Monolisa HBe Ag-Ab PLUS adet HBe Ag testi - 96 adet HBe Ab testi

Transkript

1 Monolisa HBe Ag-Ab PLUS adet HBe Ag testi - 96 adet HBe Ab testi HBe ANT JENLER LE ANT -HBe ANT KORLARINI MMÜNOENZ MAT K YÖNTEMLE ALGILAMA K T malatçı kalite kontrolü Bio-Rad irketi tarafından imal edilen ve pazarlanan tüm ürünler, hammaddelerin teslim alınmasından nihai ürünlerin pazarlanmasına kadar bir kalite güvence sistemi kontrolündedir. Her nihai ürün partisi kalite kontrole tabi tutulur ve ancak kabul kriterlerine uydu u takdirde pazarlanır. Her partinin üretim ve kontrol dokümantasyonu irketimiz tarafından muhafaza edilir.

2 Ç NDEK LER 1. TEST N AMACI 2. KL N K ÖNEM 3. TEST PRENS B 4. K T N Ç NDEK LER 5. GEREKL OLAN ANCAK ÜRÜNLE B RL KTE VER LMEYEN DONANIM 6. ÖNLEMLER 7. H JYEN VE GÜVENL K TAL MATLARI 8. REAKT FLER N YEN DEN OLU TURULMASI 9. SAKLAMA - GEÇERL L K 10. NUMUNELER 11. ÇALI MA ARTLARI 12. HESAPLAMALAR VE SONUÇLARIN DE ERLEND R LMES 13. REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES 14. PERFORMANSLAR 15. KAYNAKÇA 2

3 1 - TEST N AMACI Monolisa HBe Ag-Ab PLUS insan serumu veya plazmasında mevcut hepatit B virüsü e antijeninin (Ag HBe) ve/veya hepatit B virüsü e antijenine yönelik antikorların (Anti-HBe) immünoenzimatik teknikle kalitatif olarak belirlenmesini sa lar. 2 - KL N K ÖNEM HBe antijeninin varlı ı genellikle aktif viral ço alma eklinde açı a çıkar ve dene in bula ıcı oldu u anlamına gelir. HBe antijeni B tipi bir viral hepatitte erken ortaya çıkar ve (bir aydan daha uzun süre) kalması hepatopatinin a ırla ması riskini ifade eder. HBe antijenine kar ı antikorların ortaya çıkması viral ço almada dü ü oldu u gösterir ve genellikle hastalı ın ilerleyi i ile ilgili olumlu bir klinik tahmini temsil eder). 3 - TEST PRENS B a) HBe antijeninin algılanm ası Ag HBe antijeninin algılanması iki zamanlı sandviç tipi immünoenzimatik bir tekni e dayanır; bu teknik bir insan Anti-HBe antikoru ve farklı epitopları tanıyan murin kaynaklı (Acm1 ve Acm2) i aretlenmi bir çift monoklonal Anti-HBe antikoru kullanır. Solid faz, insan Anti-HBe antikorları ile duyarlıla tırılmı 8 polistiren kaptan olu an 12 eritten olu maktadır. ki monoklonal antikor peroksidaz ile birle tirilmi tir. Dozaj a a ıdaki reaksiyonel a amaları içerir: 1. Solid faza sabitlenen ilk insan Anti-HBe antikoru mevcut iken gerçekle tirilen numune ve kontrol inkübasyonu. 2. Yıkama, ardından peroksidaz ile i aretlenmi monoklonal antikor çifti ile çözünmez kılınmı komplekslerin inkübasyona tabi tutulması. 3. Yıkama yoluyla, serbest kalan konjugatın elimine edilmesi, ardından substrat ilavesi ile solid faza ba lı enzimatik faaliyetin develope edilmesi. 4. Developmanın durdurulması; ardından, 450/620 nm'de optik yo unlukların okunması ve sonuçların yorumlanması. b) Anti-HBe antikorlarının algılanması Anti-HBe antikorlarının algılanması için, kit Anti HBe için kullanılan solid fazın aynısını kullanır. Test, nötrle tirme reaktifi olarak kullanılan plazma kökenli sınırlı miktardaki HBe antijeni kar ısında, çözünmez kılınmı antikor ile numunede mevcut antikor arasında gerçekle en kompetisyon prensibine dayanmaktadır. Developman daha sonra, peroksidaz ile i aretlenmi ba ka bir çift monoklonal antikor karı ımı (Acm1 ve Acm2) yardımıyla gerçekle tirilir. Test a a ıdaki reaksiyonel a amaları içerir: 1. Solid faza sabitlenen ilk insan Anti-HBe antikoru ve nötrle tirme antijeni mevcut iken gerçekle tirilen numune ve kontrol inkübasyonu. 2. Yıkama, ardından peroksidaz ile i aretlenmi monoklonal antikor çifti ile çözünmez kılınmı komplekslerin inkübasyona tabi tutulması. 3. Yıkama yoluyla, serbest kalan konjugatın elimine edilmesi, ardından substrat ilavesi ile solid faza ba lı enzimatik faaliyetin develope edilmesi. 4. Developmanın durdurulması; ardından, 450/620 nm'de optik yo unlukların okunması ve sonuçların yorumlanması. 3

4 4 - K T N Ç NDEK LER Tüm reaktifler "in-vitro" te his amacıyla kullanılmaya yöneliktir Reaktifler 1 ila 12 ba ımsız i lem eklinde 2 x 96 ölçüm gerçekle tirmek için yeterli miktarda verilmi tir: yani 96 Ag HBe ölçümü ve 96 Ac HBe ölçümü ya da e zamanlı olarak 2 x 48 Ag HBe ölçümü ve 2 x 48 Anti-HBe ölçümü. ET KETLEME REAKT FLER N N TEL SUNUM R1 M KROPLAKA: Etkisiz hale getirilmi, Ag HBs açısından pozitif serumlardan elde edilen insan Anti-HBe antikorları ile duyarlı kılınmı 8 kaptan olu an 12 erit 2 plaka R2 KONSANTRE YIKAM A SOLÜSYONU (20X) NaCl ph 7,4 Tris Tamponu Koruyucu: ProClin 300 (%0,04) 235 ml R3 NEGAT F KONTROL (Ag HBe/ANTI-HBe TESTLER Ç N ORTAK) Anti- HIV1 ve anti-hiv 2 antikorları, HBs antijeni ve anti-hcv antikorları açısından negatif insan serumu Koruyucu: % 0,1 sodyum azid 8 ml R4 ANT -HBe TEST POZ T F KONTROLÜ Anti-HBe antikorları içeren ve potansiyel olarak AgHBs açısından pozitif, anti-hiv1 antikorları ve anti- HIV2 ve anti-hcv antikorları açısından negatif, etkisiz hale getirilmi insan serumu Koruyucu: % 0,1 sodyum azid 1,5 ml R5 Ag HBe TEST POZ T F KONTROLÜ Fibrinsiz insan plazması veya Ag HBe ve Ag HBs açısından pozitif, anti- HIV1, anti-hiv2 antikorları ve anti-hcv antikorları açısından negatif serum içeren, etkisiz hale getirilmi sentetik sulandırıcı Koruyucu: % 0,1 sodyum azid 1,5 ml R6 NÖTRLE T RME ANT JEN Fibrinsiz insan plazması veya Ag HBe ve Ag HBs açısından pozitif, anti- HIV1, anti-hiv2 antikorları ve anti-hcv antikorları açısından negatif serum içeren, etkisiz hale getirilmi sentetik sulandırıcı Koruyucu: % 0,1 sodyum azid 8 ml R7a 5X KONSANTRE, ANT -HBe TEST KONJUGATI Peroksidaz ile ba lantılı 2 adet Anti-HBe monoklonal murin antikoru (Acm1 ve Acm2)* 3 ml R7b 5X KONSANTRE, AG HBe TEST KONJUGATI Peroksidaz ile ba lantılı 2 adet Anti-HBe monoklonal murin antikoru (Acm1 ve Acm2)* 3 ml R8 R9 R10 PEROKS DAZ SUBSTRAT TAMPONU % 0,015 H2O2 ve % 4 dimetilsülfoksit (DMSO) içeren sitrik asit ve sodyum asetat ph 4,0 solüsyonu KROMOJEN Tetrametil benzidin (TMB) içeren pembe renkli solüsyon DURDURMA SOLÜSYONU 1 N sülfürik asit solüsyonu SULANDIRILMI R2 Ç N BO E 60 ml 5 ml 28 ml 25 ml * acm1/acm2 oranları R7a ve R7b konjugatlarından her biri için farklıdır. Bu iki konjugatı birbirinin yerine kullanmayın. 4

5 5 - GEREKL OLAN ANCAK ÜRÜNLE B RL KTE VER LMEYEN MALZEMELER Damıtık veya tamamen demineralize su. Çama ır suyu veya sodyum bikarbonat. Emici kâ ıt. Tek kullanımlık eldivenler. Tek kullanımlık (12 x 75 mm) polistiren borular. 50 l, 100 l, 200 l ve 1 ml'lik hacimler da ıtabilen ayarlanabilir veya sabit, otomatik veya yarı otomatik pipetler 10 ml, 50 ml, 100 ml, ml dereceli deney tüpleri Vorteks tipi çalkalayıcı Kontamine atık konteyneri Mikroplakalar* için otomatik, yarı otomatik veya manüel yıkama sistemi 37 C ± 1 C* termostatlı benmari veya kuru inkübatör 450 nm ve 620 nm* filtrelerle donatılmı, mikroplaka okuma cihazı (*) Teknik servislerimiz tarafından onaylanan cihazlar konusunda tam bilgi edinmek için bize danı ınız. 6 - ÖNLEMLER Elde edilecek sonuçların kalitesi a a ıdaki laboratuar uygulamalarına tam olarak uyulmasına ba lıdır: Aynı deney sırasında farklı partilere ait reaktifleri birbirine karı tırmayın. NOT: Aynı deney boyunca hep aynı partiyi kullanmak kaydıyla, kitte teslim edilenlerden farklı yıkama solüsyonu (etiketin üzerindeki ye il 20X ibaresi ile tanıtılan, R2), substrat tamponu (mavi TMB buf. ibaresi ile tanıtılan, R8), kromojen (menek e rengi TMB 11X. ibaresi ile tanıtılan, R9) ve durdurma solüsyonu (kırmızı 1N ibaresi ile tanıtılan, R10) partileri kullanmak mümkündür. Bu reaktifler irketimizin di er ürünleri ile birlikte kullanılabilir. Ayrıca, belli bir deneyde bir tek karı ımın kullanılması kaydıyla, yıkama solüsyonu (etiketin üzerindeki ye il 20X ibaresi ile tanıtılan, R2) düzgün bir ekilde yeniden olu turulan farklı Bio-Rad reaktif kitlerine dahil edilmi di er iki yıkama solüsyonundan biri ile (etiketin üzerindeki mavi bir 10X veya turuncu bir 10X ibaresi ile tanıtılan, R2) karı tırılabilir. Ayrıntılı bilgi edinmek için teknik servislerimizle irtibat kurunuz. Test ismi ve test özel tanıtım numarası her mikroplaka çerçevesinin üzerinde belirtilmi tir. Bu özel tanıtım numarası her eridin üzerinde de yer alır. Monolisa HBe Ag-Ab PLUS: Özel Tanıtım Numarası = 56. Bu tanıtım numarası her kullanımdan önce kontrol edilmelidir. Test numarası bulunmayan veya yukarıda bahsi geçen test numarasından farklı olan hiçbir erit, kullanılmamalıdır. Son kullanma tarihi geçen reaktifleri kullanmayın. Kullanımdan önce, reaktiflerin ortam sıcaklı ında (18-30 ) dengelenmesi için, 30 dakika ve sulandırılmı yıkama solüsyonu (R2) için bir saat bekleyin. Her türlü kontaminasyonu önleyerek, reaktifleri özenle tekrar olu turun Konjugatların enzimatik faaliyetini bozabilecek reaktif buharlar (asitler, alkaliler, aldehitler) veya tozlar mevcut iken test yapmayın. Damıtık su ile mükemmel bir ekilde yıkanmı cam aletler veya tercihen tek kullanımlık donanım kullanın. Yıkama i leminin sonu ile reaktiflerin da ıtımı arasında geçen sürede mikroplakanın kurumasına izin vermeyin. Her serum için yeni bir da ıtım konisi kullanın. Kapların yıkanması, yapılan i lemler açısından önemli bir a ama te kil eder: tavsiye edilen yıkama döngüleri sayısına uyun ve tüm kapların tamamen doldurulup, ardından tamamen bo altılmasına özen gösterin. Kötü bir yıkama i lemi yanlı sonuçlar elde edilmesine yol açar. Konjugatı ve developman solüsyonunu da ıtmak için asla aynı kabı kullanmayın. Pipetlerin do rulu unu ve hassasiyetini ve kullanılan cihazların düzgün çalı tı ını konrol edin. lem protokolünü de i tirmeyin. Enzimatik developman solüsyonunu da ıtmadan önce kontrol edin. Bu solüsyon pembe renkte olmalıdır. Solüsyonun rengi mavimsi ise, developman solüsyonu bozulmu tur ve testte kullanılamaz. 5

6 7 - H JYEN VE GÜVENL K T AL MATLARI Çantadaki tüm reaktifler "in vitro" te his amacıyla kullanılmaya yöneliktir. Reaktifler ve numuneleri kullanırken tek kullanımlık eldivenler giyin ve söz konusu maddeleri kullandıktan sonra ellerinizi özenle yıkayın. "A zınızla pipetlemeyin". R3 reaktifinin (negatif kontrol) hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı malzeme, Hepatit B virüsü yüzey antijeni (Ag HBs), HIV virüslerine yönelik (HIV-1 ve HIV-2) antikorlar ve Hepatit C (anti-hcv) virüsüne yönelik antikorlar açısından kontrol edilmi ve reaktif olmadı ı belirlenmi tir. R1 reaktifinin (duyarlı kılınmı plaka) hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı malzeme HIV virüslerine yönelik antikorlar (antihiv-1 ve anti-hiv-2) ve hepatit C virüsüne (HCV) yönelik antikorlar açısından kontrol edilmi ve reaktif olmadı ı belirlenmi tir. Bu malzeme hepatit B virüsü yüzey antijeni (Ag HBs) açısından reaktiftir. Muhtemelen fotokimyasal olarak etkisiz hale getirilmi tir. R4 (AntiHBe testi pozitif kontrolü), R5 (Ag HBe testi pozitif kontrolü) et R6 (nötrle tirme antijeni) reaktiflerinin hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı malzeme, HIV virüslerine yönelik antikorlar (anti-hiv-1 et antihiv-2) ve anti-hcv antikorları açısından kontrol edilmi ve reaktif olmadı ı belirlenmi tir. R5 ve R6 reaktifleri hepatit B virüsü yüzey antijeni (Ag HBs) açısından pozitiftir; R4 reaktifi hepatit B virüsü yüzey antijeni (Ag HBs) açısından potansiyel olarak pozitiftir. Bu reaktifler fotokimyasal olarak etkisiz hale getirilmi tir. Hiçbir yöntem HIV, HBV, HCV virüslerinin veya di er bula ıcı ajanların bir ortamda bulunmadı ını kesin bir ekilde garanti edemedi i için, insan kaynaklı reaktifleri ve hasta numunelerini potansiyel olarak bula ıcı malzeme addedin ve ola an önlemler ile kullanın. Numuneler ve insan kaynaklı reaktifler ile do rudan temas eden malzemeyi ve ayrıca yıkama solüsyonlarını kontamine ürünler addedin. Numunelerin veya bunları içeren solüsyonların sıçramasına engel olun. Kirlenen yüzeyler % 10 sulandırılmı çama ır suyu ile temizlenecektir. Bula an sıvı bir asit ise, kirlenen yüzeyler önceden sodyum bikarbonat ile nötrle tirilecek, ardından çama ır suyu ile temizlenecek ve emici kâ ıt ile kurutulacaktır. Temizleme i leminde kullanılan malzeme kontamine atıklar için öngörülmü özel bir konteynere atılmalıdır. nsan kaynaklı numuneler ve reaktifler ve kontamine malzeme ve ürünler, bula ıcı özellikleri giderildikten sonra atılacaktır: - Bu i lem, ya % 5 sodyum hipoklorit son konsantrasyonlu çama ır suyuna (10 hacim kontamine sıvı veya su için, 1 hacim çama ır suyu) 30 dakika boyunca batırılarak, - Ya da minimum 2 saat boyunca 121 C'de otoklavlama vasıtasıyla gerçekle tirilir. Otoklavlama, HIV ve HBV virüslerini etkisiz hale getirmek için en iyi yöntemdir. D KKAT: SODYUM H POKLOR T ÇEREN SOLÜSYONLARI OTOKLAVIN Ç NE SOKMAYIN. Solüsyonları veya yıkama atık sıvılarını veya biyolojik numuneler içeren herhangi bir sıvıyı lavaboya atmadan önce, nötrle tirmeyi ve/veya otoklavlamayı unutmayın. Güvenlik verileri fi i talep üzerine verilmektedir. Kimyasal ürünler do ru laboratuar uygulamalarına göre kullanılmalı ve atılmalıdır. Substrat tamponunun, kromojenin ve durdurma solüsyonunun cilt ve mukozalar ile hiçbir ekilde temas etmesine izin vermeyin (toksisite, tahri veya yanık riski). Bazı reaktifler sodyum azotür içerir. Bu bile ik kur un veya bakır kanalizasyonlar ile birlikte son derece patlayıcı özelliklere haiz azotürler olu turabilir. Bu tür azotürlerin kanalizasyonlarda birikmesine engel olmak için, bu reaktifleri lavaboya atarken nötrle tirin ve lavaboyu bol miktarda su ile yıkayın. Bazı reaktifler ProClin 300 (% 0,04, % 0,1 ve/veya % 0,5) içerir Xi Tahri eder R43: Cilt ile temas etmesi halinde duyarlıla maya yol açabilir S28-37: Cildinizle temas ettikten sonra, derhal su ve sabun ile bol bol yıkanın. Uygun eldivenler takın. 8 - REAKT FLER N YEN DEN OLU TURULMASI Not: Kullanımdan önc e, reaktiflerin ortam sıcaklı ında (18-30 C) dengelenmesini sa layın Mikroplak a (R1) 12 erit içeren her ta ıyıcı çerçeve kapalı alüminyum po et içine konulmu tur. Po eti makas veya bıçak ile birle me noktasının 0,5 ila 1 cm üzerinde kesin. Po eti açın ve çerçeveyi po etten çıkarın. Kullanılmayan eritleri tekrar po etin içine yerle tirin. Po eti özenle kapatın ve yeniden +2-8 C sıcaklıkta muhafaza edin. Konsantre yıkama solüsyonu (20X): R2 Solüsyonu damıtık su ile 20 kez sulandırın.. Bu ekilde, kullanıma hazır yıkama solüsyonu elde edilir. Bir erit için 75 ml kullanıma hazır solüsyon gerekir. Homojenle tirin. 6

7 KONJUGATLAR Anti -HBe Test Konjugatı (R7a) Kullanılan erit sayısına göre, R7a solüsyonunu önceden sulandırılmı olan R2 solüsyonunda 1/5 oranında sulandırın: Kullanılan erit sayısı R7a solüsyon hacmi (ml) R2 ile sulandırılmı miktar 1 0, , , , , , , , , ,4 12 Homojenle tirin. Konjugat sırasıyla, kullanıma hazır 80 l sulandırılmı R2, ardından 20 l 5X konjugat ilave edilerek, önceden sulandırılmadan da kullanılabilir. Çalkalayın. Ag HBe Test Konjugatı (R7b) R7a konjugatı için kullanılan protokolün aynısını kullanın. Enzimatik developman solüsyonu (R8 + R9) 1/11 oranında sulandırmaya dikkat ederek, reaktif R9'u reaktif R8'e karı tırın (10 hacim R8 içinde, 1 hacim R9). Homojenle tirin. 1 ila 10 erit için, 10 ml gerekli ve yeterlidir. 9 - SAKLAMA - SON KULLANMA TAR H Kit +2-8 C sıcaklıkta saklanmalıdır C sıcaklıkta saklanan kitteki her unsur kutunun üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir (özel bir uyarı bulunmadı ı takdirde). R1: Vakumlu po etin açılmasından sonra, +2-8 C sıcaklıkta muhafaza edilen ve özenle kapatılan orijinal ambalajlarındaki eritler 1 ay dayanabilir. R2: Sulandırılmı yıkama solüsyonu C sıcaklıkta 2 hafta saklanabilir. Konsantre yıkama solüsyonu (R2) C sıcaklıkta muhafaza edilebilir. R7a: Anti-HBe testinin sulandırılmı konjugatı ortam sıcaklı ında (18-30 C) 8 saat saklanabilir. Sulandırılmı konjugat ı ık almayan bir yerde, ortam sıcaklı ında (18-30 C) saklanmalıdır. R7b: Ag-HBe testinin sulandırılmı konjugatı ortam sıcaklı ında (18-30 C) 8 saat saklanabilir. Sulandırılmı konjugat ı ık almayan bir yerde, ortam sıcaklı ında (18-30 C) saklanmalıdır. R8 + R9: Yeniden olu turulduktan sonra, karanlıkta saklanan reaktifler ortam sıcaklı ında (18-30 C) 6 saat boyunca kullanılabilir NUMUNELER Ola an uygulama yöntemleriyle bir kan numunesi alın. Testler sulandırılmamı serum veya plazma numuneleri üzerinde yapılacaktır (numuneler EDTA, heparin, sitrat gibi antikoagülanlar ile alınır). Çok belirgin bir hemoliz test performanslarını etkileyebilir. Agrega içeren numuneler testten önce santrifugasyon ile arıtılmalıdır. Süspansiyon halindeki partiküller veya fibrin agregaları yanlı pozitif sonuçlar elde edilmesine yol açabilir. Tarama 7 gün içinde yapılır ise, numuneler +2-8 C sıcaklıkta saklanacaktır veya -20 C sıcaklıkta dondurulmu olarak birkaç ay saklanabilecektir. Dondurma/Çözdürme i lemlerini tekrarlamaktan kaçının. 3 defadan fazla dondurulan ve çözdürülen numuneler kullanılmamalıdır. E er numuneler ta ınacak ise, bunları etyolojik ajanların ta ınması ile ilgili yürürlükteki mevzuata uygun ekilde ambalajlayın ve tercihen dondurulmu olarak ta ıyın. KONTAM NE VEYA H PERL PEM K VEYA H PERHEMOL ZE TAB TUTULMU VEYA H PERPROTE NL SERUMLAR KULLANMAYIN NOT: 100 mg/l'ye kadar bilirubin içeren numunelerde ve ayrıca 36 gr/l'ye kadar triolein içeren lipemik numunelerde ve 2,5 mg/ml'ye kadar hemoglobin içeren hemolizli numunelerde hiçbir etkile im ispatlanamamı tır. 7

8 45 mg/ml albumin ile a ırı yükleme yapılmı negatif numunelerde, oranlarda hiperproteinemiyi takit eden bir azalma gözlemlenmi tir ÇALI MA ARTLARI 8 Ag HBe ve Anti-HBe testleri aynı plaka üzerinde yapılabilir. Bu durumda, size a a ıdakileri tavsiye ediyoruz: Anti-HBe testi: Sütun 1 ila 6 Ag HBe testi: Sütun 7 ila 12 Yıkama için, asgari hacim, yıkama ve hazne ba ına 0,55 ml'dir. a) Anti-HBe test protokolü 1. Yıkama solüsyonunu hazırlayın. 2. Ta ıyıcı çerçeve ile gerekli sayıda eridi koruyucu ambalajdan çıkarın. Kullanılmayan eritleri tekrar ambalajın içine yerle tirin ve ambalajı kapatın. 3. Kaplara art arda a a ıdaki malzemeleri da ıtın (önerilen plaka planı): A1, B1, C1: 100 l negatif kontrol (R3) D1: 100 l pozitif kontrol (R4) E1, F1, G1: 100 l bilinmeyen numune. Kullanılan sisteme ba lı olarak, kontrollerin konumu veya da ıtım sırası de i tirilebilir. Not: Görsel olarak, effaf bo bir kap ile numune içeren (açık sarı) bir kap arasında net bir renk farkı görülebilir. 490 nm'de fotometrik ölçüm yapılarak kaplarda numune olup olmadı ı kontrol edilebilir (bkz. bölüm 13: REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ). 4. Her kaba hızlı bir ekilde 50 l nötrle tirici antijen (R6) ilave edin. Homojenle tirin. Üstünü yapı kan bir filmle örtün; 37 C ± 1 C sıcaklıkta 3 saat ± 10 dakika inkübe edin. Not: Görsel olarak, nötrle tirici antijen R6'nın ilave edilmesinden sonra pembe bir renk gözlemlenebilir. 490 nm'de yapılan fotometrik bir okuma ile kaplarda nötrle tirici antijen R6 bulunup bulunmadı ı kontrol edilebilir. (bkz. bölüm 13: REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ). 5. R7a konjugat solüsyonunu ilk inkübasyon sona ermeden önce hazırlayın. 6. Yapı kan filmi çıkarın; her kabın içeri ini çekerek atık konteynerine bo altın, ardından dört kez yıkayın. 7. Önceden sulandırılmı 100 l R7a konjugat solüsyonunu hızlı bir ekilde her kaba da ıtın (bkz. bölüm 8: REAKT FLER N YEN DEN OLU TURULMASI) veya, konjugat önceden sulandırılmadan da kullanılabilece inden, her kaba sırasıyla, 80 l sulandırılmı R2, ardından 20 l R7a konjugatı ilave edin. Homojenle tirin. Üstünü yapı kan bir filmle örtün ve 37 C ± 1 C sıcaklıkta 30 dakika (minimum 25 dakika, maksimum 40 dakika) inkübe edin. Yapı kan filmi çıkarın; her kabın içeri ini çekerek atık konteynerine bo altın, ardından be kez yıkayın. Not: Görsel olarak, konjugat R7a'nın ilave edilmesinden sonra mor bir renk gözlemlenebilir. 620 nm'de yapılan fotometrik bir okuma ile kaplarda konjugat R7a bulunup bulunmadı ı kontrol edilebilir. (bkz. bölüm 13: REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ). 8. Enzimatik developman solüsyonunu (R8 + R9) hazırlayın 9. Her kaba hızlı bir ekilde 80 l developman solüsyonu ilave edin ve plakayı 30 dakika ± 5 dakika karanlıkta ve ortam sıcaklı ında ( C) tutun. Not: Pembe renkte olan developman solüsyonunun da ıtılması, i lemlerin bu a amasında görsel olarak kontrol edilebilir. Bo bir kap ile pembemsi renkteki developman solüsyonunu içeren bir kap arasında önemli bir renk farkı vardır (otomatik kontrol için paragraf 13'e ba vurun: NUMUNE VE REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ). 10. Her kaba hızlı bir ekilde 100 l durdurma solüsyonu (R10) ilave edin. Not: Renksiz olan durdurma solüsyonunun da ıtılması, i lemlerin bu a amasında görsel olarak kontrol edilebilir. Substratın pembemsi (negatif numuneler için) veya mavi (pozitif numuneler için) olan rengi, durdurma solüsyonu ilave edildikten sonra renksiz hale gelen (negatif numuneler için) veya rengi sarıya dönen (pozitif numuneler için) kaplardan kaybolur. 11. Okuma yapmadan önce 4 dak. bekleyin. 12. Plakanın altını özenle silin ve reaksiyonun sona ermesini müteakip 30 dakika içerisinde 450/620 nm'de optik yo unlu u okuyun. b) Ag HBe test protokolü 1. Yıkama solüsyonunu hazırlayın. 2. Ta ıyıcı çerçeve ile gerekli sayıda eridi koruyucu ambalajdan çıkarın. Kullanılmayan eritleri tekrar ambalajın içine yerle tirin ve ambalajı kapatın. 3. Kaplara art arda a a ıdaki malzemeleri da ıtın (önerilen plaka planı): A1, B1, C1: 100 l negatif kontrol (R3) D1: 100 l pozitif kontrol (R5) E1, F1, G1: 100 l bilinmeyen numune Kullanılan sisteme ba lı olarak, kontrollerin konumu veya da ıtım sırası de i tirilebilir. Not: Görsel olarak, effaf bo bir kap ile numune içeren (açık sarı) bir kap arasında net bir renk farkı görülebilir. 490 nm'de fotometrik ölçüm yapılarak kaplarda numune olup olmadı ı kontrol edilebilir (bkz. bölüm 13: REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ).

9 4. Üstünü yapı kan bir filmle örtün; 37 C ± 1 C sıcaklıkta 3 saat ± 10 dakika inkübe edin. 5. R7b konjugat solüsyonunu ilk inkübasyon sona ermeden önce hazırlayın. 6. Yapı kan filmi çıkarın; her kabın içeri ini çekerek atık konteynerine bo altın, ardından dört kez yıkayın. 7. Önceden sulandırılmı 100 l R7b konjugat solüsyonunu hızlı bir ekilde her kaba da ıtın (bkz. bölüm 8: REAKT FLER N YEN DEN OLU TURULMASI) veya konjugat önceden sulandırılmadan da kullanılabilece inden, her kaba sırasıyla, 80 l sulandırılmı R2, ardından 20 l R7b konjugatı ilave edin. Homojenle tirin. Üstünü yapı kan bir filmle örtün ve 37 C ± 1 C sıcaklıkta 30 dakika (minimum 25 dakika, maksimum 40 dakika) inkübe edin. Not: Görsel olarak, konjugat R7b'nin ilave edilmesinden sonra turkuaz mavisi bir renk gözlemlenebilir. 620 nm'de yapılan fotometrik bir okuma ile kaplarda konjugat R7b bulunup bulunmadı ı kontrol edilebilir. (bkz. bölüm 13: REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ). 8. Filmi çıkarın; her kabın içeri ini atık konteynerine bo altın, ardından be kez yıkayın. 9. Enzimatik developman solüsyonunu (R8 + R9) hazırlayın 10. Her kaba hızlı bir ekilde 80 l developman solüsyonu ilave edin ve plakayı 30 dakika ± 5 dakika karanlıkta ve ortam sıcaklı ında ( C) tutun. Not: Pembe renkte olan developman solüsyonunun da ıtılması, i lemlerin bu a amasında görsel olarak kontrol edilebilir. Bo bir kap ile pembemsi renkteki developman solüsyonunu içeren kap arasında önemli bir renk farkı vardır. (otomatik kontrol için paragraf 13'e ba vurun: NUMUNE VE REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ). 11. Her kaba hızlı bir ekilde 100 l durdurma solüsyonu (R10) ilave edin. Not: Renksiz olan durdurma solüsyonunun da ıtılması, i lemlerin bu a amasında görsel olarak kontrol edilebilir. Substratın pembemsi (negatif numuneler için) veya mavi (pozitif numuneler için) olan rengi, durdurma solüsyonu ilave edildikten sonra renksiz hale gelen (negatif numuneler için) veya rengi sarıya dönen (pozitif numuneler için) kaplardan kaybolur. 12. Okuma yapmadan önce 4 dak. bekleyin. 13. Plakanın altını özenle silin ve reaksiyonun sona ermesini müteakip 30 dakika içerisinde 450/620 nm'de optik yo unlu u okuyun. c) Aynı plaka üzerinde Anti-H Be ve Ag HBe test protokolü Protokoller daha önce tanımlananlar ile tamamen aynıdır. Sadece plaka üzerindeki dizili düzeni farklıdır. Anti-HBe testi: Sütun 1 ila 6 Ag HBe testi: Sütun 7 ila HESAPLAMALAR VE SONUÇLARIN YORUMLANMASI a) Anti-HBe testi: 1. Negatif kontrollerin ortalama optik yo unlu unu hesaplayın: R3 OPT K YO UNLU U Örnek: Negatif Kontrol R3 OPT K YO UNLUK 1 1, , ,552 Toplam = 4,569 Ortalama R3 Optik Yo unlu u = 4,569 / 3 = 1,523 Optik Yo unluk de eri ortalamadan %25 sapma gösterdi inde, bir negatif kontrolün de erini elimine etmek mümkündür. Bu durumda, ortalamayı di er iki de er üzerinden hesaplayın. 2. E ik de erin hesaplanması Her plaka için, e ik de er: E ik de er = VS = R3 OPT K YO UNLU U x 0,4 Örnek: R3 OPT K YO UNLU U = 1,523 VS = 1,523 x 0,4 = 0, Anti-HBe testinin onaylanması R3 OPT K YO UNLU U > 0,900 R4 OPT K YO UNLU U < 0, Oranların hesaplanması Her numune için oranı hesaplayın: Oran= Numune Optik Yo unluk De eri/vs 9

10 5. Sonuçların Yorumlanması Oranı 0,9 de erine e it veya bu de erin altında olan tüm numuneler pozitif kabul edilir (oran 0,9). Oranı 1,1 de erinin üzerinde olan tüm numuneler negatif kabul edilir (oran > 1,1). 0,9 ile 1,1 arasındaki oranlar için (0,9 < oran 1,1), daha sonra alınacak bir numunede tekrar anti HBe ara tırması yapılması tavsiye edilir. Pozitif numunelerin çift olarak tekrar teste tabi tutulması tavsiye edilir. Testin tekrarlanmasından sonra, 2 çiftten en az birinin de eri pozitif ise, numune pozitif addedilir. b) Ag HBe testi 1. Negatif kontrollerin ortalama optik yo unlu unu hesaplayın: R3 OPT K YO UNLU U Örnek Negatif Kontrol R3 OPT K YO UNLUK 1 0, , ,026 Toplam = 0,071 Ortalama R3 OPT K YO UNLU U= 0,071 / 3 = 0,024 OPT K YO UNLUK de eri ortalamadan %25 sapma gösterdi inde, bir negatif kontrolün de erini elimine etmek mümkündür. Bu durumda, ortalamayı di er iki de er üzerinden hesaplayın. 2. E ik de erin hesaplanması Her plaka için, e ik de er: E ik de er = VS = R3 OPT K YO UNLU U + 0,025 Örnek: R3 OPT K YO UNLU U = 0,024 Adım = 0,025 VS = 0,024+ 0,025 = 0, Ag HBe testinin onaylanması R3 OPT K YO UNLU U < 0,060 R5 OPT K YO UNLU U > 0, Oranların hesaplanması Her numune için oranı hesaplayın: Numune Opt. Yo. Oran = VS 5. Sonuçların Yorumlanması Oranı 1 de erinin altında olan tüm numuneler negatif kabul edilir (oran < 1). Oranı 1 de erine e it veya bu de erin üstünde olan tüm numuneler pozitif kabul edilir (oran 1). Pozitif numunelerin çift olarak tekrar teste tabi tutulması tavsiye edilir. Testin tekrarlanmasından sonra, iki çiftten en az birinin de eri pozitif ise, numune pozitif addedilir REAKT F LAVELER N N SPEKTROFOTOMETR LE KONTROL ED LMES ANT -HBe TEST NUMUNE VE KONTROL LAVES N N KONTROL ED LMES Kaplarda numune ve kontrol bulunup bulunmadı ı 490 nm'de yapılacak fotometri ölçümü ile kontrol edilebilir. OPT K YO UNLUK de eri 0,050'nin üzerinde olmalıdır. Görsel olarak, effaf bo bir kap ile numune içeren (açık sarı) bir kap arasında net bir renk farkı gözlemlenebilir. NÖTRLE T RME Ag LAVES N N (R6) KONTROL ED LMES Kaplarda R6 bulunup bulunmadı ı, 490 nm'de yapılan bir okuma vasıtasıyla, OPT K YO UNLUK delta de erinin hesaplanması ile kontrol edilebilir. OPT K YO UNLU K Delta De eri = (numune (veya kontrol) ve nötrle tirici antijen R6 mevcut iken 490 nm'de kabın OY de eri) (sadece numune (veya kontrol) mevcut iken 490 nm'de kabın OY de eri). OPT K YO UNLUK farkı 0,150'nin üzerinde olmalıdır. Görsel olarak, R6'nın ilave edilmesinden sonra pembe bir renk gözlemlenebilir. KONJUGAT (R7a) LAVES N N KONTROL ED LMES Konjugat bulunup bulunmadı ı 620 nm'de yapılan fotometrik bir okuma ile kontrol edilebilir. OPT K YO UNLUK de eri 0,070 ile 0,200 arasında olmalıdır (0,070 OY 0,200) Görsel olarak, R7a'nın ilave edilmesinden sonra mor bir renk gözlemlenebilir. 10

11 DEVELOPMAN SOLÜ SYONU LAVES N N KONTROL ED LMES (R8+R9) Developman solüsyonu bulunup bulunmadı ı, 490 nm'de yapılan fotometrik bir okuma ile kontrol edilebilir. OPT K YO UNLUK de eri 0,100'ün üzerinde olmalıdır. Görsel olarak, developman solüsyonunun ilave edilmesinden sonra, pembe bir renk gözlemlenebilir. HBe Ag TEST NUMUNE VE KONTROL LAVES N N KONTROL ED LMES Kaplarda numune ve kontrol bulunup bulunmadı ı 490 nm'de yapılacak fotometri ölçümü ile kontrol edilebilir. OPT K YO UNLUK de eri 0,050'nin üzerinde olmalıdır. Görsel olarak, effaf bo bir kap ile numune içeren (açık sarı) bir kap arasında net bir renk farkı gözlemlenebilir. KONJUGAT (R7b) LAVES N N KONTROL ED LMES Konjugat bulunup bulunmadı ı 620 nm'de yapılan fotometrik bir okuma ile kontrol edilebilir. OPT K YO UNLUK de eri 0,210'un üzerinde olmalıdır. Görsel olarak, R7b'nin ilave edilmesinden sonra turkuaz mavisi bir renk gözlemlenebilir. DEVELOPMAN SOLÜ SYONU LAVES N N KONTROL ED LMES (R8+R9) Developman solüsyonu bulunup bulunmadı ı, 490 nm'de yapılan fotometrik bir okuma ile kontrol edilebilir. OPT K YO UNLUK de eri 0,100'ün üzerinde olmalıdır. Görsel olarak, developman solüsyonunun ilave edilmesinden sonra, pembe bir renk gözlemlenebilir PERFORMANSLAR A a ıda özetlenen Monolisa HBe Ag/Ab PLUS testinin sonuçları kan donörlerinden, hastaneye yatırılmı hastalardan ve ticari panellerden alınan numuneleri kullanan iki kurulu ta de erlendirmeye tabi tutulmu tur. Ayrıca, analitik duyarlılık PEI standardı yardımıyla belirlenmi tir. HBe Ag Özgüllük 200 kan donöründen olu an bir popülasyonda incelenen özgüllük oranı, %100 [%98,51 - %100], (GA %95) olarak bulunmu tur. Özgüllük oranı ayrıca hastaneye yatırılmı hastalardan alınan numunelerde de incelenmi ve %100 [%99,28 %100] GA % 95 (416/416) olarak bulunmu tur. Hepatit B'ye ba lı olmayan farklı patoloji özelliklerine sahip 195 numune (viral ve bakteriyel enfeksiyonlar, romatoid, otoantikor, veya anti-fare faktörleri açısından pozitif numuneler, miyelom numuneleri, hamile kadınlardan alınan numuneler) teste tabi tutulmu tur. Bu popülasyonun özgüllük oranı %99,49 idi [%97,18- %99,99] (GA %95), yani 194/195 numune negatif bulunmu tur. 1 miyelom numunesi diskordans göstermektedir. Analitik Duyarlılık PEI Standardı yardımıyla belirlenen duyarlılık limiti 0,64 UI/ml [0,49 0,84] (GA %95) olarak bulunmu tur. Klinik Duyarlılık Duyarlılık, kronik hepatit hastalarından, ticari panellerden ve serokonversiyonlardan elde edilen 203 numune üzerinde test edilmi tir. Bu numunelerin tamamı üzerindeki duyarlılık %99,51 [%97,29 - %99,99] (GA %95) yani 202/203 numunedir. Hassasiyet Monolisa HBe Ag/Ab Plus (HBe Ag) testinin hassasiyeti 4 numune yardımıyla belirlenmi tir: HBe Ag açısından 1 negatif, 1 zayıf pozitif, 1 orta pozitif, 1 güçlü pozitif. Test içi inceleme, her numunenin aynı test sırasında 30 kez teste tabi tutulması ile gerçekle tirilmi tir. Testler arası inceleme, her numunenin çift olarak 20 gün boyunca günde 2 teste tabi tutulması ile gerçekle tirilmi tir. Sonuçlar öyledir: Tablo 1: Test içi n = 30 Numune 1 Numune 2 Numune 3 Numune 4 Oranların ortalaması 0,356 5,29 27,24 45,56 Standart sapma 0,05 0,35 0,63 2,88 Varyasyon Katsayısı (%) 14,20 6,53 2,31 6,33 11

12 Tablo 2: Testler arası n = 80 Numune 1 Numune 2 Numune 3 Numune 4 Oranların ortalaması 0,51 8,19 27,33 46,35 Standart sapma 0,12 1,17 3,26 4,98 Varyasyon Katsayısı (%) 23,86 14,27 11,92 10,74 HBe Ac Özgüllük 200 kan donöründen olu an bir popülasyonda incelenen özgüllük oranı, %100 [%98,51 - %100], (GA %95) olarak bulunmu tur. Özgüllük oranı ayrıca hastaneye yatırılmı hastalardan alınan 206 numunede de incelenmi ve %98,54 [%95,80 %99,70] GA %95 (203/206) olarak bulunmu tur. Hepatit B'ye ba lı olmayan farklı patoloji özelliklerine sahip (viral ve bakteriyel enfeksiyonlar, romatoid, otoantikor veya anti-fare faktörleri açısından pozitif numuneler, miyelom numuneleri, hamile kadınlardan alınan numuneler) 198 numune teste tabi tutulmu tur. 3 numune pozitif bulunmu tur (2 HCV numunesi ve 1 romatoid faktör numunesi). Bu popülasyonun özgüllük oranı %98,48 idi [%95,64- %99,69] (GA %95), yani 195/198 numune negatif bulunmu tur. Bu numuneler tekrar teste tabi tutulmu tur; romatoid faktör numunesi tekrar pozitif bulunmu tur; 2 HCV numunesi tekrar, ya negatif ya da üpheli bulunmu tur. Klinik Duyarlılık Duyarlılık, kronik hepatit hastalarından ve ticari panellerden elde edilen 220 numune üzerinde test edilmi tir. Bu numunelerin duyarlılı ı %98,64 [%96,07 - %99,72] (GA %95) yani 217/220 numunedir. Hassasiyet Monolisa HBe Ag/Ab Plus (HBe Ac) testinin hassasiyeti HBe Ac açısından 1 negatif, 1 zayıf pozitif, 1 orta pozitif, 1 güçlü pozitif numune olmak üzere, 4 numune yardımıyla belirlenmi tir. Test içi inceleme, her numunenin aynı test sırasında 30 kez teste tabi tutulması ile gerçekle tirilmi tir. Testler arası inceleme, her numunenin çift olarak 20 gün boyunca günde 2 teste tabi tutulması ile gerçekle tirilmi tir. Sonuçlar öyledir: Tablo 1: Test içi n = 30 Numune 1 Numune 2 Numune 3 Numune 4 Oranların ortalaması 3,15 0,69 0,42 0,03 Standart sapma 0,05 0,04 0,04 0,00 Varyasyon Katsayısı (%) %1,7 %5,7 %10,5 %6,6 Tablo 2: Testler arası n = 80 Numune 1 Numune 2 Numune 3 Numune 4 Oranların ortalaması 2,39 0,81 0,59 0,03 Standart sapma 0,23 0,077 0,09 0,01 Varyasyon Katsayısı (%) %9,6 %9,5 %14,5 %39,3 12

13 15 - KAYNAKÇA 1. MIYAKAWA Y.; MAYUMI M.; (1985) Hepatitis Be antigen and antibody (HBe Ag/Anti-HBe) in Hepatitis B. Academic Press., chap. 4: KANNO A.; OHORI H., MATSUDA K.; NAKAYAMA H.; MIYAZAKI Y.; ISHIIM.; SUZUKI H.; OHTSUKI M.; GOTO Y. (1 987) Virological significance of HBe Ag subtypes (HBe Ag/1 and HBe Ag/2) in patients with type B hepatitis. Hepatology; 7 (1) BRECHOT C.; (1987) Les marqueurs et la prévention des infections par le virus de l hépatite B en Encyclopédie Médicochirurgicale; Instantanés Médicaux, 4; THIERS V.; BOUCHARDEAU F.; COUROUCE A.M.; TIOLLAIS P.; BRECHOT C., (1986) L ADN du virus de l hépatite B comme marqueur de multiplication virale: comparaison avec l antigène HBe et l anticorps anti Hbe. La Presse Médicale: 15: LAROUZE B., PENALBA C., DAZZA M.C. (1983) Signification des marqueurs sériques du virus de l hépatite B. Biologiste et praticien; 56; ALDERSHVILE J., FROSNER G.G.; NIELSEN J.O.; HARDT F. DEINHARTD F.; SKINHOJ P., (1980) Hepatitis Be antigen and antibody measured by radioimmuno-assay in acute hepatitis B surface antigen positive hepatitis. J. Infect. dis.: 141 (3), TAKAHASHI K.; IMAI M., TSUDA F., TAKAHASHI T., MIYAKAWA Y. MAYUMI M. (1976) Association of Dane particles with e antigen in the serum of asymptomatic carriers of hepatitis B surface antigen. J. of Immunol. 117 (1);

14 IVD (GB) - CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro diagnostic medical devices) (FR) - Marquage CE (Directive européenne 98/79/CE relative aux dispositifs médicaux de diagnostic in vitro) (ES) - Marcado CE (Directiva europea 98/79/CE sobre productos sanitarios para diagnóstico in vitro) (IT) - Marchiatura CE (Direttiva europea 98/79/CE relativa ai dispositivi medico-diagnostici in vitro) (DE) - CE Konformitätskennzeichnung (Europäische Richtlinie 98/79/EG über In-vitro-Diagnostika) (PT) - Marcação CE (Directiva europeia 98/79/CE relativa aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro) (SE) - CE-märkning (Europeiskt direktiv 98/79/EG om medicintekniska produkter för in vitro-diagnostik) (DK) - CE-mærkningen (Europa direktiv 98/79/EF om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik) (GR) - CE ( 98/79/CE in vitro ) (PL) - CE oznaczenie (Dyrektywa unijna 98/79/CE dotycząca produktów medycznych do badań in vitro) (LT) - CE ženklas (Europos sąjungos direktyva 98/79/CE dėl in vitro diagnostikos medicinos prietaisų) (HU) - CE jelzés (98/79/CE Európai Irányelv az in vitro orvosi diagnosztikai eszközökről) (EE) - CE märgistus (Euroopa direktiiv 98/79/CE in vitro diagnostikameditsiiniseadmete kohta) (SK) - CE označenie o zhode (Európska direktíva 98/79/CE pre in vitro diagnostické zdravotnícke postupy) (CZ) - CE značka (Evropská direktiva 98/79/CE o diagnostických zdravotnických prostředcích in vitro) (NO) - CE-merking (EU-direktiv 98/79/CE om medisinsk utstyr til in vitro-diagnostikk) (RO) - Marca CE (Directiva europeana 98/79/CE pentru dispozitive medicale de diagnostic in vitro) (BG) - СЕ маркировка (Европейска директива 98/79/CE за ин витро диагностичните медицински изделия) (GB) - For in vitro diagnostic use (GB) - Catalogue number (FR) - Pour diagnostic in vitro (FR) - Référence catalogue (ES) - Para diagnóstico in vitro (ES) - Número de catálogo (IT) - Per uso diagnostico in vitro (IT) - Numero di catalogo (DE) - In-vitro-Diagnostikum (DE) - Bestellnummer (PT) - Para uso em diagnóstico in vitro (PT) - Número de catálogo (SE) - In vitro-diagnostik (SE) - Katalognummer (DK) - In vitro diagnose (DK) - Katalognummer (GR) - in vitro (GR) - (PL) - Do stosowania in vitro (PL) - Numer katalogu (LT) - in vitro diagnostikai (LT) - Katalogo numeris (HU) - Csak in vitro diagnosztikai alkalmazásra (HU) - Cikkszám (EE) - In vitro diagnostiliseks kasutamiseks (EE) - Katalooginumber (SK) - Na diagnostiku in vitro (SK) - Katalógové číslo (CZ) - Pro diagnostiku in vitro (CZ) - Katalogové číslo (NO) - Til in vitro-diagnostikk (NO) - Katalognummer (RO) - Pentru diagnostic in vitro (RO) - Număr de catalog (BG) - За ин витро диагностика (BG) - Каталожен номер (GB) - Manufacturer (GB) - Authorised Representative (FR) - Fabricant (FR) - Représentant agréé (ES) - Fabricante (ES) - Representante autorizado (IT) - Produttore (IT) - Distributore autorizzato (DE) - Hersteller (DE) - Bevollmächtigter (PT) - Fabricante (PT) - Representante Autorizado (SE) - Tillverkad av (SE) - Auktoriserad representant (DK) - Fremstillet af (DK) - Autoriseret repræsentant (GR) - (GR) - (PL) - Producent (PL) - Upoważniony Przedstawiciel (LT) - Gamintojas (LT) - Įgaliotasis atstovas (HU) - Gyártó (HU) - Meghatalmazott Képviselő (EE) - Tootja (EE) - Volitatud esindaja (SK) - Výrobca (SK) - Autorizovaný zástupca (CZ) - Výrobce (CZ) - Zplnomocněný zástupce (NO) - Produsent (NO) - Autorisert representant (RO) - Producător (RO) - Reprezentant autorizat (BG) - Производител (BG) - Упълномощен представител (GB) - Batch code (GB) - Expiry date YYYY/MM/DD (FR) - Code du lot (FR) - Date de peremption AAAA/MM/JJ (ES) - Código de lote (ES) - Estable hasta AAAA/MM/DD (IT) - Codice del lotto (IT) - Da utilizzare prima del AAAA/MM/GG (DE) - Chargen-Bezeichnung (DE) - Verwendbar bis JJJJ/MM/TT (PT) - Código do lote (PT) - Data de expiração AAAA/MM/DD (SE) - Batchnr (SE) - Utgångsdatum ÅÅÅÅ/MM/DD (DK) - Batchkoden (DK) - Anvendes før ÅÅÅÅ/MM/DD (GR) - (GR) - YYYY/MM/DD (PL) - Numer serii (PL) - Data ważności YYYY/MM/DD (LT) - Serijos numeris (LT) - Galioja iki YYYY/MM/DD (HU) - Gyártási szám (HU) - Szavatossági idő ÉÉÉÉ/HH/NN (EE) - Partii kood (EE) - Aegumistähtaeg AAAA/KK/PP (SK) - Číslo šarže (SK) - Použiteľné do RRRR/MM/DD (CZ) - Číslo šarže (CZ) - Datum exspirace RRRR/MM/DD (NO) - Partikode (NO) - Utløpsdato ÅÅÅÅ/MM/DD (RO) - Număr de lot (RO) - Data expirarii AAAA/LL/ZZ (BG) - Партиден номер (BG) - Срок на годност година/месец/ден

15 (GB) - Storage temperature limitation (FR) - Limites de températures de stockage (ES) - Temperatura límite (IT) - Limiti di temperatura di conservazione (DE) - Lagertemperatur (PT) - Limites de temperatura de armazenamento (SE) - Temperaturbegränsning (DK) - Temperaturbegrænsning (GR) - (PL) - Temperatura przechowywania (LT) - Saugojimo temperatūriniai apribojimai (HU) - Tárolási hőmérsékleti határok (EE) - Piirangud säilitustemperatuurile (SK) - Skladovacia teplota od do (CZ) - Teplotní rozmezí od do (NO) - Oppbevaringstemperatur (RO) - Limitele de temperatură la stocare (BG) - Температурни граници на съхранение (GB) - Consult Instruction for use (FR) - Consulter le mode d'emploi (ES) - Consulte las instrucciones de uso (IT) - Consultare le istruzioni per uso (DE) - Siehe Gebrauchsanweisung (PT) - Consulte o folheto informativo (SE) - Se bruksanvisningen (DK) - Se instruktion før brug (GR) - (PL) - Sprawdź instrukcję (LT) - Ieškokite informacijos vartojimo instrukcijoje (HU) - Olvassa el a használati utasítást (EE) - Kasutamisel vaata instruktsiooni (SK) - Katalógové číslo (CZ) - Viz návod k použití (NO) - Se bruksanvisninger (RO) - Consultati prospectul de utilizare (BG) - Виж инструкцията за употреба

16 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2009 Fax.: Code: