Сhlamydia trachomatis/ureaplasma/ M.hominis Real-TM El Kitabı

Transkript

1 In Vıtro Tanısal Kullanım için Sadece Profesyonel Kullanım için Сhlamydia trachomatis/ureaplasma/ M.hominis Real-TM El Kitabı Chlamydia trachomatis, Ureaplasma species ve Mycoplasma hominis in Kalitatif Tespiti için Multipleks Real Time PCR Kiti REF B43-100FRT 100

2 İSİM Сhlamydia trachomatis/ureaplasma/m.hominis Real-TM GİRİŞ STD (cinsel yolla bulaşan hastalıklar) cinsel aktivite yoluyla edinilen bakteriyel, viral ve paraziter enfeksiyonlar sonucu oluşur. HIV gibi hastalıklar sadece son birkaç yıl içinde tespit edilmiş ise de frengi ve gon-orrhea gibi bazı cinsel yolla bulaşan hastalıklar, yüzyıllardır bilinmektedir. Cinsel yolla bulaşan hastalıklar 25'ten fazla bulaşıcı organizmadan kaynaklanır. Organizmalar tanımlandıkça cinsel yolla bulaşan hastalıklar sayısı da genişletmeye devam etmektedir. Yaygın cinsel yolla bulaşan hastalıklar şunlardır: klamidya, gonore, herpes, HIV, HPV, frengi, Gardnerella ve trichomoniasis. Chlamydia trachomatis hareketsiz, gram-negatif bakteriyel patojen ve en yaygın cinsel yolla bulaşan bakteriyel ajandır. C. trachomatis enfeksiyonu prevalansı en fazla risk altında kabul nüfusun cinsel olarak aktif ergen kadınlarda, genel olarak %10 u aşmakta ve ergenve STD klinik toplumlarda, prevalans % 40 a ulaşabilmektedir. C. trachomatis enfeksiyonu prevalansı STD polikliniklerine başvuran erkeklerde %15-20 asemptomatik erkeklerde % 4 ile 10 arasında değişmektedir. Yenidoğanlarda klamidya enfeksiyonları perinatal maruz kalma sonucu olarak ortaya çıkmaktadır. Enfekte annelerden doğan bebeklerin yaklaşık % 65 i vajinal doğum sırasında enfekte olmaktadır. Nükleik asit amplifikasyon teknolojisi tabanlı testlerin geliştirilmesi STD tanı alanında önemli bir gelişme olmuştur. Çünkü nükleik asit amplifikasyonu son derece hassas ve spesifiktir, genellikle klinik bakım talebi olmayan asemptomatik kişilerde enfeksiyonu invaziv olmayan örnekleme teknikleri kullanarak görüntülemek için fırsat sunar. KULLANIM AMACI Сhlamydia trachomatis/ureaplasma/m.hominis Real-TM PCR kiti real-time hibridizasyonfloresans tespiti kullanarak, klinik materyallerden (ürogenital, rektal ve boğaz kültürleri, konjonktiva akıntı, prostat bezi salgısı ve idrar örnekleri) Chlamydia trachomatis, Ureaplasma (parvum and urealyticum) ve Mycoplasma hominis DNA sının multipleks tespiti için in vitro nükleik asit amplifikasyonunu sağlamak amacı ile kullanılır. PCR analizinin sonuçları hastalığın kompleks tanısı ile beraber ele alınmalıdır. TESPİT PRENSİBİ Polimeraz zincir reaksiyonu ile(pcr) C.trachomatis / Ureaplasma / M.hominis tespiti spesifik C.trachomatis / Ureaplasma / M.hominis primerleri kullanarak patojen genomunun spesifik bölgelerinin amplifikasyonuna dayanır. Real-time PCR da amplifiye ürünler floresans boyalar kullanılarak tespit edilir. Bu boyalar, amplifiye ürüne spesifik olarak bağlanan oligonükleotit problara bağlanır. Floresans şiddetin real-time PCR süresince gerçek zamanlı görüntülenmesi reaksiyon tüplerinin PCR çalışmasının ardından tekrar açılmasına gerek kalmadan biriken ürünleri tespit eder. Сhlamydia trachomatis/ureaplasma/m.hominis Real-TM PCR kiti spesifik olmayan primer reaksiyonlarını başarılı bir şekilde azaltan hot-start kullanır. Hot-start nükleotitlerin ayrılması ve 95 C de 15 dakika ısıtılarak aktive olan kimyasal olarak modifiye edilmiş polimeraz (TaqF) ile garanti altına alınır.

3 İÇERİK Reaktifler Açıklama Hacim, ml Miktar PCR-mix-1-FL C.trachomatis / Ureaplasma / M.hominis renksiz duru sıvı tüp PCR-mix-2-FRT renksiz duru sıvı tüp Polimeraz (TaqF) renksiz duru sıvı tüp Pozitif Kontrol (C+) renksiz duru sıvı tüp DNA-tamponu renksiz duru sıvı tüp Negatif Kontrol (C )* renksiz duru sıvı tüp İç Kontrol-FL (IC)** renksiz duru sıvı tüp *Ekstraksiyon prosedüründe Ekstraksiyon Negatif Kontroü olarak kullanılmalıdır. ** DNA ekstraksiyonu prosedürü sırasında direk olarak örnek/lizis karışımına 10 µl İç Kontrol-FL ekleyin (bkz DNA-sorb-A REF K-1-1/A protokol). EK GEREKLİLİKLER DNA ekstraksiyon kit. Transfer ortamı Tek kullanımlık tozsuz eldiven ve laboratuvar önlüğü. Pipetler (ayarlanabilir). Aerosol bariyerli steril pipet uçları ( up to 200 µl). Tüp rakları. Vortex karıştırıcı. 2 mllik reaksiyon tüpleri için masaüstü rotorlu santrifüj. PCR kutusu. Real Time PCR termocycler (örneğin, Rotor-Gene 6000/Q (Qiagen), iq5 (BioRad), Mx3005P (Agilent) PCR veya PCR-plaka için polipropilen mikrotüp (0.1- veya 0.2-ml). 2-8 C için buzdolabı. -16 C için derin dondurucu. Kullanılan pipet uçları için atık kutusu KALİTE KONTROL Sacace s ISO Certified Kalite Yönetim Sistemi uyarınca, her lot tutarlı ürün kalitesini sağlamak için önceden belirlenmiş özellikleri karşı test edilir. ÜRÜN KULLANIM KISITLAMALARI Tüm Reaktif sadece in vitro tanısal olarak kullanılabilir. Bu ürünün kullanımı DNA amplifikasyonu (EN375) teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır. Kullanım kılavuzu ile tam uyum en iyi PCR sonuçları için gereklidir. Tüm bileşenlerin kutuları üzerindeki etiketler üzerinde yazılı son kullanma tarihlerine dikkat edilmelidir. Kitleri son kullanma tarihinden sonra kullanmayın.

4 UYARI VE ÖNLEMLER In Vitro Tasıl Tıbbi Cihaz Sadece In Vitro Tanısal kullanım 1. Numuneler e reaktifler ile çalışırken tek kullanımlık eldiven ve göz koruması kullanın laboratuvar önlüğü giyin. Sonrasında ellerinizi güzelce yıkayın. 2. Ağızla pipetleme yapmayın. 3. Çalışma alannda yemek yemeyin, sıvı tüketmeyin, sigara içmeyin, makyaj yapmayın veya kontak lenslerinizi çıkarıp-takmayın. 4. Son kullanma tarihinden sonra bir kiti kullanmayın. 5. Tüm örnekler ve kullanılmayan reaktifleri yerel düzenlemelere uygun olarak atın. 6. Biyogüvenlik Seviyesi 2, bulaşıcı maddeler içeren veya içerdiğinden şüphelenilen malzemeler için kullanılmalıdır. 7. % 0,5 'lik sodyum hipoklorit ya da diğer uygun bir dezenfektan kullanılarak bütün numune veya reaktiflerin tüm döküntülerini temizleyin ve dezenfekte edin. 8. Deri, göz ve mukozanın örnek ve reaktiflerle temasından kaçının. Eğer özelti temas ederse, su ile yıkayınız ve hemen bir doktora başvurun. 9. Malzeme Güvenlik Bilgi Formları (MSDS) istek üzerine sağlanır. 10. Bu ürünün kullanımı DNA amplifikasyonunda eğitilmiş personel ile sınırlı olmalıdır. 11. PCR reaksiyonları kontaminasyona karşı hassastır. Iyi laboratuvar uygulamaları uyarınca laboratuvarda kontaminasyon riskini en aza indirmek için PCR sürecindaki uygulamaların fiziksel ayrımı gereklidir. 12. Labarotuvardaki çalışma akışı tek yönlü işlemelidir. Ekstraksiyon alanında başlamalı PCR ve ardından tespit alanına doğru devam etmelidir. Önceki basamakların gerçekleştirildiği alanlara örnek, ekipman ve reaktif taşımayın. Kitin bazı bileşenleri koruyucu olarak Sodyum azid içerir. Reaktifin taşınması sırasında metal tubing kullanmayın. PCR analizi, nakliye ve depolama için biyolojik maddelerin örneklemesi üreticinin el kitabında ayrıntılı olarak tarif edilmiştir. Bu el kitabının işin başlamadan önce okunması tavsiye edilir. DEPOLAMA TALİMATLARI Сhlamydia trachomatis/ureaplasma/m.hominis Real-TM PCR kitinin bütün bileşenleri kullanılmıyor olduklarında 2-8 C de saklanmalıdır. Сhlamydia trachomatis/ureaplasma/m.hominis Real-TM PCR kitinin bütün bileşenleri etiketin üzerinde yazan son kullanma tarihine kadar kararlıdır. Aksi belirtilmediği sürece, reaktiflerin ilk kullanımdan önce ve sonraki raf ömrü aynıdır. KARARLILIK PCR-mix-1-FL C.trachomatis / Ureaplasma / M.hominis uşıktan korunmalıdır. Polimeraz (TaqF) ve PCR-mix-2-FRT, - 16 C den daha yüksek sıcaklıkta saklanamaz. Сhlamydia trachomatis/ureaplasma/m.hominis Real-TM kit etiketinde belirtilen son kullanma tarihine kadar kararlıdır. Ürün, etiketin üzerinde belirtilen kontrol tarihine kadar işlemeye devam edecektir.

5 Işık, ısı ve neme maruz kalmak bazı kit bileşenlerini etkileyebilir. Bu durumdan kaçınılmalıdır. Reaktiflerin sürekli dondurulup-çözülmesinden kaçınılmalıdır. Bu durum reaktiflerin hassasiyetine zarar verebilir. Etiketinin üzerinde bulunan talimatlara uygun saklanmayan reaktiflerin performans etkilenebilir ve bu durum test sonuçlarını ileri derecede etkileyebilir. ÖRNEKLERİN TOPLANMASI, SAKLANMASI VE TAŞINMASI Сhlamydia trachomatis/ureaplasma/m.hominis Real-TM aşağıdaki materyallerden ekstrakte edilen DNA lar ile kullanılabilir: servikal, üretral, konjonktiva sürüntüden: sürüntü çubuklarını nükleaz içermeyen 1,5 ml tüp içine yerleştirin ve 0,2 ml ulaştırma ortamı ekleyin. Sürüntü çubuklarını saniye şiddetle sallayın. idrar sediment: steril bir kapta ilk idrarı ml toplayın x g de 30 dakika santrifüj edin, süpernatantı dikkatle atın ve 200 µl kadar çözelti bırakın. Sedimenti yeniden süspanse edin. Süspansiyonu DNA ekstraksiyonu için kullanın. "Eppendorf" tüp içinde depolanan prostatik sıvı; seminal sıvı: spermleri sıvılaşma kadar karanlıkta 40 dakika koruyun. DNA izolasyonu için 100 ul kullanın. Örneklerin toplandıktan hemen sonra çalışılması tavsiye edilir. Örnekler 2 8 C de 24 saatten uzun süreli olmamak şartıyla daha uzun süreli saklamak için 20/80 C de dondurun. Klinik örneklerin,etyolojik ajanların taşınması için ulaştırma ülke, federal, eyalet ve yerel yönetmeliklere uygun olmalıdır. DNA İZOLASYONU Aşağıdaki kit önerilir: DNA-Sorb-A (Sacace, REF K-1-1/A). DNA ekstraksiyonunu üreticinin talimatlarına uygun olarak gerçekleştiriniz. DNA izolasyonu prosedürü sırasında direk olarak örneğe/lizis karışımına 10 µl İnternal Kontrol ekleyin. (Not: Sacace İç Kontrol tüm ürogenital enfeksiyon kitleri için aynıdır) REAKTİF HAZIRLIĞI (REAKSİYON HACMİ 25 µl): Toplam reaksiyon hacmi 25 µl, DNA örneği hacmi 10 µl. 1. Klinik ve kontrol örneklerinden DNA amplifikasyonu için gerekli sayıda tüp hazırlayın. 2. N reaksiyon gerçekleştirmek için: (2 kontrol dahil), yeni bir tüpte karıştırın: 10*(N+1) µl PCR- mix-1-fl C.trachomatis / Ureaplasma / M.hominis, 5.0*(N+1) µl PCR-mix-2-FRT ve 0.5*(N+1) µl Polimeraz (TaqF). Tübü vorteksleyin ve kısaca santrifüj edin. Hazırlanan karışımdan 15 µl her tüpe dağıtın. PCR-mix-2-FRT karıştırmadan önce çözün. 3. Aerosol bariyerli pipet ucu kullanarak, klinik veya kontrol örneklerinden DNA ekstraksiyonu aşamasında elde edilmiş 10 µl DNA hazırlanmış tüplere ekleyin. 4. Kontrol amplifikasyonu reaksiyonları:

6 NCA - NCA (Amplifikasyonun Negatif Kontrolü) ile etiketli tübe 10 µl DNA-buffer ekleyin. C+ - C+ (Amplifikasyonun Pozitif Kontrolü) ile etiketli tübe 10 µl Pozitif Kontrol kompleks ekleyin. Amplifikasyon 1. Cihazınızda aşağıdaki gibi bir sıcaklık profili oluşturun: Rotor tipi cihaz Plate veya modüler tip cihaz Basamak Sıcaklık, Sıcaklık, Süre Döngü С С Süre Döngü Bekle dak min s 95 5 s Döngü s s s s 95 5 s 95 5 s Döngü s (floresans 30 s (floresans tespiti) tespiti) s s 1 Örneğin Rotor-Gene 6000/Q (Corbett Research, Qiagen) 2 Örneğin, iq5 (BioRad); Mx3005P (Agilent), ABI 7500 Real Time PCR (Applied), SmartCycler (Cepheid) FAM/Green, JOE/Yellow/HEX/Cy3, ROX/Orange/Texas Red, ve Cy5/Red kanallarında floresans 2. Döngü aşamasının 2. Basamağında (60 C) tespit edilir. CİHAZ AYARLARI Rotor-tip cihaz Kanal Eşik Daha fazla ayar/ aykırı değer Doğru eğim kaldırma FAM/Green % Off JOE/Yellow % Off Rox/Orange % Off Cy5/Red % Off Plate-tip cihaz Sonuç analizi için, eşik çizgisini son amplifikasyon döngüsü sırasında Poz C + numune için elde edilen maksimum floresans sinyalinin % karşı gelen bir seviyede ayarlayın. VERİ ANALİZİ Chlamydia trachomatis DNA amplifiye ürünü FAM/Green Floresans kanalda tespit edilir, Ureaplasma spp. (U.parvum and U.urealyticum) DNA, JOE/Yellow/HEX kanalında, Mycoplasma hominis DNA, ROX/Orange kanalında, İç Kontrol ise Cy5/Red kanalında tespit edilir. SONUÇLARIN YORUMLANMASI Sonuçlar eşik hattı ile floresan eğrisinin çakışmasına göre (ya da çakışmamasına ) aygıtın

7 yazılımı tarafından yorumlanır. Analiz sonuçları sadece Pozitif ve Negatif Kontroller için elde edilen sonuçların doğru olması halinde geçerli sayılır. Tablo 2. Kontroller için sonuçlar Kontrol Kontrol alanı Ct kanal FAM/Green, JOE/Yellow/HEX, Ct kanal Cy5/Red Yorumlama ROX/Orange C DNA ekstraksiyonu Neg Poz (< 33) OK NCA Amplifikasyon Neg Neg OK C+ Amplifikasyon Poz (< 33) Poz (< 33) OK 1. Örneğin Chlamydia trachomatis pozitif sayılması için Ct değerinin sonuç sisteminde (floresans eğrisi eşik çizgisi ile çakışır) FAM/Green kanalında tanımlanması gerekir. 2. Örneğin Ureaplasma spp pozitif sayılması için Ct değerinin sonuç sisteminde (floresans eğrisi eşik çizgisi ile çakışır) JOE/Yellow/HEX/Cy3 kanalında tanımlanması gerekir. 3. Örneğin Mycoplasma hominis pozitif sayılması için Ct değerinin sonuç sisteminde (floresans eğrisi eşik çizgisi ile çakışır) ROX/Orange kanalında tanımlanması gerekir. 4. Örneğin Chlamydia trachomatis, Ureaplasma spp. Mycoplasma hominis negatif sayılması için Ct değerinin sonuç sisteminde (floresans eğrisi eşik çizgisi ile çakışmaz) FAM/Green, JOE/Yellow/HEX and ROX/Orange kanalarında tanımlanmaması gerekir ve Cy5/Red kanalında Ct değeri sınır değeri aşmaz (Ct < 33). KALİTE KONTROL PROSEDÜRÜ Her örneğin ekstraksiyon prosesini kontrol etmek ve olası reaksiyon inhibasyonlarını belirlemek için örnek hazırlığının başında belirlenmiş miktar Internal Kontrol (IC) her örneğe ve kontrole katılır. Örnek hazırlığını, Amplifikasyonu ve tespit basamaklarının doğru şekilde işlendiğinin doğrulanması için ekstraksiyonun Negatif Kontrolü (NCE), Negatif Amplifikasyon Kontrol (NCA), pozitif Amplifikasyon Kontrol (C+) gereklidir. Kontroller beklenen aralığın dışında ise (Kontroller için sonuçlar tablosuna bkz), bu çalışmada kullanılan bütün örnekler ve kontroller örnek hazırlık aşamasından başlanarak tekrarlanmalıdır. ÖZELLİKLER Hassasiyet Klinik materyal Ürogenital sürüntü İdrar Nükleik asit ekstraksiyonu kit DNA-sorb-A DNA-sorb-A Mikroorganizma Hassasiyet, kopya/ml Chlamydia trachomatis 5х102 Ureaplasma spp. 103 Mycoplasma hominis Chlamydia trachomatis Ureaplasma spp. Mycoplasma hominis x103 2x103 Diğer iki organizma yüksek konsantrasyonda bulunuyor olsa bile her bir

8 organizmanın analitik hassasiyeti aynı kalır. Özgünlük Сhlamydia trachomatis/ureaplasma/m.hominis Real-TM PCR kitin analitik özgünlüğü spesifik primerler ve probların seçimi ve sıkı reaksiyon koşulları ile sağlanır. Primer ve problar dizi karşılaştırma analizi ile gen bankalarında yayınlanan tüm dizilere olan mümkün benzerlikleri için kontrol edildi. İnsan DNA ve aşağıdaki mikroorganizmaların DNA örneklerinin testlerinde spesifik olmayan yanıtlar görülmemeiştir: Gardnerella vaginalis, Lactobacillus spp., Escherichia coli, Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Candida albicans, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum, Mycoplasma genitalium, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Neisseria spp., Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Treponema pallidum, Toxoplasma gondii, HSV tipleri 1 ve 2, CMV, ve HPV. PROBLEM GİDERME 1. Ekstraksiyon Negatif Kontrolü için IC (Cy5 kanalı) sinyalin zayıf olması veya sinyal olmaması. PCR inhibe edilmiştir. Önerilen bir DNA ekstraksiyon yöntemi kullandığınızdan ve üreticinin talimatlarına uygun olduğundan emin olun. Ekstrakte DNA yı pipetlemeden önce bütün tüpleri maksimum hızda ( g) 2 dakika boyunca yeniden santrifüj edin ve supernatantı dikkatle alın. Pelleti dağıtmayın, sorbent reaksiyonu inhibe eder! Reaktiflerin saklama koşulları talimatlara uygun değildir. Depolama koşullarını kontrol edin. PCR koşulları talimatlara uygun değildir. PCR koşulları kontrol edin ve IC tespiti için protokolde bildirilen floresan kanalı seçin Reaktiflerin pipetlenmesi sırasında örneğe IC eklenmemiştir. DNA ekstraksiyon işlemi sırasında dikkat edin. 2. Pozitif Kontrol sinyali zayıftır veya yoktur. PCR oşulları talimatlara uygun değildir. Amplifikasyon protokolünü kontrol edin ve manuelde belirtilen floresans kanalını seçin. 3. Negatif Kontrol ekstraksiyonu ile Fam(Green), Joe (Yellow)/Hex/Cy3, Rox (Orange)/TexasRed kanallarından herhangi birinde sinyal gözlenmesi. DNA ekstraksiyon işlemi sırasında kirlenme. Tüm numuneler sonuçları geçersizdir. Sodyum hipoklorit ve etanol ile tüm yüzeyleri ve aletleri dezenfekte edin. Ekstraksiyon prosedürü boyunca sadece filtreli pipet ucu kullanın. Tüpler arası pipet uçlarını değiştirin. DNA ekstraksiyonunu yeni bir set reaktif ile tekrarlayın. 4. PCR Negatif Kontrol (DNA-tamponu) ile herhangi bir sinyal. PCR prosedürü sırasında kirlenme. Tüm numuneler sonuçları geçersizdir. Sodyum hipoklorit ve etanol veya özel DNA dekontaminasyon reaktifleri ile tüm

9 yüzeyleri ve aletleri dezenfekte edin. Positive Kontrolleri sonda pipetleyin. PCR hazırlığını yeni bir set reaktif ile tekrarlayın.

10 İŞARET LİSTESİ Liste Numarası DİKKAT! Lot Numarası <n> test için yeterli içerik In Vıtro Tanısal Kullanım için Sürüm Saklama sıcaklığı NCA Negatif Kontrol (Amp) Üretici C Negatif Kontrol (Ekst) Kullanım için talimatlara danışın. C+ Pozitif Kontrol (Amp) Son kullanma tarihi IC İç Kontrol REFERENCES Role of Chlamydia trachomatis in Miscarriage. Baud D, Goy G, Jaton K, Osterheld MC, Blumer S, Borel N, Vial Y, Hohlfeld P, Pospischil A, Greub G. Emerg Infect Dis Sep;17(9): Molecular Diagnosis of Genital Chlamydia trachomatis Infection by Polimeraz Chain Reaction. Khan ER, Hossain MA, Paul SK, Mahmud MC, Rahman MM, Alam MA, Hasan MM, Mahmud NU, Nahar K. Mymensingh Med J Jul;20(3): Chlamydia trachomatis prevalence in unselected infertile couples.salmeri M, Santanocita A, Toscano MA, Morello A, Valenti D, La Vignera S, Bellanca S, Vicari E, Calogero AE. Syst Biol Reprod Med Dec;56(6): Epub 2010 Sep 17. Urine-based testing for Chlamydia trachomatis among young adults in a population-based survey in Croatia: feasibility and prevalence. Božičević I, Grgić I, Židovec-Lepej S, Čakalo JI, Belak-Kovačević S, Štulhofer A, Begovac J. BMC Public Health Apr 14;11:230. Frequency of Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis and Ureaplasma species in cervical samples. Rodrigues MM, Fernandes PÁ, Haddad JP, Paiva MC, Souza Mdo C, Andrade TC, Fernandes AP. J Obstet Gynaecol. 2011;31(3): Chlamydia trachomatis prevalence in unselected infertile couples. Salmeri M, Santanocita A, Toscano MA, Morello A, Valenti D, La Vignera S, Bellanca S, Vicari E, Calogero AE. Syst Biol Reprod Med Dec;56(6): Epub 2010 Sep 17. Prevalence of Chlamydia trachomatis: results from the first national population-based survey in France. Goulet V, de Barbeyrac B, Raherison S, Prudhomme M, S le C, Warszawski J; CSF group. Sex Transm Infect Aug;86(4):263 *iq5,bio-rad Laboratories in ticari markasıdır. * Rotor-Gene Technology,Qiagen in ticari markasıdır.

11 * MX3005P,Agilent Technologies in ticari markasıdır. *ABI,Applied Biosystems in ticari markasıdır. Sacace Biotechnologies Srl via Scalabrini, Como Italy Tel Fax mail: web: