18 ölçüm LEM NE YÖNEL K DO RULAMA K T

Transkript

1 NEW LAV BLOT II 18 ölçüm ANT -HIV-2 NSAN ANT KORLARINI SERUM VEYA PLAZMADA MMÜNOBLOT YÖNTEM YLE ALGILAMA LEM NE YÖNEL K DO RULAMA K T malatçı kalite kontrolü Bio-Rad irketi tarafından imal edilen ve pazarlanan tüm ürünler, hammaddelerin teslim alınmasından nihai ürünlerin pazarlanmasına kadar bir kalite güvence sistemi kontrolündedir. Her nihai ürün partisi kalite kontrole tabi tutulur ve ancak kabul kriterlerine uydu u takdirde pazarlanır. Her partinin üretim ve kontrol dokümantasyonu irketimiz tarafından muhafaza edilir.

2 Ç NDEK LER 1. K T N AMACI 2. KL N K ÖNEM 3. TEST PRENS B 4. K T N Ç NDEK LER 5. ÖNLEMLER 6. H JYEN VE GÜVENL K TAL MATLARI 7. GEREKL OLAN ANCAK ÜRÜNLE B RL KTE VER LMEYEN MALZEMELER 8. REAKT FLER N YEN DEN OLU TURULMASI, SAKLANMASI VE SON KULLANMA TAR H 9. NUMUNELER N ALINMASI VE KULLANILMASI 10. ÇALI MA ARTLARI 11. SONUÇLARIN GEÇERL LAN ED LMES, OKUNMASI VE YORUMLANMASI 12. PERFORMANSLAR 13. TEST L M TLER 14. KAYNAKÇA 2

3 1 - K T N AMACI NEW LAV BLOT II kiti pozitif bir anti-hiv-2 yanıtını do rulamak ve AIDS te hisi çerçevesinde bu yanıtın antijenik özgüllü ünü belirtmek amacıyla, insan serumu veya plazmasındaki anti-hiv-2 antikorlarının immunodot yöntemiyle algılanmasına yöneliktir. 2 - KL N K ÖNEM nsan immünyetmezlik sendromu (AIDS) oldukça ayrı özelliklere sahip bir hastalık olarak 1981'de tanımlanmı ve kabul edilmi tir. Lentivirüs grubu ile akrabalı ı olan ve klasik serolojik testlerle ayırdedilemeyecek üç retrovirüs (LAV, HTLV III, ARV) AIDS'e yakalanmı veya bu hastalı ın ön belirtilerine sahip hastaların lenfositlerinde izole edilmi tir. 1986'da bu üç virüsü aynı klasifikasyon altında bir araya getirme kararı alınmı tır yılında, AIDS'e yakalanmı Batı Afrikalı hastalarda yeni bir retrovirüs (LAV II/HIV-2) izole edilmi tir. Bu virüs morfolojisi, tropizmi ve T4 lenfositleri üzerindeki sitopatojen etkisi bakımından açık bir ekilde HIV-1 ile ba lantılıdır. Yapılan genetik incelemeler bu virüsün özellikle kılıf bölgesinde HIV-1 virüsünden farklı oldu unu ve STLV III ile akrabalı ı oldu unu göstermi tir. Di er yandan, yapılan serolojik incelemeler de vakaların ço unda, hasta antikorlarının e zamanlı olarak HIV-1 ve HIV-2 virüslerinin dahili proteinlerini tanıdı ını göstermi tir, bununla birlikte, HIV-1 te his kitleri bazı serumları pozitif bulmamaktadır. Tarama, antikorların serum veya plazmalarda immünoenzimatik yöntemle algılanmasına dayanmaktadır. Bu testlerde kullanılan antijenlerin kalitesi bazı özgül olmayan yanıtların elimine edilmesine olanak tanımamaktadır. Konulan te hisin ciddiyeti dikkate alındı ında, tarama testlerinden elde edilen yanıtın ba ka bir teknikle do rulanması veya geçersiz ilan edilmesi zorunludur. DSÖ uzmanları HIV-1 virüsü için immünodot tekni inin (Western-BLot, mmünoblot) kullanılmasını tavsiye etmektedir. Bu teknik viral proteinlerden her birine yönelik antikorların karakterize edilmesini dolayısıyla seropozitifli in do rulanmasını sa lamaktadır. AIDS hastalı ı te hisinin konulması çerçevesinde, bu teknik HIV-1 veya HIV-2 virüs enfeksiyonlarının karakterize edilmesi için gereklidir. 3 - TEST PRENS B Test, HIV-2 virüsünü olu turan tüm proteinler ile dahili bir anti-igg kontrol içeren nitroselüloz bandı üzerinde indirekt ELISA prensibine dayanmaktadır. Dahili kontrol bandı, P16 reaksiyonundan önce bandın numaralandırılmamı uç tarafında bulunmakta ve numunenin, reaktiflerin ve i lem protokolünün düzgün i leyi inin do rulanmasını sa lamaktadır. Etkisiz hale getirilmi HIV-2 virüsünün proteinleri elektroforez ile moleküler a ırlıklarına göre poliakrilamid jel üstünde ayırıcı ve indirgeyici bir ortamda ayrılır, ardından elektroforezle nitroselüloz membran üzerine transfer edilir. Testin uygulanması a a ıdaki a amaları içerir: 1. Bantların tekrar nemlendirilmesi 2. Do rulanacak numunelerin veya kontrol serumlarının inkübasyona tabi tutulması. Anti-HIV-2 antikorları mevcut ise, bandın üzerindeki tanınan viral proteinlere ba lanır. 3. Yıkamadan sonra, alkalen fosfataz ile i aretlenmi anti-igg insan antikorlarının inkübasyonuna geçilir. Konjugat katı mesnet üzerinde tutulan anti-hiv-2 antikorlarına ba lanır. 4. Yıkama ve konjugat fazlasını elimine etme i lemlerinden sonra, developman solüsyonu nitroselüloz ile ili kili komplekslerin enzimatik faaliyetinin ortaya çıkarılmasını sa lar. 5. Özel renkli bantların belirmesi numunede anti-hiv-2 antikorları bulundu unu ortaya koyar. 3

4 4 - K T N Ç NDEK LER Tüm reaktifler sadece "in-vitro" te his amacıyla kullanılmaya yöneliktir. Her kit 18 ölçüme yetecek miktarda reaktif içerir; söz konusu ölçümler birbirinden ba ımsız birçok test eklinde gerçekle tirilebilir. ET KETLEM REAKT FLER N N TEL E HIV-2 nitroselüloz bandı HIV-2 virüs proteinlerinin aktarılması R1 ve bir anti-igg dahili kontrolün aktarılması ile etkinle tirilir Bantlar tek kullanımlık raklar halinde sunulmaktadır Yıkama solüsyonu/sulandırıcı (5x) 5 kez konsantre % 0,5 R2 kloroform içerir R3 R4 R5 R6 Negatif kontrol Ag HBs açısından negatif ve anti-hiv-1, anti-hiv-2 ve anti-hcv antikorları açısından negatif insan serumu Koruyucu: < %0,1 Sodyum azid Anti-HIV-2 pozitif kontrolü Anti-HIV-2 antikorları açısından pozitif, anti-hcv antikorları açısından negatif ve Ag HBs açısından negatif ve ardından ısı ile etkisiz hale getirilmi insan serumu. Koruyucu: < %0,1 sodyum azid Konjugat Alkalen fosfataz ile i aretlenmi insan anti IgG keçi antikorları. Koruyucu: < %0,1 sodyum azid Developman solüsyonu (BCIP/NBT) 5 Bromo - 4 Kloro-3 ndolil Fosfat (BCIP) ve developman tamponu olarak NitroBlue Tetrazolyum (NBT). SUNUM 3 rakın içine yerle tirilmi 18 bant (raklardan her birinde 6 bölme bulunur) 1 i e 100 ml 1 i e 0,2 ml 1 i e 0,2 ml 1 i e 40 ml 1 i e 40 ml 5 - ÖNLEMLER 4 Elde edilecek sonuçların kalitesi a a ıdaki laboratuar uygulamalarına tam olarak uyulmasına ba lıdır: Son kullanma tarihi geçmi reaktifler kullanmayın. Aynı deney sırasında farklı partilere ait reaktifleri birbirine karı tırmayın. Not: Aynı test sırasında aynı partiyi kullanmak kaydıyla ba ka yıkama solüsyonu (etiketin üzerinde mavi bir R2 ile tanıtılan) ve developman solüsyonu (R6) partileri kullanılabilir. Kullanımdan önce, reaktiflerin laboratuar sıcaklı ında (18-30 C) dengelenmesi için 30 dakika beklemek gerekir. Her türlü bula mayı önleyerek, reaktifleri özenle tekrar olu turun Yıkanmı ve damıtık su ile mükemmel bir ekilde temizlenmi cam aletler veya tercihen tek kullanımlık donanım kullanın. Her numune için yeni bir da ıtım konisi kullanın. Konjugatları ve developman solüsyonunu da ıtmak için asla aynı kabı kullanmayın. Pipetlerin do rulu unu ve hassasiyetini ve kullanılan cihazların düzgün çalı tı ını konrol edin. Çalı ma artlarını de i tirmeyin. Kontrol serumları her test serisinde hasta numunelerine paralel olarak teste tabi tutulmalıdır. Test esnasında bantları 10 dakikadan fazla kuru bırakmayın. Developman solüsyonunda süspansiyon halinde partiküller bulunması durumunda, pipetlemeden önce i enin içinde tortula maya bırakın (bu partiküller testte giri ime neden olmaz). 6 - H JYEN VE GÜVENL K T AL MATLARI Kitteki tüm reaktifler "in vitro" te his amacıyla kullanılmaya yöneliktir. Bantlara asla çıplak elle dokunmayın: Plastik penseler kullanın. Reaktiflerle çalı ırken tek kullanımlık eldivenler takın. "A zınızla pipetlemeyin". Negatif kontrolün (R3) hazırlamasında kullanılan insan kaynaklı malzeme, teste tabi tutulmu ve HBs antijeni ve anti-hiv-1, anti-hiv-2 ve anti-hcv antikorları açısından negatif bulunmu tur. Pozitif kontrolün (R4) hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı malzeme teste tabi tutulmu ve HBsantijeni ve anti-hcv antikorları açısından negatif bulunmu tur. Bu insan kaynaklı malzeme ısı ile etkisiz hale getirilmi tir. Hiçbir yöntem HIV, Hepatit B veya Hepatit C virüslerinin veya di er bula ıcı ajanların bulunmadı ını

5 kesin bir ekilde garanti edemedi i için, bu reaktifleri ve hasta numunelerini potansiyel olarak bula ıcı malzeme addedin ve ola an önlemler ile kullanın. Numuneler ve insan kaynaklı reaktifler ile do rudan temas eden malzemeyi ve ayrıca yıkama solüsyonlarını kontamine ürünler addedin ve buna göre i leme tabi tutun. Numunelerin veya bunları içeren solüsyonun sıçramasına engel olun. Kirlenen yüzeyler % 10 sulandırılmı çama ır suyu ile temizlenecektir. Bula an sıvı bir asit ise, kirlenen yüzeyler önceden sodyum bikarbonat ile nötrle tirilecek, ardından çama ır suyu ile temizlenecek ve emici kâ ıt ile kurutulacaktır. Temizleme i leminde kullanılan malzeme kontamine atıklar için öngörülmü özel bir konteynere atılmalıdır. nsan kaynaklı numunler ve reaktifler ve kontamine malzeme ve ürünler, bula ıcı özellikleri giderildikten sonra atılacaktır: - Bu i lem, ya % 5 sodyum hipoklorit son konsantrasyonlu çama ır suyuna (10 hacim kontamine sıvı veya su için, 1 hacim çama ır suyu) 30 dakika boyunca batırılarak, - Ya da minimum 2 saat boyunca 121 C'de otoklavlama vasıtasıyla gerçekle tirilir. D KKAT: SODYUM H POKLOR T ÇEREN SOLÜSYONLARI OTOKLAVIN Ç NE SOKMAYIN. Atık solüsyonları veya biyolojik numuneler içeren herhangi bir sıvıyı lavaboya atmadan önce, nötrle tirmeyi ve/veya otoklavlamayı unutmayın. Kimyasal ürünler do ru laboratuar uygulamalarına göre kullanılmalı ve atılmalıdır. Bazı reaktifler koruyucu madde olarak sodyum azotür içerir. Sodyum azotür laboratuar borularında kur un veya bakır azotürleri olu turabilir. Bu azotürler patlayıcıdır. Azotür birikmesine engel olmak için, azotür içeren solüsyonlar etkisiz hale getirildikten sonra lavaboya dökülürse, boruları bol su ile yıkayın. 7 - GEREKL OLAN ANCAK ÜRÜNLE B RL KTE VER LMEYEN MALZEMELER Damıtık veya demineralize su. 100 ml, 250 ml ve 500 ml dereceli deney tüpleri. 2 ml dereceli pipetler. 20 l'lik hacimler ölçebilen ve bo altabilen ayarlanabilir veya sabit, otomatik veya yarı otomatik pipet. Tek kullanımlık eldivenler. Güvenlik i esi ile donatılmı su emme pompası Sodyum hipoklorit (çama ır suyu). Emici kâ ıt. Penseler. Tek boyutlu, üç boyutlu veya döner çalkalayıcı (reaksiyon ortamının homojenli ini ve bantların çalkalama safhasında tam olarak batmasını garanti eden çalkalayıcı). Kontamine atık konteyneri Koruyucu gözlükler. 8 - REAKT FLER N YEN DEN OLU TURULMASI VE SAKLANMASI Her kit 18 ölçüme yetecek miktarda reaktif içerir; söz konusu ölçümler birbirinden ba ımsız birçok test eklinde gerçekle tirilebilir. Kullanıma hazır reaktifler R1: HIV-2 nitroselüloz bantları R3: Negatif kontrol R4: Anti-HIV-2 pozitif kontrolü R5: Konjugat R6: Developman solüsyonu (BCIP/NBT) Yeniden olu turulacak reaktif R2: Yıkama solüsyonu/sulandırıcı (5x) HAZIRLAMA:Örnek almadan önce i eyi çalkalayın. Yıkama solüsyonunu/sulandırıcıyı damıtık suda 1/5 oranında sulandırın (komple bir rak için örnek: 30 ml yıkama solüsyonu ml damıtık su). yice homojenle tirin. SAKLAMA: Kiti +2-8 C sıcaklıkta saklayın. Açıldıktan sonra, kitteki her reaktif kutunun üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar 2-8 C sıcaklıkta muhafaza edilebilir (özel bir uyarı bulunmadı ı takdirde). Sulandırılan yıkama solüsyonu/sulandırıcı (R2) +2-8 C sıcaklıkta 1 ay dayanır. Reaktiflerin mikrobiyal kontaminasyona maruz kalmasını önleyin. 5

6 9 - NUMUNELER N ALINMASI VE KULLANILMASI Ola an uygulama yöntemleriyle bir kan numunesi alın. Testler sulandırılmamı serum veya plazma numuneleri üzerinde yapılacaktır (numuneler EDTA, heparin, sitrat gibi antikoagülanlar ile alınır). Hemolize engel olmak için en kısa sürede serumu veya plazmayı pıhtıdan veya alyuvarlardan çıkarın. Çok belirgin bir hemoliz test performansını etkileyebilir. Agrega içeren numuneler testten önce santrifugasyon ile arıtılmalıdır. Süspansiyon halindeki partiküller veya fibrin agregaları yanlı pozitif sonuçlar elde edilmesine yol açabilir. Test 7 gün içerisinde yapılır ise, numuneler C sıcaklıkta muhafaza edilecektir; veya numuneler -20 C sıcaklıkta dondurulmu olarak muhafaza edilebilir. Plazmalar birkaç dakika 40 C sıcaklıkta ısıtılarak hızlı bir ekilde çözdürülecektir (fibrinin çökelmesini sınırlı tutmak için). 3 defadan fazla dondurulan ve çözdürülen numuneler kullanılmamalıdır. E er numuneler ta ınacak ise, bunları etyolojik ajanların ta ınması ile ilgili yürürlükteki mevzuata uygun ekilde ambalajlayın. KONTAM NE, H PERL PEM K VEYA H PERHEMOL ZE TAB TUTULMU SERUMLAR VEYA PLAZMALAR KULLANMAYIN. NOT: 90 gr/l'ye kadar albumin ve 100 mg/l'ye kadar bilirubin içeren numunelerde ve ayrıca 36 gr/l'ye kadar triolein içeren lipemik numunelerde ve 10 gr/l'ye kadar hemoglobin içeren hemolizli numunelerde hiçbir etkile im ispatlanamamı tır ÇALI MA ARTLARI 1. Kullanımdan önce, reaktiflerin laboratuar sıcaklı ında (18-30 C) dengelenmesi için 30 dakika beklemek gerekir. Kullanılan rakın effaf kapa ını çıkarın. aret çizgisi ile numaraları içeren bant yüzlerindeki viral proteinlerin i lemler sırasında farklı reaktifler ile kaplı olması amacıyla, bu yüzün gözle görülür olmasına dikkat edin. Bantlar plastik bir pense yardımıyla dikkatle tutulmalıdır. Test esnasında bantların 10 dakikadan fazla kurumasına izin vermeyin. Teslim edilen kontroller her test serisinde numunelere paralel olarak kullanılm alıdır. Pozitif kont rol yapılan i lemlerin geçerlili ini onaylamak ve bantları do ru ekilde yorumlamak için gereklidir. 2. Her bölmeye 2 ml yeniden olu turulmu yıkama solüsyonu/sulandırıcı ilave edin. Ortam sıcaklı ında (18-30 C) 5 dakika ± 1 dakika çalkalayarak inkübe edin. 3. lgili bölmeye her numuneden veya kontrol serumundan 20 l ilave edin. Ortam sıcaklı ında (18-30 C) 2 saat ± 5 dakika çalkalayarak inkübe edin. 4. Her bölmenin içeri ini dezenfektan (%25'lik çama ır suyu) içeren bir kap ile donatılmı bir emme pompası yardımıyla tamamen çekin. Emme i lemi sırasında bandın çekilmemesine dikkat edin; bu amaçla öngörülmü emme haznesini kullanın. Numuneler arasında bula mayı önlemek için, her emme i lemi arasında, numuneler ile temas eden emici ucu muslu un altında yıkayın. Her bandı yeniden olu turulmu 2 ml'lik yıkama solüsyonu/sulandırıcı ile yıkayın ve aynı önlemlere uyarak, emme yoluyla bu yıkama solüsyonunu/sulandırıcıyı elimine edin. ki defa daha yıkayın; çalkalama i lemiyle birlikte, her bandı 5 dakika boyunca 2 ml yeniden olu turulmu yıkama solüsyonu/sulandırıcı ile temas ettirin (yani toplam 3 yıkama). Son yıkamada kullanılan solüsyonu elimine edin. 5. Her bölmeye 2 ml konjugat da ıtın; konjugat solüsyonu önceden ortam sıcaklı ında dengelenmi olacaktır. Ortam sıcaklı ında (18-30 C) 1 saat ± 5 dakika çalkalayarak inkübe edin. 6. Yıkama: Bölüm 4'te belirtilen ekilde hareket edin. 7. Her bölmeye 2 ml developman solüsyonu da ıtın. Developman solüsyonunda süspansiyon halinde partiküller bulunması durumunda, pipetlemeden önce i enin içinde tortula maya bırakın (bu partiküller testte giri ime neden olmaz). Çalkalama i lemiyle inkübe edin ve renk de i imine dikkat edin. Viral proteinlere tekabül eden tüm bantlar pozitif kontrol serumuyla görüntülenmelidir. (Developman süresi: Minimum 5 dakika). 8. Developman solüsyonunu elimine ederek ve bantları 3 kez damıtık su ile yıkayarak reaksiyonu sona erdirin. 9. Bantları ortam sıcaklı ında (18-30 C) 2 emici kâ ıt arasında kurutun. Bantları sınıflandırın; i aret çizgisi yardımıyla tam olarak konumlandırın. Geçerli ilan edin ve yorumlayın. D KKAT: Viral proteinlere tekabül eden bant bölümüne yapı kan plastik yapı tırmayın. 6

7 11 - SONUÇLARIN GEÇERL LAN ED LMES, OKUNMASI VE YORUMLANMASI Sonuçların geçerli ilan edilmesi Anti-IgG kontrol bandı güçlü bir renge sahip olmalıdır; bu kontrol bandı numune, reaktif ilavelerinin ve i lem protokolünün iyi i leyi inin do rulanmasını sa lar. Anti-IgG dahili kontrol bandında renk olmaması veya dü ük bir renk yo unlu u olması, ya numune veya reaktif ilavesi olmadı ını ya da i lem protokolüne uyulmadı ını gösterir. Pozitif kontrol: Viral proteinlere tekabül eden tüm bantlar ve kontrol bandı mevcuttur. Negatif kontrol: Hiçbir viral protein gözükmemelidir; sadece kontrol bandı mevcut olmalıdır. Okuma Kontrol edilen numunelerde HIV-1 virüsünü olu turan anti-protein antikorlarının bulunması, özel renkli bantların belirmesi eklinde ortaya çıkar (mavi-mor). Bu bantların konumu a a ıdaki tabloda toplanan viral poteinlerin moleküler kütlelerine tekabül eder: ÖNEML Ortaya çıkarılan antikorları tespit etmek ve yerlerini belirlemek için pozitif kontrolden yararlanın (bkz. sayfa 10'daki ekil) ve her bantta dahili kontrol bandı bulundu unu kontrol edin. Okunabilir her türlü özel bant yorumlanmalıdır. S M GENOM N TEL K WESTERN BLOT GÖRÜNÜMÜ GP 140 ENV GP 105 ve GP 36 habercileri Az çok da ınık bant GP 105/GP 125 ENV Kılıf glikoproteini Da ınık bant P68 POL Ters transkriptaz Net bant P56 GAG Dahili protein habercisi Net bant GP36 ENV Transmembraner glikoprotein Da ınık bant P34 POL Endonükleaz Net bant* P26 GAG Dahili protein Net bant P16 GAG Dahili protein Net bant *p34 bandı GP 36'nın da ınık bandı ile aynı yerde bulunan ince ve net bir banttır. YORUMLAMA YORUMLAMA Pozitif Belirsiz PROF L ENV + GAG + POL ENV + GAG ENV + POL GAG + POL GAG POL ENV Bant yok Negatif ndekslenmemi bantlar NOT Pozitif veya belirsiz profiller pozitif bir serumla kontaminasyon yoluyla elde edilebilir. Ba ka yorumlama kriterleri de kullanılabilir. Alman Viral Hastalıklarla Mücadele Derne i Almanya'da bu kriterlerin kullanılmasını tavsiye etmektedir (DVV) [Pozitif: Minimum bir Env proteininin ve bir Gag veya Pol proteininin bulunması - Belirsiz: Yukarıdaki kriterlere uymayan her türlü profil - Negatif: Hiçbir bant yok. Bu çerçevede gp105/125/140 bir tek protein olarak kabul edilir.] 12 - PERFORMANSLAR NEW LAV BLOT II (NLB II) testinin özgüllü ü kan donörlerinden (196) ve hastanelerdeki hastalardan alınan (201) numuneler üzerinde incelenmi tir. Özgüllük incelemesi ayrıca anti-hiv antikorları (EIA tekni i) açısından negatif ancak kızamıkçık, toksoplazmoz, pnömoni, hepatit A, B ve C gibi di er patolojilere sahip ki iler ile hamile kadınlardan alınan numuneler, romatoid faktör açısından pozitif numuneler üzerinde yürütülmü ve E.I.A. tekni iyle pozitif bulunan ve do rulanmamı 39 numune de bu incelemeye dahil edilmi tir. Bu ekilde, zorluk arz eden toplam 119 numune teste tabit tutulmu tur. 7

8 Sonuçların tamamı yorumlama tablosunda belirtilen talimatlardaki kriterler yardımıyla yorumlanmı tır. Bu 516 numuneden hiçbiri NLB II testiyle pozitif bulunmamı tır. E.I.A. tekni iyle anti-hiv pozitif ve monospesifik diferansiyasyon testleriyle (EIA, Immunoblot) HIV-2 olarak sınıflandırılan 204 numunden 202'sinin HIV-2 pozitif oldu u NLB II testiyle do rulanmı,2 numune belirsiz sonuç vermi tir. Anti-HIV-1 ve anti-hiv-2 çifte pozitif 41 numunenin pozitif oldu u NLB II testiyle de do rulanmı tır. Anti-HIV-1 pozitif 131 numuneden 110'u NEW LAV BLOT II testi ile belirsiz sonuç vermi ve 21'i pozitif sonuç vermi tir. Seri içi ve seriler arası tekrarlanabilirlik testleri farklı sonuçlar vermemi tir TEST L M TLER Optimum performans elde etmek için teknik prosedüre tam olarak uymak gerekmektedir. Pozitif kontrol her test serisinde numunelere paralel olarak kullanılmalıdır. Pozitif kontrol testin geçerlili ini onaylamak ve bantları do ru ekilde yorumlamak için gereklidir. Enfeksiyonun ilk safhasında pozitif bir tarama testi ile birlikte negatif bir do rulama testi elde edilebilir; u halde, negatif bir sonuç teste tabi tutulan numunenin NEW LAV BLOT II testi tarafından algılanabilir anti-hiv antikorları içermedi ini gösterir. Bununla birlikte, böyle bir sonuç kısa süre önce ya anmı bir HIV-1/HIV-2 enfeksiyonu olasılı ının dı lanmasına olanak tanımaz. leride yeni bir numunenin teste tabi tutulması tavsiye edilir HIV-1 ve HIV-2 virüslerinin de i kenli i yanlı negatif reaksiyon olasılı ının dı lanmasına olanak tanımamaktadır. Bilinen hiçbir yöntem HIV virüsünün bulunmadı ına dair bir garanti sunmamaktadır. Daha az kısıtlayıcı yorumlama kriterlerinin kullanılması numunelerin farklı ekilde de erlendirilmesine yol açabilir. Talimatlardaki kriterlere göre belirsiz olarak sınıflandırılan bazı numuneler bu durumda pozitif kılınacaktır. "Belirsiz" bir profil a a ıdaki durumlardan birinin ihtimal dı ı bırakılmasına yol açmamalıdır: Serokonversiyon, HIV1 veya ba ka retrovirüsler ile çapraz reaksiyon. 8

9 14 - KAYNAKÇA 1. CLAVEL F., BRUN-VEZINET F., GUETARD D. et al: LAV II: un second retrovirus associé au SIDA en Afrique de l Ouest C.R. Acad. Sc. Paris, 1986, 13, CLAVEL F., GUETARD D., BRUN-VEZINET F. et al: Isolation of a new human retrovirus from West African patients with AIDS. Science, 1986, 233, CLAVEL F., GUYADER M., GUETARD D. et al: Molecular cloning and polymorphism of the human immune deficiency virus type 2. Nature, 1986, 324, NEWMARK P.: AIDS in an African context. Nature, 1986, 324, BARRE-SINOUSSI F., CHERMANN J.C., REY F. et al: Isolation of a T-lymphotropic retrovirus from a patient at risk for acquired immunodeficiency syndrome (AIDS).Science, 1983, 220, POPOVIC M., SARNGADHARAN MG., READ E., GALLO RC.: Detection, isolation and continuous production of cytopathic retroviruses (HTLV II) from patients with AIDS and pre-aids, Science, 1984, 224, LEVY JA, HOFFMAN AD, KRAMER SM et al: Isolation of lymphocytopathic retroviruses from San Francisco patients with AIDS. Science, 1984, 225, KANKI P.J., ALROY J., ESSEX M. et al: Isolation of T-lymphotropic retrovirus related to HTLV III-LAV from wild caught African green monkeys. Science, 1985, 228, KANKI P.J., BARIN F., M BOUP S. et al: New human T-lymphotropic retrovirus related to Simian T-lymphotropic virus type III (STLV III Agm). Science, 1986, 232, BRUN-VEZINET F., REY M.A., KATLAMA et al.: HIV/LAV2 in AIDS and ARC patients: Clinical and virological studies. Lancet 11. JREY F., SALAUN D., LESBORDES J.L. et al: Evidence for HIV-1 and HIV-2 double infection in Central African Republic. Lancet, II, 1986, MOLBAK K., LAURITZEN E., FERNANDES D. et al.: Antibodies to HTLV IV associated with chronic, fatal illness ressembling slim disease. Lancet, II, 1986, BIBERFELD G., BOTTIGER B., BREDBERG-RADEN U. et al: Findings in fowe HTLV-IV seropositive women from West Africa. Lancet, II, 1986, ESTEBAN J.I., CHANG-CHIN T., KAY J.W.D. et al: Importance of Western Blot analysis in predicting infectivity of anti HTLV III/LAV positive blood. Lancet, II, 1985, LAURITZEN E., LINDHARDT BO.: Antibodies against human immunodeficiency (HIV) detected by immunoblotting. In Bjerrum OJ. Heegaard NHH. eds Handbock of immunoblotting of proteins-crc Press 16. TOWBIN H., STAEHLIN T., GORDON J.: Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 1979, 76, SOUTHERN E.M. et al.: Detection of specific sequences among DNS fragments separated gel electrophoresis. J. Mol. Biol. 1975, 98, ARNHEIM N., SOUTHERN E.M. et al: Heterogeneity of the ribosonal genes in mice and men. Cell 1977, 11, KHYSE-ANDERSEN J.: Electroblotting of multiple gels: a simple apparatus without buffer-tank for rapid transfer of proteins. J. Biochem. Biophys. Meth., 1984, 10, JOHNSON D.A., GAUTSCH J.W., SPORTMAN J.R., ELDER J.H.T.: Improved technic utilizing non fat dry milk for analysis of proteins and nucleic acids transfer to nitrocellulose. Gene. Annals Techn., 1984, 1, 3-8 9

10 D KKAT: Gerçekte elde edilen bantlar bu görüntüdekilerden farklı olabilir. Bu görüntüyü son yorumlama için kullanmayın. Son yorumlama hastanın antikorlarını tespit etmek için, pozitif kontrol bandı yardımıyla yapılmalıdır. Dahili kontrol bandı her bantta bulunmalıdır. 10

11 IVD (GB) - CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro diagnostic medical devices) (FR) - Marquage CE (Directive européenne 98/79/CE relative aux dispositifs médicaux de diagnostic in vitro) (ES) - Marcado CE (Directiva europea 98/79/CE sobre productos sanitarios para diagnóstico in vitro) (IT) - Marchiatura CE (Direttiva europea 98/79/CE relativa ai dispositivi medico-diagnostici in vitro) (DE) - CE Konformitätskennzeichnung (Europäische Richtlinie 98/79/EG über In-vitro-Diagnostika) (PT) - Marcação CE (Directiva europeia 98/79/CE relativa aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro) (SE) - CE-märkning (Europeiskt direktiv 98/79/EG om medicintekniska produkter för in vitro-diagnostik) (DK) - CE-mærkningen (Europa direktiv 98/79/EF om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik) (GR) - CE ( 98/79/CE in vitro ) (PL) - CE oznaczenie (Dyrektywa unijna 98/79/CE dotycząca produktów medycznych do badań in vitro) (LT) - CE ženklas (Europos sąjungos direktyva 98/79/CE dėl in vitro diagnostikos medicinos prietaisų) (HU) - CE jelzés (98/79/CE Európai Irányelv az in vitro orvosi diagnosztikai eszközökről) (EE) - CE märgistus (Euroopa direktiiv 98/79/CE in vitro diagnostikameditsiiniseadmete kohta) (SK) - CE označenie o zhode (Európska direktíva 98/79/CE pre in vitro diagnostické zdravotnícke postupy) (CZ) - CE značka (Evropská direktiva 98/79/CE o diagnostických zdravotnických prostředcích in vitro) (NO) - CE-merking (EU-direktiv 98/79/CE om medisinsk utstyr til in vitro-diagnostikk) (RO) - Marca CE (Directiva europeana 98/79/CE pentru dispozitive medicale de diagnostic in vitro) (BG) - СЕ маркировка (Европейска директива 98/79/CE за ин витро диагностичните медицински изделия) (GB) - For in vitro diagnostic use (GB) - Catalogue number (FR) - Pour diagnostic in vitro (FR) - Référence catalogue (ES) - Para diagnóstico in vitro (ES) - Número de catálogo (IT) - Per uso diagnostico in vitro (IT) - Numero di catalogo (DE) - In-vitro-Diagnostikum (DE) - Bestellnummer (PT) - Para uso em diagnóstico in vitro (PT) - Número de catálogo (SE) - In vitro-diagnostik (SE) - Katalognummer (DK) - In vitro diagnose (DK) - Katalognummer (GR) - in vitro (GR) - (PL) - Do stosowania in vitro (PL) - Numer katalogu (LT) - in vitro diagnostikai (LT) - Katalogo numeris (HU) - Csak in vitro diagnosztikai alkalmazásra (HU) - Cikkszám (EE) - In vitro diagnostiliseks kasutamiseks (EE) - Katalooginumber (SK) - Na diagnostiku in vitro (SK) - Katalógové číslo (CZ) - Pro diagnostiku in vitro (CZ) - Katalogové číslo (NO) - Til in vitro-diagnostikk (NO) - Katalognummer (RO) - Pentru diagnostic in vitro (RO) - Număr de catalog (BG) - За ин витро диагностика (BG) - Каталожен номер (GB) - Manufacturer (GB) - Authorised Representative (FR) - Fabricant (FR) - Représentant agréé (ES) - Fabricante (ES) - Representante autorizado (IT) - Produttore (IT) - Distributore autorizzato (DE) - Hersteller (DE) - Bevollmächtigter (PT) - Fabricante (PT) - Representante Autorizado (SE) - Tillverkad av (SE) - Auktoriserad representant (DK) - Fremstillet af (DK) - Autoriseret repræsentant (GR) - (GR) - (PL) - Producent (PL) - Upoważniony Przedstawiciel (LT) - Gamintojas (LT) - Įgaliotasis atstovas (HU) - Gyártó (HU) - Meghatalmazott Képviselő (EE) - Tootja (EE) - Volitatud esindaja (SK) - Výrobca (SK) - Autorizovaný zástupca (CZ) - Výrobce (CZ) - Zplnomocněný zástupce (NO) - Produsent (NO) - Autorisert representant (RO) - Producător (RO) - Reprezentant autorizat (BG) - Производител (BG) - Упълномощен представител (GB) - Batch code (GB) - Expiry date YYYY/MM/DD (FR) - Code du lot (FR) - Date de peremption AAAA/MM/JJ (ES) - Código de lote (ES) - Estable hasta AAAA/MM/DD (IT) - Codice del lotto (IT) - Da utilizzare prima del AAAA/MM/GG (DE) - Chargen-Bezeichnung (DE) - Verwendbar bis JJJJ/MM/TT (PT) - Código do lote (PT) - Data de expiração AAAA/MM/DD (SE) - Batchnr (SE) - Utgångsdatum ÅÅÅÅ/MM/DD (DK) - Batchkoden (DK) - Anvendes før ÅÅÅÅ/MM/DD (GR) - (GR) - YYYY/MM/DD (PL) - Numer serii (PL) - Data ważności YYYY/MM/DD (LT) - Serijos numeris (LT) - Galioja iki YYYY/MM/DD (HU) - Gyártási szám (HU) - Szavatossági idő ÉÉÉÉ/HH/NN (EE) - Partii kood (EE) - Aegumistähtaeg AAAA/KK/PP (SK) - Číslo šarže (SK) - Použiteľné do RRRR/MM/DD (CZ) - Číslo šarže (CZ) - Datum exspirace RRRR/MM/DD (NO) - Partikode (NO) - Utløpsdato ÅÅÅÅ/MM/DD (RO) - Număr de lot (RO) - Data expirarii AAAA/LL/ZZ (BG) - Партиден номер (BG) - Срок на годност година/месец/ден

12 (GB) - Storage temperature limitation (FR) - Limites de températures de stockage (ES) - Temperatura límite (IT) - Limiti di temperatura di conservazione (DE) - Lagertemperatur (PT) - Limites de temperatura de armazenamento (SE) - Temperaturbegränsning (DK) - Temperaturbegrænsning (GR) - (PL) - Temperatura przechowywania (LT) - Saugojimo temperatūriniai apribojimai (HU) - Tárolási hőmérsékleti határok (EE) - Piirangud säilitustemperatuurile (SK) - Skladovacia teplota od do (CZ) - Teplotní rozmezí od do (NO) - Oppbevaringstemperatur (RO) - Limitele de temperatură la stocare (BG) - Температурни граници на съхранение (GB) - Consult Instruction for use (FR) - Consulter le mode d'emploi (ES) - Consulte las instrucciones de uso (IT) - Consultare le istruzioni per uso (DE) - Siehe Gebrauchsanweisung (PT) - Consulte o folheto informativo (SE) - Se bruksanvisningen (DK) - Se instruktion før brug (GR) - (PL) - Sprawdź instrukcję (LT) - Ieškokite informacijos vartojimo instrukcijoje (HU) - Olvassa el a használati utasítást (EE) - Kasutamisel vaata instruktsiooni (SK) - Katalógové číslo (CZ) - Viz návod k použití (NO) - Se bruksanvisninger (RO) - Consultati prospectul de utilizare (BG) - Виж инструкцията за употреба

13 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2009 Fax.: Code: