AESKUBLOT Liver Pro Ref 4004

Transkript

1 AESKUBLOT Ref 4004

2

3 Kullanım Kılavuzu İçindekiler 1 Kullanım Amacı Klinik Uygulama ve Test Prensibi Kit İçeriği Muhafaza ve Raf Ömrü Kullanım Önlemlerive Genele Tanıtım Numune Toplama, Kullanma ve Muhafaza Test Prosedürü Kalitatif Yorumlama Teknik Veri Performans Verisi Literatür... 8 AESKU.DIAGNOSTICS GmbH & Co. KG Mikroforum Ring Wendelsheim, Almanya Tel: Fax: Info@aesku.com

4 1 Kullanım Amacı AESKUBLOT, insan serum ya da plazmasında, AMA M2, Sp100, LKM1, gp210, LC1 ve SLA karşı IgG antikorlarının kalitatif tespiti için, membran bazlı bir enzim immunoassaydir. Antijenler, bir nitroselüloz zarı üzerinde tam olarak belirlenmiş pozisyonlarda, paralel çizgiler olarak yer almaktadır. Bu tahlil, otoimmün karaciğer hastalıklarının ayırıcı tanısında bir araçtır. 2 Klinik Uygulama ve Test Prensibi En önemli otoimmün karaciğer hastalıkları, otoimmün hepatit (AIH) tip 1-3, primer biliyer siroz (PBC) ve bu iki hastalığın hibrid formudur, immunkolanjiopati. AIH, immunsupresif tedaviye iyi cevap veren, ancak tedavi edilmezse kötü prognoz sergileyen, nedeni bilinmeyen kronik ilerleyen bir karaciğer hastalığıdır. PBC, küçük ve orta safra kanallarının kronik inflamatuar hastalığıdır. Bilinmeyen karaciğer sirozuna sebep olabilir. Bu nedenle erken ve güvenilir tanı, büyük bir önem taşımaktadır. Karşı antikorlar: - AMA M2, mitokondri ketoasit-dehidrogenaz kompleksinin proteinleri ile reaksiyona girer. Yüksek titreli PBC hastalarının %95'inde görülürler. Tespit edilmeleri, diğer kolestatik karaciğer hastalıklarından ayırt edilmeleri ve PBC tanısı açısından, kritik önem taşır. - Çözünür çekirdek proteini SP100, PBS hastalarında yaklaşık % oranında görülür (Blüthner et al. 1999). Nadiren, AIH (%8) ve ve sistemik lupus eritematozda (%10) görülür (Wichmann et al. 2003). - Karaciğer ve böbrek mikrozomları 1 (LKM1, karaciğer-böbrek mikrozomları) ve çözünür karaciğer antijeni (SLA) karşı antikorları, AIH için tipiktir. - gp210, PBC (%99 ) için oldukça spesifiktir. Ancak, PBC hastaların sadece % 25 inde görülürler. gp210 antijeni, çekirdek kılıfının integral membran glikoproteini ve çekirdek gözeneğinin parçasıdır. - LC1, börek hücrelerinin sitosolik bileşenlerine karşı yöneliktir. Bunlar, anti-lkm-1 pozitif AIH'li hastaların %30'unda, AIH hastalarının %10'unda görülürler, sadece karaciğer ile ilişkili otoantikorları sirküledir. Test prensibi Antijenler, bir nitrosellüloz membran üzerinde çizgiler (hatlar) şeklinde uygulanmıştır. Membran, spesifik olmayan reaksiyonları önlemek üzere bloke edilmiştir. Tam olarak tanımlı pozisyonlardaki antijenli membran-stripler, 1:101 oranında diliüe edilen serum/plazma numunelerinde inkübe edilirler. Hastanın antikorları (numunede varsa) antijene bağlanır. Bağlanmamış kısım, takip eden aşamadaki yıkama işlemi ile uzaklaştırılır. Sonra, horseradish peroksidazına (conjugate) konjuge edilmiş antihuman immunoglobinleri inkübe edilir ve numunenin antijen-antikor kompleksi ile reaksiyona girer. Bağlanmamış konjugat, takip eden aşamadaki yıkama işlemi ile uzaklaştırılır. TMB substrate ilavesinden sonra, bir enzimatik reaksiyon ile mavi çökeltiye döner. Reaksiyon, distile su ile sonlandırılır. Sayfa 1/8

5 3 Kit İçeriği HAZIRLANMASI GEREKEN MALZEMELER Öğe Miktar Kapak rengi Solüsyon rengi Tanım / İçerik Blocking Reagent (Bloklama Reaktifi) 3 x 10 ml her konsantrat için beyaz N/A 3x10 ml sample buffer'ın hazırlanması için, yağsız kuru süt tozu. Wash Buffer (Yıkama Tamponu) (20x) 1 x 50 ml beyaz Renksiz 1 L Tris buffer hazırlanması için 20x konsantre, ph 6.9 ± 0.2 KULLANIMA HAZIR Öğe Miktar Kapak rengi Solüsyon rengi Tanım / İçerik Conjugate, IgG 1 x 10 ml mavi Renksiz İçerik: Horseradish peroxidase a konjuge Anti-human immunoglobulin G (IgG) TMB Substrate 1 x 10 ml siyah Renksiz Stabilize TMB/H 2O 2 Membran stripleri 24 Strip Renk kodu: kahvere ngi N/A Kaplı olan antijenler için Kullanım Amacına bakınız. cımbız, referans şablonu, puanlama sayfası, yapışkan bant (siyah, çift taraflı) 1 parça, her biri. N/A N/A N/A İnkubasyon tepsisi 3 adet. N/A N/A N/A Sample buffer (numune tamponu) için etiketler 3 adet. N/A N/A N/A GEREKEN AMA SAĞLANMAYAN MATERYALLER Sallama platformu, silindir 1000 ml, 10 ml'lik silindir ya da pipet, hassas pipetler (10, 1000 µl), kurutma ya da filtre kağıdı. Testlerimiz, Amerika Birleşik Devletleri Farmakopesi (USP 26 - NF 21) ve Avrupa Farmakopesi (Eur.Ph.4th ed.) tanımına göre, saflaştırılmış suyla kullanılmak üzere tasarlanmıştır. 4 Muhafaza ve Raf Ömrü Tüm reaktifleri ve membran-stripleri, orijinal ambalajlarında, 2-8 C/35-46 F ta muhafaza edin. Sulandırılmış solüsyonlar, hazırlandıktan sonra 2-8 C/35-46 F ta en az altı hafta stabildir. Reaktifler ve stripler, sadece her bileşenin belirtilmiş olan son kullanım tarihi içinde kullanılmalıdır. Malzemeleri son kullanma tarihinden sonra kullanmayın. TMB solüsyonunu, yoğun ışığa maruz bırakmaktan kaçının. Sayfa 2/8

6 5 Kullanım Önlemlerive Genele Tanıtım 5.1 Sağlık tehlikesi verileri Bu ürün sadece IN VITRO DIAGNOSTIC kullanım içindir. Bu nedenle, kit sadece eğitimli personel ve önerilen in vitro diagnostik yöntemler ile çalışılabilir. Bu ürün amaçlanan kullanım koşulları altında, özellikle toksik ya da tehlikeli olarak kabul edilmemesine rağmen, maksimum güvenlik için aşağıdakilere bakınız: Öneriler ve önlemler Bu kit, potansiyel tehlikeli bileşenler içerir. Kit reaktifleri her ne kadar gözler ve cilt için tahriş edici olarak sınıflandırılmamış olsa da, gözler ve cilt ile temasından kaçınılmasını ve tek kullanımlık eldivenler giyilmesini öneririz. Substrate, koruyucu olarak kathon (%1 hac/hac) içerir. Yutmayın ya da deri veya mukoza ile temas ettirmeyin. Kit ile çalışırken, sigara içmeyin veya birşey yiyip-içmeyin. Ağızınızla pipetleme yapmayınız. Hasta numuneleri ile çalışırken, bulaşıcı hastalığı geçirme kapasitesine sahipmiş gibi davranılmalı ve ulusal gerekliliklerine uyulmalıdır. 5.2 Genel Kullanım Talimatları Mevcut olan çeşitli AESKU BLOT-testleri arasında ayrım yapmak için striplerin referans çizgilerinin üzerine renk kodları uygulanmıştır. Renk kodu sarı turuncu mavi kahverengi mor siyah Yeşil AESKUBLOT ANA-12 Pro ANA-17 Pro Myositis Pro Vasculitis Pro Gastro Pro Borrelia-G ve Borrelia-M Etiketleme de dahil olmak üzere ürün bilgilerinde herhangi bir yanlışlık olması halinde, kit üreticisi ya da satıcısı ile temasa geçin. Blocking Reagent ve wash buffer, lotlar ve test kitleri arasında değiştirilebilir. Diğer tüm bileşenler; test kitine özeldir ve değiştirilemez/ birbirleri yerine kullanılamazlar. Otoimmünite ve Borrelia tanı testleri arasında, herhangi bir reaktif değişimi yapmayın! Konjugat çalışmalarında, polistiren malzeme kullanmayın. Testin optimal performansı için, bütün bileşenlerin kullanmadan önce oda sıcaklığına ulaşmasını sağlayın (20-32 C/ F), iyice karıştırın ve önerilen inkübasyon şemasını takip edin. Bileşenleri asla 37 C/ 98.6 tan daha yüksek sıcaklığa maruz bırakmayın. Substrat solüsyonunu her zaman sadece yeni pipet uçlarıyla pipetleyin. Reaktifi ışıktan koruyun Konjugatı asla daha önceden başka reaktiflerle kullanılmış pipet uçlarıyla, pipetlemeyin. Bant rengin yoğunluğu, diğer referans metodolojileriyle elde edilen antikor titreleri ile ilişkili olmak zorunda değildir. Normal kan vericilerden alınan numuneler, otoantikor içerebilir. Sayfa 3/8

7 Hasta numunesi, immun komplekslerinin veya diğer immünoglobülin agregatlarının yüksek seviyelerini içeriyorsa, spesifik olmayan bağlanma ile oluşan yanlış pozitif sonuçlar göz ardı edilemez. Kesin klinik tanı, sadece test performansının sonuçlarına dayandırılmamalıdır, tüm klinik ve laboratuvar bulguları değerlendirildikten sonra doktor tarafından yapılmalıdır. Tanı, farklı diagnostik metodlar kullanılarak doğrulanmış olmalıdır. 6 Numune Toplama, Kullanma ve Muhafaza Tercihen taze toplanmış serum/plazma örneklerini kullanın. Kan almada, ulusal yönergeler takip edilmelidir. İkterik, lipemik, hemolize veya bakteriyel olarak kontamine numuneleri kullanmayın. Serumdaki partiküller, düşük hızlı santrifüjleme ile (<1000 x g) giderilmelidir. Kan örnekleri temiz, kuru ve boş tüplerde toplanmalıdır. Serum/plazma numuneleri, ayırma işleminden sonraki ilk 8 saat içinde kullanılmalıdır veya şişeler sıkıca kapatılarak 48 saate kadar 2-8 C/35-46 F ta muhafaza edilmeli ya da daha uzun süreler için -20 C/-4 'ta dondurulmalıdır. Tekrarlanan çözülme ve dondurma işlemlerinden kaçının. Isı ile inaktive edilmiş numuneleri kullanmayın. 7 Test Prosedürü 7.1 Başlamadan önceki hazırlıklar Konsantre içinde tuz kristali oluşumu olmadığından emin olun. Eğer oluşmuşsa; konsantreyi hafifçe ısıtarak kristalleri çözün, bunun için oda sıcaklığı yeterli olacaktır. Konsantre Wash Buffer ı (Yıkama tamponunu) 1:20 oranında distile su ile dilüe edin (örn: 950 ml + 50 ml). Sample Buffer hazırlanması için: bir şişe Blocking Reagent'ta 10 ml wash buffer ekleyin ve iyice karıştırın. 7.2 Test Adımları Önemli notlar: Bu protokolü harfiyen takip edin. Protokolde belirtilmiş olan iki bileşenin, 2,6,9. adımlarda tepsiye ilave ettiğinizden emin olun. İnkübasyon adımları esnasında, striplerin kurumasına izin vermeyin. Stribe parmaklarınızla dokunmayın, cımbız kullanın. Strip inkübasyonundan sonra, taşmayı engellemek için, dilüe numuneleri tamamen uzaklaştırın. İnkübasyon adımı esnasında, stribi sürekli olarak sallayın. İnkübasyon tepsisinin bir tarafına, wash buffer ile sample buffer, konjugat ve substratı birlikte koyun. Stribin üzerinde akmasına izin vermeyin. Sayfa 4/8

8 Adım Açıklama 1. Yukarıdaki 7.1 adımındaki hazırlıkların, pipetleme öncesinde yapılmış olmasını sağlayın. 2. Stribi, inkübasyon tesisinin içine doğru şekilde yerleştirin (referans çizgisi ve renk kodu yukarıda). İnkübasyon tepsisine, 700 µl wash buffer ve 300 µl numune koyun. Stribi solusyon ile nemlendirin ve çalkalayarak 5 dakika inkübe edin. KONTROLLER VE NUMUNELER 3. Sample buffer lı belirlenmiş yerlere 10 µl serum/plazma numunesi pipetleyin C/ F ta 30 dakika çalkalayarak inkübe edin. Sonra numuneyi tamamen uzaklaştırın. 5. Çalkalayarak 1.5 ml wash buffer ile 5 dakika boyunca 3 kez yıkayın. Her yıkama adımından sonra, wash buffer ı uzaklaştırın. KONJUGAT 6. Stripli her bir inkübasyon tepsisinin içine, 700 µl wash buffer ve 300 µl conjugate pipetleyin C/ F ta 30 dakika çalkalayarak inkübe edin. Konjugatı uzaklaştırın. Sayfa 5/8

9 8. Çalkalayarak 1.5 ml wash buffer ile 5 dakika boyunca 3 kez yıkayın. Her yıkama adımından sonra, wash buffer ı uzaklaştırın. SUBSTRAT 9. Stripli her bir inkübasyon tepsisinin içine, 700 µl dh 2O ve 300 µl substrate pipetleyin C/ F ta 15 dakika çalkalayarak inkübe edin, yoğun ışıktan koruyun. Substratı uzaklaştırın. DURDURMA 11. Stripli her bir inkübasyon tepsisinin içine 2 ml dh 2O pipetleyin. 1 dakika çalkalayarak inkübe edin. dh 2O yu uzaklaştırın. Bu adımı bir kez tekrarlayın İnkübasyon tepsisinin stribini çıkarın. Stribi, kurutma kağıdının arasında kurutun. 24 saat içerisinde analiz sonuçlanır.. Sayfa 6/8

10 8 Kalitatif Yorumlama 8.1 Manual Analiz Sonuçlar; - Fonksiyonel kontroller görülebilir ise, - Cut-off control görülebilir ise, - Cut-off kontrolünin renk yoğunluğu, fonksiyonel kontrolün renk yoğunluğundan daha zayıf ise, test sonuçları kabul edilebilir. Referans çizgisi ile hizalanan puanlama sayfası üzerine kuruyan stribi sabitleyin. Stribin referans çizgisi ile referans şablonunu hizalayın. Sonuçları sadece, her stribin cutt-off kontrolü referansı dahilinde yorumlayın. Her test kiti, test içinde tüm bantların kanıtlanabildiği bir renk kopyası içerir. Analiz, cut-off kontrolünün renk yoğunluğu ile bantların renk yoğunluklarının karşılaştırılmasıyla gerçekleştirilir. Yoğunluklar arasında anlamlı bir fark yoksa test belirsiz olarak kabul edilir. Rengi daha yoğun olan test sonucu pozitiftir. Renk yoğunluğu daha zayıf ise, test negatiftir. Sonuçlar, puanlama cetveline kaydedilebilir. Kontrol değerlerinin kriterleri karşılamadığı durumda test geçersizdir ve tekrarlanmalıdır. Sınırdaki numuneler için, testin tekrarlanmasını öneririz. Aşağıdaki teknik konular da kontrol edilmelidir: (Hazırlanmış) reaktiflerin son kullanma tarihleri, muhafaza koşulları, pipetler, cihazlar, inkübasyon koşulları ve yıkama yöntemleri. Test edilen ögeler anormal değerler veya herhangi sapma türü gösteriyorsa veya operatörün sorumluluğu dışındaki nedenlerden dolayı doğrulama kriterlerini karşılamıyorsa, lütfen test kitinin üreticisi veya satıcısıyla temasa geçin. Medikal laboratuvarlar kendi kalite kontrollerini, ulusal düzenlemelerde belirtildiği gibi, kendi kontrollerini ve / veya iç havuz serumlarını kullanarak yapabilirler 9 Teknik Veri Numune malzemesi: Numune hacmi: Toplam inkübasyon süresi: Muhafaza: Tespit sayısı: Serum veya plazma 10 µl numune C/ F ta 112 dakika 2-8 C/35-46 F ta, sadece orijinal şişeleri kullanın. 24 test Sayfa 7/8

11 10 Performans Verisi 10.1 Rölatif Hassasiyet ve Özgünlük Pozitif uyuşumu (rölatif hassasiyet) belirlemek için; IIF antikoru açısından pozitif olan 65 serum, AESKUBLOT. ile test edildi. Negatif uyuşumu (rölatif özgünlük) belirlemek için; kan vericilerinden gelen 220 serum test edildi. pozitif uyuşum (rölatif hassasiyet) negatif uyuşum (rölatif özgünlük) AMA M2 % 96 %100 Sp100 %100 %100 LKM1 %100 %100 gp210 %100 %100 LC1 %100 %100 SLA %100 % Literatür Bandin O, Courvalin J, Poupon R, Dubel L, Homberg J, Johanet C (1996). Specificity and sensitivity of gp210 autoantibodies detected using an enzyme-linked immunosorbent assay and a synthetic polypeptide in the diagnosis of primary biliary cirrhosis. Hepatology, 23: Blüthner M, Schäfer C, Schneider C, Bautz FA (1999). Identification of major linear epitopes on the sp100 nuclear PBC autoantigen by the gene-fragment phage-display technology. Autoimmunity., 29(1): Wichmann I, Montes-Cano MA, Respaldiza N, Alvarez A, Walter K, Franco E, Sanchez-Roman J, Nún ez-roldán A (2003). Clinical significance of anti-multiple nuclear dots/sp100 autoantibodies. Scand J Gastroenterol. 38(9):996 9 For further reading: Alvarez F, Berg PA, Bianchi et al. (1999). International Autoimmune Hepatitis Group Report: a review of criteria for diagnosis of auto immune hepatitis. J Hepatol 31: Kanzler S, Weidemann C, Gerken G, Löhr H, Galle PR, Meyer zum Büschenfelde KH, Lohse AW (1999). Clinical significance of autoantibodies to soluble liver antigen in autoimmune hepatitis. J Hepatol 31: Krawitt EL (1996). Autoimmune Hepatitis. N Engl J Med 334: Manns MP, Griffin KJ, Sullivan KF, Johnson EF (1991). LKM-1 autoantibodies recognize a short linear sequence in P450 IID6, a cytochrome P-450 monooxygenase. J Clin Invest 88: Meyer zum Büschenfelde KH, Lohse AW (1995). Autoimmune Hepatitis. N Engl J Med 333: Wies I, Brunner S, Henninger J, Herkel J, Kanzler S, Meyer zum Büschenfelde KH, Lohse AW (2000). Identification of target antigen for SLA/LP autoantibodies in autoimmune hepatitis. Lancet 355: Sayfa 8/8

12 Diagnosi in vitro Pour diagnostic in vitro Ιn Vitro Diagnostikum Para uso Diagnóstico in vitro Numero d ordine Référence Catalogue Bestellnummer Número de catálogo Descrizione lotto Lot Chargen Bezeichnung Lote Conformità europea Déclaration CE de Conformité Europäische Konformität Déclaracão CE de Conformidade 24 determinazioni 24 tests 24 Bestimmungen 24 Testes Rispettare le istruzioni per l uso Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Ver as instrucões de uso Da utilizzarsi entro Utilise avant le Verwendbar bis Utilizar antes de Conservare a 2-8 C Conserver à 2-8 C Lagerung bei 2-8 C Conservar entre 2-8 C Prodotto da Fabriqué par Hergestellt von Fabricado por Strip di nitrocelluslosa rivestita Strip de nitrocellulose couché Nitrozellulosemembran-Streifen mit aufgebrachten Antigenen Tira de nitrocelulose revestido Tampone di lavaggio Tampon de Lavage Waschpuffer Solucão de lavagem Reagente bloccante réactif de blocage Blockier-Reagenz Bloqueio de reagente Ricostituire con 10 ml reconstituer avec 10 ml rekonstituiren mit 10 ml reconstituir com 10 ml Tampone campione Tampon Echantillons Probenpuffer Diluente de amostra Coniugato Conjugé Konjugat Conjugado Tampone substrato Substrat Substratpuffer Substrato For in vitro diagnostic use Para uso diagnóstico in vitro - In Vitro Διαγνωστικό μέσο Katalog numarası Numéro de catálogo Αριθμός παραγγελίας Lot Lote Χαρακτηρισμός παρτίδας EC Uygunluk Beyanı Declaración CE de Conformidad Ευρωπαϊκή συμφωνία 24 test 24 pruebas 24 προσδιορισμοί Kullanım talimatlarına bakın Ver las instrucciones de uso Λάβετε υπόψη τις οδηγίες χρήσης Tarafından kullanım Utilizar antes de Χρήση μέχρι 2-8 C (35-46 F) de muhafaza Conservar a 2-8 C Φυλάσσεται στους 2-8 C Üretici Fabricado por Κατασκευάζεται από Nitrosllüloz ile kaplı strip Tira de nitrocelulosa recubierta Επίστρωση λωρίδα νιτροκυτταρίνης Yıkama Tamponu Solución de parada Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης Blocking Reagent Reactivo bloqueante Αντιδραστήριο αποκλεισμού 10 ml ile sulandırın reconstituir con 10 ml Ανασύσταση με 10 ml Sample Buffer / Numune tamponu Tampón Muestras Ρυθμιστικό διάλυμα δειγμάτων Konjugat Conjugado Σύζευγμα Substrat Tamponu Tampón sustrato Ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος

13