Kullanılan Semboller Üretici. In vitro diagnostik medikal gereç. Lot numarası. Katalog numarası. İle Kullanım. Kullanım bilgileri.

Transkript

1

2 İÇERİK TABLOSU Kullanılan Semboller... 6 Türkçe Kullanım Amacı... 9 Test Prensibi... 9 Reaktifler... 9 Tanımlama,kullanım için hazırlama ve saklama koşulları... 9 Reaktif Hazırlama Kit içeriğinde olmayan gerekli materyaller Güvenlik ve Çevre Koşulları Örnekler Beyanat ve Önlemler Yıkama Talimatı Manipulasyon Prosedürü Kaplı olmayan polipropilen pleytte örnek dağılımı için talimatlar Test Prosedürü Sonuçlar Validasyon Test sonuçları Sınırlamalar Test performansı Klinik sonuçlar Test aralığı Analitik özgünlük Belirleme limiti Kesinlik Bir standart eğri örneği Yasal Uyarı Kullanılan Semboller Üretici In vitro diagnostik medikal gereç Lot numarası Katalog numarası İle Kullanım Kullanım bilgileri Biyolojik riskler Sıcaklık sınırlamaları < X > testi için yeterli miktarı içerir Kaplı Plate Standard Örnek Diluent

3 Konjugat 1 100x Konjugat 2 100x Konjugat Diluent 1 Konjugat Diluent 2 Substrat 100x Substrat Buffer Stop Solusyonu Yıkama Solusyonu 25x Kullanım Amacı INNOTEST ß-AMYLOID (1-42) insan beyin- omurilik sıvısında (BOS) ß-amyloid (1-42) kantitatif belirlemesi için solid-faz bir enzim imunotesttir. BOS-ß-amyloid(1-42) ve BOS-tau markır konsantrasyonlarının kombinasyon şeklinde kullanılması, Alzheimer hastalığı ve normal yaşlanma ya da depresyon gibi diğer nörolojik hastalıklar arasında ayrım yapmaya yardımcı olur (Hulstaert F et al. Neurology 1999;52:1555). Test Prensibi INNOTEST ß-AMYLOID (1-42) solid fazda bağlı olan bir monoklonal antikor (21F12) tarafından ilk yakalanan amiloid peptid ile solid-faz bir immunotesttir. BOS örnekleri 25-µl eklenir ve biotin işaretli antikor (3D6) ile inkübe edilir. Bu antikor, peroxidase işaretli streptavidin ile belirlenir. Substrat solusyonunun eklenmesinden sonra, pozitif örnekler mavi renk oluştururlar. Reaksiyonu durdurmak için sulfuric asid eklenmesinden sonra renk sarıya döner. Absorbansları 450 m de okunur. Reaktifler Tanımlama,kullanım için hazırlama ve saklama koşulları - Tüm test reaktifleri orjinal ambalajında, 2-8 C de saklanırsa son kullanma tarihine kadar bozulmaz. Son kullanım tarihi geçmiş reaktifleri kullanmayınız. - Tüm reaktifler ve alüminyum folyo poşetlerindeki stripler kullanımdan yaklaşık 30 dakika önce oda sıcaklığına (18-30 C) getirilmiş olmalı ve kullanımdan hemen sonra buzdolabına (2-8 C) kaldırılmalıdır.. Kuyucuklarda su yoğunlaşmasından kaçının, alüminyum folyo oda ısısında bekletilirken sıkıca kapatılmış olmalıdır. İçeriğindeki Reaktifler: Komponent Miktar Ref. Açıklama Kaplı plate 1 x kapalı paket bir strip-tutucu ile 12 x 8 kaplı test kuyucukları içerir. Içine kurutucu madde olarak silikajel torba eklenmiştir. Örnek 1 x 30 ml Stabilize proteinler ve koruyucu olarak 0.01% MIT/0.1% CAA içeren Phosphate buffer Diluent yüksek konsantrasyonda ß-amyloid (1-42) içeren standart ve örneklerin seyreltilmesi için. Konjugat 1 1 x 0.2 ml Stabilize proteinler ve koruyucu olarak 0.04% MIT/0.1% CAA içeren phosphate buffer da biotin işaretli mouse anti-ß-amyloid (1-42) IgG. Kullanılmadan önce Konjugat Diluent 1 ile 100x seyreltilmelidir (Reaktif Hazırlamaya bakın). Konjugat çalışma solusyonu 1 oda sıcaklığında 24 saat saklanabilir. Konjugat 2 1 x 0.3 ml Koruyucu olarak 0.02% MIT and 0.02% bromonitrodioxane içeren peroxidase-işaretli streptavidin. Kullanılmadan önce Konjugat Diluent 2 ile 100x seyreltilmelidir (Reaktif Hazırlamaya bakın)). Konjugat çalışma solusyonu 2 taze olarak hazırlanmalıdır. Konjugat 1 x 20 ml Stabilize proteinler ve koruyucu olarak 0.01% MIT/0.1% CAA içeren phosphate buffer Diluent 1 Konjugat 1in seyretilmesi için kullanılır. Konjugat 1 x 30 ml Koruyucu olarak 0.05% Proclin 300, stabilizer olarak bovine casein içeren, protease inhibitor Diluent 2 olarak bovine aprotinin içeren phosphate buffer, Konjugat 2 seyreltilmesi için. Substrat 1 x 0.3 ml Dimethyl sulfoxide içinde çözülmüş Tetramethyl benzidine (TMB) TMB kullanılmadan önce Substrate Buffer ile 100x seyreltilmelidir. Substrat çalışma solusyonu taze olarak hazırlanmalıdır. Substrat 1 x 30 ml % hydrogen peroxide içeren phosphate-citrate buffer, Buffer Substrat TMB seyreltilemesi için kullanılır. Stop 1 x 30 ml N sulfuric acid Solusyonu Yıkama 1 x 60 ml % MIT/0.09% CAA içeren phosphate buffer Solusyonu kullanılmadan önce distile ya da deiyonize su ile 25x seyreltilmelidir. Herbir test kuyucuğu için en az 40 ml yıkama solusyonu hazırlayın.

4 Yıkama Solusyonda 2-8 C de bekledikten sonra tuz kristalleri oluşabilir. Bu kristaller, seyreltme yapmadan önce 37 C de eritilmelidir. Standart 3 x 0.2 ml Kullanılmadan önce standartın tezgah üzerinde erimesini sağlayın ve vorteksleyin. Değişken Donmuş standart konsantrasyonuna dayanarak konsatrasyonu Örnek Diluent içinde ± 1500 µl ( yüksek standart (2000 pg/ml) hazırlayın pg/ml) Diğer standartları hazırlamak için Lot numarasına 2000 pg/ml kullanın (tabloya bakın). göre kullanılır Önce standart stoğu eritilmelidir, daha sonraki kullanımlar için saklanmamalıdır. Kullanımdan sonra dilusyonlar atılmalıdır. Tüm standartları hazırlamak için sadece polipropilen tüpler kullanılmalıdır. Kaplı olmayan 1 - Reaktivite değişimini önlemek için polipropilen kaplı pleyte transferden önce plate örneklerin ayrılması için. Plate kaplayıcı Minigrip poşet 1 - Kullanılmamış striplerin saklanması içindir. Reaktifleri Hazırlama 1500 µl 2000 pg/ml ß-amyloid (1-42) standart Hazırlanması Y = kit ile birlikte verilen konsantre standart konsantrasyonu X = 2000 pg/ml solusyon hazırlamak için kullanılacak olan Y miktarı X = 1500 (= hazırlanan miktar) x 2000 (= yüksek standart konsantrasyonu) µl Y Kons. (pg/ml) Standart Örnek Diluent 2000 => A X µl X µl 1500 => B 150 µl of A 50 µl 1000 => C 200 µl of A 200 µl 500 => D 200 µl of C 200 µl 250 => E 200 µl of D 200 µl 125 => F 200 µl of E 200 µl NOT: - Herbir standart seviyesi ve herbir standart karıştırılması yapılmadan önce yeni bir uç takın. Konjugat çalışma solusyonu 1 ve 2, substrat çalışma solusyonu hazırlanması 8 wells 16 wells 32 wells 64 wells 96 wells CONJ 1 in µl CONJ DIL 1 in ml wells 16 wells 32 wells 64 wells 96 wells CONJ 2 in µl CONJ DIL 2 in ml wells 16 wells 32 wells 64 wells 96 wells SUBS in µl SUBS BUF in ml Preparation of diluted wash solution 8 wells 16 wells 32 wells 64 wells 96 wells WASH SOLN 25x in ml H2O in ml Kit içeriğinde bulunmayan gerekli materyaller - Distile ya da deiyonize su µl pipetler ve tek kullanımlık pipet uçları. Ornekler, Konjugat çalışma solusyonu, Substrat çalışma solusyonu ve Stop Solusyonu eklenmesi için 25 µl, 50 µl, 75 µl, 100 µl, 200 µl multikanal pipetlerin kullanılması önerilir. - Vorteks mikser. - Örnek sulandırmak ve standart hazırlamak için polipropilen tüpler. - Microplate yıkayıcı (400 µl volümlü tekrar şırıngası ve aspirator kullanılarak alternatif olarak yıkama el ile yapılabilir). - Zamanlayıcı. - Emici dokular. - Fotometrik Okuyucu: 450 nm ve opsiyonel olarak 595 nm, 620 nm ya da 690 nm de okuma yapaliben ve ya da daha yüksek aralıkta linear absorbansa sahip mikroplate okuyucu.

5 - Çalışma solusyonlarını hazırlamak için tek kullanımlık şişeler. - Potansiyel kontaminasyonlu materyallere uygun biyotehlikeli atık konteyner. - Mikroplate shaker (1000 rpm); alternative olarak, karıştırma pleyt kenarını tutup sallayarak da yapılabilir. Güvenlik ve Çevre Koşulları - Lütfen Material Safety Data Sheet (MSDS) ve potansiyel tehlikeli komponentler içeren işaretli ürün bilgilerini inceleyiniz.. En son güncellenen MSDS versiyonu websitesinde yer almaktadır. R43, S24-37 Tahriş edici! (Xi) Deri ile temasından kaçınınız. Deri ile teması hassasiyete neden olur. Eldiven kullanın. 2-Chloroacetamide içerir: CONJ 1, CONJ DIL 1, SAMP DIL, ß-amyloid (1-42) STAND. R36/37/38, S Tahriş edici! (Xi) Gözler, solunum sistemi ve deri için tahriş edicidir. Buharını solumayınız. Deri ile temasından kaçınınız. Gözler ile temas etmesi halinde hemen bol su ile yıkayınız ve doktorunuza başvurunuz. DMSO içeren: Substrat TMB 100x. R34, S28-36/37/39-45 Koroziv! (C) Yanmaya sebep olur. Deri ile temas etmesi halinde bol miktarda su ve sabunla yıkayınız. Koruyucu giysiler, göz/yüz koruyucu giyiniz ve eldiven kullanınız. Bir kaza olduğunda ya da kendinizi kötü hissettiğinizde derhal doktorunuza başvurunuz (üzerindeki etiketi gösteriniz). STOP SOLUSYONU H2SO4 içermektedir. - Örneklerin potansiyel enfeksiyon ajanı olduğu göz önüne alınarak kullanılmalıdır. Tüm biyolojik materyallerinin potansiyel enfeksiyon ajanı olduğu göz önüne alınarak kullanılmalıdır. Sadece yeterince tecrübesi olan personel bu testi çalışmalıdır. Tüm biyolojik materyaller güvenlik koşullarına uygun olarak atılmalıdır. 121 C de 15 dakika otklavlanmalıdır. Tek kullanımlık materyaller yakılmalıdır. Sodyum hipokloritli miks likit atıkların son konsantrasyonu ± 1% sodyum hipoklorit olmalıdır. Atmadan önce bir gece bekletiniz. ÖNLEM: asit içeren likitlere sodium hipoklorit eklemeden önce nötralize ediniz. BEYAN: Bulaşıcı Spongiform Ensefalopati (TSE) / Prion kontaminasyonlu materyaller için özel uyarı: Örneklerin inaktivasyonu BOS gibi klinik örnekler, son aşamada yakılmadan önce otoklavlanmalı ya da 20,000 ppm serbest klor içeren sodium hipoklorit solusyonuna batırılmalıdır. Atılması Klinik atık olarak sınıflandırılan tüm materyaller yakılarak yok edilmelidir. Klinik atıkların güvenli muamele görmesi için sızmayı önleyen konteynerlere atılması gerekir. Konteynerlerin dış kontaminasyonlarından kaçının. Referans: - Tehlikeli Patojenler Danışma Komitesi (UK) - Spongiform Ensefalopati Danışma Komitesi - Bulaşıcı Spongiform Ensefalopati Ajanları: Güvenli çalışın ve Enfeksiyona karşı önlem alın. - Dünya Sağlık Örgütü (WHO): WHO Bulaşıcı Spongiform Ensefalopatiler için Enfeksiyon Kontrol Kuralları. - STOP SOLUSYONU 0.9N sulfuric acid içerir, KONJ 2 koruyucu olarak MIT/Bromonitrodioxane ve KONJ DIL 2 koruyucu olarak Proclin 300 içerir. - Tehlikeli ya da enfeksiyonlu ajanlar ile çalışılırken koruyucu giysiler; eldiven ve koruyucu gözlük kullanılması gereklidir. - Atıklar hastanelerin atılım talimatlarına göre yok edilmelidir. Kamusal ve çevresel düzenlemelere uyulmalıdır. Örnekler - İnsan beyiomurilik sıvısı -20 C (-80 C tercihen) de saklanmalıdır, polipropilen tüplerde toplanmalıdır. Örnekler hücrelerden serbest olmalı ve hemoliz göstermemelidir. - Bu test serum taraması veya hücre kültür süpernatantları için kullanılamaz. - Devamlı dondurup çözdürmekten kaçınmak için örnekleri küçük hacimlere ayırıp saklamanız önerilir. - OD450 değeri en yüksek standardın üzerinde olan BOS örnekleri, doğru seviyelerde ölçebilmek için Örnek Diluent ile seyreltilmelidir. - Test yapılmadan önce örneklerin çözülmemiş kısımları 4000 devirde 10 dakika santrifüj ile ortadan kaldırılmalıdır. - Cam ya da polistren ß-amyloidi absorbe edebilir. BOS veya standart dilusyonu yapılırken polipropilen şişe kullanılması şiddetle tavsiye edilir. Beyanat ve Önlemler - Farklı lot numarasındaki reaktifleri birbirine karıştırmayınız. - Tüm kanallar Konjugat Çalışma Solusyonu ve Substrat Solusyonu hazırlanmasından sonra distile su ile iyice temizlenmelidir. - Kontaminasyonu önlemek için plate kenarlarına dokunmayınız. - Reaktiflerin mikrobiyal kontaminasyonundan kaçınınız. - Kullanmadan önce örnekler ve kontrollerin homojen olduğundan emin olun. - Herbir örnek için yeni bir pipet ucu kullanın. - Örneklerin kuyucuklara eklendiğinden emin olun. - Kontaminasyonu önlemek için örnek ya da konjugat yüklerken kuyucukların kenarlarına pipet ucu ile değmeyiniz. - Hava baloncuklarını pleyte hafifçe vurarak yok ediniz - İnkübasyon ya da saklama sırasında Substrat Solusyonunu güçlü ışık altında açıkta bırakmayın. Substrat ile inkübasyon sırasında plate karanlıkta bekletilmelidir. Substrat Solusyonu kullanılırken renksiz olmalıdır. Eğer solusyon maviye dönerse değiştirilmelidir. - Stop Solusyonu, Substrat çalışma solusyonu, Konjugat çalışma solusyonu 1 veya Konjugat çalışma solusyonu 2 istenmeyen renk değişimlerini önlemek için metal veya metal iyonları ile temas etmemelidir. - Yıkama sonrasında eğer kuyucuklar hemen konjugat ya da substrat ile doldurulmamış ise, emici doku üzerine ters çevrilmeli, 15 dakikadan uzun olmayacak şekilde Yıkama Solusyonu ile ıslatılmalıdır. - Reaktif çalışma solusyonlarını hazırlarken kan toplama tüplerini kullanmayınız. Yıkama Talimatı En etkili otomayıkama performası: Columbus M8/2ch Tecan. Protokol talep üzerine verilir. Diğer yıkayıcı ve protokoller için aşağıdaki otomatik yıkama önerilerine dikkat ediniz: - Seyreltilmiş yıkama solusyonu ile yıkayıcıya önyıkama yaptırınız.

6 - 5 yıkama siklüsüne ayarlanmalıdır: 400 µl/kuyucuk miktarında yükleyin. Doldurma yüksekliğini kuyucuğun tamamı olarak ayarlayınız. Bir aspirasyon/yıkama/ıslanma siklüsü yaklaşık 30 saniye sürmelidir. Aşağıda manual yıkama adımları bulunmaktadır: - Tüm kuyucuklardaki sıvıyı tamamen aspire edin, aspiratörün ucu ile kuyucukların dibinde kalanları da çekin. - Kuyucuk yüzeyine zarar vermemeye dikkat edin. - Herbir aspirasyondan sonra pleyti ters çevirin ve emici dokular üzerinde sertçe vurun. - Kuyucukları 400 µl seyreltilmiş Yıkama Solusyonu ile doldurun. - En az 30 saniye ıslanması için bekleyin ve sıvıyı aspire edin. - Bu adımları 5 kez tekrarlayın. - Yıkama tamamlandıktan sonra pleyti ters çevirin ve emici dokular üzerinde sertçe vurun. Tamamlanmamış yıkama, sonuçları olumsuz etkileyecektir. Yıkama solusyonunun ve yıkayıcının kontamine olması kapsamlı problemlere neden olabilir. Bir problem oluştuğunda, yıkama şişesi ve yıkayıcıyı uygun dezenfeksiyon solusyonu ile overnight dezenfekte ediniz. Manipulasyon Prosedürü Kaplı olmayan polipropilen pleytte örnek dağılımı için talimatlar Örnek inkübasyonu oda ısısında(18-30 C) 60 dakika olduğu için, pipetleme zamanı minimuma indirilmelidir. Bir reaksiyon değişikliğini azaltmak için, bekleme istasyonu olarak kaplı olmayan polipropilen mikropleyt eklenmiştir. 3 stripten fazla test kullanılacaksa polipropilen mikropleyt kullanmanızı öneririz. - Ön hazırlama pleytinin kuyucuklarına 60 µl standard / örnek diluent / örnek olacak şekilde pipetleyin. Çok-kanallı pipet kullanarak kaplı olmayan polipropilen pleytten test pleytine 25 µl örnek aktarın (Test prosedürlerine bakınız). Test Prosedürü Lütfen teste başlamadan önce Beyanat ve Önlemler kısmını okuyunuz. NOT: - Tüm örnek ve test materyallerinin kullanmadan önce oda sıcaklığına (18-30 C) getirilmiş olduğundan emin olunuz. - Teste başlamadan önce tüm reaktif ve örnekler hazır olmalıdır. Bir kere teste başlandığında, en güvenilir ve uygun sonuçları almak için ara verilmeden yapılmalıdır. 1. Gerekli sayıda stribin üzerindeki koruyucuları alın, herbir test çalışması için 6 standart ve bir blank kuyucuğu içermelidir. Test çalışması sırasında, strip, ilgili çerçevesi içinde olmalıdır. Üçten fazla strip gerektiği durumlardar, örneklerin dağıtılması için kit içeriğinde bulunan polipropilen peytin kullanılması önerilmektedir. Kullanılmayan stripler plastik minigrip poşetinin içinde silikagel kurutucu ile saklanmalıdır. 2. Konjugat çalışma solusyonu 1 hazırlayın ve antikor kaplı pleytin herbir kuyucuğuna 75 µl ekleyin. 3.a. Sınırlı sayıda örnek test edildiği durumlarda: 25 µl herbir standarttan (blank 25 µl Örnek Diluent içeren) ve örneklerden ekleyin ve iki kopya koyun. BOS örnekleri testten önce vortekslenmelidir, pleyt dikkatlice sallanarak ya da plate shaker (1000 rpm de 1 dakika) kullanılarak karıştırılmalıdır. 3.b. Yüksek sayıda örnek test edildiği durumlarda(3 stripten fazla): Çok kanallı pipet kullanılarak, polipropilen pleytten ilişkili olan antikor-kaplı pleytin herbir kuyucuğuna 25 µl transfer edin (Manipulasyon prosedürüne bakın, Kaplı olmayan polipropilen plate). 4. Standartların ve BOS örneklerinin plate dikkatlice sallanarak ya da 1000 rpm de 1 dakika karıştırıcıda karıştığından emin olun. Stripleri yapışkan kaplayıcı ile kapatın ve oda ısısında (18-30 C) 1 saat inkübe edin aşama tamamlanmadan hemen önce konjugat çalışma solusyonu 2 yi hazırlayın. 6. Herbir kuyucuğu 5 kez yıkayınız (Yıkama Talimatlarına bakınız). 7. Herbir kuyucuğa 100 µl Konjugat çalışma solusyonu 2 ekleyiniz. Stripleri yeni yapışkan kaplayıcı ile kapatınız ve oda ısısında (25 ± 2 C) 30 ± 3 dakika inkübe ediniz aşama tamamlanmadan hemen önce substrat çalışma solusyonunu hazırlayın. 9. Herbir kuyucuğu 5 kez yıkayınız (Yıkama Talimatlarına bakınız). 10. Herbir kuyucuğa 100 µl Substrat çalışma solusyonu ekleyiniz ve oda ısısında ve karanlıkta (18-30 C) 30 ± 3 dakika inkübe ediniz. 11. Reaksiyonu durdurmak için, Substrat Solusyonu ile aynı sekansta ve aynı zaman aralığında 50 µl Stop Solusyonu ekleyiniz. Strip tutacağını miksin tam üzerini kapattığından emin olacak şekilde dikkatlice kapatınız adımdan sonra 15 dakika içinde kuyucuklardaki solusyonların absorbanslarını 450 nmde mikroplate okuyucu da okutunuz. Sonuçlar Validasyon - Blankin 450 nm de absorbansı den düşük olmalıdır. - Yüksek standartın 450 nm de absorbansı 1.5 den yüksek olmalıdır. NOT:

7 - Çift dalgaboyu (450 nm, 620 nm) kullanıldığında elde edilen absorbans değeri, tek dalgaboyu değerinden yaklaşık 50 mod farklı olacaktır. Bu durum test sonuçlarını etkilemez. Sonuçların Hesaplanması Standart solusyonların ve bilinmeyen örneklerin ortalama absorbanslarını ölçünüz. OD değerleri 20% den fazla farklı ise testi tekrar ediniz. ß-amyloid(1-42) standart solusyonların her biri dikey (Y) aksiste ve ilişkili ß-amyloid(1-42) konsantrasyonlarının yatay (X) aksiste olduğu ortalama absorbans değerleri grafiğinden standart eğriyi işaretleyiniz. Bu noktalardan en iyi uygun eğriyi çiziniz. NOT: - Uygun bir sigmoidal eğri gerekmektedir (çeşitli eğimler, dört parametreli lojistik denklem ya da Logit-Log ile sigmoidal doz-cevap). Herbir bilinmeyen BOS örneğinin ortalama absorbans değerini kullanarak, pg/ml olarak ß-amyloid (1-42) ilişkili konsantrasyonlarını belirleyiniz. Sadece absorbanslar standart eğri limitleri içinde ise örnek konsantrasyonları belirlenebilir.en yüksek noktaya uzanan ya da en düşük noktaya inen uygun değerler ile anormal olarak ölçülen konsantrasyonları düzenleyebilirsiniz. Sınırlamalar INNOTEST ß-AMYLOID (1-42) test prosedürü insan beyinomurilik sıvısında ß-amyloid (1-42) kantitasyonu için dizayn edilmiştir. Diğer vucüt sıvıları ve beyin dokuları ile test performansı hakkında yeterli bilgi bulunmamaktadır. Bu nedenle, bu örneklerin çalışılması önerilmez. Test Performansı Klinik Sonuçlar Eksternal validasyon çalışması, BOS araştırmaları yapan sekiz Avrupa ve iki Amerika üniversite merkezinde yürütülmüştür (Hulstaert F et al. Neurology 1999;52:1555). 150 AD hastası (AD), 79 bunamanın non-ad tipleri hastaları (NAD), 84 diğer nörolojik hastalar (ND) ve 100 sağlıklı gönüllü ya da beyin patolojik kondisyonları (CON) ile alakalı olmayan hastalığa sahip hastalar ile yapılan çalışmalarda rezidüel BOS depolarında ß-amyloid(1-42) ve tau protein BOS seviyeleri belirlenmiştir. ß-amyloid(1-42) kantifikasyonu INNOTEST ß-AMYLOID(1-42), tau protein konsantrasyonu INNOTEST htau Ag kullanılarak ölçülür. ß-amyloid (1-42) ortalama seviyesi AD (487 pg/ml) de CON (849 pg/ml; p=0.001), ND (643 pg/ml; p=0.001) ve NAD (603 pg/ml; p=0.001) dan düşüktür. AD nin CON ve ND den ayırt edilmesi ß-amyloid(1-42) ve tau protein (ayrım çizgisi Aß42= ,18 tau) kombinasyonunun keşfi ile önemli ölçüde gelişmiştir. 