İnönü Üniversitesi Sğlık Bilimleri Dergisi 213; 1: 23-28. Arştırm Mklesi İnsn Meme Knseri Hüre Serileri (MCF-7) Üzerine Apelin-13 ün Etkilerinin Arştırılmsı: In Vitro Bir Çlışm The Investigtion of The Effets of Apelin on Humn Brest Cner Cell Lines (MCF-7): An In Vitro Stuy Fer KOYUNOĞLU 1, Sut TEKİN 2, Vhit KONAR 1, Süleymn SANDAL 2 1 Fırt Üniversitesi Fen Fkültesi Biyoloji Bölümü, Elzığ 2 İnönü Üniversitesi Tıp Fkültesi Fizyoloji AD, Mlty Özet Apelin, G protein kenetli orfn pelin reseptörünün (A PJ) enojen ligntıır. Apelinin hipotlmust özellikle rkut, suproptik ve prventriküler nükleus gii hipotlmik lnlr ğılım göstermesi testis, prostt ve meme okusun APJ nin ulunmsı, üreme sistemi üzerine pelinin önemli fizyolojik etkilerinin olileeğini kl getirmekteir. Apelinin ypısınki 13 mino sit izilimi tüm formlrın eğişmez oluğunn, temel pelin ypısı pelin-13 olrk kul eilmekteir. Bu çlışm ilk olrk, östrojen uyrlı insn meme knseri hüre httın (MCF 7), pelin 13 ün.1, 1 ve 1 nm'lık konsntrsyonlrı, östrojen hormonunun 1, 1, 1 nm lik konsntrsyonlrı uygulnı. Dh sonr pelinin, 1 ve 1 nm oln ozlrı ile östrojen hormonunun 1, 1, 1 nm lik ozlrı eş zmnlı olrk kültüre uygulnı ve 24 st inküe eili. Bu melerin MCF-7 hüre nlılığı üzerine etkileri, 3-(4,5-imethylthizol-2-yl)-2,5- iphenyltetrzolium romie (MTT) ssy ile elirleni. Sonuçlr, % hüre nlılık eğeri olrk elirleni. MCF 7 hüre httın uygulnn pelin-13 ün hüre nlılığını zlttığı (p<.5), östrojenin ise hüre nlılığını rttırığı tespit eili (p>.5). Apelin -13 ün, MCF-7 hüre serilerine nlılığı zltmsı (östrojen inüklemeli gruplr hil) polifertif etkinin östrojen reseptör kynklı oluğunu ve pelin-13 ün nti-knserojenik ir jn olrk kullnılileeğini kl getirmekteir. Anhtr Kelimeler: MTT ssy, pelin, APJ, MCF-7, hüre kültürü Astrt Apelin is the enogenous lign for the G-protein-ouple APJ reeptor. Apelin hs een foun in hypothlmi fiels suh s the prventriulr nuleus n supropti nuleus of the hypothlmus n it is seen in testile, prostte n mmmry tissues. Therefore pelin my e influentil on proutive system. Apelin show the istriution the hypothlmus, espeilly the rute, supropti nuleus n suh s prventriulr hypothlmi res. Presene of APJ in the testiles, the prostte tissue, rest tissue, suggests tht pelin my e importnt physiologil effets on the reproutive system. As the sequene of 13 mino is in pelin n not e hnge, the si pelin struture is epte s pelin-13. In the stuy, firstly,.1, 1 n 1 μm onentrtions of pelin 13 n 1, 1, 1 μm onentrtions of estrogen were pplie into the line of estrogen sensitive rest ner ell ( MCF 7). Apelin.1, 1 n 1 μm n estrogen hormone 1, 1, 1 μm were simultneously ulture n inute for 24 hours n their effetiveness were etete y mens of 3-(4,5-imethylthizol 2-yl)-2,5-iphenyltetrzolium romie (MTT). It hs een etete tht pelin 13 pplie into MCF 7 line ereses the ell liveliness, n estrogen inreses ell liveliness (p<.5). These results suggest tht the prolifertive effet on MCF 7 is estrogen reeptor oriente euse estrogen hormone is estrogen reeptor positive. Apelin-13 to reue the viility of MCF-7 ell lines (inluing estrogen-inue groups) suggests tht polifertif effet is inue estrogen reeptor n pelin-13 n e use s n ntirinogeni gent. Key wors: MTT ssy, pelin, APJ, MCF-7, ell ulture Giriş Meme knseri, kınlr rsın yygın görülmekte ve knser neenli ölümlerin şın yer lmktır. Düny Sğlık Örgütü trfınn, kınlr görülen knser türleri içine en yygın olnının meme knseri oluğu rpor eilmiştir (1). Hstlığın yygın olrk görülmesi ve ölümle sonuçlnmsı neeniyle u hstlığın tevisine yönelik rştırmlr hlen günelliğini korumkt ve gierek rtmktır. Meme knserlerinin orty çıkmsı ve gelişmesine şt östrojen (E 2 ) olmk üzere zı hormonlrın rol oynığı ve hormonlrın etkisi olmn, meme knseri olmyğı ilirilmekteir (2, 3). Bunn olyı kınlr meme knseri erkeklere ornl 1 kt h sık görülmekteir (4). Oezitenin meme knserine ir risk fktörü oluğu ve iyete ğlı yğ lımının knser gelişimine önemli rol oynığı ileri sürülmekteir (5). 1998 yılın Ttemto ve rk. trfınn keşfeilen pelin, ipoz oku ilesinin yeni ir üyesiir (6) ve etkilerini APJ reseptörlerine ğlnrk orty koyr (6-8). İlk olrk sığır mie okusunn izole eilmiş oln pelin (6, 7), 77 minositlik iziye ship ir prepropelin prekürsörünen türemiştir ve frklı okulr eğişik pelin formlrı ulunmktır (pelin -1, 13, 16 ve 36 gii) (9, 1). Ypıln in vitro çlışmlr tüm pelin türevleri içerisine iyolojik olrk en ktif oln formun pelin-13 oluğu orty konulmuştur (6, 9). Ht ve rk. sıçn meme okusun geelik ve lktsyon önemine pelin ekspresyonun elirgin ir rtış oluğunu elirlemişlerir (11). Ypıln çlışmlrl, pelinin see sığır ve sıçn süt örneklerine eğil, insn sütüne e ol miktr ulunuğu gösterilmiştir (9, 1, 12). Apelin mrna sının, Hs 578T insn meme knseri hüre kültürlerine yüksek seviyelere eksprese eiliği orty konulmuştur (13). Ayrı mlin uktl ve loüler tümör hürelerine e pelin mrna ekspresyonunun evm ettiği gösterilmiştir (14). Tüm u F. Koyunoğlu ve rk. 23
ulgulr, meme knseri gelişimine pelinin önemli etkilere ship olileeğini üşünürmekteir. Fkt u sürein yınltılmsın yönelik ypıln çlışmlrın syısı olukç zır. Bu çlışm, pelin-13 ve E 2 hormonlrının in vitro olrk, MCF-7 hüre httı üzerine oln etkilerini elirlemek mıyl ypılı. Gereç ve Yöntem Kimysllr Apelin-13 (Cymn), β-östroiol (Alf esr), Neworn lf serum (FCS) ve pensilin -streptomisin (Biologil Inustries, İsril), NCl, NOH, imetil sülfoksit (DMSO) ve HCl (Merk, Almny) stın lını. Kullnıln iğer kimysllr ve meyumlr, Sigm Alrih ten (St. Louis, MO, ABD) sğlnı. Deneylerin tüm sfhlrın i-istile su kullnılı. Test eileek pelin-13, meyum çözülerek.1, 1 ve 1 nm lik konsntrsyonlrı, β-östroiol ise etil lkole () çözülerek 1, 1, 1 nm lik konsntrsyonlrı eneye kullnılmk üzere hzırlnı. Stok çözeltiler eney süresine +4 C e muhfz eili. Hüre kültürü MCF 7 hüreleri Ort Doğu Teknik Üniversitesi Biyoloji Bölümü nen (Ankr) temin eil i. Çlışm, İnönü Üniversitesi Tıp Fkültesi Fizyoloji Anilim Dlı Moleküler Arştırmlr Lortuvrın ypılı. Tüm hüreler 25 m 2 kültür flsklrın, RPMI-164 meyum (içerisine %1 FCS, 1U/ml penisilin ve.1mg/ml streptomisin ilve eilerek hzırlnn) ile esleniler. Kronioksitli inkütöre (%5 CO 2 +%95 O 2 ; Nuire Co, Plymouth,MN, ABD), 37 C e ve nemli ortm tutuln hürelerin meyumlrı hft iki ef eğiştirili. Hüreler konfluent oluğun, tripsin-edta solüsyonu kullnılrk flsklrn sökülü ve 96 kuyuuklu plklr ktrılrk 3-(4,5-imetiltizol 2-il)- ifenil tetrzolium romi (MTT) ssy nlizlerine kullnılı. Test jnlrı ile mumele Test jnlrı ile mumele eilmeen öne hürelerin nlılık ornlrı (tryphn lue exlusion yöntemi ile) elirleni. Cnlılık ornının %9 ın ltın oluğu urumlr eneylere şlnmı. Test eileek pelin- 13 hormonun.1, 1 ve 1 nm lik, E 2 hormonunun 1, 1, 1 nm ozlrı ve ynı miktrlr çözüü () hürelerin içine ulunuğu kuyuuklr ilve eili ve kronioksit inkütörüne 24 st süreyle 37 C e inküsyon ırkılı. MTT Assy Sitotoksik etkiler, sitotoksisitenin eğerlenirilmesine yygın olrk kullnıln enzimtik test yöntemlerinen iri oln MTT ssy ile elirleni. Bu yöntem, MTT oysının tetrzolium hlksını prçlyilmesi ilkesine ynmktır. Bu yönteme, MTT nlı hürelere ktif olrk sore olur ve reksiyon mitokonriyl süksint ehirogenz trfınn ktlize eilerek mvi-mor renkli, su çözünmeyen formzn inirgenir. Formzn oluşumu, ylnız ktif mitokonrinin ulunuğu nlı hürelere görülmekteir. Bu hüre nlılığının ir elirtei olrk kul eilir ve spektrofotometrik olrk elirlenen eğer, yşyn hüre syısı ile ilişkilenirilir (, 16). Steril PBS içerisine hzırlnn stok MTT solüsyonunn,,5 mg/ml MTT çlışm solüsyonu hzırlnı ve 96 kuyuuklu plklr ilve eili. İnkütöre 3 st ekletilikten sonr plklrki hürelerin optik nsiteleri, ELISA plte okuyuu (Synergy HT ABD) 55 nm lg oyun okutulu (17). Kontrol kuyuuklrı okutulrk, ele eilen sorns eğerlerinin ortlmsı lını ve u eğer %1 nlı hüre olrk kul eili. Çözüü ve jn uygulnn kuyuuklrn ele eilen sorns eğerleri, kontrol sorns eğerine ornlnı ve yüze nlılık olrk kul eili. MTT enemeleri frklı günlere en z on kez tekrr eili. İsttistiksel Anliz Gruplrın norml ğılım uygunluğu, Kolmogorov Smirnov testi ile eğerlenirili. Gruplrın krşılştırılmsın tek yönlü vryns nlizi kullnılı. Vrynslrın homojenliği, Levene testi ile nliz eili. Tek yönlü vryns nlizi sonrsı vrynslrın homojen olmığı gözleni ve çoklu krşılştırmlr için TAMHANE T2 testi kullnılı. p<.5 isttistiksel olrk nlmlı kul eili. Veriler ortlm ± stnrt ht olrk ife eili. Bulgulr MCF-7 hüreleri, 24 st süreyle pelin-13 ün frklı konsntrsyonlrı ile (.1, 1 ve 1 nm) inküe eilikten sonr hürelerin nlılık ornlrın meyn gelen % eğişimler elirlenip sonuçlr Şekil 1 e gösterilmiştir. Hüre Cnlılığı (%) 12 15 9 Kontrol Apelin (.1 nm) Şekil 1. Apelin 13 uygulnmsınn sonr hüre nlılığın meyn gelen (Ort ± SH) eğişiklikler ( p<.1; TAMHANE Post Ho Turkey HSD). Uygulnn pelin-13 ün, tüm konsntrsyonlrı hüre nlılığın önemli zlmlr seep olu (p<.1). E 2 hormonunun tüm ozlrı, (1, 1, 1 nm) 24 st süreyle hüre httın uygulnı ve u süre sonun, E 2 ye ek olrk pelin-13 ün iki frklı ozu (1 1 nm) ilve eili. Hürelerin % nlılık ornlrı Şekil 2A, B, C e gösterilmiştir. E 2 nin tüm ozlrının (1, 1, 1 nm) tek şın uygulnığı hürelerin % nlılık miktrın rtış oluğu nk u rtışın isttistiksel olrk nlmlı olmığı gözleni (p>.5). E 2 ile inküe eilen hürelere inküsyon sonrsı uygulnn pelin-13 ün, her iki ozunun hüre nlılığın nlmlı zlmlr meyn getiriği tespit eili ( p<.1, p<.5, p<.1, p<.5). Apelin (1 nm) Apelin (1 nm) F. Koyunoğlu ve rk. 24
12 15 A 12 15 B Hüre Cnlılığı (%) 9 Hüre Cnlılığı (%) 9 E2 (1 nm) E2 (1 nm)+apelin (1 nm) E2 (1 nm)+apelin (1 nm) E2 (1 nm) E2 (1 nm)+apelin (1 nm) E2 (1 nm)+apelin (1 nm) 12 15 C E2 (1 nm) E2 (1 nm)+apelin (1 nm) E2 (1 nm)+apelin (1 nm) Hüre Cnlılığı(%) 9 Şekil 2. 1 nm (A) 1 nm (B) ve 1 nm ( C) E 2 uygulmsınn 24 st sonr uygulnn pelin- 13 ün (1 ve 1 nm) hüre nlılığın meyn getiriği (Ort± SH) eğişiklikler ( p<.1; p<.5; p<.1; p<.5; TAMHANE Post Ho Turkey HSD) Hüre httın 1, 1 ve 1 nm E 2 ile eş zmnlı.1, 1 ve 1 nm pelin-13 ilve eilerek ypıln enemelere hüre % nlılık miktrlrı Şekil 3A, B, C e gösterilmiştir. Apelin-13 ve E 2 nin eş zmnlı uygulnm sonrsın hüre nlılığın meyn gelen zlmnın, 24 st E 2 uygulmsı sonrsın ele eilen sonuçlrl enzerlik gösteriği tespit eili. Trtışm Knser, son yıllr en üyük sğlık sorunlrn iri hline gelmiş ve kınlr en sık görülen knser kynklı ölüm neenlerinin meme knseri oluğu rpor eilmiştir (18). Meme knserlerinin orty çıkmsı ve gelişmesine şt E 2 olmk üzere zı hormonlrın rolü oluğu ve hormonlrın etkisi olmn meme knseri olmyğı ilirilmekteir (2, 3). 17β-östriolün östrojen reseptör (ER) pozitif meme tümör hürelerine çoğlmyı uyrığı ve poptozu engelleiği ilinmekteir (19). Meme krsinomunki ilerlemenin, E 2 ğımlı oluğu şk çlışmlr gösterilmiştir (2, 21). ER pozitif meme knseri hürelerine, östrojen ER yi ktive eerek hüre siklusunki G1 fzı kısltıp hürenin h sık şekile ölünmesine neen oluğu yrı rpor eilmiştir (22). Bizim çlışmmız E 2 hormonunun 1, 1, 1 nm lik konsntrsyonlrı, MCF-7 hüre httın uygulnı ve % hüre nlılığını mevut çlışmlr enzer şekile kısmen rttığı tespit eili. Bu ulgu, hstlığın ptofizyolojisine E 2 hormonu ve reseptörü için sunuln olsı rollerini h güçlü kılmktır. Yğ okunun, ktif enokrin orgn gii, irçok hormon ve sitokin slgılığı ilinmekteir (23-25). Yğ oku kitlesineki rtışın, meme knserine ir risk fktörü oluğu (5) ve yüksek klorili iyetlerin knser etiyolojisine rol oynığı ilinmekteir (26). Oezitenin zı knser formlrıyl oln ilişkisi uzun zmnır iliniğinen (27), ipositokinlerin knserojen olrk oezite ile knser rsın ir ğlntısının olup olmığını tespit eilmeye çlışılmkt ve rştırmlr u yöne ğırlık kznmktır (28). Mevut litertüre, yğ oku F. Koyunoğlu ve rk. 25
kynklı zı hormonlrın insn meme knseri ile ilişkisini çıklyn çlışmlr ulunmktır. Özellikle iponektin ve leptinin meme knseri ile ğlntısı rpor eilmiştir (29-31). Kim ve rk. trfınn ypıln ir çlışm, yğ oku kynklı ir hormon oln visftinin, MCF-7 hüre httı üzerine ypıln enemelere oz ğımlı olrk hüre nlılığını rttığı gösterilmiştir (32). Somsunr ve rk. trfınn ypıln çlışmyl leptin hormonun MCF-7 hüre serilerine nlılığı etkilemeiği rpor eilmiştir (33). Ctlno ve rk. nın yptığı çlışm, MCF- 7 meme knseri hüre serilerine leptinin romtz ktivitesini inükleiği, E 2 sentezini rttırığı ve E 2 ğımlı meme knseri progresyonun neen oluğu gösterilmiştir (34). Bir şk çlışm ise, iposit ilişkili komplemn protein (Arp ) un oz ğımlı olrk MCF -7 hüre nlılığını zlttığı gösterilmiştir (35). Bu ulgulr, yğ oku ile meme knseri rsınki sinylleri gierek güçlü kılmkt ve yğ okunun ir şk hormonu oln pelinin, meme knserineki olsı rollerine ikktleri çekmekteir. Apelin hormonu ve knser rsınki ilişkiyi gösteren çlışmlrın syısı olukç zır. Bert ve rk. insn kiğer knser hüresi (NSCLC) üzerine pelin uygulmsının etkilerini, hem in vitro heme in vivo olrk rştırmışlrır. Sonuç olrk in vitro pelin uygulmsının hüre nlılığını etkilemeiği, in vivo çlışm ise pelinin njiyogenezi uyrrk tümör hüresinin gelişimini rttırığı gösterilmiştir (36). Heo ve rk. insn il knseri hüreleri üzerine ypmış oluklrı ir şk çlışm, pelinin hüre nlılığını rttırığını rpor etmişlerir (37). Bizim çlışmmız pelin-13 ün,.1, 1, 1 nm lik konsntrsyonlrının MCF-7 hüre nlılığı üzerine olsı etkileri rştırılı. 12 A 12 B 15 15 Hüre Cnlılığı (%) 9 Hüre Cnlılığı (%) 9 E2 (1 nm) Apelin (.1 nm)+e2 (1 nm) Apelin (1 nm)+e2 (1 nm) Apelin (1 nm)+e2 (1 nm) E2 (1 nm) Apelin (.1 nm)+e2 (1 nm) Apelin (1 nm)+e2 (1 nm) Apelin (1 nm)+e2 (1 nm) 12 C 15 E2 (1 nm) Apelin (.1 nm)+e2 (1 nm) Apelin (1 nm)+e2 (1 nm) Apelin (1 nm)+e2 (1 nm) Hüre Cnlılığı (%) 9 Şekil 3. 1 nm ( A), 1 nm (B) ve 1 nm ( C) E 2 ile pelin 13 ün (.1, 1 ve 1 nm) eş zmnlı uygulnmsının hüre nlılığın meyn getiriği (Ort±SH) eğişiklikler ( p<.1; p<.5; p<.1; p<.5; TAMHANE Post Ho Turkey HSD) Çlışm kullnıln pelin-13 ün, tüm konsntrsyonlrının % hüre nlılığını zlttığı tespit eili. Mevut litertüreki in vitro çlışmlrın sonuçlrı ile çlışmmızın ulgulrı çelişmekteir. Bu frklılığın, çlışmlr kullnıln knser hüreleri ve F. Koyunoğlu ve rk. ship oluklrı reseptör çeşitlerinin frklı olmsının ynı sır, kullnıln pelin formlrının ynı iyolojik ktiviteye ship olmmsınn kynklnığını üşünürmekteir. Ayrı in vivo çlışmlr pelinin oğrun eğil, vsküler njiyogenezi rttırrk olylı 26
ir meknizmyl tümör gelişimini rttırığı ilirilmiştir. Bu urum peptiin in vivo ve in vitro ortmlr ypıln enemelere frklı etkiler orty koyileeğini göstermekteir. Bizim çlışmmız sitotoksik etkinin ER uyrlı MCF-7 hürelerine orty çıkmış olmsı, etkinin ER rılı ir meknizm ile oluğunu üşünürmekteir. Ayrı, pelin-13 ün E 2 inüklemeli gruplr hil olmk üzere, MCF-7 hüre serilerine nlılığı zltmsı peptiin nti-knserojenik ir jn olrk kullnılileeğini kl getirmekteir. Apelin-13 ile meme knseri rsınki ilişkiyi çıklyn herhngi ir litertür ilgisi mevut olmyıp, çlışmmız u ln ypılmış ilk rştırm olm özelliğineir. Çlışm kullnıln knser hürelerinin insn özgü olmsı, çlışmmızn ele ettiğimiz sonuçlrın önemini rttırmktır. Bu melerin, in vivo enemelere nsıl sonuçlr vereeğinin, sğlıklı okulr üzerine etkilerinin neler olğının rştırılmsı olukç önemliir. Meknizmnın h iyi nlşılilmesi için, hem in vitro hem e in vivo frklı kpsmlı çlışmlr ihtiyç uyulmktır. Teşekkür Bu proje Fırt Üniversitesi Bilimsel Arştırm Projeleri Birimi (FÜBAP Proje No: FF11.36) trfınn esteklenmiştir. MCF-7 hürelerinin temini konusun yrımlrını esirgemeyen Ortoğu Teknik Üniversitesi Biyoloji Bölümü Öğretim Üyesi Prof. Dr. Ufuk GÜNDÜZ e teşekkür eeriz. Kynklr 1. WHO, Düny Knser Rporu 28, e. P. Boyle, B. Levin28, Lyon. 2. Meites J. Reltion of proltin n estrogen to mmmry tumorigenesis in the rt. J Ntl Cner Inst 1972; 48(4): 1217-24. 3. Cuzik J, Wng DY, Bulrook RD. The prevention of rest ner. Lnet 1986; 1(8472): 83-6. 4. Snten RJ, Boy NF, Chleowski RT, Cummings S, Cuzik J, Dowsett M, Eston D, Fores JF, Key T, Hnkinson SE, Howell A, Ingle J. Critil ssessment of new risk ftors for rest ner: onsiertions for evelopment of n improve risk preition moel. Enor Relt Cner 27; 14(2): 169-87. 5. Dieuonne MN, Bussiere M, Dos Sntos E, Leneveu MC, Giuielli Y, Pequery R. Aiponetin meites ntiprolifertive n poptoti responses in humn MCF7 rest ner ells. Biohem Biophys Res Commun 26; 3(1): 271-9. 6. Ttemoto K, Hosoy M, Ht Y, Fujii R, Kkegw T, Zou MX, Kwmt Y, Fukusumi S, Hinum S, Kit C, Kurokw T, On H, Fujino M. Isoltion n hrteriztion of novel enogenous peptie lign for the humn APJ reeptor. Biohemil n Biophysil Reserh Communitions 1998; 251(2): 471-476. 7. Hinum S, On H, Fujino M. The quest for novel iotive pepties utilizing orphn seventrnsmemrne-omin reeptors. J Mol Me (Berl) 1999; 77(6): 495-54. 8. Toiso A, Cmpell V, Dikinson CJ, DelVlle J, Ym T. Moleulr sis for somtosttin tion: inhiition of -fos expression n AP-1 ining. Am J Physiol 1994; 267(2 Pt 1): G2-53. 9. Hosoy M, Kwmt Y, Fukusumi S, Fujii R, Ht Y, Hinum S, Kit C, Hon S, Kurokw T, On H, Nishimur O, Fujino M. Moleulr n funtionl hrteristis of APJ. Tissue istriution of mrna n intertion with the enogenous lign pelin. J Biol Chem 2; 2(28): 2161-7. 1. Kwmt Y, Ht Y, Fukusumi S, Hosoy M, Fujii R, Hinum S, Nishizw N, Kit C, On H, Nishimur O, Fujino M. Moleulr properties of pelin: tissue istriution n reeptor ining. Biohim Biophys At 21; 38(2-3): 162-71. 11. Ht Y, Fujii R, Hosoy M, Fukusumi S, Kwmt Y, Hinum S, Kit C, Nishizw N, Muroski S, Kurokw T, On H, Ttemoto K, Fujino M. Apelin, the nturl lign of the orphn reeptor APJ, is unntly serete in the olostrum. Biohimi et Biophysi At (BBA) - Moleulr Cell Reserh 1999; 12(1): 25-35. 12. Wng G, Anini Y, Wei W, Qi X, O Crroll A-M, Mohizuki T, Wng H-Q, Hellmih MR, Englner EW, Greeley GH. Apelin, New Enteri Peptie: Loliztion in the Gstrointestinl Trt, Ontogeny, n Stimultion of Gstri Cell Prolifertion n of Choleystokinin Seretion. Enorinology 24; 1(3): 1342-1348. 13. Wng G, Qi X, Wei W, Englner EW, Greeley GH, Jr. Chrteriztion of the 5'-regultory regions of the rt n humn pelin genes n regultion of rest pelin y USF. FASEB J 26; 2(14): 2639-41. 14. Wng Z, Greeley GH, Jr., Qiu S. Immunohistohemil loliztion of pelin in humn norml rest n rest rinom. J Mol Histol 28; 39(1): 121-4.. Denizot F, Lng R. Rpi olorimetri ssy for ell growth n survivl: Moifitions to the tetrzolium ye proeure giving improve sensitivity n reliility. Journl of Immunologil Methos 1986; 89(2): 271-277. 16. Horkov K, Sovikov A, Seemnnov Z, Syrov D, Busnyov K, Dron Z, Ferenik M. Detetion of rug-inue, superoxie-meite ell mge n its prevention y ntioxints. Free Ri Biol Me 21; (6): 65-64. 17. Mosmnn T. Rpi olorimetri ssy for ellulr growth n survivl: pplition to prolifertion n ytotoxiity ssys. J Immunol Methos 1983; 65(1-2): 55-63. 18. Ry A. Aipokine leptin in oesity-relte pthology of rest ner. J Biosi 212; 37(2): 289-94. 19. Yşrtürk Ü, Altıntş A. Meme Tümörlü Köpeklere Serum 17β-estriol Kolesterol ve Trigliseri Düzeylerinin Klinik Önemi. F.Ü.Sğ.Bil.Vet.Derg. 21; 24(3): 7-161. 2. Henerson BE, Ross R, Bernstein L. Estrogens s Cuse of Humn Cner: The Rihr n Hin Rosenthl Fountion Awr Leture. Cner Reserh 1988; 48(2): 246-253. F. Koyunoğlu ve rk. 27
21. Crlstrom K. Influene of intrtumorl estriol iosynthesis on estrogen reeptors. Reent Results Cner Res 1984; 91: 1-9. 22. Osorne CK. Tmoxifen in the tretment of rest ner. N Engl J Me 1998; 339(22): 19-18. 23. Gimle JM. Aipose tissue-erive therpeutis. Expert Opin Biol Ther 23; 3(5): -13. 24. Woznik SE, Gee LL, Whtel MS, Frezz EE. Aipose tissue: the new enorine orgn? A review rtile. Dig Dis Si 29; 54(9): 1847-56. 25. Liu Y, Song CY, Wu SS, Ling QH, Yun LQ, Lio EY. Novel ipokines n one metolism. Int J Enorinol 213; 213: 895. 26. Popkin BM. Unerstning glol nutrition ynmis s step towrs ontrolling ner iniene. Nt Rev Cner 27; 7(1): 61-7. 27. Zhng Y, Proen R, Mffei M, Brone M, Leopol L, Friemn JM. Positionl loning of the mouse oese gene n its humn homologue. Nture 1994; 372(655): 425-32. 28. Groflo C, Surmz E. Leptin n ner. J Cell Physiol 26; 27(1): 12-22. 29. Mntzoros C, Petriou E, Dessypris N, Chvels C, Dlmg M, Alexe DM, Ppimntis Y, Mrkopoulos C, Spnos E, Chrousos G, Trihopoulos D. Aiponetin n rest ner risk. J Clin Enorinol Met 24; 89(3): 112-7.. Miyoshi Y, Funhshi T, Kihr S, Tguhi T, Tmki Y, Mtsuzw Y, Noguhi S. Assoition of serum iponetin levels with rest ner risk. Clin Cner Res 23; 9(): 5699-74. 31. Mtsur M, Mruok S, Ktyose S. Inverse reltionship etween plsm iponetin n leptin onentrtions in norml-weight n oese women. Europen Journl of Enorinology 22; 147(2): 173-18. 32. Kim JG, Kim EO, Jeong BR, Min YJ, Prk JW, Kim ES, Nmgoong IS, Kim YI, Lee BJ. Visftin stimultes prolifertion of MCF-7 humn rest ner ells. Mol Cells 21; (4): 341-5. 33. Somsunr P, Yu AK, Von-Dvis L, MFen DW. Differentil effets of leptin on ner in vitro. J Surg Res 23; 113(1): 5-5. 34. Ctlno S, Muro L, Mrsio S, Giorno C, Rizz P, Rgo V, Montnro D, Mggiolini M, Pnno ML, Ano S. Leptin inues, vi ERK1/ERK2 signl, funtionl tivtion of estrogen reeptor lph in MCF-7 ells. J Biol Chem 24; 279(19): 1998-. 35. Grossmnn ME, Nkht KJ, Mizuno NK, Ry A, Clery MP. Effets of iponetin on rest ner ell growth n signling. Br J Cner 28; 98(2): 37-9. 36. Bert J, Kenessey I, Doos J, Tovri J, Klepetko W, Jn Ankersmit H, Hegeus B, Renyi-Vmos F, Vrg J, Lorinz Z, Pku S, Ostoros G, Rozss A, Timr J, Dome B. Apelin expression in humn nonsmll ell lung ner: role in ngiogenesis n prognosis. J Thor Onol 21; 5(8): 112-9. 37. Heo K, Kim YH, Sung HJ, Li HY, Yoo CW, Kim JY, Prk JY, Lee UL, Nm BH, Kim EO, Kim SY, Lee SH, Prk JB, Choi SW. Hypoxi-inue upregultion of pelin is ssoite with poor prognosis in orl squmous ell rinom ptients. Orl Onology 212; 48(6): 5-56. İletişim Sut TEKİN İnönü Üniversitesi Tıp Fkültesi Fizyoloji AD, Mlty sut.tekin@inonu.eu.tr F. Koyunoğlu ve rk. 28