EL KİTABI. Klamidya trakomatis Real-TM. Klamidya trakomatis Kalitatif tespiti için Gerçek zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) kiti

Transkript

1 Vitro Diagnostik Kullanım İçin Profesyonel kullanım için Klamidya trakomatis Real-TM EL KİTABI Klamidya trakomatis Kalitatif tespiti için Gerçek zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) kiti REF B1-100FRT 100 Sacace Chlamydia trachomatis Real-TM VER

2 İSİM Klamidya trakomatis Real-TM GİRİŞ STD (cinsel yolla bulaşan hastalıklar) cinsel aktivite yoluyla edinilen bakteriyel, viral ve paraziter enfeksiyonlar sonucu oluşur. HIV gibi hastalıklar sadece son birkaç yıl içinde tespit edilmiş ise de frengi ve gon-orrhea gibi bazı cinsel yolla bulaşan hastalıklar, yüzyıllardır bilinmektedir. Cinsel yolla bulaşan hastalıklar 25'ten fazla bulaşıcı organizmadan kaynaklanır. Organizmalar tanımlandıkça cinsel yolla bulaşan hastalıklar sayısı da genişletmeye devam etmektedir. Yaygın cinsel yolla bulaşan hastalıklar şunlardır: klamidya, gonore, herpes, HIV, HPV, frengi, Gardnerella ve trichomoniasis. Chlamydia trachomatis hareketsiz, gram-negatif bakteriyel patojen ve en yaygın cinsel yolla bulaşan bakteriyel ajandır. C. trachomatis enfeksiyonu prevalansı en fazla risk altında kabul nüfusun cinsel olarak aktif ergen kadınlarda, genel olarak %10 u aşmakta ve ergenve STD klinik toplumlarda, prevalans % 40 a ulaşabilmektedir. C. trachomatis enfeksiyonu prevalansı STD polikliniklerine başvuran erkeklerde %15-20 asemptomatik erkeklerde % 4 ile 10 arasında değişmektedir. Yenidoğanlarda klamidya enfeksiyonları perinatal maruz kalma sonucu olarak ortaya çıkmaktadır. Enfekte annelerden doğan bebeklerin yaklaşık % 65 i vajinal doğum sırasında enfekte olmaktadır. Nükleik asit amplifikasyon teknolojisi tabanlı testlerin geliştirilmesi STD tanı alanında önemli bir gelişme olmuştur. Çünkü nükleik asit amplifikasyonu son derece hassas ve spesifiktir, genellikle klinik bakım talebi olmayan asemptomatik kişilerde enfeksiyonu invaziv olmayan örnekleme teknikleri kullanarak görüntülemek için fırsat sunar. KULLANIM AMACI Klamidya trakomatis Real-TimePCR kiti (ürogenital, rektal ve boğaz bezlerden, göz akıntısı, idrar ve prostat bezi salgısı) bir laboratuar ortamında Klamidya trakomatis DNA kalitatif tespiti için gerçek zamanlı hibritleşme-floresans saptama vasıtasıyla kullanılan güçlendirilmiş nükleik asit testidir. PCR analizinin sonuçları hastalığın kompleks tanısı ile beraber ele alınmalıdır. PCR ALGILAMA İLKESİ Klamidya trakomatis Chlamydia trachomatis polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile tespit edildi. PCR özellikli kapsüller kullanılarak patojenin genomunun belirli bir bölgenin güçlendirilmesine dayanmaktadır. Gerçek zamanlı PCR, güçlendirilmiş ürün flüoresan boyalar kullanılarak tespit edilir. Bu boyalar, güçlendirilmiş ürün özellikle bağlanan oligonükleotid probları ile bağlantılıdır. Gerçek zamanlı PCR sırasında, Gerçek zamanlı flüoresan yoğunluklarının izlenmesi PCR çalıştırdıktan sonra reaksiyon tüpleri yeniden açılmadan biriken gerçek zamanlı PCR ürünün algılanmasını sağlar. Klamidya trakomatis Gerçek Zamanlı PCR medical malzemesi İç Kontrol (IC) içeren ve ekstraksiyon prosedürü her bir numunenin çıkartma işlemi kontrol etmek amacı ve olası reaksiyon inhibe tanımlamak için kullanılması gereken niteliksel bir testtir. Klamidya trakomatis Gerçek Zamanlı

3 PCR kiti hot start (sıcak başlangıç) için kullanılır. "Hot-start" 15 dakika için 95 º C'de ısıtma aktive edilir kimyasal olarak modifiye polimeraz (TaqF), tarafından garanti edilmektedir. İÇERİK Reaktif Açıklama Hacim (ml) Miktar PCR-mix-1-FL Chl. trakomatis tüp PCR-mix-2-FRT Polimeraz (TaqF) Pozitif Kontrol komplex (C+) DNA tampon Negatif Kontrol (C-)* İç Kontrol -FL (IC)** tüp tüp tüp tüp tüp tüp * Ekstraksiyon prosedüründe Ekstraksiyon Negatif Kontrol olarak kullanılmalıdır. ** DNA ekstraksiyon işlemi sırasında Örnek / lizis karışımına doğrudan 10 µl Internal Control-FL ekleyin. (bakınız DNA-sorb-A REF K-1-1/A protokolü). EK GEREKSİNİMLER DNA ekstraksiyon kiti. Transfer ortamı. Tek pudrasız eldivenler Pipetler (ayarlanabilir). Steril pipet uçları 200 µl kadar aerosol engelleriyle Tüp rafları. Vorteks karıştırıcı. 2 ml reaksiyon tüpleri için rotor ile masaüstü Santrifüj PCR kutusu. Gerçek Zamanlı PCR malzemeleri. PCR veya PCR-plaka için tek polipropilen mikro tüpler. Buzdolabı 2 8 C dereceli. Dondurucu 16 C dereceli. Kullanılan malzemeler için çöp kutusu. GENEL ÖNLEMLER Laboratuar ortamında Tanısal Tıbbi Cihaz Sadece laboratuar ortamında Tanısal Kullanım için

4 Kullanıcı aşağıdakilere her zaman dikkat etmelidir: Aerosol bariyerli pipet ucu kullanın ve her prosedür için farklı pipet ucu kullanın. Amplikonları diğer reaktif ve ajanlardan uzakta ele alın. Tespit prosedürüne başlamadan önce bütün reaktifleri oda sıcaklığına getirin. Çözdükten sonra bileşenleri karıştırın ve kısaca santrifüj edin. Numuneler ve reaktifler ile çalışırken tek kullanımlık eldiven ve göz koruması kullanın laboratuar önlüğü giyin. Sonrasında ellerinizi güzelce yıkayın. Çalışma alanında yemek yemeyin, sıvı tüketmeyin, sigara içmeyin, makyaj yapmayın veya kontak lenslerinizi çıkarıp-takmayın. Son kullanma tarihi geçmiş kitleri kullanmayın. Tüm örnekler ve kullanılmayan reaktifleri yerel düzenlemelere uygun olarak atın. Örnekler uygun biyogüvenlik uygulamalarına uygun olarak potansiyel bulaşıcı olarak kabul edilmeli ve bir biyolojik kabin içinde ele alınmalıdır. % 0,5 'lik sodyum hipoklorit ya da diğer uygun bir dezenfektan kullanılarak bütün numune veya reaktiflerin tüm döküntülerini temizleyin ve dezenfekte edin. Deri, göz ve mukozanın örnek ve reaktiflerle temasından kaçının. Eğer özelti temas ederse, su ile yıkayınız ve hemen bir doktora başvurun. Malzeme Güvenlik Bilgi Formları (MSDS) istek üzerine sağlanır. Bu ürünün kullanımı DNA amplifikasyonunda eğitilmiş personel ile sınırlı olmalıdır. Laboratuvarlar çalışma akışı tek yönlü işlemelidir. Ekstraksiyon alanında başlamalı PCR ve ardından tespit alanına doğru devam etmelidir. Önceki basamakların gerçekleştirildiği alanlara örnek, ekipman ve reaktif taşımayın. KALİTE KONTOL Dikkat! Kitin bazı bileşenleri koruyucu olarak Sodyum asit içerir. Reaktifin taşınması sırasında metal borular kullanmayın. Uyarı olarak ISO Sertifikalı Kalite Yönetim Sistemine uygun olarak, her bir lot tutarlı ürün kalitesini sağlamak için önceden belirlenmiş özellikleri karşı test edilir. ÜRÜN KULLANIMI SINIRLAMASI Tüm reaktifler sadece laboratuar ortamında diagnostik olarak kullanılabilir. Bu ürünün kullanımı DNA amplifikasyonu (EN375) teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlandırılmalıdır. en iyi PCR sonuçları için Kullanım kılavuzu ile tam ve katı uyum gereklidir. Dikkat: tüm bileşenlerin etiketleri ve kutu üzerindeki yazılı olan son kullanma tarihlerine dikkat edilmelidir. Son kullanma tarihinden sonra bir kiti asla kullanmayın. SAKLAMA KOŞULLARI Kullanılmadığı zaman Klamidya trakomatis Gerçek Zamanlı PCR kitinin tüm parçaları (Polimeraz (TaqF) and PCR-mix-2-FRT dışında) 2-8 ºC' de muhafaza edilmelidir. Klamidya trakomatis Gerçek Zamanlı kitinin ) 2-8 ºC' de sevk edilebilir (taşınabilir) ama 2-8 ºC' de muhafaza edilmelidir. İlk alındığı anda ise -20 C muhafaza edilmelidir. Aksi belirtilmedikçe ilk kullanımdan önce ve sonra veliler Reaktiflerin raf ömrü, aynıdır.

5 Polimeraz (TaqF) and PCR-mix-2-FRT eksi 16 C veya daha altında saklanmalıdır. PCR-mix-1-FL Klamidya trakomatis ışıktan uzak tutulmalıdır. DAYANIKLILIK Klamidya trakomatis Gerçek Zamanlı kit etiketinde belirtilen son kullanma tarihine kadar saklanabilir. Ürün etiketi üzerinde yazılı olan denetim tarihine kadar performans koruyacaktır. Kiti ışık, ısı veya neme maruz kalma durumundan kaçınılmalıdır çünkü kitin içindekilerin raf ömrünü etkileyebilir ve kaçınılmalıdır. Reaktiflerin tekrar çözülme ve dondurma gibi işlemlerden kaçınılmalıdır çünkü Bu reaktiflerin hassasiyeti azaltabilir. ÖRNEK TOPLAMA,SAKLAMA VE TAŞIMA Klamidya trakomatis Gerçek Zamanlı Elde edilen DNA analiz edebilirsiniz: servikal, üretral, konjonktiva sürüntü: Sürüntüyü nükleazsız 1.5 ml tüpe yerleştirin ve 0.2 ml transfer ortamı ekleyin. Sürüntüyü sn kuvvetle çalkalayın. Idrar sedimenti : Steril bir kaba ml sabah ilk idrarı toplayın. 30 dakika 3000 x g de santrifüj edin, süpernatantı dikkatle atın ve yaklaşık 200 µl çözelti ekleyin. Sedimenti yeniden süspanse edin. Süspansiyonu DNA ekstraksiyonu için kullanın. prostat sıvısı Eppendorf tupte saklanır. seminal sıvı: semeni sıvılaşma kadar karanlıkta 40 dakika koruyun. Örneklerin toplandıktan hemen sonra çalışılması tavsiye edilir. 2 8 C de 24 saatten fazla olmamak üzere saklanabilir, daha uzun süreler için 20/80 C de dondurun. Klinik örneklerin,etyolojik ajanların taşınması için ulaştırma ülke, federal, eyalet ve yerel yönetmeliklere uygun olmalıdır. DNA İZOLASYONU Aşağıdaki izolasyon kiti önerilir: DNA-Sorb-A (Sacace, REF K-1-1/A). DNA ekstraksiyonunu üreticinin talimatlarına uygun olarak gerçekleştiriniz. DNA izolasyonu prosedürü sırasında direk olarak örneğe/lizis karışımına 10 µl İnternal Kontrol ekleyin. (Not: Sacace İç Kontrol tüm ürogenital enfeksiyon kitleri için aynıdır) REAKTİFLERİN HAZIRLANMASI (REAKTİF HACMİ 25 µl) : Toplam reaksiyon hacmi 25 ul, DNA örneği hacmi 10 ul. 1. PCR-mix-2-FRT tupünü çözün. Tüpü PCR-mix-1-FL Chamydia trachomatis, PCR-mix-2- FRT, and polimeraz (TaqF) ile vorteksleyin ve kısa süre santrifüj edin. Klinik ve kontrol

6 örneklerinden DNA Amplifikasyonu için gerekli sayıda tüp alın (36-well rotor için 0.2-ml tüp veya 72-well rotor için 0.1-ml strip tüpleri). 2. N reaksiyon (2 kontrol dahil ) için yeni tüp ekleyin: 10*(N+1) µl PCR-mix-1-FL Chlamydia trachomatis, 5.0*(N+1) µl PCR-mix-2-FRT, 0.5*(N+1) µl polimeraz (TaqF). Tüpleri vorteksleyin ve kısa süre santrifüj edin. Hazırlanmış karışımdan her tüpe 15 µl transfer edin. 3. aerosol filtreli pipet ucu kullanın, klinik veya kontrol örneğinden elde edilen örneklerden 10 µl DNA örneği hazırlanmış tüplere ekleyin. 4. Kontrol amplifikasyon reaksiyonunu gerçekleştirin: NCA - NCA (Amplifikasyonun Negatif Kontrolü) etiketli tüpe 10 µl DNA-tamponu C+ - C+ (Amplifikasyonun Pozitif Kontrolü) ile etiketli tübe 10 µl Pozitif Kontrol Komplex ekleyin C - C- (Amplifikasyonun Negatif Kontrolü) ile etiketli tübe 10 µl Negatif Kontrol Komplex ekleyin. Chlamydia trachomatis, FAM (Green) kanalında, IC DNA JOE(Yellow)/HEX/Cy3 kanalında tespit edilir. Amplifikasyon 1. Cihazınızda aşağıdaki şekilde bir sıcaklık profili oluşturun: Rotor-tip Cihazlar 1 Plate- veya modular tip Cihazlar 2 Basamak Sıcaklık, Sıcaklık, Süre Tekrar С Süre Tekrar dak dak s 95 5 s s s s s 9 5 s 95 5 s s floresan sinyal tespiti s floresan sinyal tespiti s s 1 Örneğin Rotor-Gene 3000/6000/Q (Corbett Research, Qiagen) 2 Örneğin, iq5 (BioRad); Mx3005P (Stratagene), Applied Biosystems 7300/7500/StepOne Real Time PCR (Applera), SmartCycler (Cepheid), LineGeneK (Bioer) FAM/Green ve JOE/Yellow/HEX/Cy3, kanallarında floresans 2. Döngü aşamasının 2. Basamağında (60 C) tespit edilir.

7 CİHAZ AYARLARI Rotor-tipi cihazlar (RotorGene 3000/6000, RotorGene Q) Kanal Eşik değeri Daha fazla ayar/ aykırı değer Doğru eğim FAM/Green 0.1 kaldırma 0 % Off JOE/Yellow % Off Plate-tipi cihazlar (iq5, Mx300P, ABI 7500/7300) Sonuç analizi için, eşik çizgisini son amplifikasyon döngüsü sırasında Poz C + numune için elde edilen maksimum floresans sinyalinin % karşı gelen bir seviyede ayarlayın. VERİ ANALİZİ Floresans sinyal yoğunluğu iki kanalda tespit edilir: Chlamydia trachomatis DNA amplifikasyon ürünü FAM/Green floresans kanalında tespit edilir, İç Kontrol Amplifikasyon ürünlerinden gelen sinyal ise JOE/Yellow/HEX/Cy3 kanalında tespit edilir. Sonuçların yorumlanması Sonuçlar eşik hattı ile floresan eğrisinin çakışmasına göre (ya da çakışmamasına ) aygıtın yazılımı tarafından yorumlanır. Yorumlamanın prensipleri: Eğer bir örneğin FAM kanalında Ct değeri mevcut ise o örnekte Chlamydia trachomatis DNA tespit edilir. Floresan eğrisi tipik sigmoid bir şekle sahip olmalı ve önemli floresan artışı olan bölgede bir kez eşik çizgisi ile çakışmalıdır. Eğer bir örneğin JOE kanalında Ct değeri 33 den az iken FAM kanalında Ct değeri mevcut değilse Chlamydia trachomatis DNA sı o örnek için tespit edilmez. Örneğin JOE kanalında Ct değeri yok veya spesifik sınır değerden fazla (33) iken FAM kanalında Ct değeri yok sonuç geçersizdir. Bu gibi örneklerin PCR analizlerinin tekrar edilmesi gerekir. Analiz sonuçları sadece Amplifikasyonun Pozitif ve Negatif Kontrolleri ile Ekstraksiyonun Negatif Kontrolü için elde edilen sonuçların uygun olması halinde geçerli sayılır (Table 2). Tablo 2. Kontroller için Sonuçlar Kontrol Kontrol alanı Ct kanalı Fam Ct kanalı Joe Yorumlama NCE DNA isolation NEG POS Geçerli sonuç NCA Amplifikasyon NEG NEG Geçerli sonuç C+ Amplifikasyon POS POS Geçerli sonuç

8 KALİTE KONTROL PROSEDÜRÜ Her örneğin ekstraksiyon prosesini kontrol etmek ve olası reaksiyon inhibasyonlarını belirlemek için örnek hazırlığının başında belirlenmiş miktar Internal Kontrol (IC) her örneğe ve kontrole katılır. Örnek hazırlığını, Amplifikasyonu ve tespit basamaklarının doğru şekilde işlendiğinin doğrulanması için ekstraksiyonun Negatif Kontrolü (NCE), Negatif Amplifikasyon Kontrol (NCA), pozitif Amplifikasyon Kontrol (C+) gereklidir. Kontroller beklenen aralığın dışında ise (Kontroller için sonuçlar tablosuna bkz), bu çalışmada kullanılan bütün örnekler ve kontroller örnek hazırlık aşamasından başlanarak tekrarlanmalıdır. ÖZELLİKLER Hassasiyet Chlamydia trachomatis Real-TM PCR kitinin analitik hassasiyeti aşağıdaki tabloda belirtilmiştir. Klinik materyal DNA ekstraksiyon kit Analitik hassasiyet, GE/ml* Ürogenital sürüntü İdar DNA-sorb-A DNA-sorb-A 5 x x 10 3 * Belirtilen taşıma ortamı yerleştirilen bir klinik örneğin 1 mlsi başına mikroorganizmanın Genom benzerleri (GE). Özgünlük Сhlamydia trachomatis Real-TM PCR kitin analitik özgünlüğü spesifik primerler ve probların seçimi ve sıkı reaksiyon koşulları ile sağlanır. Primer ve problar dizi karşılaştırma analizi ile gen bankalarında yayınlanan tüm dizilere olan mümkün benzerlikleri için kontrol edildi. İnsan DNA ve aşağıdaki mikroorganizmaların DNA örneklerinin testlerinde spesifik olmayan yanıtlar görülmemeiştir: Gardnerella vaginalis, Lactobacillus spp., Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Candida albicans, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Mycoplasma genitalium, Neisseria flava, Neisseria subflava, Neisseria sicca, Neisseria mucosa, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Treponema pallidum, Toxoplasma gondii, HSV type 1 ve 2, CMV,ve HPV.

9 SORUN GİDERME 1. Ekstraksiyon Negatif Kontrolü için IC (Joe/Hex/Cy3 kanalı) zayıf sinyal veya sinyal olmaması. PCR inhibe edilmiştir. Önerilen bir DNA ekstraksiyon yöntemi kullandığınızdan ve üreticinin talimatlarına uygun olduğundan emin olun. Ekstrakte DNA yı pipetlemeden önce bütün tüpleri maksimum hızda ( g) 2 dakika boyunca yeniden santrifüj edin ve supernatantı dikkatle alın. Pelleti dağıtmayın, sorbent reaksiyonu inhibe eder! Reaktiflerin saklama koşulları talimatlara uygun değildir. Depolama koşullarını kontrol edin. Uygun olmayan DNA ekstraksiyonu. DNA ekstraksiyon aşamasından başlayarak analizi tekrarlayın. PCR koşulları talimatlara uygun değildir. PCR koşullarını kontrol edin ve IC tespiti için protokolde belirtilen floresans kanalı seçin. Reaktiflerin pipetlenmesi sırasında IC katılmamıştır. DNA ekstraksiyon işlemi sırasında dikkat olun. 2. Pozitif Kontrol sinyali zayıftır veya hiç sinyal yoktur. PCR koşulları talimatlara uygun değildir. Amplifikasyon protokolünü kontrol edin ve manuelde belirtilen floresans kanalını seçin. 3. DNA ekstraksiyon işlemi sırasında kirlenme. Tüm numuneler sonuçları geçersizdir. Sodyum hipoklorit ve etanol ile tüm yüzeyleri ve aletleri dezenfekte edin. Ekstraksiyon prosedürü boyunca sadece filtreli pipet ucu kullanın. Tüpler arası pipet uçlarını değiştirin. DNA ekstraksiyonunu yeni bir set reaktif ile tekrarlayın. 4. PCR Negatif Kontrol (DNA-tamponu) ile herhangi bir sinyal. PCR prosedürü sırasında kirlenme. Tüm numuneler sonuçları geçersizdir. Sodyum hipoklorit ve etanol veya özel DNA dekontaminasyon reaktifleri ile tüm yüzeyleri ve aletleri dezenfekte edin. Positive Kontrolleri sonda pipetleyin. PCR hazırlığını yeni bir set reaktif ile tekrarlayın.

10 İŞARET LİSTESİ Liste Numarası DİKKAT! Lot Numarası In Vıtro Tanısal Kullanım için <n> test için yeterli içerik Sürüm Saklama sıcaklığı NCA Negatif Kontrol (Amp) Üretici C Negatif Kontrol (Ekst) Kullanım için talimatlara danışın. C+ Positive Kontrol (Amp) Son kullanma tarihi IC Internal Kontrol REFERANSLAR Role of Chlamydia trachomatis in Miscarriage. Baud D, Goy G, Jaton K, Osterheld MC, Blumer S, Borel N, Vial Y, Hohlfeld P, Pospischil A, Greub G. Emerg Infect Dis Sep;17(9): Molecular Diagnosis of Genital Chlamydia trachomatis Infection by Polimeraz Chain Reaction. Khan ER, Hossain MA, Paul SK, Mahmud MC, Rahman MM, Alam MA, Hasan MM, Mahmud NU, Nahar K. Mymensingh Med J Jul;20(3): Chlamydia trachomatis prevalence in unselected infertile couples.salmeri M, Santanocita A, Toscano MA, Morello A, Valenti D, La Vignera S, Bellanca S, Vicari E, Calogero AE. Syst Biol Reprod Med Dec;56(6): Epub 2010 Sep 17. Urine-based testing for Chlamydia trachomatis among young adults in a population-based survey in Croatia: feasibility and prevalence. Božičević I, Grgić I, Židovec-Lepej S, Čakalo JI, Belak-Kovačević S, Štulhofer A, Begovac J. BMC Public Health Apr 14;11:230. Frequency of Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis and Ureaplasma species in cervical samples. Rodrigues MM, Fernandes PÁ, Haddad JP, Paiva MC, Souza Mdo C, Andrade TC, Fernandes AP. J Obstet Gynaecol. 2011;31(3): Chlamydia trachomatis prevalence in unselected infertile couples. Salmeri M, Santanocita A, Toscano MA, Morello A, Valenti D, La Vignera S, Bellanca S, Vicari E, Calogero AE. Syst Biol Reprod Med Dec;56(6): Epub 2010 Sep 17. Prevalence of Chlamydia trachomatis: results from the first national population-based survey in France. Goulet V, de Barbeyrac B, Raherison S, Prudhomme M, S le C, Warszawski J; CSF group. Sex Transm Infect Aug;86(4):263 *iq5,bio-rad Laboratories ın ticari markasıdır. * Rotor-Gene Technology,Qiagen ın ticari markasıdır. * MX3005P, Agilent Technologies ın ticari markasıdır. *ABI, Applied Biosystems ın ticari markasıdır. * LineGeneK, Bioer ın ticari markasıdır. * SmartCycler,Cepheid ın ticari markasıdır. Sacace Biotechnologies Srl via Scalabrini, Como Italy Tel Fax mail: info@sacace.com web: