R-Biopharm AG + R-Biopharm Rhône Ltd e Genel Bakış ve Mikotoksinler, Hormon & Antibiyotik testleri için çözümler Patrick J.L.Taylor International Development Manager R-Biopharm AG.
R-Biopharm AG Gıda Analizleri nzimatik Mikotoksinler Antibiyotikler Hormonlar Risk Materyal/BS Mikrobiyoloji 2006 Alerjenler Vitaminler
Pazarlarımız İşimizi Sincer gibi seçkin distrübitörlerce yürüterek 60 tan fazla ülkeye ihracat yapmaktayız R-Biopharm AG Merkez - Darmstadt, Germany. R-Biopharm Rhone - Glasgow, Scotland. R-Biopharm a bağlı olarak çalışan satış şirketleri: USA France Italy Argentina Brazil R-Biopharm Inc. R-Biopharm SA. R-Biopharm Srl. R-Biopharm Latin America. R-Biopharm Brasil. China R-Biopharm China.
R-Biopharm AG Dünya Çapında Yan şirket ya da direk satış Distributor
R-Biopharm ISO 9001 Kalite Sistemi
İşimizi sürdürmemizi sağlayan nedir? Tüketicilerin kalite ve güvenlik kaygıları 4 İhracat kontrolü için uluslararası mevzuat. 4 Gıda üreticileri daha iyi bir değer veya itibar kazanmak için kalite ve güvenlik temin etme arzusundadırlar. 4 Ulusal yurtiçi gıda kontrolleri. 4 Gıda korkuları reddedilen veya geri çekilen ürünlerin yüksek maliyetleri. 4 Gıda üreticileri düşük kaliteli ürün imajı yüzünden gelecekteki iş kayıplarından endişelenmektedir.
bugün tarışılacak ürünler: LISA - genel prosedür Mikotoksinler Immunoaffinity kolonlar (IAC) Immuno-Kromatographik Testler (LFD & CARDS) Hormonlar LISA Antibiyotik LISA
Zemin Kanunlar Analizler Hormonlar için analiz kriterleri Tarama metotları hızlı, basit, düşük maliyet, fazla sayıda numune Hatalı negatif yok Doğrulama metotları Hatalı pozitif yok Moleküler spektrometrik tespit
MİKOTOKSİNLR
RIDASCRN Competitive LISA
RIDASCRN LISA-Testkit
anti-igg antikoru kaplı Microwell anti-igg antikorları
Competitive lisa (2) Standart veya Numune kle
Competitive lisa (3) nzim Konjugat ekle
Competitive lisa (4) Antikor solusyonu ekle
Competitive lisa (5) Reaksiyon başlar Bağlanan ve bağlanmayan standart/numune ve enzimkonjugat arasındaki denge
Competitive lisa (6) Yıkama 3x Fazla moleküllerin uzaklaştırılması
Competitive lisa (6) 3x Yıkama sonrası Bağlanmayan moleküllerin tamamen uzaklaştırılması
Competitive lisa (7) S R Substrat/Kromojen kle Substrat (S), enzimin varlığında Renkli ürün (R) oluşturur
Competitive lisa (8) Stop Solusyonu kle Reaksyon durdurulur ve oluşan renk gözle veya Spektrofotometre ile okunur. Rengin yoğunluğu numunenin/standardın yoğunluğu ile ters orantılıdır. - Daha çok renk, numune/standart konsantrasyonunun daha az olması demektir.
Competitive LISA (9) 450 nm de okuma
Ridascreen FAST Competitive LISA Standart ğrisi
RIDASCRN Approvals RIDASCRN FAST analizleri için onaylar AOAC (Association of Analytical Chemists) - AOAC RI Onayı DON (license no. 000701) T-2 Toxin (license no. 991101) USDA/FGIS (United States Department of Agriculture/Federal Grain Inspection Service) Uygunluk Sertifikası Aflatoxin total (COC no. 2003-101) DON (COC no. 2001-105 and 2002-105) Fumonisin (COC no. 2001-103 and 2002-107)
HPLC & FLUOROMTR İÇİN IMMUNOAFFINITY KOLONLAR
RBR IAC kolonlar Analit için spesifik ankitor içerir Numuneden analiz için konsantre Kontaminantların, matriks bileşenlerinin ve pigmentlerin uzaklaştırılması Kompleks matriksler için kusursuz temizleme Herhangi bir analitik metot için kullanılabilir
Mikotoksin analizleri için RBR IAC kolonları Aflatoxins Aflatoxin M 1 AFLAPRP M AFLAPRP, ASI XTRACT, AFLASCAN Ochratoxin A OCHRAPRP Zearalenone ASI-XTRACT ZARALNON Fumonisins FUMONIPRP Deoxynivalenol DONPRP T2 & HT2 Toxins ASI-XTRACT T2& HT2
Immunoaffinity Kolonları - Analizin Temel Prensibi KSTRAKT DİLMİŞ NUMUNYİ UYGULA YIKA LU T Fluorometre UV tarama HPLC HPLCMS HPLCMS/MS TLC
Kantitatif HPLC RBR IAC & KOBRA CLL Kuru üzümde RBR Immunoaffinity Kolon kullanılarak HPLC ile aflatoksin analizi
IMMUNO-CHROMOTOGRAFİK TSTLR LATRAL FLOW DVICS & CARDS
RIDA QUICK Aflatoxin Negatif sonuç < 4 µg/kg (ppb) Test bandı Kontrol bandı Uygulama bölgesi Pozitif sonuç > 4 µg/kg (ppb)
Şematik Competitive Lateral Flow Device Y Y Latex Beads Mycotoxin Anti-Mycotoxin Antibody Capture Antibody The following LFD animation by kind permission Prof J. Banks, Central Science Laboratory
Membran Kartlar Bir membran yüzeye bağlanmış spesifik monoklonal antikor içeren küçük kartlardır AFLACARD B1- aflatoksin B 1 için fındık, kuru üzüm, baharat vb. ürünlerde kalitatif tarama testi. AFLACARD TOTAL - toplam aflatoksin için fındık, kuru üzüm, baharat vb. ürünlerde kalitatif tarama testi. AFLACARD T-20 - toplam aflatoksin için ABD düzenlemelerine uygun 20ppb seviyesinde tarama testi. FGIS onaylı. OCHRACARD - okratoksin için tahıl, kuru üzüm ve kahvede kalitatif tarama testi.
AFLACARD T20 Geçerli bir test sonucu için kontrol noktasında açıkça görülebilen mor bir nokta oluşmalıdır. Kontrol ve numune noktalarının her ikisinde de mor renk oluştuğunda numune negatiftir (kartın cut off değerinin altında) Numune kolaylıkla gözlenebilir renk oluşturamadığında pozitiftir (kartın cut off değerinin üstünde)
HORMONLAR
Sınıflandırma Genel Bilgi Kanunlar Analiz Androgens strogens 17ß-stradiol Doğal (fizyolojik) hormonlar Testosterone Trenbolone Methytestosterone 19-Nortestosterone thinylestradiol Diethylstilbestrol Zeranol Sentetik (xenobiotic) hormonlar Gestagens Acetylgestagens (Medroxyprogesterone acetate) ß-Agonists Clenbuterol & ilgili maddeler
Genel Bilgi Kanunlar Kimyasal Yapılar OH CH 3 Doğal Hormonlar Analiz HO 17ß-stradiol CH 3 Testosterone H H H H H O H O CH 3 O H Androstenone
Genel Bilgi Kanunlar Kimyasal Yapılar Sentetik (xenobiotic) Hormonlar Analiz CH 3 OH HO H 3 C DS (Diethylstilbestrol) OH O CH 3 Zeranol O HO OH
Genel Bilgi Kanunlar Analiz Yetiştiricilikte anabolik bileşenler neden kullanılır? Protein oluşumunu arttırmak Yağ deposunu metobolize etmek t artışını hızlandırmak Anabolik hormon uygulaması yapılan hayvanlarda büyüme, yapılmayanlara göre %20 daha fazladır
Genel Bilgi Kanunlar Analiz Anabolizan maddelerin etkinliğini etkileyen parametreler Cinsiyet Kısırlaştırılmış hayvanlar > dişi > erkek Yem yüksek > düşük protein içeriği Yaş yaşlı > genç Tür sığır, koyun > domuz > kanatlı
Genel Bilgi Anabolik Steroidler Deneysel Çalışma Uygulama bölgesindeki değişim Kanunlar Analiz Maddelerin %14 53 ü uygulamadan sekiz hafta sonra uygulama bölgesinden alınan etlerde tespit edilebilmiştir.
Genel Bilgi Kanunlar Analiz 135 hastada sığır karaciğeri tüketimi sonunda görülen semptomların frekansı (kontaminasyon: 160-291 ppb) Symptom Frekans % Tremors/Titreme Tachycardia/Taşikardi Nervousness/Sinirlilik Cephalalgia/Baş ağrısı Generalized myalgia Periorbital(göz)myalgia Asthenia/Asteni Dizzy Spells/Baş Dönmesi Nausea/Bulantı Vomiting/Kusma Fever/Ateş Cills 123 91 105 78 87 71 56 46 13 25 22 16 11 10 64 53 41 34 10 19 16 12 8 7 FOOD POISONING Clenbuterol AFTR FDING CLNBUTROL Martinez- Navorro, TH LANCT, 336 (1990) Centro Nacional de pidemiologia, Madrid,spana
Genel Bilgi Kanunlar Analiz doku akciğer karaciğer böbrek dalak beyin kalp m. masseter m. trapezius karın yağı göz yumurtalık uterus kan idrar atılım( gün) 0 3.5 14 ng / g ng / g ng / g 76.0 39.0 29.0 24.0 12.0 11.0 8.6 4.8 4.4 118.0 13.0 8.2 1.1 47.0 2.40 1.60 1.20 1.20 0.40 0.30 0.30 0.20 0.30 52.00 0.40 0.40 0.05 0.50 <0.08 0.60 <0.08 <0.08 <0.08 <0.08 <0.08 <0.08 0.20 15.00 <0.02 <0.02 <0.03 <0.05 Clenbuterol tedavisinden sonra Sığır dokusunda clenbuterol kalıntısı (3 hafta boyunca 10 µg/kg vücut ağırlığı )
safra böbrek k.ciğer şurup yem Sığır gözü kıl idrar dışkı doku Sığır yağı serum/ plasma et süt Test Clenbuterol Acetylgestagene MGA 17-ß stradiol Testosterone thinylestradiol Trenbolone DS 19- Nortestosterone Methyltestosteron Zeranol Matriks Genel Bilgi Kanunlar Analiz
Genel Bilgi Kanunlar Anabolizan ajanlar için tarama metotları Analiz 1. ß-Agonists (e.g.: Clenbuterol) 2. Xenobiotic steroid hormones 3. stradiol-17ß, Testosterone 4. 17-alpha-Acetylprogesterone idrar, göz, kıl idrar kan plazması böbrek yağı
Genel Bilgi Kanunlar Analiz Ulusal Kalıntı İzleme Programı 1989 yıylnda kurulmuştur: Almanya federal bölgeleri kalıntı kontrollerini Alman Sağlık ve Tarım Bakanlığı na (BVA - eski adı:bgvv) bağlı olarak organize eder. Amaç: hayvansal gıdalarda kalıntı kontrolü Yasal kaynak: AB Komisyonu Direktifleri 96/23/G, 97/747/G Kesilen tüm hayvanların %0.1 2 si of kontrol edilmelidir (türe bağlı olarak) süt, yumurta ve bal dahil Örnekleme, metot ve numune/parametre sayısı yıllık izleme programında tanımlanır
Genel Bilgi Almanya İzleme Programı 2005 Kanunlar Madde Kanatlı Matriksi Sığır, domuz, koyun, keçi matriksi MRPL / LOQ (µg/kg, ppb) Analiz DS Methyltestosteron idrar, safra, karaciğer idrar, safra kas, dışkı 2 10 Trenbolon idrar, safra kas, dışkı 10 thinylestradiol 17-ß stradiol Zeranol plazma, idrar, safra plazma idrar, safra kas, dışkı kas, dışkı 10 0,1 2
Genel Bilgi Almanya İzleme Programı 2005 Kanunlar Analiz Substance Matrix of beef, pork, sheep, goat Matrix of poultry MRPL / LOQ (µg/kg, ppb) Clenbuterol Clenbuterol İdrar Retina 0,2 3 Salbutamol, Mabuterol, Brombuterol İdrar 0,5 Terbuterol İdrar 1,0 Cimaterol, Clenproperol İdrar 3,0
Genel Bilgi Kanunlar Analiz İzleme Planları Üye ülkeler izleme planlarını Komisyon a iletmelidirler Komisyon, üçüncü ülkelerin kalıntı izleme planlarını değerlendirirken, istenen şartlardan ziyade eşdeğerlik aramaktadır Üçüncü ülkeler kalıntı izleme planlarının AB içerisinde uygulanabilir eşdeğer seviyeleri gerçekleştirdiğini sunma garantisi vermelidir.
Genel Bilgi Kanunlar Analiz ürünler imha edilir Pozitif Numuneler ilgili ürün ve maddelerin testleri artırılır Üye Ülkeler Rapid Alert System (Hızlı Uyarı Sistemi) ile bilgilendirilir (http://europa.eu.int/comm/food/food/rapidalert/index_en.htm) ürünün ithal olması durumunda etkilenen üçüncü ülkeler bilgilendirilir Birlik, AB ye girmeden önce test seviyelerini %100 e kadar artırmaya karar verebilir AB gıda güvenliği için önemli sorunların rapor edilmesi, belirli ülkelerden belirli ürünlerin AB ye kabul edilmemesine yol açabilir
Genel Bilgi Kanunlar Analiz R-Biopharm Hormone & Anabolizan Tarama Testlerine Genel Bakış
RIDASCRN Hormones & Anabolics Parametre Clenbuterol Acetylgestagene 17ß-stradiol Testosterone thinylestradiol Trenbolone Diethylstilbestrol 19-Nortestosterone Zeranol Methyltestosterone Melengestrolacetate Standart aralığı 100 8100 ppt 150 12150 ppt 50 12800 ppt 50 12800 ppt 50 12800 ppt 25 400 ppt 25 400 ppt 200 16200 ppt 31.25 8000 ppt 50 4050 ppt 150 12150 ppt Matriksler idrar, plazma, et, karaciğer, süt, göz, kıl, yem böbrek yağı, yem, şurup et, plazma et, plazma et, plazma idrar, safra, et, karaciğer, dışkı, plazma idrar, plazma, safra, et, dışkı, yem idrar, et idrar, et idrar, et böbrek yağı, et
ANTİBİYOTİKLR
Genel Bilgi Kanunlar Analiz Antibiyotik Sınıfları b-lactam (e.g. Penicillin) Aminoglycosides (e.g. Streptomycin) Chinolones (e.g. nrofloxacin/ciprofloxacin) Macrolides (e.g. Amphotericin) Tetracyclines (e.g. Tetracyclin) Sulfonamides (e.g. Sulfamethazine) Polymycins (e.g. Colistin) Nitroimidazoles (e.g. Metronidazol)
Genel Bilgi Kanunlar Analiz Kanunlar Mevzuat, Düzenlemeler, Direktifler, Tavsiyeler
Genel Bilgi Kanunlar Analiz Council Regulation (C) No 2377/90 of 26 June 1990 (Son değişiklik 16.6.2003) hayvansal gıda maddelerinde veteriner tıbbi ürünler için Maksimum Kalıntı Limitleri (Maximum Residue Limits) belirlenmesi www.emea.eu.int/indexv1.htm
Genel Bilgi Kanunlar Council Regulation (C) No 2377/90 K I Kalıntı seviyeleri belirlenen farmakolojik aktif maddeler listesi Analiz Antibiyotik Streptomycin (sığır, koyun, domuz) MRL (Maximum Residue Limit) kas, yağ, karaciğer 500 ppb böbrek 1000 ppb süt 200 ppb bal 20 ppb Sulfamethazin (gıda - tüm hayvanlar) Tetracycline (gıda - tüm hayvanlar) kas, yağ, karaciğer, böbrek süt süt böbrek karaciğer yumurta kas 100 ppb 100 ppb 100 ppb 600 ppb 300 ppb 200 ppb 100 ppb
Genel Bilgi Kanunlar Council Regulation (C) No 2377/90 K I Kalıntı seviyeleri belirlenen farmakolojik aktif maddeler listesi Analiz Antibiyotik Quinolones (nrofloxacin, Ciprofloxacin) sığır, koyun, keçi MRL (Maximum Residue Limit) kas 100 ppb yağ 100 ppb k.ciğer 300 ppb böbrek 200 ppb süt 100 ppb domuz, tavşan kas 200 ppb yağ 100 ppb k.ciğer 400 ppb
Genel Bilgi Kanunlar Council Regulation (C) No 2377/90 K I Kalıntı seviyeleri belirlenen farmakolojik aktif maddeler listesi Analiz Antibiyotik Quinolones (Danofloxacin) sığır, koyun, keçi domuz, tavşan MRL (Maximum Residue Limit) kas 200 ppb yağ 100 ppb k.ciğer 400 ppb böbrek 400 ppb süt 30 ppb kas 200 ppb yağ 100 ppb k.ciğer 400 ppb
Genel Bilgi Kanunlar 2003/181/C K II Gerekli n Az Performans Limitleri / Minimum Required Performance Limits Analiz Antibiotic Chloramphenicol Medroxyprogesterone acetate Nitrofurans Parent drugs - metabolites -Furazolidone - AOZ -Furaltadone - AMOZ -Nitrofurantoin - AHD -Nitrofurazone - SM MRPL (Minimum Required Performance Limit) et, yumurta, süt, idrar, su ürünleri, bal domuz böbrek yağı kanatlı eti, su ürünleri 0.3 ppb 1 ppb 1 ppb
Genel Bilgi Kanunlar Analiz Analiz Analiz için mevcut metotlar (R-Biopharm Group ürünleri)
Genel Bilgi Kanunlar Analiz RIDASCRN Chloramphenicol Numune Hazırlama adım 1 karides/et numunesini homojenize edin 3 g homojenat tartın + 3 ml dist. su karıştırın
Genel Bilgi Kanunlar Analiz RIDASCRN Chloramphenicol Numune Hazırlama adım 2 6 ml til asetat ekleyin vorteksleyin ve 10 dakika karıştırın (ters-düz)
Genel Bilgi Kanunlar Analiz RIDASCRN Chloramphenicol Numune Hazırlama adım 3 numuneyi santrifuj edin (10 dak, 2000 x g, oda sıcaklığı) supernatantın 2 ml sini alın (1 g numuneye karşılık gelen) ve kurutun
Genel Bilgi Kanunlar Analiz RIDASCRN Chloramphenicol Numune Hazırlama adım 4 kalıntıyı 1 ml n-hexane da çözün & 1 dak. vortex 1 ml Buffer 1 ekleyin & 1 dak. vortex ayırma için 10 dakika, oda sıcaklığında 3000g de santrifüj edin. İyi bir ayrım olmazsa en az 80 C ısıtıp tekrar santrifüj edin! Üst Buffer katmanının 50 µl sini testte kullanın Seyreltme faktörü = 1, LOD = 25 ppt
Genel Bilgi Kanunlar Analiz
Genel Bilgi Kanunlar Analiz RIDASCRN Chloramphenicol LISA Prosedürü kuyucuklara sırasıyla her bir standarttan 50 µl ekleyin belirlediğiniz kuyucuklara her bir numuneden 50 µl ekleyin kuyucuklara 50 µl seyreltilmiş konjugat ekleyin hafifçe karıştırın 1 saat inkübe edin
Genel Bilgi Kanunlar Analiz R-Biopharm Antibiyotik Tarama Testleri
Genel Bilgi Kanunlar Analiz RIDASCRN Antibiotics-Tests Parametre Chloramphenicol, R1501 Chloramphenicol, NW R1505 Chloramphenicol- Glucuronid Sulfamethazin Streptomycin Standart Aralığı 0.050 4.05 ppb 0.025-0,75 ppb 1 20 ppb 10 810 ppb 5 1280 ppb Matriksler süt, süt tozu, bal, karides, et, balık, yumurta, süt, süt tozu, bal, karides, et, balık, yumurta, serum, idrar süt, yağsız süt, et, böbrek süt, bal, et, karaciğer Tetracyclin Nitrofuran (AOZ) Nitrofuran (AMOZ) nro-/ciprofloxacin 0.5 40.5 ppb 50 4050 ppt 100 8100 ppt 1 81 ppb süt, bal, et karides, et, karaciğer, balık, yumurta,süt karides, et, karaciğer, balık, yumurta süt, et, karides, balık
R-Biopharm AG web sitesi: www.r-biopharm.com R-Biopharm Rhône web sitesi: