ProtoFluor Reaktif Sistemi REF. 2000
KULLANIM AMACI Helena ProtoFluor Reaktif Sistemi tam kanda çinko protoporfirin ölçmek için hematoflorometre kullanılır. Çinko protoporfirin (ZPP) ölçümü demir eksikliğinde kırmızı kan hücrelerinde mikrositer hipokrom anemi için bir tanı testi olarak kullanılır 1-4. Kırmızı hücre hem oluşmuş porfirin halkaya demir eklenerek oluşturulur. Yetersiz demir kaynağı (demir eksikliği) veya bozulmuş demir kullanımı (aşırı kurşun zehirlenmesi) durumunda, çinko protoporfirin IX de demir yerine geçer. Şelasyon sürecinde oluşan ZPP stabildir ve 120 gün boyunca kırmızı hücrede kalır. Kırmızı hücrede ZPP düzeyi, daha sonra, hücre olgunlaşması sırasında mevcut demir kaynağının fonksiyonel bir göstergesidir. Ayrıca kanda kurşun seviyesinin artması artan ZPP ile sonuçlanır. CDC, 25 μg/dl den 10 μg/dl e çocuklarda önerilen kurşun tarama seviyesini düşürmüştür. 25 μg/dl altında kurşun seviyeleri önemli derecede ZPP oluşumunu etkilemez ve bu nedenle kurşun taramada bu testin kullanımı artık tavsiye edilmez. Lamola ve Yamane, aşırı kurşun zehirlenmesi ile ilişkili floresan eritrosit porfirinin çinko protoporfirin (ZPP) olduğunu göstermiştir ve kırmızı kan hücresi içinde absorpsiyon ve floresans özellikleri belirlemiştir 5. ZPP, bir ön yüz florimetre kullanımı ile tam kanda kolaylıkla tespit edilebilir 6-7. Kandaki ZPP in absorpsiyonu (424 nm Soret bant) ve floresanı (595 nm) çeşitli porfiriyalar ile ilişkili olan metal-free porfirinlerden farklıdır. Demir eksikliği anemisi ile ilişkili floresan porfirin kurşun zehirlenmesi ile üretilen ZPP ile aynıdır. ZPP in hematofluorometer ölçümü sırasında, kan ın eksik oksijenasyonu yanlış negatif veya düşük duyarlılık gibi düşük sonuçlara yol açan haemaglobinde bir spektral değişime neden olur. ProtoFluor Reaktif kullanımı ile, stabil bir hemoglobin spektrumu,deoksijenasyon kaymadan kaçınarak, haemaglobin in full oksijenasyonu ile karşılaştırılabilen sonuçlar üretir. ProtoFluor Reaktif kullanımı olmadan, hava akımı ölçüm yapmadan hemen önce test slaydı üzerinde kan damlası silinmelidir. Bu yöntemin standardizasyonu son derece zordur ve test sonuçlarında önemli farklılıklar görülür. ProtoFluor Kalibratörler tekrarlanabilir ve ProtoFluor sisteminin yüksek ve düşük düzeylerinde cihaz kalibrasyonu sağlamak üzere tasarlanmıştır. Ayrıca, üreticinin talimatlarına göre diğer hematoflorometre sistemleri için günlük kalibrasyon, tekrarlanabilirlik ve doğrusallık kullanılabilir. Hematoflorometre den başka kan porfirin testleri saflaştırma adımının ardından porfirin (ler) in ekstraksiyonunu içerir 8. ProtoFluor Reaktif ve ProtoFluor Kalibratörleri kullanarak Hematofluorometry demir eksikliği tanısında eritrosit ZPP düzeylerinin belirlenmesi için çok kolay, doğru, basit ve ucuz bir yöntem sunmaktadır. Yöntem sadece bir damla tam kan gerektirir ve örnek ölçümlerine gerek yoktur. Genel laboratuvar tanısı ve beslenme durumuna ek olarak, demirin şüpheli olduğu durumlarda test kan bankacılığı, spor hekimliği ve pediatri gibi uzmanlıklar için yararlı olabilir. Çinko protoporfirin ölçmek için hematofluorometre in temeli hemoglobinin tamamen oksijenli olmasını gerektirir. Tam kan için ProtoFluor Reaktif ekleyerek hemoglobin, hematofluorometer çalışılan bölgede oxyhemoglobin in spektral özelliklere sahip bir ürün için elde edilir. Böylece, oksijenasyondan kaçınmak için gerekli olan orta yaşlı ve deoksijenize kanda daha doğru ve hassas çinko protoporfirin belirlemeyi sağlamaktır. UYARILAR VE ÖNLEMLER Tüm kitler yalnızca in-vitro diyagnostikte kullanım içindir. Herhangi bir kit bileşenini ağzınızla pipetlemeyin, ağzınıza sürmeyin. Tüm kit bileşenlerinin işlemi sırasında eldiven giyin. Risk, güvenlik koşulları ve atım bilgisi için ürün güvenlik kağıdına başvurun. 1
BİLEŞENLER 1. ProtoFluor Reaktif Sulu solüsyon içinde stabilizatörler olarak siyanür tuzu içerir. Reaktif paket içinde kullanıma hazırdır. 2. ProtoFluor Düşük Kalibratör ve ProtoFluor Yüksek Kalibratör Koruyucular ve stabilizatörler olarak çinko protoporfirin solüsyon ve piridin içerir. Kalibratörler ProtoFluor sistemi için μmol ZPP/mole Heme de test edildi. ZPP konsantrasyon için kalibratörler ile paketlenmiş test kartına bakın. Kalibratörler paketlenmiş olarak kullanıma hazır. 3. Diğer Kit Bileşenleri Her kitin kullanım talimatlarını içerir. SAKLAMA VE RAF ÖMRÜ 1. ProtoFluor Reaktif Reaktif 15...30 C de saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Bulanıklık bozulmayı gösterebilir. 2. ProtoFluor Düşük Kalibratör ve ProtoFluor Yüksek Kalibratör Kalibratörler 2...6 C de saklanmalıdır ve etiket üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. Partiküllü madde bozulmayı gösterebilir. SAĞLANMAYAN FAKAT GEREKSİNİLEN ÖĞELER Cam test tüpler 12 x 75mm Pasteur pipetler NUMUNE ALINMASI VE HAZIRLANMASI Tercih edilen numune heparin, EDTA veya sitrat gibi anti-koagülant ile toplanan tam kandır. Fingerstick den alınan kan: Heparinli mikro-hematokrit kapiller tüplere kan alın. Critoseal ile tüpleri kapatın. Test çalışmaya hazır olduğunda, tüplerin başlarını kesin ve 12 x 75mm test tüplerine bir damla kan alın. STEP-BY-STEP PROCEDURE de venipunktür örnekler için gösterdiği gibi alın. Saklama ve Stabilitesi: Örnekler alındıktan sonra ve hemoliz oluşmadan önce hemen test edilmelidir. Bir haftaya kadar saklama kabul edilebilir fakat antikoagulate kan bekledikçe hemoliz olur ve hatalı sonuçlara neden olur. Engelleyici maddeler: 1. Hemolizli örnekleri kullanmayın. 2. Anormal olarak artan bilirubin spektral özelliklerinden dolayı pozitif engel oluşturur. ADIM-ADIM PROSEDÜR NOT: Tam kanda ZPP düzeylerinin ölçümü için tüm talimatları için Hematofluorometer Çalışma manueline bakın. Aşağıdaki prosedür, özellikle ProtoFluor Kalibratörleri ve ProtoFluor Reaktif kullanımı gösterir. 1. Talimatlara göre hematoflorometre yi ısıtın. 2. ProtoFluor Kalibratörlerin ve saklanan numunelerin oda sıcaklığına gelmesini bekleyin. Floresan sıcaklığı ile etkilenir, bu nedenle 15... 30 C ye getirmek önemlidir. 3. ProtoFluor Kalibratörler kullanarak hematoflorometre de cihazın kalibrasyonunu ve kalite kontrolünü gerçekleştirin. 4. Kullanım manuelindeki talimatlara göre ProtoFluor Yüksek ve Düşük Kalibratörleri kullanarak ProtoFluor Z Hematofluorometer de kalibre edin. 5. Aşağıdaki adımları göre diğer hematoflorometer sistemlerinin hassasiyetini doğrulayın. 2
a) Örnek lameli üzerine doğrudan bir damla ProtoFluor Düşük Kalibratör damlatın. Şişe ucu kullanarak, kalibratörü tamamen görünen örnek alanında kapatmak için damlayı yayın. alibratör için ProtoFluor Reagent EKLEMEYİN. b) Hematofluorometer bir okuma yapın ve sonuçları kaydedin. c) ProtoFluor Yüksek Kalibratörü kullanarak a ve b adımlarını tekrar edin. 6. ProtoFluor Reaktif kullanarak tam kanda ZPP düzeyini belirleyin. 7. Pasteur pipet kullanarak, küçük test tüpüne(12 x 75mm) hasta tam kan örneğinden bir damla koyun. Parmaktan alınan örnek için önerilen ÖRNEK ALMA VE HAZIRLAMA prosedürüne bakın. 8. İki damla ProtoFluor Reaktifi ekleyin. 9. Kısa süre çalkalayarak karıştırın (bir kaç dakika yeterlidir). Vortekslemeyin. 10. Örnek taşıyıcı içine konulmuş olan cam lamel üzerine bir damla örnek damlatın. Test tüpün ağzını kullanarak damlayı yayın daha sonra örneği uygun lamelle kapatın. 11. Hematoflorometer için kullanım manuelindeki talimatlara göre ölçüm işlemine devam edin. NOT: Her hazırlanmış slaytta sadece bir okuma yapın. Eğer tekrar okuma gerekirse, temiz lamel üzerine taze bir damla kalibratör damlatın ve ikiniv bir okuma yapın. Kan ve reaktif karıştığında, solüsyon 5 dakikaya kadar stabilidir. Bir okuma alındıktan sonra, test karışımı daha fazla stabil değildir. Okuma sırasında kan örneğinin bozulması fotodekompozisyona neden olabilir. SONUÇLARIN YORUMLANMASI ProtoFluor Reaktifinin kullanımında tam olarak oksijenli, temiz, tam kan ile elde edilenlerle karşılaştırılabilir sonuçlar vermelidir. Gerçek değerler cihaz tarafından görüntülenen birimlere bağlıdır (μg ZPP/dL tam kan; μg ZPP/g, μmol ZPP/mol heme; μg ZPP/dL RBC). Kırmızı kan hücrelerinde ZPP in yükselen seviyeleri demir eksikliği veya ağır kurşun zehirlenmesinin göstergesidir. Demir eksikliği aşırı kan kaybı ya da yetersiz demir alımı, emilimi veya kullanımından kaynaklanabilir. Genellikle eksiklik bebeklik ve çocukluk ya da hamilelik sırasında hızlı büyüme dönemlerinde artan ihtiyacın olduğu dönemlerde ortaya çıkar. ZPP in yükselen düzeylerinde retiküloendotelyal hücreden çıkan demirin serbest kalmasını bloke eden kronik enfeksiyon ya da malignite gibi kronik hastalık ile ilişkili anemi de görülebilir 1. Demir eksikliği durumlarında ZPP ölçümleri anemi oluşumundan önce hem in biyosentetik yolunda subklinik değişikliklerin teşhisi anlamına gelir. Özet olarak, demir eksikliği eritropoez ile ZPP artar. Yükseltilmiş bir ZPP, 35μg/dL den daha yüksek kurşun seviyelerinden de kaynaklanabilir. Bu gözlem yükselmiş ZPP sonuçları yorumlarken dikkate alınmalıdır. Bu düzeydeki kurşun son derece toksik olabilir. Davranış problemleri ve düşük IQ, ZPP analizini tespit etmek için çok düşük kurşun düzeylerinde dokümante edilmiştir ve bu nedenle, bu test artık kurşun tarama için önerilmez. KALİTE KONTROL ProtoFluor Kalibratörleri kalibrasyon ve kalite kontrolü için kullanılmaktadır. Test edilmiş referans malzemelerinin iki düzeyi (düşük ve yüksek) her bir kit ile birlikte verilmektedir. SINIRLAMALAR Helena ProtoFluor Z hematofluorometer tam kanda çinko protoporfirin / hem oranını ölçmek için tasarlanmıştır. ÖRNEK ALMA VE HAZIRLAMA, Engelleyici Maddeler bakın. 3
PERFORMANS ÖZELLİKLERİ PRESİZYON ÇALIŞMALARI Çalışma arası: Çalışma içi: Bir tek kan örneği aşağıdaki sonuçlar ile ProtoFluor Reaktif ile replike olarak çalıştırıldı: Karşılaştırma Çalışmaları Korelasyon çalışmaları ProtoFluor Sistemi ve Havalandırma kullanılarak yapıldı. Veri metabolit oranı μmol ZPP/mol Heme gibi sonuçlarını görüntülemek için tasarlanmış özel bir modifiye hematofluorometer üzerinde yapıldı. Aşağıdaki sonuçlara ulaşılmıştır: BIBLIYOGRAFYA 1. Trundle, D. D., Erythrocyte Zinc Protoporphyrin, Clin Chem News, pg 8, August, 1984. 2. Labbe, R. F., History and Background of Protoporphyrin Testing. Clin Chem, 23(2):256-259, 1977. 3. Labbe, R. F. et al., Erythrocyte Protoporphyrin/Heme Ration in the Assessment of Iron Status. Clin Chem, 25:87-92, 1979. 4. Sassa, S. et al., Studies in Lead Poisoning. I. Microanalysis of Erythrocyte Protoporphyrin Levels of Spectrophotometer in the Detection of Chronic Lead Intoxication in the Subclinical Range. Biochem Med, 8:135, 1973. 5. Lamola, A.S. and Yamane, T., Zinc Protoporphyrin in the Erythrocytes of Patients with Lead Intoxication and Iron Deficiency Anemia. Sciences, 186:936, 1974. 6. Blumberg, W.E. et al., Zinc Protoporphyrin Level in Blood Determined by a Portable Hematofluorometer: A Screening Device for Lead Poisoning. J Lab Clin Med, 89(4):712-722, 1977. 7. Rettmer, R.L et al., The Zinc Protoporphyrin/Heme Ratio in Laboratory Diagnosis. Clin Chem, 31:1025, 1985. 8. Piomelli, S., Free Erythrocyte Porphyrins in the Detection of Undue Absorption of Pb and of FE Deficiency. Clin Chem, 23:264, 1977. 4