85% duyarlılıkta, 55% (95% CI [47%, 62%]) ß-amyloid(1-42) tek başına ve 65% (95% CI [58%, 72%]) tau protein tekbaşına ile kıyaslandığında kombine testin özgünlüğü 86% (95% CI [81%, 91%]) dır. 85% duyarlılıkta kombine test NAD için 58% (95% CI [47%, 69%]) spesifiktir. Tartışmalarda, ß-amyloid(1-42) ve tau protein konsantrasyonlarının kombine ölçümü, Konsensus kuralları tarafından AD nin normal gelişme ve depresyon gibi spesifik nörolojik hastalıklardan ayırt edilmesi için gerekli olduğunu görülmüştür: bir biyomarkır 80% den fazla duyarlılık ve özgünlüğe sahip omalıdır (Consensus raporu [no authors listed] Neurobiol Aging 1998;19:109). BOS-ß-amyloid(1-42) ve BOS-tau marker konsantrasyonlarının kombinasyonu erken ADA tanısı (Andreasen N et al. Neurosci Lett 1999;273:5) ya da diğer spesifik klinik tespitlerde (Andreasen N et al. Arch Neurol 2001;58:373) kullanılabilir. AD nin Lewy Bodies içeren bunama gibi diğer AD-olmayan bunama tiplerinden ayırt edilmesi, BOS-phospho-tau181 kantitasyonu kullanılarak geliştirilmesine yardımcı olabilir (De Vreese K et al. [poster136] Abstract Book:18th International Conference of Alzheimer's Disease;2002 October 23-26;Barcelona, Spain). Test Aralığı ß-amyloid (1-42) standart aralığı 125 ve 2000 pg/ml arasındadır (figür 1 deki standart eğriye bakın). Analitik Özgünlük INNOTEST ß-AMYLOID (1-42) amino asit 1 ile başlayan ve amino asit 42 ya da 43 ile biten amiloid peptidler için yüksek özgünlüktedir. ELISA ve BIAcore ile teyit edilmiş olarak the (1-42) peptid için yüksek duyarlılık görülmektedir. Belirleme Limiti En düşük belirleme limiti ± 50 pg/ml ve örnek diluentin 8 determinasyonunun ortalaması + 5 SD olarak ölçülmüştür. Kesinlik Çalışma-içi Standartlar Çalışma-içi varyasyon çeşitli standart konsantrasyonlarında (2000, 1500, 1000, 750, 500, 250, 125 pg/ml) belirlenmiştir, tümü altı defa test edilmiştir. Her standart için varyasyon katsayısı (%) 2.5, 6.0, 7.3, 4.6, 7.6, 7.3 olarak bulunmuştur. Örnekler 6 farklı kalite kontrol örneği için ortalama VK (%) (iki BOS dahil) altı defa test edilmiştir ve 400 pg/ml den yüksek değerler ile ölçülmüştür. Çalışmalar-arası Örnekler Çalışmalar-arası varyasyon 6 farklı kalite kontrol örneği (iki BOS dahil) kullanılarak belirlenmiştir, üç kez çalışılmış, altı farklı test çalışmasında. Tüm örnekler için ölçülen ortalama VK 7.7%. Bir standart eğri örneği Tipik bir standart eğri aşağıda gösterilmiştir. Bu eğri sadece örnek içindir ve herbir çalışma için yeni bir standart eğri çizilmelidir.

8 Tablo 1: Standartların karakteristik absorbans değerleri Standart (pg/ml) Ortalama Figür 1: Bir standart eğri örneği Figür 2: INNOTEST ß-amyloid (1-42) Özgünlüğü Yasal Uyarı US 5,593,846A, US 5,766,846A, US 5,837,672A, US 6,284,221B1, US 6,610,493B1, US 5,441,870A, US 5,721,130A, US 5,605,811A and US 6,114,133A patentli bu ürünleri içeren Abeta monoclonal antikorlarının kullanımı için bir lisans Eli-Lilly ve Şirketiden edinilmiştir. Daha fazla ürün sitesinde bulabilirsiniz.