PLASENTAL KAYNAKLI MEZENKİMAL KÖK HÜCRELERİNİN KRONİK BÖBREK YETMEZLİĞİNDE PROLİFERASYON VE APOPTOZ MEKANİZMALARINA ETKİSİ 33. Ulusal Nefroloji Kongresi Büşra Çetinkaya 1,Gözde Ünek 2,Aslı Özmen 2,Müge Molbay 2, Karoline Dogum 2,Sadi Köksoy 3,Gültekin Süleymanlar 4,Emin Türkay Korgun 2 1 Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı; Bülent Ecevit Üniversitesi Tıp Fakültesi Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı 2 Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı 3 Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji ve İmmünoloji Anabilim Dalı 4 Akdeniz Üniversitesi Tıp Fakültesi İç Hastalıkları Anabilim Dalı 21.10.2016
Anlatım Planı Ön Bilgi Materyal ve Metod Bulgular Sonuçlar
KÖK HÜCRE Kendini yenileme Farklılaşma Klon oluşturabilme
http://brightnepenthe.blogspot.com/2010/10/stem-cells-part-2.html
Renal Fibrozis Renal fibrozis, ekstrasellüler matriks bileşenlerinin aşırı üretimiyle birlikte sürekli böbrek inflamasyonuyla kombine olan durumdur. Fibrozis, glomerülde ve/veya tübülointerstisyal alanda gerçekleşmektedir. Bu lezyonlar zamanla ilerleyerek, nefron disfonksiyonuna, atrofiye ve böbrek yetmezliğine neden olur.
Aristolohik Asit (AA) Aristolohik asit, renal fibrozisi oluşturarak KBY ye neden olmaktadır. Sun, D., et al.,am J Nephrol, 2006 Yang, L., X. Li, and H. Wang., Nephrol Dial Transplant, 2007
Bu çalışmanın amacı, insan plasentasından elde edilen mezenkimal kök hücrelerin kronik böbrek yetmezliği sonucu oluşan fibrozisin onarılmasında proliferasyon ve apoptoz mekanizmalarında etkili olup olmadığını belirlemektir.
MATERYAL- METOD
İnsan Term Plasentasından Amniyon Mezenkimal Kök Hücre İzolasyonu Hücrelerin Flow Sitometre ile Karakterizasyonu Mezenkimal Hücrelerin Adiposit, Kondrosit ve Osteositlere Yönlendirilmesi ve Oil Red O, Alcian Blue, Alizarin Red, Sirius Red Boyamalarının Yapılması
Aristolohik Asit Kullanılarak KBY Modelinin Oluşturulması 150-200 g ağırlığına sahip 4 haftalık Wistar türü erkek sıçanlar kullanıldı. KBY modeli için her 3 gün de bir 10 mg/kg olacak şekilde intraperitonal olarak AA enjeksiyonu 6 hafta boyunca yapıldı. Enjeksiyon sonrasında KBY nin meydana gelmesi için 6 hafta beklendi. Sham grubuna ise 6 hafta boyunca DMSO verildi ve 6 hafta beklenildi. Gruplar: Kontrol (n=5) AA (n=5) Sham+30 (n=5) AA+KH+30 (n=5) 6x10⁵ iamkh intravenöz Sham+60 (n=6) AA+KH+60 (n=6) 6x10⁵ iamkh intravenöz
Özel Boyamalar ( Masson Trikrom ve Sirius Red) İmmünohistokimya Boyamaları İnsan Mitokondri Antikor PCNA Ki67 TUNEL Western Blot Analizi PCNA P57 Apoptotik Parp Serum Kreatinin ve Üre Testleri
BULGULAR
Amniyon Membranından Kök Hücre İzolasyonu iamkh:
Hücrelerin Flow Sitometre ile Karakterizasyonu CD 90: CD 105: CD 73: %98.8 %95,3 %93,5
CD 44: Negatif Kokteyl (CD34, CD45, CD11b, CD19, HLA-DR) : %88,6 %3,9
Mezenkimal Kök Hücrelerin Adiposit, Kondrosit ve OsteositlereYönlendirilmesi Kondrojenik farklılaşma: Alcian Blue Sirius Red
Osteojenik Farklılaşma: Adipojenik Farklılaşma: Alizarin Red Oil Red O
MASSON TRİKROM 10X 20X 40X Kontrol AA Sham+30 AA+KH+30 AA+KH+60
SİRİUS RED Kontrol 10X 20X 40X AA Sham+30 AA+KH+30 AA+KH+60
İmmünohistokimyasal Boyamalar İnsan Mitokondri Antikor 40X 100X Böbrek (Sıçan) Pozitif Kontrol: Desidua (İnsan)
PCNA Kontrol 10x 20x 40x K AA Sham+30 AA+KH+30 AA+KH+60
Ki67 Kontrol 10x 20x 40x K AA Sham+30 AA+KH+30 AA+KH+60
TUNEL Kontrol 10x 20x 40x AA Sham+30 AA+KH+30 AA+KH+60 l
WESTERN BLOT ANALİZLERİ
Serum Kreatinin ve Kan Üre Nitrojen (BUN) Konsantrasyonları
SONUÇLAR
1. Özel boyama sonuçları doğrultusunda, AA uygulanması renal dokuda fibrozise neden olabilir. 2. AA indüklü KBY modelinde mezenkimal kök hücrelerin transplantasyonu sonucunda PCNA ve Ki67 bulguları ile proliferasyonun arttığı tespit edilmiştir. 3. KBY de apoptotik PARP ve TUNEL bulgularına göre kök hücre transplante edilen renal doku hücrelerinde apoptoz azalmaktadır. 4. p57 proteinin ekspresyonu; iamkh transplante edilen gruplarda, AA uygulanan gruplara göre azalma göstermektedir. Bu bulgular, AA grubunun hücre siklusunda duraklama evresine girdiğini ve bunun sonucu olarak apoptoza yöneldiğini göstererebilir. 5. Bu çalışma, özetle AA-indüklü KBY de iamkh lerin renal dokuda proliferasyonu arttırdığını ve apoptozu azalttığını göstermiştir. 6- Fonksiyonel olarak üre ve keratinin konsantrasyon miktarlarının kök hücre verilen gruplarda, AA uygulanan gruplara göre azalması iamkh renal fibrozisde etkili olabileceğini düşündürmektedir.
TEŞEKKÜR EDERİM