tanıtılan, R1) kullanmak mümkündür. Bu reaktifler irketimizin di er ürünleri ile birlikte kullanılabilir. Ayrıca, belli bir deneyde bir tek karı ımın kullanımın kullanılması kaydıyla, yıkama solüsyonu (etiketin üzerindeki ye il 20X ibaresi ile tanıtılan, R2) düzgün bir ekilde yeniden olu turulan farklı Bio- Rad reaktif kitlerine dahil edilmi di er iki yıkama solüsyonundan biri ile (etiketin üzerindeki mavi bir 10X veya turuncu bir 10X ibaresi ile tanıtılan, R2) karı tırılabilir. Ayrıntılı bilgi edinmek için teknik servislerimizle irtibat kurunuz. Kullanımdan önce, reaktiflerin laboratuar sıcaklı ında dengelenmesi için 30 dakika beklemek gerekir. Her türlü kontaminasyonu önleyerek, reaktifleri özenle tekrar olu turun Konjugatların enzimatik faaliyetini bozabilecek reaktif buharlar (asitler, alkaliler, aldehitler) veya tozlar mevcut iken test yapmayın. Damıtık su ile mükemmel bir ekilde yıkanan ve tercihen tek kullanımlık cam aletler kullanın. Yıkama: Azami test performanslarını elde edebilmek için yıkama prosedürlerine uymak önemlidir. Enzimatik reaksiyon tüm metallere ve metal iyonlarına kar ı duyarlıdır. Dolayısıyla, hiçbir metal unsur, konjugatlar veya substratı içeren farklı solüsyonlar ile temas etmemelidir Developman solüsyonu (substrat tamponu + kromojen) pembeye boyanmalıdır. Yeniden olu umu takip eden dakikalar içerisinde ba ka bir rengin ortaya çıkması reaktifin kullanılamaz durumda oldu unu ve de i tirilmesi gerekti ini gösterir. Bu preparat için tercihen, tek kullanımlık plastik veya önceden 1N klorhidrik asit, ardından damıtık su ile yıkanmı ve kurutulmu cam kaplar veya da ıtım malzemeleri kullanın. Bu solüsyonu güne ı ınlarına maruz bırakmayın. Her numune için yeni bir da ıtım konisi kullanın. Konjugatları ve developman solüsyonunu da ıtmak için asla aynı kabı kullanmayın Pipetlerin do rulu unu ve hassasiyetini ve kullanılan cihazların düzgün çalı tı ını kontrol edin. Çalı ma artlarını de i tirmeyin. Kontrol serumları her test dizisi için hasta numunelerine paralel olarak test edilmelidirler. Yıkama i leminin sonu ile reaktiflerin da ıtımı arasında geçen sürede mikroplakanın kurumasına izin vermeyin. Developman solüsyonundan asılı olan partiküllerin bulunması durumunda, pipetlemeden (bu partiküller teste dahil müdahale etmezler) önce i eye dikkatle bırakınız. 7 - H JYEN VE GÜVENL K T AL MATLARI Kitteki tüm reaktifler in vitro te his amacıyla kullanılmaya yöneliktir. Reaktiflerle çalı ırken tek kullanımlık eldivenler takın. "A zınızla pipetlemeyin". Pozitif kontrol (R4) foto kimyasal olarak etkisizle tirilmi lerdir. Negatif kontrol hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı malzeme, Hepatit B virüsü (Ag HBs) yüzey antijeni, hepatit C (anti-hcv) virüsüne yönelik antikorlar ve HIV virüslerine kar ı olan antikorlar (anti-hiv-1 ve anti-h IV-2) açısından kontrol edilmi ve reaktif olmadı ı belirlenmi tir. R4 Pozitif kontrolün hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı malzeme test edilmi ve Hepatit C (anti-hcv) virüsüne ve insani immüno yetmezlik (anti-hi V1 ve anti-hiv2) virüsüne kar ı yönelik antikorlar bakımından non-reaktif olarak bulunmu tur. Hiçbir yöntem HIV, Hepatit B veya Hepatit C virüslerinin veya di er bula ıcı ajanların bulunmadı ını kesin bir ekilde garanti edemedi i için, bu reaktifleri ve hasta numunelerini potansiyel olarak bula ıcı malzeme addedin ve ola an önlemler ile kullanın. Numuneler ve reaktifler ile do rudan temas eden malzemeyi ve ayrıca yıkama solüsyonlarını kontamine ürünler addedin ve buna göre i leme tabi tutun. Numunelerin veya bunları içeren solüsyonun sıçramasına engel olun. Kirlenen yüzeyler % 10 sulandırılmı çama ır suyu ile temizlenecektir. Bula an sıvı bir asit ise, kirlenen yüzeyler önceden sodyum bikarbonat ile nötrle tirilecek, ardından çama ır suyu ile temizlenecek ve emici kâ ıt ile kurutulacaktır. Temizleme i leminde kullanılan malzeme kontamine atıklar için öngörülmü özel bir konteynere atılmalıdır. nsan kaynaklı numuneler ve reaktifler ve kontamine malzeme ve ürünler, bula ıcı özellikleri giderildikten sonra atılacaktır: 5

6 - Bu i lem, ya % 5 sodyum hipoklorit son konsantrasyonlu çama ır suyuna (10 hacim kontamine sıvı veya su için, 1 hacim çama ır suyu) 30 dakika boyunca batırarak, - ya da minimum 2 saat boyunca 121 C'de otoklavlama vasıtasıyla gerçekle tirilir. D KKAT: SODYUM H POKLOR T ÇEREN SOLÜSYONLARI OTOKLAVIN Ç NE SOKMAYIN. Atık solüsyonları veya biyolojik numuneler içeren herhangi bir sıvıyı lavaboya atmadan önce, nötrle tirmeyi ve/veya otoklavlamayı unutmayın. Güvenlik verileri fi i talep üzerine verilmektedir. Substrat tamponunun, kromojenin ve durdurma solüsyonunun cilt ve mukozalar ile hiçbir ekilde temas etmesine izin vermeyin (toksisite, tahri veya yanık riski). Kimyasal ürünler do ru laboratuar uygulamalarına göre kullanılmalı ve atılmalıdır. Bazı reaktiflerde koruyucu olarak sodyum azotür bulunmaktadır. Sodyum azatür, laboratuar kanalizasyonlarında kur un veya bakır azatürleri olu turabilirler Bu azatürler patlayıcıdırlar. Azatürlerin birikmesini önlemek için, azatür içeren solüsyonlar etkisizle tirildikten sonra lavaboda atılmı larsa bol miktarda su ile yıkayın. Bazı reaktifler ProClin 300 (% 0,04, % 0,1 ve/veya % 0,5) içerir Xi Tahri eder R43: Cilt ile temas etmesi halinde duyarlıla maya yol açabilir S28-37: Cildinizle temas ettikten sonra, derhal su ve sabun ile bol bol yıkanın. Uygun eldivenler takın. 8 - REAKT FLER N YEN DEN OLU TURULMASI NOT: Kullanmadan önce, bütün reaktiflerin ortam sıcaklı ına (18-30 C) ula masını bekleyiniz. 1) Kullanıma hazır reaktifler Reaktif 1 (R1): Mikroplak 12 erit içeren her ta ıyıcı çerçeve "ZIP" po et içine konulmu tur. Po eti makas veya bıçak ile birle me noktasının 0,5 ila 1 cm üzerinde kesin. Po eti açın ve çerçeveyi po etten çıkarın. Kullanılmayan eritleri tekrar po etin içine yerle tirin. Po eti özenle kapatın ve yeniden +2-8 C sıcaklıkta muhafaza edin. Reaktif 1 (R3): Negatif kontrol Reaktif 1 (R4): Pozitif kontrol Reaktif 1 (R5): Numunelerin sulandırıcısı Reaktif 1 (R7): Konjugat sulandırıcısı Reaktif (R1 0): Durdurma solüsyonu 2) Yeniden olu turulacak reaktifler Konsantre yıkama solüsyonu (20X): R2 Solüsyonu damıtık su ile 20 kez sulandırın.. Böylece kullanıma hazır yıkama solüsyonu elde edilir. 