INNO-LiPA HLA-DPB. Fujirebio Italia S.r.l. Tel Fax

Transkript

1 INNO-LiPA HLA-DPB ANAHTAR-KODU: FRI INNO-LiPA HLA-DPB v p 1/9 Türkçe Tarafından üretildi: Fujirebio Europe N.V. Technologiepark Gent Belgium Tel BTW BE RPR Gent Tarafından dağıtılan: Fujirebio Europe N.V. Tel Fax customer.support@fujirebio-europe.com Fujirebio Germany GmbH Tel Fax germany@fujirebio-europe.com Fujirebio Italia S.r.l. Tel Fax italy@fujirebio-europe.com Fujirebio Iberia S.L. Tel Fax spain@fujirebio-europe.com "Vurgulanan Not değişiklikleri" Fujirebio France SARL Tel Fax france@fujirebio-europe.com Diğer Dillere bakınız / Autres langues voir / Andere Sprachen siehe / Altre lingue vedere / Ver otros idiomas / Outras línguas ver: EUROPE GR IS LT RO SK TR LI MT EE non-europe US CA AR, BR, CO, UY, AU, NZ, RU :00 17:00 GMT+1 M T W T F S S Fujirebio Europe N.V

2 80344 INNO-LiPA HLA-DPB / v1 / ANAHTAR KODU:FRI36908 p 2/9 İÇİNDEKİLER Kullanım amacı... 3 Test Prensibi... 3 Reaktifler... 3 Açıklama, kullanım için hazırlanması ve önerilen depolama koşulları... 3 Gerekli ama sağlanmayan malzemeler... 5 Güvenlik ve Çevre Koşulları... 5 Numune... 6 Manipülasyon prosedürleri... 6 Uyarılar ve önlemler... 6 Strip kullanımı... 6 Numuneler... 7 Otomatik test prosedürü:... 7 Sonuçlar... 7 Okuma... 7 Doğrulama... 7 Sonucların yorumlanması... 8 Yorumlama yazılımı: LiRAS... 8 Prosedür sınırlamaları... 8 Test performans... 8 Numune reaktivitesi... 9 Doğruluk... 9 Kesinlik... 9 Uygulama aralığı... 9 Ticari markalar... 9 Kullanılan semboller Üretici In Vitro Diagnostik Medikal Cihaz Parti kodu Katalog numarası Tarafından Kullanılan Kullanım Talimatlarına başvurun Sıcaklık sınırlaması <n> testleri için yeterli içerir Konjugat 100x Konjugat Diluent Denatürasyon Çözeltisi Hibridizasyon Çözeltisi Durulama Çözeltisi 5x Sıkı Yıkama Çözeltisi

3 80344 INNO-LiPA HLA-DPB / v1 / ANAHTAR KODU:FRI36908 p 3/9 Kullanım amacı Stripler Substrat BCIP/NBT 100x Substrat Tampon Tehlike Uyarı: INNO-LiPA HLA-DPB, in vitro kullanım için, insan lökosit antijeni (HLA) DPB1 allellerinin moleküler tiplenmesi için tasarlanmış bir çizgi prob testidir. Test Prensibi INNO-LiPA HLA tipleme testi, ters hibridizasyon temeline dayanmaktadır. Amplifiye biotinlenmiş DNA materyali kimyasal olarak denatüre edilir ve ayrılan iplikler, membran temelli stripler üzerine paralel şekilde sabitlenmiş spesifik oligonükleotidler ile hibridize olur. Bu işlemi, yanlış eşleşmiş amplifiye materyalleri uzaklaştırmak için yapılan sıkı yıkama basamağı izler. Sıkı yıkamadan sonra alkalin fostatazlı streptavidin konjugat eklenir ve önceden şekillenmiş herhangi bir biotinlenmiş hibrite bağlanır. Kromojen içeren substrat çözeltisi ile inkübasyon mor/kahve rengi çökelti ile sonuçlanır. Reaksiyon yıkama basamağı ile durdurulur ve probların reaktivite örüntüsü kaydedilir. INNO-LiPA HLA-DPB ile amplifikasyon kiti (INNO-LiPA HLA-DPB amplifikasyon) biotinlenmiş amplifiye malzemenin standartize edilmiş hazırlığı için kullanılabilir. Amplifikasyon kiti polimeraz zincir reaksiyonuna (PCR) dayanmaktadır.bu amplifikasyon kiti polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) temeline dayanmaktadır. Amplifikasyon ürünleri sonradan üzerinde 24 adet dizi-spesifik prob çizgisi ve 2 kontrol çizgisi bulunduran 1 tipleme stribi kullanılarak hibridize edilir (Şekil 1, Sonuçlara bakın). INNO-LiPA HLA-DPB: basamakları dahil Basamak 1 HLA-DPB1 lokusunun 2. ekzonunun amplifikasyonu. Basamak 2 INNO-LiPA HLA-DPB stribinin üzerine sabitlenmiş 24 probun hibridizasyonu ve sıkı yıkanması (56 C). Basamak 3 Renk geliştirilmesi. Basamak 4 Prob reaktivite örüntüsünün yorumlanması. INNO-LiPA HLA-DPB allel grup seviyesinde (standart HLA terminolojisi izlendiğinde allel ismindeki, yıldızdan sonraki ilk iki hane, HLA-DPB1*0801) ters hibridizasyon testi formatını kullanarak olası en iyi çözünürlüğü vermek üzere tasarlanmıştır. Reaktifler Açıklama, kullanım için hazırlanması ve önerilen depolama koşulları - Açılmamış ve 2-8 C de saklanmış, kaplı test stripleri dahil tüm test reaktifleri kitin son kullanma tarihine kadar stabildir. Reaktifleri dondurmayın. Son kullanma tarihinden sonra reaktifleri kullanmayın. - Tüm reaktifler ve test striplerini içeren plastik tüpler kullanımdan yaklaşık 60 dakika önce oda sıcaklığına (20-25 C) getirilmiş olmalı ve kullanımdan hemen sonra buzdolabına kaldırılmalıdır.

4 80344 INNO-LiPA HLA-DPB / v1 / ANAHTAR KODU:FRI36908 p 4/9 - Kit bileşenlerinin fiziksel görünümündeki değişiklikler kararsızlık veya bozulma belirtisi olabilir. - - Bu kit kontamine DNA nın herhangi kaynağından, özellikle amplifiye DNA ürünlerinden ayrı saklanmalıdır. - - Striplerin kullanımdan önce kıvrılmasını önlenmesi için plastik tüplerin yatay olarak saklanması önerilir. Verilen Reaktifler: Bileşen Miktar Ref. Açıklama Stripler 1 x Mavi markır çizgiyle işaretli INNO-LiPA HLA-DPB için 20 strip içerir. Denatürasyon Çözeltisi 1x 1 ml EDTA içeren alkalin çözeltisi. Kullanıldıktan sonra şişe kapağı derhal kapatılmalıdır, çözeltinin havaya uzun süre maruz kalması denatürasyon gücünde hızlı bir gerilemeye sebep olur. Hibridizasyon Çözeltisi 1x 80 ml % sodyum dodecyl sulfat (SDS) içeren Salin sodyum fosfat EDTA (SSPE) buffer. Hibridizasyon Çözeltisi önceden en az 37 C ye ısıtılmalıdır ve sıcaklık 56 C yi aşmamalıdır (kullanımdan önce bütün kristaller çözünmüş olmalıdır). Sıkı Yıkama Çözeltisi 1x 200 ml % 0.1 SDS içeren SSPE tamponu. Sıkı Yıkama Çözeltisi önceden en az 37 C ye ısıtılmalıdır ve sıcaklık 56 C yi aşmamalıdır (kullanımdan önce bütün kristaller çözünmüş olmalıdır). Konjugat Diluent 1x 80 ml NaCl, Triton, protein stabilizatörleri ve koruyucu olarak 0.01% MIT/< 0.1% CAA içeren fosfat buffer. Konjugat 100x 1x 0,8 ml Kullanımdan önce Konjugat Seyreltici içinde 1/100 seyreltilecek, koruyucular olarak protein stabilizatörleri içeren tampon içerisinde alkalin fosfataz ile etiketli streptavidin. Auto-LiPA için 10 ml fazla hazırlayın. Konjugat çalışma solüsyonu karanlıkta saklanırsa oda sıcaklığında (20-25 C) 24 saat kararlıdır. Substrat Tampon 1x 180 ml NaCl, MgCl 2 ve koruyucu olarak 0.01% MIT/< 0.1% CAA içeren Tris-tamponu. Substrat BCIP/NBT 100x 1x 0,8 ml Kullanımdan önce Substrat buffer içinde 1/100 seyreltilecek, dimethylformamide (DMF) içinde 5- Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate p-toluidine salt (BCIP) ve nitroblue tetrazolium (NBT). Auto-LiPA için 10 ml fazla hazırlayın. Substrat çalışma solüsyonu oda sıcaklığında (20-25 C) karanlıkta korunduğu sürece 24 saat kararlıdır. Durulama Çözeltisi 5x 1x 80 ml Kullanmadan önce distile veya deiyonize suda 1/5 oranında seyreltilecek (1 kısım + 4 kısım), NaCl, Triton ve koruyucu olarak 0.05% MIT / 0.48% CAA içeren fosfat tamponu. Auto-LiPA için, test oluğu başına 12 ml Durulama çalışma solüsyonu hazırlayın +20 ml fazladan. Durulama Çalışma Çözeltisi 2-8 C de iki hafta kararlıdır. İnkubasyon tepsisi 3 - Her biri sekiz küvet içerir. Okuma kartı 1 - Pozitif probların tanımlanması için. Veri raporlama sayfası 2 - Kullanılan striplerin saklanması için.

5 80344 INNO-LiPA HLA-DPB / v1 / ANAHTAR KODU:FRI36908 p 5/9 Gerekli ama sağlanmayan malzemeler - Vorteks mikser veya eşdeğer. - Dereceli silindirler (10, 25, 50, ve 100 ml). - Distile veya deionize su. - Tek kullanımlık eldiven. - Tek kullanımlık steril pipet uçları (tercihen pamuk filtreli). - Strip işleme için forsepsler µl, µl, ve µl dağıtmak için ayarlanabilir pipetler. - Dağıtım Multipipet (Eppendorf, isteğe bağlı). Güvenlik ve Çevre Koşulları Lütfen Material Safety Data Sheet (SDS) ve potansiyel tehlikeli komponentler içeren işaretli ürün bilgilerini inceleyiniz. En son güncellenen SDS versiyonu almaktadır. Tehlike Uyarı Tehlike Sodyum hidroksit içerir H314-P260-P280-P303+P361+P353-P305+P351+P338-P310-P363 2-Chloroacetamide içerir H317-P280-P261-P362+P364-P333+P313-P302+P352 N,N-Dimethylformamide, 5,5'-diphenyl-3,3'-bis (4-nitrophenyl)-2,2'-(3,3'-dimethoxybiphenyl-4,4'-ylene)ditetrazolium dichloride ve methanol içerir H312-H332-H319-H360D P261-P280-P201-P303+P361+P353-P305+P351+P338-P308+P313 Tehlike Açıklamaları H312 Cilt ile temasta zararlı. H314 Ciddi derecede deri yanıkları ve göz hasarına neden olur. H317 Allerjik deri reaksiyonuna neden olabilir. H319 Ciddi derecede göz tahrişine neden olur. H332 Solunması halinde zararlıdır. H360D Doğmamış çoçuğa zarar verebilir. Önlem ifadeleri: P201 Kullanmadan önce özel talimatları elde edininiz. P260 Duman/buhar/sprey solumayın. P261 Duman/buhar/sprey solunmaktan kaçının. P280 Koruyucu eldiven/koruyucu giysi/göz koruyucu/yüz koruyucusu kullanın. P303+P361+P353 Cilt temasında(veya aç): Derhal tüm bulaşmış olan kıyafetleri çıkarın. Su/duş ile cildi durulayın. P305+P351+P338 GÖZ TEMASINDA: Dikkatlice bir kaç dakika sudan geçiriniz. Mevcut ve kolaysa kontakt lensleri çıkarın. Yıkamaya devam edin.

6 80344 INNO-LiPA HLA-DPB / v1 / ANAHTAR KODU:FRI36908 p 6/9 P308+P313 P310 P333+P313 P302+P352 P362+P364 P363 Maruz kaldığınızda veya endişenlendiğinizde: Tıbbi yardım/destek alın. Hemen bir ZEHİR MERKEZİ/doktor/... başvurun. Ciltte tahriş veya kızarıklık meydana gelirse: Tıbbi yardım/destek alın. Cilt temasında: Bol su ve sabun ile yıkayın. Kirlenen giysileri çıkartın ve tekrar kullanmadan önce yıkayın. Tekrar kullanmadan önce kontamine olmuş giysileri yıkayın. - Sadece yeterince eğitimli personel test prosedürünü yapmak için izinli olmalıdır. - Numune her zaman potansiyel bulaşıcı gibi ele alınmalıdır. Bu nedenle, tüm kan bileşenleri ve biyolojik maddeler potansiyel olarak bulaşıcı olarak kabul edilmelidir. Tüm kan bileşenleri ve tüm biyolojik materyaller güvenlik koşullarına uygun olarak atılmalıdır. 121 C de 15 dakika otoklavlanmalıdır. Tek kullanımlık malzemeleri yakınız. Nihai konsantrasyon ±% 1 sodyum hipokloritli olacak şekilde,sıvı atığı sodyum hipoklorit ile karıştırın. Bertaraf etmeden önce bir gece bekletin. DİKKAT: sodyum hipoklorit eklemeden önce asit içeren sıvı atığını nötralize edin. - Kişisel koruyucu ekipman kullanımı gereklidir: Tehlikeli veya bulaşıcı ajanlar işlenirken eldiven ve koruyucu gözlük kullanılmalıdır. - Atık, kurumun atık bertaraf kurallarına göre ele alınmalıdır. Tüm federal, eyalet ve yerel çevresel düzenlemeler de dikkate alınmalıdır. Numune INNO-LiPA HLA-DPB testi numunesi olarak biotinlenmiş amplifiye DNA materiyali kullandığından, amplifikasyon kiti olan, INNO-LiPA HLA-DPB, beraberinde bir araç olarak kullanılabilir. Manipülasyon prosedürleri Uyarılar ve önlemler - Sadece profesyonel kullanım için. - DNA kontaminasyonundan kaçınmak için, pre-ve post-amplifikasyon adımları arasında maksimum fiziksel ayrım önerilir: ayrı odalarda, ayrı pipetler ve diğer laboratuvar malzemeleri, ayrı laboratuvar önlük ve eldiveni (ve onların stoğu) iyi laboratuar uygulamaları için alınabilecek minimum önlemlerdir. - Post amplifikasyon odasından pre amplifikasyon odasına herhangi bir dönüşten kaçının. - Otoklavlanmış tek kullanımlık laboratuar malzemesi kullanılması tavsiye edilir. - Tek kullanımlık laboratuar malzemelerini tekrar kullanmayın. - Herbir porsiyonlanmış örnek için yeni bir pipet ucu kullanın. - Bileşenleri aynı lot numarasına sahip olmadığı sürece, farklı kitlerin reaktiflerini karıştırmayın. - Reaktiflerin mikrobiyel kontaminasyonundan kaçının. Strip kullanımı - Stripler sadece tek kullanılmak üzere tasarlanmıştır! - Striplere çıplak elle dokunmayın, temiz forsepsler kullanın.

7 80344 INNO-LiPA HLA-DPB / v1 / ANAHTAR KODU:FRI36908 p 7/9 - Test striplerinin tanımlaması için kurşun kalem kullanın. Tükenmez kalem vs kullanmayın. Kimliği striplerin üzerindeki marker çizgisinin yukarısına yazın. - Farklı inkübasyon aşamaları boyunca, test stripleri her zaman aynı oluk içinde kalmalıdır. - Kullanılmamış veya gelişmiş stripler yoğun ışık ve ısıdan uzak tutulmalıdır. - Yorumlama, kaplama ve depolama öncesi gelişmiş striplerin tamamen kurumasını bekleyin. - Gelişmiş kuru stripler tercihen C de karanlıkta saklanmalıdır. - Olukları tekrar kullanmayın. Numuneler 1. HLA-DPB amplifiye ürün (10 μl kullanın). Örnek hazırlama için: kullanım için INNO-LiPA HLA-DPB Amplifikasyon talimatlarına bakın. NOT: Tam olarak 10 μl amplifiye örnek eklendiğinden emin olun. Gereğinden fazla veya az örnek yanlış tiplemeye sebep olabilir. 2. Boş amplifiye kontrol örneği (negatif kontrol; 10 μl kullanın). Otomatik test prosedürü: Göstergeler ve ilişkili protokoller Fujirebio Avrupa N.V. edinilebilir (bakınız- Sonuçlar Okuma Şekil 1 INNO-LiPA HLA-DPB striplerindeki farklı oligonükleotit problarının yerini göstermektedir. Bir çizgi, test prosedürünün sonunda net bir mor/kahverengi bant belirdiğinde Pozitif kabul edilir. Şekil 1: Doğrulama INNO-LiPA HLA-DPB striplerinde markır çizgisi (mavi çizgi), konjugat kontrol çizgisi (konj. kontrol), HLA-DPB1 kontrol çizgisi (HLA-DPB1 CTRL) ve 24 sequence-specific DNA problarının konumu - Testin yapıldığı her defasında bir negatif kontrol dahil edin (INNO-LiPA HLA-DPB için). Herhangi yeni test prosedürüyle olduğu gibi, ek pozitif ve negatif kontrollerin dahil edilmesi doğru test prosedürünün gerçekleştirilmesi konusunda yüksek derecede güvene erişilene kadar dikkate alınmalıdır. Test koşullarının uygunluğunun gösterilmesi için referans DNA kullanılması önerilmektedir. - INNO-LiPA HLA-DPB stribinde en üstteki çizgi (Şekil 1) markır çizgisidir (mavi renkli çizgi). Bu çizgi stribin doğru oryantasyonuna izin verir.

8 80344 INNO-LiPA HLA-DPB / v1 / ANAHTAR KODU:FRI36908 p 8/9 - Sonraki çizgi tespit prosedürü sırasında reaktif Konjugat ve Substrat çalışma solüsyonunun eklenmesini kontrol eder. Bu çizgi plastik okuma kartındaki Konjugat Kontrol çizgisi ile yanyana gelmelidir. Bu çizgi daima pozitif olmalıdır (değilse: yorumlama yapılmamalı!) ve aynı test çalışmasında her strip üstünde yaklaşık aynı yoğunluğa sahip olmalıdır. - Sonraki çizgi hibridizasyon için uygun miktarda HLA-DPB1 amplifiye materyalin eklenip eklenmediğini gösteren HLA-DPB1 iç hibridizasyon kontrol çizgisidir (okuma kartında HLA-DPB1 CTRL). Bu çizgi, Negatif Kontrol hariç, her zaman pozitif olmalıdır ama yoğunluk örnekler arasında farklılık gösterebilir. - Her negatif kontrolün test sonucu Konjugat kontrol çizgisi hariç, strip üzerindeki çizgilerin herhangisi için belirgin sinyal vermemelidir. - Bir stripteki probların renk yoğunlukları bir çizgiden diğerine değişiklik gösterebilir. Sonucların yorumlanması - Stripteki konjugat kontrol çizgisi ile plastik okuma kartı üzerindeki konjugat kontrol çizgisi yanyana gelmelidir. - Her bir stribin geçerliğini göstermek için öncelikle kontrol çizgilerinin pozitifliğini kontrol edin (ilk iki çizgi) (Geçerliliğe bakın). - Tipleme sonuçları kit içindeki probların reaktivitesine dayanır. Prob özgüllükleri listesi mevcuttur. - INNO-LiPA HLA-DPB striplerinde pozitif olan tüm prob numaralarını belirleyin ve INNO-LiPA HLA-DPB tipleme tablosunu veya LİPA yorumlama yazılımının bir versiyonunu kullanarak HLA-DPB1 tipini sonuçlandırın (Yorumlama yazılımı: LiRAS bakın). (Yorumlama yazılımı bakın:liras). Yorumlama yazılımı: LiRAS INNO-LiPA HLA için LiRAS yazılımı LİPA sonuçlarının yorumlanmasını desteklemek için tasarlanmıştır. En son güncellenen versiyonu öğrenmek için lütfen yerel distribütörünüz ile bağlantıya geçin. Prosedür sınırlamaları - Bu ürünün kullanımı hibridizasyon teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır. - Sadece iyi laboratuvar uygulamaları ve belirtilen prosedürlerin dikkatli uygulanması spesifik hibridizasyon ve hedef DNA'nın doğru tiplenmesini sağlar. - INNO-LiPA HLA-DPB stribi allelik seviyede çözünürlük vermek üzere tasarlanmıştır. Yine de, belirli allel grupları kombinasyonu benzersiz olmayan probe kombinasyonlarına yol açabilmektedir ve bu yüzden iki ya da daha fazla olası allelik grup kombinasyonlarının belirsiz bir cevaba sebep verir. - Yeni alleller prob bölgeleri dışında polimorfizmlere sahip olabilir, sonuçları yorumlarken bu dikkate alınmalıdır. - "No typing deducible" (LiRAS yazılımı) prob bölgeleri içinde polimorfizmlere sahip yeni alellerden dolayı elde edilebilir. Test performans INNO-LiPA HLA-DPB 12. Uluslar arası doku uyuşmazlığı atölyesi kapsamında dünya çapında 23 doku tipleme laboratuvarında değerlendirilmiştir, Fransa 1996.

9 80344 INNO-LiPA HLA-DPB / v1 / ANAHTAR KODU:FRI36908 p 9/9 Çalışma boyunca toplam 413 örnek INNO-LiPA HLA-DPB ile test edilmiştir. Sonuçlar, belirtilen klasik tipleme teknikleri (DNA-based testler (PCR-SSO ve PCR-RFLP) ve/veya sequence-based tipleme (SBT)) ile karşılaştırılmıştır. Numune reaktivitesi Çalışma boyunca INNO-LiPA HLA-DPB ile toplamda 10 yanlış negatif ve 6 yanlış pozitif bant gözlenmiştir. 2 durumda yanlış negatif ve yanlış pozitif probların bir kombinasyonu gözlendi. Prob ve primer özgüllüklerin tam bir listesi mevcuttur. Tüm problar liste içinde, aksi belirtilmedikçe, bir uyumsuzluk seviyesinde tamamlayıcı sekansı ile spesifik olarak melezleşmesi şekilde tasarlanmıştır. Reaktivitelerinin kalite kontrolüne ilişkin bir rapor talep üzerine akreditasyon amaçlı kullanılabilir. Doğruluk Toplam 413 örnek, dizileme ile analiz edilenlerin çoğu, INNO-LiPA HLA-DPB ile tiplendirilmiş ve 92.7% (383/413) uyum göstermiştir. Uyumsuzlukların Özeti: 18 örnek Yanlış negatif prob, yanlış pozitif prob ya da her ikisinin kombinasyonları. 3 örnek Yazma hatası veya yorumlama tamamlanmadı veya bağlantı dengesizliğine dayalı yanlış tipleme. 2 örnek Yeni alel. 4 örnek Daha fazla araştırma için yetersiz DNA. 3 örnek Diğer sebepler (belirtilmemiş). Kesinlik In house test intra-test, inter-test ve inter-lot testin her zaman aynı tiplemeyle sonuçlandığını ortaya koymuştur. Uygulama aralığı 0.1 µg kadar küçük extrakte edilmiş DNA, (A260nm/A280nm > 1.5) LiPA da tespit için yeterli DNA dan fazlasını vererek ilişikteki amplifikasyon testinde kullanılabilir. Ticari markalar - INNO-LiPA, dünya çapında bir ticari markadır örneğin ABD de. - LiPA Benelux da tescili ticari markadır ve dünyanın geri kalanında bir ticari markadır (ABD dahil). - LiRAS Avrupa da tescilli markadır ve dünyanın geri kalanında bir markadır (ABD dahil). - - Auto-LiPA dünya çapında bir ticari markadır örneğin ABD de.