REF 40 EPHE0500 40 EPHE2500 TEST 500 2500 GARANTİ Teşhis kitinden başka açık garanti yapmayan üretici, üreticinin yazılı talimatlarına göre kullanıldığında belirlenmiş analitlerle ölçülecektir. Teşhis kitinin başka bir amaç için kullanımı, belirtilen şeklinin dışında kullanılmasıdır ve risk kullanıcının kendisine aittir. Üreticilerin ticarete uygunluğu tüm veya herhangi anlaşmalı garantileri, kullanım için kanuni uygunluk veya başka amaçlar için kullanılan anlaşmayı onaylamamaktadır. Talimatlara göre gerçekleştirildiğinde tanı kitinde ortaya çıkan az veya tam zararın karşılanması sadece kitlerin değiştirilmesi ile sınırlıdır. Bioclone Australia Pty Limite in ve dağıtıcılarının tek sorumluluğu ya ürünün yenilenmesi ya da satın alma bedelinin geri ödenmesi ile sınırlıdır. Bioclone Australia Pty Ltd, maddi hasar, kişisel yaralanma veya üründen kaynaklanan ekonomik kayıptan sorumlu değildir. Manufactured by Bioclone Australia Pty Limited (a subsidiary of Hitachi Chemical Co., Ltd) ABN 14 002 036 071 71-73 Railway Parade Marrickville NSW AUSTRALIA 2204 Tel +61 (0) 2 9517 1966 Fax +61 (0) 2 9517 2990 Freecall 1800 251 138 Email sales@bioclone.com.au Web www.bioclone.com.au EC REP Hitachi Chemical Diagnostics Inc. Hitachi Europa Limited Whitebrook Park,Lower Cookham Road Maidenhead,Berkshire, SL6 8YA, UK. Phone: +44 1628 585 591 KULLANIM AMACI ELEGANCE Neonatal Fenilalanin testi yenidoğan kan spotlarında L-fenilalanin in kantitatif in vitro tanısı için tasarlanmıştır. [Ayrıca " Beklenen Değerler " bölümüne bakın] ELEGANCE TESTİN PRENSİBİ Fenilalanin (PHE) Test Kiti, kurumuş kan spot numunelerinden fenilalanin ekstre etmek için trikloroasetik asid (TCA) kullanır. Ekstraksiyondan sonra çözünmüş numune Fenilalanin dehidrogenaz Enzim Reaktifi ile birleştirilir. Bu enzim reaktifi, Fenilalaninin NAD-bağımlı oksidatif deaminasyon ile fenilpirüvat ve amonyağa dönüşümünü katalize eder. Üretilmiş NADH numunede kolorimetrik olarak ölçülür ve bulunan fenilalanin konsantrasyonuyla doğrudan orantılıdır. ELEGANCE SAĞLANAN REAKTİFLER, STABİLİTE VE SAKLAMA Kit boyut - 500 test; ve 2500 test (parantez içinde). Açılmış yada açılmamış kit ve bütün komponentler son kullanım tarihine kadar 2-8 C de saklanmalıdır. PART No.: EKBPHE Ed. 7 Page 1 of 5 Revision date: 1 July 2009
Neonatal PHE: Enzim Reaktif 1 şişe REF # PER1 (5 şişe REF # PER1) Stabilize edici buffer ile 3 ( 5 x 3) ml Fenilalanin dehidrogenaz. Sodyum azid, 0.01% w/v içerir. Liyofilize edilmiş. Enzim Reaktif Diluent 1 şişe REF # GPD1 (1 şişe REF # GPD5) 3 (15 ) ml Stabilize edici buffer solüsyon. Sodyum azid, 0.01% w/v içerir. Kullanıma hazır. Koenzime Reaktif 1 şişe REF # CER1 (5 şişe REF # CER1) Stabilize edici buffer ile 50 (5 x 50) ml NAD. Liyofilize edilmiş. Test Buffer 1 şişe REF # PAB1 (1 şişe REF # PAB5) Stabilizör ile 15 (75) ml buffer solüsyon. Sodyum azid, 0.01% w/v. içerir. Kullanıma hazır. TCA 1 şişe REF # TCA1 (2 şişe s REF # TCA2) 3% w/v trikloroasetik asid (TCA) solüsyonunun 50 (2 x 125) ml. Kullanıma hazır. Renk Reaktifi 1 şişe REF # CR1 (1 şişe REF # CR5) 3 (15) ml Bir tetrazolium tuz solüsyonu ve bir ara ürün elektron alıcı. Kullanmadan önce dilüe edilmiş olmalı. Neonatal PHE: Kalibratör [A-E] 2 kart REF # EGPS1-5 (4 kart REF # EGPS1-5) Her kart başına 5 seviye.filtre kağıdı üzerine kurutulmuş multipl insan kanı spot kalibratörler, 5 seviye [A-E]. Kullanıma hazır. Neonatal PHE: Kontrol Setleri [C1-C3] 1 kart REF # EGPC1-3 (2 kart REF # EGPC1-3) Her kart başına 3 seviye. Filtre kağıdı üzerine kurutulmuş multipl insan kanı spot kontroller, 3 seviye [1-3]. Kullanıma hazır. PART No.: EKBPHE Ed. 7 Page 2 of 5 Revision date: 1 July 2009
KULLANICILARI İÇİN ÖNLEMLER VE UYARILAR Numune ve kit bileşenlerinin işlenmesi, bunların kullanımı, depolanması ve atılması herhangi bir yerel laboratuar veya ulusal güvenlik prosedürleri veya düzenlemelerine göre yapılmalıdır. Örnek ve Kalibratörler Kan spotlarının kaynak malzemesi, onaylı bir akredite yöntem ile kan donörü gibi test edilmiştir ve Anti HCV, Anti HIV ½ (AIDS) ve hepatit B yüzey antijeninin varlığı için negatif olarak bulunmuştur. Ancak tüm numuneler kullanılırken bulaşıcı hastalık yayabilirmiş gibi düşünülmesi tavsiye edilir. Koruyucular Kit koruyucu olarak sodyum azid içerir. Reaktifler potansiyel olarak toksik koruyucu madde içerdiği için işlem sırasında, yenmemesine veya cilt ile temas etmemesine dikkat edilmelidir. Sodyum azid kurşun ve bakır borular ile reaksiyona girebilir ve potansiyel olarak patlayıcı azidler oluşturabilir. TCA Trikloroasetik asid yüksek derecede asidik ve aşındırıcıdır. Reaktif kullanıldığında koruyucu eldiven giyilmelidir. Herhangi bir cilt temasından kaçınınız. PART No.: EKBPHE Ed. 7 Page 3 of 5 Revision date: 1 July 2009
ÖRNEK TOPLANMASI VE İŞLENMESİ ELEGANCE Neonatal Fenilalanin Test Kiti, NCCLS LA4A kılavuzuna göre yeni doğanlardan iğneyle alınan ve filtre kâğıt üzerinde kurumuş ve toplanmış topuk kan numunelerinde kullanılmak üzere tasarlanmıştır. Numune, kalibratörler ve kontroller ile eşdeğer olduğu için filtre kâğıdı Whatman Grade 903 olmalıdır. Yeni doğanın topuğundan alınan kan doğumdan sonra 3-5 gün sonra toplanır. Filtre kağıdı üzerindeki yuvarlak numune alanını kapsayan bir kan spotu bebeğin topuğundan delinerek alınan kanın bir damlasının filtre kağıdı üzerine uygulaması ile elde edildi. Filtre kağıdı numune alanı kan ile tamamen dolacak şekilde iyice emdirilmelidir. Test numunesinin toplanmasından sonra filtre kağıtları yatay olarak kurutulmalıdır (2 saat veya daha fazla). Kuru numuneler 2-8 C'de 5 ay veya -20 C en az 2 yıl süreyle kuru ortam altında saklanabilir. Sadece yukarıdaki şekilde hazırlanan kan spotları test edilmelidir. GEREKLİ FAKAT SAĞLANMAYAN MATERYALLER VE EKİPMANLAR * Deiyonize su * Dilüsyon için kap * Disk punch (3mm) * Otomatik pipet * Zaman ölçer * Yuvarlak-tabanlı pleyt (Elusyon Pleyt A) * Düz-tabanlı pleyt (Reaksiyon Pleyt B) * Pleyt kapağı * Pleyt çalkalayıcı * Pleyt okuyucu sistem. PROSEDÜR İLE İLGİLİ NOTLAR Bütün numuneler ve örnekleri oda sıcaklığına(20-25 C) gelene kadar bırakın ve kullanımdan önce yavaşça ters düz ederek karıştırın. Reaktif kirlenmesi zayıf performansa neden olabilir. Bir kalibratör eğrisi her testte uygulanmalıdır. Bütün test adımları kesintisiz yapılmalıdır. Reaktifler her kite özeldir ve bu nedenle farklı lot numaralı reaktifler karıştırılmamalıdır. Kullanılan fotometre ve bütün pipetler kullanım öncesi uygun bir şekilde kalibre edilmelidir. Kalite Kontrol Kontrol örnekleri her testte doğru prosedür sağlamak için çalıştırılmalıdır. Kontrol değerleri test onaylanmadan önce laboratuar aralıkları içinde kalmalıdır. TEST PROSEDÜRÜ Reaktiflerin hazırlanması 1. Enzim Reaktifin bir şişesini 3mL Enzim Reaktif Diluent ile çözündürün. Tarihi not edin. 2. Koenzim Reaktifin 1 şişesini 50mL deiyonize suyla çözündürün. Tarihi not edin. Çözünmüş her şişeyi döndürerek yavaşça karıştırın ve kullanmadan önce 5 dakika bekletin. Eğer orijinal şişeleri içinde tutulursa Enzim ve Koenzim Reaktifleri çözündürüldükten sonra 2-8 C'de 30 gün stabildir. PART No.: EKBPHE Ed. 7 Page 4 of 5 Revision date: 1 July 2009
Reaktifleri kuvvetlice karıştırmayın. 3. Bir full pleyt için yeterli Çalışma Enzim Reaktifi hazırlamak için 0.5mL Enzim Reaktif, 2.5mL Assay Buffer ekleyin ve 7.5mL Koenzim Reaktif ekleyin. Döndürerek yavaşça karıştırın. Kullanmadan önce Çalışma Enzim Reaktifi hemen hazırlayın. 4. Bir full pleyt için yeterli Çalışma Renk Reaktifi hazırlamak için 0.5mL Renk Reaktif ve 10mL deiyonoze su ekleyin. Döndürerek yavaşça karıştırın. Kullanmadan önce hemen Çalışma Renk Reaktifi hazırlayın. Kalibratörler ve Kontroller Her lot için belirlenmiş kan konsantrasyonları, kan spotlarının her seti için etiket üzerinde belirtilmiştir. Yoğunlaşmayı önlemek için, sıcaklık dengelenmeden açmayın. Kullanılmayan kan spotlarını folyo çanta içine koyun, ağzını iyice kaptın ve 2-8 C'de saklayın. Protokol* 1. Elution Pleyt A da belirlenmiş aynı kuyu içine 3 mm kan spotlarından iki adet yerleştirin ( kontrol kalibratör ve numuneler için ). Pançlama sırasında kan spotlarının kenarlarını almaktan kaçının. 2. Her kuyu içine 100µL TCA pipetleyin. Pleyti yavaşça sallayın ve her iki kan spotunun da sıvıya girdiğine emin olun. 3. Kapak ile Elution Peyt A yı kapatın ve bir pleyt çalkalayıcısı üzerinde oda sıcaklığında(20-25 C) 60 dakika boyunca inkübe edin. 4. Elution Peyt A dan 40µL ekstraktı Reaksiyon Pleyt B in uygun kuyularına transfer edin. 5. Bütün kuyuların içine 100µL Çalışma Enzim Reaktifi pipetleyin. 6. Kapak ile Reaksiyon Pleyt B yi kapatın ve bir pleyt çalkalayıcısı üzerinde oda sıcaklığında(20-25 C) 40 dakika boyunca inkübe edin. 7. Reaksiyon Pleyt B nin bütün kuyuları içine 100µL Çalışma Renk Reaktifi pipetleyin. Pleytiı yavaşça sallayın ve kuyuların içinde hava kabarcığı olmamasından emin olun. 8. Kapak ile Reaksiyon Pleyt B yi kapatın ve oda sıcaklığında (20-25 C) sabit olarak 5 dakika süresince inkübe edin. 9. Çift dalga boyunda 570nm ve 690nm de Reaksiyon Pleyt B nin absorbansını ölçün. Reaksiyon Pleyt B 30 dakika gecikmeye kadar okunabilir. [*Alternatif protokol için Teknik Özete bakın - Form # EPHETB1,]. PART No.: EKBPHE Ed. 7 Page 5 of 5 Revision date: 1 July 2009
SONUÇLARIN HESAPLANMASI Eğer otomatik veri hesaplayıcı yoksa, sonuçlarının hesaplanması manuel olarak gerçekleştirilir. Her kuyu için OD belirleyin. Y-ekseninde OD ve x-ekseninde kalibratörün konsentrasyonu ile doğrusal grafik kağıdı kullanarak kalibratör eğrisini çizin. Eğri çiziminde, lineer regresyon veya noktadan-noktaya eğri modelleri kullanılabilir. Kalibrasyon eğrisi üzerinde OD verilerini kullanarak numune değeri ölçülür. her bir numune için kan PHE mg/dl değerlerini kaydedin. ELEGANCE Yenidoğan PHE test kitinin aralığı yaklaşık kanda 0-20 mg / dl arasındadır fakat rapor edilen maksimum konsantrasyon kullanılan fotometre nin lineerite performansı ile sınırlıdır. Eğer yüksek kalibratörün OD değeri fotometre aralıklarından yukarı ise, o zaman bu kalibratör, kalibratör eğrisinin çizgisi dışında olarak kabul edilebilir. Benzer şekilde, mikropleyt okuyucunun aralığı dışında ölçülen her hangi bir numune kabul edilen en yüksek kalibratörden büyük olarak rapor edilmelidir. MODEL HESAPLAMALARI Son nokta Verisi ID Ave OD PHE (mg/dl W.B.) 0.9 0.028 2.9 0.038 5.4 0.050 9.9 0.072 20.9 0.126 Numune 10.0403.4 Numune 20.0627.8 Numune 30.09815.1 KALİBRASYON Bu kitte sağlanan kalibratörler Amino Asid Referans Malzeme verilerine dayalı olarak kalibre edilmiş ve mg/dl tam kan olarak ifade edilmiştir. 3 mm lik kan spotundaki kanın hacmi % 55 hematokrite sahip kanın 3 μl si olarak değerlendirilmiştir (v / v). µmol/l ye dönüştürmek için, 60,6 dönüşüm faktörü kullanın. 1 mg/dl = 60,6 µmol/l SINIRLAMALAR Test, doğumundan 48 saatten daha az süre geçmiş, kan transfüzyonu yapılmış,ilaç almış bebeklerde ve prematüre bebeklerde fenilalanin tespit etmek için uygulanmaz. ["Beklenen Değerler" bölümüne de bakın] PART No.: EKBPHE Ed. 7 Page 6 of 5 Revision date: 1 July 2009
BEKLENEN DEĞER ELEGANCE Fenilalanin Test Kiti ile ölçülen fenilalanin konsantrasyonu 902 yenidoğan kurumuş kan spot örneklerinin test edilmesi ile bir çalışmada değerlendirildi. Ortalama PHE konsantrasyonu 1mg/dL dir. Cut-off değeri (ortalama + 3SD) 2mg/dL olarak tespit edildi. Bu cut-off değerinin yukarısındaki numuneler muhtemel pozitif olarak kabul edildi ve tekrar test (doğrulayıcı) gecikmeden yapılmalıdır. Fenilketonüri için bir tarama yöntemi olduğundan yüksek sonuç kesinlikle tanı koydurucu değildir. Ancak sorun tespit edilen yenidoğanda acilen daha fazla araştırma yapılması gereğini işaret eder. Premature, düşük doğum ağırlıklı veya hasta yenidoğan veya doğumdan sonra 48 saatten az zamanda alınan numunelerin şüpheli fenilalanin değerleri gerçek klinik durumu ile ilgili olmayabilir. Tedavide bu gibi klinik durumlar değerlendirilmelidir. Her laboratuar kendi referans aralıklarını ve laboratuarın rutin popülasyonundan gelen örneklere dayalı cut-off belirlenir ve cut-off düzeylerinden üzerindeki yenidoğanların takibini kapatmak için bir prosedür oluşturulması şiddetle önerilir. PERFORMANS ÖZELLİKLERİ 2-spot test Intra-test Hassasiyet Numune n Mean ± 2SD %CV (mg/dl tam kan) 1 14 2.7 ± 0.2 3.2 2 14 7.3 ± 0.6 4.2 3 14 13.4 ± 0.6 2.1 Inter-test Hassasiyeti Numune n * Mean ± 2SD %CV (mg/dl tam kan) 1 9 2.5 ± 0.5 10.5 2 9 7.6 ± 0.6 3.7 3 9 13.5 ± 1.4 5.0 * dört misli PART No.: EKBPHE Ed. 7 Page 7 of 5 Revision date: 1 July 2009
Özgüllük Her potansiyel çapraz reaktant 11mg/dL PHE eklenir. Amino Asid Çapraz reaktant Konsentrastyon % PHE (mg/dl W.B.) Kurtarma Alanin 20 96.2 Alanin 20 100.7 Arginin 20 102.2 Aspartik Asid 20 104.0 Sistein 20 101.6 Glutamik Asid 20 102.0 Glisin 20 103.1 Histadine 20 97.7 Hidroksiprolin 20 98.2 Lösin 20 101.2 Metionin 20 95.3 Proline 20 100.4 Serine 20 94.1 Triptofan 20 99.2 Tirozin 20 100.2 Valin 20 95.9 Doğruluk Gerialma, dışsal analitin eklenmesinden önce ve sonra test edilmesi ile hesaplandı. NumuneGözlenen PHE Beklenen PHE %Kurtarma (mg/dl W.B.) (mg/dl W.B.) 1 5.4 5.2 104.3 2 8.2 8.0 102.1 3 12.9 12.8 100.7 Dilüsyon Bir numune sıfır kalibratör ile dilüe edildi, test edildi ve geri alma hesaplandı. Numune Gözlenen PHEBeklenen PHE% Kurtarma (mg/dl W.B.) (mg/dl W.B.) Numune 10.0 1/2 5.0 5.0 99.9 1/4 2.5 2.5 101.3 Duyarlılık Testin duyarlılığı genellikle 0.2 mg/dl PHE tam kandan daha azdır. Duyarlılık doz tepki değişkenine (OD) karşılık gelen analitin konsantrasyonu olarak tanımlanır bu bir test çalışmasında sıfır kalibratörün 12 kez çoğalmasının belirlenmesinde tahmin edilen sıfır noktasındaki iki standart sapmasıdır. PART No.: EKBPHE Ed. 7 Page 8 of 5 Revision date: 1 July 2009
Etkileşim Analit gerialımında 1350 mg / dl trigliserid, 10 mg / dl bilirubin ve 20 mg / dl hemoglobin konsantrasyonunda hiçbir etkileşim gözlenmedi. SİPARİŞ BİLGİ VE TEKNİK SERVİS ELEGANCE NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY kiti Bioclone Australia Pty Limited, 71-73 Railway Parade, Marrickville NSW 2204, AUSTRALIA. nın bir ürünüdür. Telephone +61 (0) 2 9517 1966 Freecall 1800 251 138 Fax +61 (0) 2 9517 2990 Email sales@bioclone.com.au Web www.bioclone.com.au TEKNİK SERVİS Tam teknik servis Bioclone +61 (0) 2 9517 1966 yada Freecall 1800 251 138 aranarak kullanılabilir. Manufactured by Bioclone Australia Pty Limited (a subsidiary of Hitachi Chemical Co., Ltd) ABN 14 002 036 071 71-73 Railway Parade Marrickville NSW AUSTRALIA 2204 Tel +61 (0) 2 9517 1966 Fax +61 (0) 2 9517 2990 Freecall 1800 251 138 Email sales@bioclone.com.au Web www.bioclone.com.au PART No.: EKBPHE Ed. 7 Page 9 of 5 Revision date: 1 July 2009