12 eritlik bir plak için 800 ml öngörünüz. Konjugatlar (R6+ R7) 6 ml konjugat (R7) sulandırıcısı ile dondurularak kurutulmu (R6) bir konjugat i esinin içeri i alın. 2 dakika bekleyin. Homojenle tirin. 1 ila 6 arasında erit kullanımı için bir konjugat i esi olu turun (R6) 6'dan fazla erit için, 2 konjugat i esi olu turun ve her i edeki içeri i aynı kaba karı tırın. Enzimatik developman solüsyonu (R8 + R9) Substrat tamponundaki (R8) kromojen (R9) solüsyonunu 11 kez sulandırınız (örn: 1 ml reaktif + 10 ml reaktif RS). Yeniden olu turduktan sonra 6 saat karanlıkta bekletin. 9 - SAKLAMA - SON KULLANMA TAR H Kit +2-8 C sıcaklıkta saklanmalıdır C sıcaklıkta saklanan kitteki her unsur kutunun üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir (özel bir uyarı bulunmadı ı takdirde). R1: Vakumlu po etin açılmasından sonra, +2-8 C sıcaklıkta muhafaza edilen ve özenle kapatılan eritler 4 ay dayanabilir. R2: Sulandırılmı yıkama solüsyonu C sıcaklıkta 2 hafta saklanabilir. Konsantre yıkama solüsyonu (R2) C sıcaklıkta muhafaza edilebilir. R6 + R7: Yeniden olu turulduktan sonra, +2-8 C'de muhafaza edilen reaktifler 3 hafta kullanılabilirler. R8 + R9: Yeniden olu turulduktan sonra, karanlıkta saklanan reaktifler ortam sıcaklı ında (18-30 C) 6 saat boyunca kullanılabilir. 6

7 10 - NUMUNELER Ola an uygulama yöntemleriyle bir kan numunesi alın. Testler sulandırılmamı serum veya plazma numuneleri üzerinde yapılacaktır (numuneler EDTA, heparin, sitrat gibi antikoagülanlar ile alınır). Hemolize engel olmak için en kısa sürede serumu veya plazmayı pıhtıdan veya alyuvarlardan çıkarın. Çok belirgin bir hemoliz test performanslarını etkileyebilir. Agrega içeren numuneler testten önce santrifugasyon ile arıtılmalıdır. Süspansiyon halindeki partiküller veya fibrin agregaları yanlı pozitif sonuçlar elde edilmesine yol açabilir. Test -20 C'de dondurularak muhafaza edilebildi i 7 gün içinde gerçekle tirilmi se numuneler C'de muhafaza edileceklerdir. Plazlamalar bir kaç dakika 40 C 'de ısıtıldıktan sonra hızlı bir buz çözülmesine u rayacaklardır (Fibrinin hızlanmasını kısıtlamak için). 3 defadan fazla dondurulan ve çözdürülen numuneler kullanılmamalıdır. E er numuneler ta ınacak ise, bunları etolojik ajanlar konusundaki mevzuata uygun ekilde ambalajlayın KONTAM NE, H PERL PEM K VEYA H PERHEMOL ZE SERUMLARI KULLANMAYIN. D KKAT: 90 gr/l'ye kadar albümin ve 100 mg/l'ye kadar bilirubin içeren numunelerde ve ayrıca 36 gr/l'ye kadar triolein içeren lipemik numunelerde ve 1,25 gr/l'ye kadar hemoglobin içeren hemolize numunelerde hiçbir etkile im ispatlanamamı tır ÇALI MA ARTLARI 1. R2 Yıkama solüsyonunu hazırlayın. 2. Numunelerin sulandırıcısında (R5) 1/101 oranından bilinmeyen numuneleri sulandırın. (10 μl serum μl reaktifr5). Negatif (R3) ve pozitifi (R4) kontroller önceden sulandırılmı olarak hazırlanırlar. Numuneler gibi sulandırılmamı lardır. 3. Ta ıyıcı çerçeve ile gerekli sayıda eridi koruyucu (R1)ambalajdan çıkarın. Kullanılmayan eritleri tekrar ambalajın içine yerle tirin ve ambalajı kapatın. 4. Bütün kaplara 0,370 lm yıkama solüsyonu doldurun. Kaplardaki içeri i çekerek atık konteynırına bo altın. Yıkama i lemini bir kere tekrarlayıp ardından emici ka ıdın üzerine ters çevirerek pla ı kurutun. Otomatik bir yıkayıcınız var ise, aynı i lem döngüsünü uygulayın. 5. sulandırılmamı kontrol serumlarının ve a a ıdaki sırada 1/101 oranında sulandırılmı bilinmeyen numuneleri kaplara da ıtın. Kaplar A1, B1, C1: 100 l negatif kontrol (R3) Kaplar D1, E1, F1: 100 l pozitif kontrol (R4) Kaplar G1, H1...vb: 100 l bilinmeyen numune. Kullanılan sisteme ba lı olarak, kontrollerin konumu veya da ıtım sırası de i tirilebilir. Negatif ve pozitif kontroller önceden sulandırılmı olarak hazırlanırlar. Numuneler gibi sulandırılmamı lardır. 6. yapı kan bir filme kaplayın ve 37 ± 1 C'de 30 ± 5 dakika inkübe edin. 7. Konjugat solüsyonu (R6+R7) hazırlayın 8. Yapı kan filmi çıkarın; her kabın içeri ini çekerek atık konteynerine bo altın, ardından 4. adımda belirtildi i gibi 3 kez yıkayın. 9. Her kaba 100 μl solüsyon da ıtın. yapı kan bir filme kaplayın ve 37 ± 1 C'de 60 ± 5 dakika inkübe edin. N.B: Kırmızı renkli konjugat solüsyonunun da ıtılması, i lemlerin bu a amasında görsel olarak kontrol edilebilir. Bo bir kap ile kırmızı konjugat solüsyonu içeren bir kap arasında önemli bir renk farkı vardır. 10. Yapı kan filmi çıkarın; her kabın içeri ini çekerek atık konteynerine bo altın, ardından 4. adımda belirtildi i gibi 6 kez yıkayın. 11. Enzimatik developman solüsyonunu adlandırılan prosedürü takip ederek (R8 + R9) hazırlayın 12. Önceden hazırlanmı 80 l enzimatik faaliyet developman solüsyonunu (R8+R9) tüm kaplara hızla da ıtın. Reaksiyonun ortam sıcaklı ında (18 ila 30 C) 30 ± 5 dakika boyunca karanlıkta gerçekle mesini sa layın. Bu inkübasyon sırasında, yapı kan film kullanmayın. N.B.: Pembe renkte olan developman solüsyonunun da ıtılması, i lemlerin bu a amasında görsel olarak kontrol edilebilir. Bo bir kap ile pembemsi renkte developman solüsyonu içeren bir kap arasında önemli bir renk farkı vardır. (otomatik kontrol için paragraf 12'e ba vurun: DEVELOPMAN SOLÜSYONU ÇÖKELT S N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ). 13. Developman solüsyonu ile aynı sıra ve da ıtım temposunu kullanarak 100 l durdurma solüsyonu (R10) ilave edin. Reaksiyonel karı ımı homojenle tirin. N.B.: Renksiz olan durdurma solüsyonunun da ıtılması, i lemlerin bu a amasında görsel olarak kontrol edilebilir. Substratın pembemsi (negatif numuneler için) veya mavi (pozitif numuneler için) olan rengi, durdurma solüsyonu ilave edildikten sonra renksiz hale gelen (negatif numuneler için) veya rengi sarıya dönen (pozitif numuneler için) kaplardan kaybolur. 14. Plakaların alt kısmını özenle silin. Durdurma solüsyonunun da ıtılmasından en az 4 dakika sonra ve reaksiyonun sona ermesinden sonraki 30 dakika içinde, bir plaka okuyucusu yardımıyla 450/ nm'de optik yo unlu u okuyun. 15. Sonuçları kayda geçirmeden önce, okuma i lemi ile plaka ve numunelerin da ıtım ve tanıtım planının birbirleriyle uyumlu oldu unu kontrol edin. 7

8 12 - DEVELOPMAN SOLÜSYONU ÇÖKELT S N N SPEKTROF OTOMETR K OLARAK KONTROL ED LMES 490 nm'de otomatik okuma i lemi ile pembe renkli developman solüsyonunun varlı ını do rulamak mümkündür: Developman solüsyonu içeren bir kap 0.100'nin üzerinde optik bir yo unlu a sahip olmalıdır (bir DO daha zayıf bir yo unluk developman solüsyonunun kötü bir da ıtımını gösterir. Bo bir kap ile pembemsi renkte developman solüsyonu içeren bir kap arasında önemli bir renk farkı vardır HESAPLAMALAR VE SONUÇLARIN DE ERLEND R LMES 1. Negatif kontrollerin ortalama optik yo unlu unu hesaplayın: DO R3 Örnek: Negatif kontrol R3 DO 1 0, , ,045 Toplam DO R3/3 = 0,080/3 = 0,026 = DO R3 2. Pozitif kontrollerin ortalam a optik yo unlu unu hesaplayın: DO R4 Örnek: Pozitif kontrol R4 DO 1 0, , ,897 Toplam DO R4/3 = 2,727/3 = 0,909 = DO R4 DO de eri ortalamadan %25 sapma gösterdi inde, bir pozitif kontrolün de erini elimine etmek mümkündür. 3. E ik de erin hes aplanması E ik de eri DO R3 + (DO R4/7)'ye e de erdir. Örnek: DO R3 = 0,026 DO R4 = 0,909 E ik de eri = 0,026 + (0,909/7) = 0, Testin geçerlili i Pozitif kontrolün (DO R4) ortalama de eri 0,4 ünite optik yo unlu a denk ya da üzerinde olmalıdır. DO R4 0,400. Negatif kontrolün (DO R3) ortalama de eri 0,1 ünite optik yo unlu a denk ya da altında olmalıdır. DO R3 0, Oranların hesaplanması Her numune için oranı hesaplayın: DO e antiyon Oran = VS 6. Sonuçların Yorumlanması Oranı 1'in altında olan numuneler negatiftirler. Oranı 1'e denk ve üzerinde olan numuneler pozitiflerdir. 8

9 14 - PERFORMANSLAR Monolisa HBs Ag ULTRA performansları, seçilmemi kan donörleri, akut Hepatit B, kronik Hepatit B'ye yakalanmı hasta numunelerini, Hepatit B virüsü ile ili kisi olmayan farklı patolojiler gösteren hasta numunelerinin, serokonversion panellerindeki gibi ticari numunelerin üzerinde gerçekle tirilen testlerle belirlenmi lerdir. Özgüllük 1312 seçilmemi kan donöründeki özgüllük %99,9 (1311/1312) olarak var sayılmı tır. Özgüllük incelemesi aynı ekilde 202 hasta numunesi üzerinde yapılmı ve %99,5 olarak hesaplanmı tır. Hepatit B (gebe kadın, rymatoid faktör veya di er viral enfeksiyonlar) ile ilgisi olmayan patolojiler veya durumlar gösteren 99 hasta analizi %100 (99/99) bir özgüllük göstermi tir. Analitik Duyarlılık PEI standardı (fer IGM HBc 84) ile de erlendirilen analitik duyarlılık e i i 50 U/ml'nin altında oldu u varsayılmı tır. Duyarlılık Kronik Hepatit B, akut Hepatit B'ye yakalanmı hastalardan gelen 199 pozitif numune üzerinde gerçekle tirilen duyarlılık incelemeleri %100 oranından bir duyarlılık göstermi lerdir. Ayrıca, 27 akut enfeksiyondan gelen 129 numune ve 3 ticari serokonversiyon paneli test edilmi ve piyasadaki mevcut immünoenzimatik testlerle kar ıla tırılmı tır. Hassasiyet Monolisa HBs Ag ULTRA testinin kesinli i 4 numunenin analiz edilmesi ile belirlenmi tir: IgM HBc'de 1 negatif numune, 2 pozitif numune (numune. 2 ve 3) ve g HBs' bakımından güçlü bir pozitif numune. Tekrarlanabilirlik (deney içi) aynı i leme boyunca 30 kez test edilen 4 numune örne inin analizi ile de erlendirilmi tir. Tekrarlanabilirlik (deney içi) her günden ayrı 2 deneme kar ılı ında 20 gün boyunca iki kez test edilen 4 aynı numunenin analizi ile de erlendirilmi tir. Sonuçlar a a ıdaki tablolarda gruplandırılmı tır: Tablo 1: Deney içi tekrarlanabilirlik n = 30 numune 1 numune 2 numune 3 numune 4 Oranların ortalaması 0,21 2,32 4,11 5,42 Standart sapma (SD) 0,01 0,07 0,14 0,34 CV (%) oranları 5,38% 3,21% 3,44% 6,22% Tablo 2: Deney içi yeniden tekrarlanabilirlik n = 40 numune 1 numune 2 numune 3 numune 4 Oranların ortalaması 0,22 2,28 3,89 5,37 Standart sapma (SD) 0,05 0,26 0,51 0,59 CV (%) oranları 22,13% 11,27% 13,13% 11,02% 15 - TEST L M TLER Negatif bir sonuç kontrol edilen numunenin Monolisa HBc IgM PLUS tarafınfan tespit edilen IgM anti-hbc antikorları içermedi ini i aret etmektedir. Bununla birlikte, böyle bir negatif sonuç Hepatit B virüsünün yol açtı ı bir enfeksiyon olasılı ını ortadan kaldırmaz. Numunelerin ve/veya konjugat ve/veya developman solüsyonunun çökeltirinin kalorimetrik do rulama yöntemi da ıtılan hacimlerin kesinli ini do rulamaz fakat numunelerin /konjugatın varlı ını gösterir. Bu yöntemle elde edilen yanlı cevap oranları kullanılan sistemin kesinli ine ba lıdır (toplanan pipetleme CV'leri ve %10'nun üzerindeki okuma i lemi bu do rulamanın niteli ini önemli ölçüde dü ürebilir. Konjugatın kuluçka a amasından sonra yetersiz bir yıkama durumunda, developman solüsyonunun da ıtımının otomatik do rulanması (kapların optik yo unluklarının 490 nm'deki okuma i lemi ile) developman solüsyonunun eksikli inde 0,100'zün üstündeki optik yo unluklar la yanlı sonuçlar verebilir. Bununla birlikte, test edilen 939 numune üzerinde yapılan de erlendirmeler sırasından bu olgu gözlenmemi tir. 9

10 16 - KAYNAKÇA 1. GERLICH W.H.; LUER W and THOMSSEN R. (1980) - Diagnosis of acute and inapparent Hepatitis B virus infections by measurement of IgM antibody to Hepatitis B core antigen - J. Infect. Dis 142 (1): LEMON S.M.; GATES NL.; SIMMS T.E. and BANCROFT W.H. (1981) IgM antibody to Hepatitis B core antigen as a diagnostic parameter of acute infection with Hepatitis B virus.- J. Infect. Dis. 143 (6): WIDELL A.; HANSSON B.G.; LOFGREN B.; MOESTRUP T.; NORKRANS G.; JOHNSSON and NORDENFELT E. (1982) - IgM antibody to the Hepatits B core antigen in acute Hepatitis determined by SPRIA Diagnostic value.- Acta Path. Microbiol. Immunol. Scand. 90: GERLICH W.H.; UY A.; LAMBRETCH F. and THOMSSEN R. (1986) Cut-off levels of Immunoglobulin M antibody against viral core antigen for differentiation of acute, chronic and past Hepatitis B virus infections - J. of Clin. Microbiol. 24; NAKAJIMA E.; TSUJI T.; KACHI K.; KAGAWA K.; OKANOUE T. and TAKINO T. (1987) - Immunoglobulin M. antibody to Hepatitis B core antigen (IgM anti-hbc) as a marker of interferon therapy in patients with persistant Hepatitis B virus infection - Biken Journal 30; KIYOSAWA K.; SODEYAMA T.; FRANCA S.T.M.; YODA H.; OHIKE Y.; IMAI H.; IMAY Y. and FURUTA S. (1988) - Serial assay for IgM anti-hbc in patients with anti-hbe positive chronic Hepatitis and its significance for long-term prognosis - J. of Med. Virol. 24; LEMON S.M. (1988) - What is the role of testing for IgM antibody to core antigen of Hepatitis B virus - Mayo Clin. Proc. 63;

11 IVD (GB) - CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro diagnostic medical devices) (FR) - Marquage CE (Directive européenne 98/79/CE relative aux dispositifs médicaux de diagnostic in vitro) (ES) - Marcado CE (Directiva europea 98/79/CE sobre productos sanitarios para diagnóstico in vitro) (IT) - Marchiatura CE (Direttiva europea 98/79/CE relativa ai dispositivi medico-diagnostici in vitro) (DE) - CE Konformitätskennzeichnung (Europäische Richtlinie 98/79/EG über In-vitro-Diagnostika) (PT) - Marcação CE (Directiva europeia 98/79/CE relativa aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro) (SE) - CE-märkning (Europeiskt direktiv 98/79/EG om medicintekniska produkter för in vitro-diagnostik) (DK) - CE-mærkningen (Europa direktiv 98/79/EF om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik) (GR) - CE ( 98/79/CE in vitro ) (PL) - CE oznaczenie (Dyrektywa unijna 98/79/CE dotycząca produktów medycznych do badań in vitro) (LT) - CE ženklas (Europos sąjungos direktyva 98/79/CE dėl in vitro diagnostikos medicinos prietaisų) (HU) - CE jelzés (98/79/CE Európai Irányelv az in vitro orvosi diagnosztikai eszközökről) (EE) - CE märgistus (Euroopa direktiiv 98/79/CE in vitro diagnostikameditsiiniseadmete kohta) (SK) - CE označenie o zhode (Európska direktíva 98/79/CE pre in vitro diagnostické zdravotnícke postupy) (CZ) - CE značka (Evropská direktiva 98/79/CE o diagnostických zdravotnických prostředcích in vitro) (NO) - CE-merking (EU-direktiv 98/79/CE om medisinsk utstyr til in vitro-diagnostikk) (RO) - Marca CE (Directiva europeana 98/79/CE pentru dispozitive medicale de diagnostic in vitro) (BG) - СЕ маркировка (Европейска директива 98/79/CE за ин витро диагностичните медицински изделия) (GB) - For in vitro diagnostic use (GB) - Catalogue number (FR) - Pour diagnostic in vitro (FR) - Référence catalogue (ES) - Para diagnóstico in vitro (ES) - Número de catálogo (IT) - Per uso diagnostico in vitro (IT) - Numero di catalogo (DE) - In-vitro-Diagnostikum (DE) - Bestellnummer (PT) - Para uso em diagnóstico in vitro (PT) - Número de catálogo (SE) - In vitro-diagnostik (SE) - Katalognummer (DK) - In vitro diagnose (DK) - Katalognummer (GR) - in vitro (GR) - (PL) - Do stosowania in vitro (PL) - Numer katalogu (LT) - in vitro diagnostikai (LT) - Katalogo numeris (HU) - Csak in vitro diagnosztikai alkalmazásra (HU) - Cikkszám (EE) - In vitro diagnostiliseks kasutamiseks (EE) - Katalooginumber (SK) - Na diagnostiku in vitro (SK) - Katalógové číslo (CZ) - Pro diagnostiku in vitro (CZ) - Katalogové číslo (NO) - Til in vitro-diagnostikk (NO) - Katalognummer (RO) - Pentru diagnostic in vitro (RO) - Număr de catalog (BG) - За ин витро диагностика (BG) - Каталожен номер (GB) - Manufacturer (GB) - Authorised Representative (FR) - Fabricant (FR) - Représentant agréé (ES) - Fabricante (ES) - Representante autorizado (IT) - Produttore (IT) - Distributore autorizzato (DE) - Hersteller (DE) - Bevollmächtigter (PT) - Fabricante (PT) - Representante Autorizado (SE) - Tillverkad av (SE) - Auktoriserad representant (DK) - Fremstillet af (DK) - Autoriseret repræsentant (GR) - (GR) - (PL) - Producent (PL) - Upoważniony Przedstawiciel (LT) - Gamintojas (LT) - Įgaliotasis atstovas (HU) - Gyártó (HU) - Meghatalmazott Képviselő (EE) - Tootja (EE) - Volitatud esindaja (SK) - Výrobca (SK) - Autorizovaný zástupca (CZ) - Výrobce (CZ) - Zplnomocněný zástupce (NO) - Produsent (NO) - Autorisert representant (RO) - Producător (RO) - Reprezentant autorizat (BG) - Производител (BG) - Упълномощен представител (GB) - Batch code (GB) - Expiry date YYYY/MM/DD (FR) - Code du lot (FR) - Date de peremption AAAA/MM/JJ (ES) - Código de lote (ES) - Estable hasta AAAA/MM/DD (IT) - Codice del lotto (IT) - Da utilizzare prima del AAAA/MM/GG (DE) - Chargen-Bezeichnung (DE) - Verwendbar bis JJJJ/MM/TT (PT) - Código do lote (PT) - Data de expiração AAAA/MM/DD (SE) - Batchnr (SE) - Utgångsdatum ÅÅÅÅ/MM/DD (DK) - Batchkoden (DK) - Anvendes før ÅÅÅÅ/MM/DD (GR) - (GR) - YYYY/MM/DD (PL) - Numer serii (PL) - Data ważności YYYY/MM/DD (LT) - Serijos numeris (LT) - Galioja iki YYYY/MM/DD (HU) - Gyártási szám (HU) - Szavatossági idő ÉÉÉÉ/HH/NN (EE) - Partii kood (EE) - Aegumistähtaeg AAAA/KK/PP (SK) - Číslo šarže (SK) - Použiteľné do RRRR/MM/DD (CZ) - Číslo šarže (CZ) - Datum exspirace RRRR/MM/DD (NO) - Partikode (NO) - Utløpsdato ÅÅÅÅ/MM/DD (RO) - Număr de lot (RO) - Data expirarii AAAA/LL/ZZ (BG) - Партиден номер (BG) - Срок на годност година/месец/ден

12 (GB) - Storage temperature limitation (FR) - Limites de températures de stockage (ES) - Temperatura límite (IT) - Limiti di temperatura di conservazione (DE) - Lagertemperatur (PT) - Limites de temperatura de armazenamento (SE) - Temperaturbegränsning (DK) - Temperaturbegrænsning (GR) - (PL) - Temperatura przechowywania (LT) - Saugojimo temperatūriniai apribojimai (HU) - Tárolási hőmérsékleti határok (EE) - Piirangud säilitustemperatuurile (SK) - Skladovacia teplota od do (CZ) - Teplotní rozmezí od do (NO) - Oppbevaringstemperatur (RO) - Limitele de temperatură la stocare (BG) - Температурни граници на съхранение (GB) - Consult Instruction for use (FR) - Consulter le mode d'emploi (ES) - Consulte las instrucciones de uso (IT) - Consultare le istruzioni per uso (DE) - Siehe Gebrauchsanweisung (PT) - Consulte o folheto informativo (SE) - Se bruksanvisningen (DK) - Se instruktion før brug (GR) - (PL) - Sprawdź instrukcję (LT) - Ieškokite informacijos vartojimo instrukcijoje (HU) - Olvassa el a használati utasítást (EE) - Kasutamisel vaata instruktsiooni (SK) - Katalógové číslo (CZ) - Viz návod k použití (NO) - Se bruksanvisninger (RO) - Consultati prospectul de utilizare (BG) - Виж инструкцията за употреба

13 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2009 Fax.: Code: