Influenza A H1N1 & H3N2 Real-TM. El Kitabı. Influenza A H1N1 ve H3N2 virusleri tespiti için Real Time Amplifikasyon testi

Transkript

1 Influenza A H1N1 & H3N2 Real-TM El Kitabı Influenza A H1N1 ve H3N2 virusleri tespiti için Real Time Amplifikasyon testi REF V54-50FRT REF TV54-50FRT 50

2 İSİM Influenza A H1N1 & H3N2 Real-TM KULLANIM AMACI Influenza A H1N1 & H3N2 Real-TM, Influenza virus kültürlerinde ve klinik malzemelerde (nazal ve orofaranjiyel swablar; balgam bronşiyal lavaj, otopsi metaryali) Ifluenza virus A (H1N1 ve H3N2 alt tipleri tanımlama) RNA nı tiplendirilmesi için Real-Time amplifikasyonbtestidir. TAHLİL PRENSİBİ Influenza A H1N1 & H3N2 Real-TM testi dört ana sürece dayanır: örneklerden Influenza A virus RNA izolasyonu, RNA nın ters transkripsiyonu ve Influenza A virus cdna nın Real Time amplifikasyonu. Influenza A H1N1 & H3N2 Real-TM PCR kiti, Internal Kontrol (IC) içere kalitatif bir testir. Her bir numunenin ektraksiyon işlemini kontrol etmek amacıyla, hem de olası inhibasyom reaksiyonunun belirlemek için izolasyon prosedüründe kullanılımalıdır. SAĞLANAN MALZEMLER Modul No.1: Real Time PCR kit (V54-50FRT) Part N 2 Reverta-L : Reverse transcription of the RNA (RNA ters transkiripsiyonu) RT-G-mix-1, 5 x 0,01 ml; RT-mix, 5 x 0,125 ml; Reverse transcriptase (M-MLV), 0,03 ml; TE-buffer, 1,2 ml. 60 test için reaktif içerir. Part N 3 Influenza A Real-TM : Real Time amplification kit PCR-mix-1 H1N1, 55 tüp; PCR-mix-1 H3N2, 55 tüp; PCR-mix-2, 0,77 ml; Positive Control cdna H1N1 C+, 0,1 ml; Positive Control cdna H3N2 C+, 0,1 ml; DNA-buffer (NCA), 0,5 ml; Negative Control*, 1,2 ml; Internal Control (IC) RNA**, 5 x 0,12 ml; Internal Control (IC) DNA, 0,1 ml; 55 test için reaktif içerir. * ekstraksiyon prosedüründe ekstraksiyon Negatif control olarak kullanılmalıdır. ** 10 µl Internal Control (IC) RNA yı RNA ekstraksiyon prosedürü esnasında direkt numune/lysis karıçımına ekleyin

3 Modul No.2: Complete Real Time PCR test with RNA purification kit (TV54-50FRT) (RNA purification kit (TV47-50FRT) ile komple Real Time PCR testi) Part N 1 Ribo-Sorb : Numune Hazırlama Lysis Solution, 22,5 ml; Washing Solution, 20 ml; Sorbent, 1,25 ml. RNA-eluent, 5 x 0,5ml; 50 test için reaktif içerir. Part N 2 Reverta-L : Reverse transcription of the RNA(RNA ters transkiripsiyonu) RT-G-mix-1, 5 x 0,01 ml; RT-mix, 5 x 0,125 ml; Reverse transcriptase (M-MLV), 0,03 ml; TE-buffer, 1,2 ml. 60 test için reaktif içerir. Part N 3 Influenza A Real-TM : Real Time amplification kit PCR-mix-1 H1N1, 55 tubes; PCR-mix-1 H3N2, 55 tubes; PCR-mix-2, 0,77 ml; Positive Control cdna H1N1 C+, 0,1 ml; Positive Control cdna H3N2 C+, 0,1 ml; DNA-buffer (NCA), 0,5 ml; Negative Control*, 1,2 ml; Internal Control (IC) RNA**, 5 x 0,12 ml; Internal Control (IC) DNA, 0,1 ml; 55 test için reaktif içerir. * ekstraksiyon prosedüründe ekstraksiyon Negatif control olarak kullanılmalıdır. ** 10 µl Internal Control (IC) RNA yı RNA ekstraksiyon prosedürü esnasında direkt numune/lysis karıçımına ekleyin (ekstraksiyon kit protokolüne bakınız). SAĞLANMAYAN, GEREKLİ MALZEMELER Alan1: Numune Hazırlama RNA extraction kit (Module N. 1) Biyogüvenlik kabini eppendorf tipli tüpler için masa üstü mikrosantrifüj

4 Kuru hava bloğu Vortex mixer Pipetler Aerosol bariyerli pipetörler 1,5 ml lik polipropilen tüpler(sarstedt, QSP, Eppendorf) Tek kullanımlık atılabilir eldivenler (pudrasız) Tüp rakları 70% Ethanol (%96 lık etanol ve distile su ile yeni hazırlanmış) Aseton Buzdolabı Dondurucu Alan 2: RT ve amplifikasyon: Real Time Thermalcycler Çalışma istasyonu Aerosol beriyerli pipetörler( kapasite 0,5-10 µl; 5-40 µl) Tüp rakları MUHAFAZA KOŞULLARI Reverta-L -20 C de Influenza A H1N1 & H3N2 Real-TM ve Ribo-Sorb 2-8 C'de muhafaza edilmelidir. Kitler 3-4 gün için2-8 C'de sevk edilebilirler, ancak alındıklarında hemen 2-8 C ve -20 C de muhafaza edilmelidirler. STABILITE Influenza A H1N1 & H3N2 Real-TM kit etiketinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. Ürün, etiketinde basılı kontrol tarihine kadar performansını koruyacaktır. Işık, ısı veya neme maruz kalma, kitin bazı bileşenlerini etkileyebilir, bunlardan kaçınılmalıdır. Hassasiyet azalabileceğinden, reaktiflerin tekrarlanan çözülme ve dondurma işlemlerinden kaçınılmalıdır. KALİTE KONTROL Her lot, tutarlı ürün kalitesini sağlamak için; SACACE, ISO Sertifikalı Kalite Yönetim Sistemine uygun olarak, önceden belirlenmiş özelliklere karşı test edilmektedir.

5 UYARILAR VE ÖNLEMLER Kullanıcı her zaman aşağıdakilere dikkat etmelidir: Lysis Solüsyonu,guanidine thiocyanate* içerir. Guanidin tiyosiyanat solunduğunda veya yutulduğunda veya deri ile temas etmesi halinde zararlıdır. Asit ile temasında toksik gaz oluşturur. (Xn; R: 20/21/22-36/37/38; S: 36/37/39). Şüpheli grip A (H1N1) durumlarda klinik örnekler, BSL3 uygulamaları (gelişmiş BSL2 koşulları) ile BSL2 laboratuvarında çalışılmalıdır. Aerosol bariyerli steril pipet uçları kullanın ve her prosedür için yeni bir uç kullanın. Ekstrakte edilmiş pozitif malzemeleri ( örnekler, kontroller ve amplikonlar) diğer tüm reaktiflerden uzakta tutun ve ayrı bir alanda reaksiyon karışımına ekleyin. Tahlile başlamadan önce tüm bileşenleri oda sıcaklığında tamamen çözün. Bileşenler çözündüğünde, karıştırın ve kısa süre santrifüjleyin. Reaktif ve örnekler ile çalışırken, atılabilir eldiven, laboratuar önlüğü ve göz koruyucu kullanın.işlem sonrası ellerinizi iyice yıkayın. Laboratuar çalışma alanlarında, sigara içmeyin, herhangi birşey yemeyin- içmeyin, kozmetik uygulamayın veya kontakt lenslere dokunmayın. Son kullanım tarihlerinden sonra kitleri kullanmayın. Tüm numuneleri ve kullanılmayan reaktifleri,yerel yönetim kurallara uygun olarak imha edin. Örnekler potansiyel bulaşıcı olarak dikkate alınmalı ve işlemler uygun biyogüvenlik yöntemlerine uygun olan biyolojik kabinde yapılmalıdır. Dökülen/ saçılan tüm numune veya reaktifleri temizleyin ve %0.5 lik sodyum hipoklorit veya diğer uygun dezenfektanlarla dezenfekte edin. Örnek veya reaktifin deri, göz ve mukoza zarları ile temasından kaçının, temas olması halinde su ile yıkayınız ve hemen tıbbi yardım alın. Malzeme Güvenlik Bilgi Formları (MSDS) istek üzerine verilebilir. Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır. Laboratuvar süreci tek yönlü olmalı; Ekstraksiyon alanında başlamalı ve sonra Amplifikasyon ve Tespit alanlarına gidilmeli/ yönlenmelidir. Örnekleri, ekipmanları ve reaktifleri önceki adımın yapıldığı bölgeye/alana geri döndürmeyin Laboratuvar süreci tek yönlü olmalı; Ekstraksiyon alanında başlamalı ve sonra Amplifikasyon ve Tespit alanlarına gidilmeli/ yönlenmelidir. Örnekleri, ekipmanları ve reaktifleri önceki adımın yapıldığı bölgeye/alana geri döndürmeyin. Bu kitteki bazı bileşenler koruyucu olarak sodium azid içerir. Reaktif transferi için metal tüp kullanmayınız. * Sadece Module No.2 için

6 ÜRÜN KULLANIM SINIRLARI Tüm reaktifler sadece in vitro diagnostic için kullanılabilir. Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır (UNI EN ISO :2012). Kullanım kılavuzu ile tam uyum, optimum PCR sonuçları için gereklidir. Kutu üzerinde ve tüm bileşenlerin etiketlerinde yazılı olan son kullanma tarihlerine dikkat edilmelidir. Kiti, son kullanma tarihinden sonra kullanmayın. NUMUNE TOPLAMA, MUHAFAZA VE TAŞIMA Influenza A H1N1 & H3N2 Real-TM can analyze RNA extracted from: Influenza A H1N1 & H3N2 Real-TM aşağıdakilerden RNA ekstrakt analizi yapabilir: İnsan Tanılamaları: mukozal swablar ( nazal, oral): swab alanı ve yeri 0,5 ml tuzlu su içeren Eppendorf tüpü veya PBS steril. Kuvvetlice çalkalayın.swab ve çalkalamayı aynı tüpte tekrarlayın. 1000g/dk.de 5 dk. santrifüjleyin. Süpernatantı ayırın. Pelleti 100 µl tuzlu su içinde resüspanse edin. Bronşiyal lavaj, burun yıkama: 2000 g/dk.da dk santrifüjleyin. Pellet görülmezse, 10 ml likit ekleyin ve tekrar santrifüjleyin. Supernatantı ayırın ve kaldırın. Pelleti 100 µl tuzlu suda resüspanse edin. otopsi materyali: Otopsi metaryallerini steril bir kapın içinde toplayın ve hemen dondurun veya 1 saat içinde analizi gerçekleştirin. Örnekler 68 C de 1 yıl muhafaza edilebilir. Örneği steril porselen havan ve ve havan tokmağı kullanarak homojen hale getirin ve sonra steril tuzlu su veya PBS de %10'luk süspansiyon olarak hazırlayın. Süspansiyonu 1,5 ml lik tüpe aktarın ve rpm de 5 dakika santrifüjleyin. RNA ekstraksiyon için 100 µl süpernatant kullanın. Daha sonra analiz tekrarlamak gerekirse, aspiratın geri kalanını dondurun. Hayvan Tanılamaları: dışkı: o Tuzlu su ile %10 luk dışkı (4-5g) süspansiyonu hazırlayın. Homojen bir süspansiyon elde edene kadar vortksleyin ve oda sıcaklığında 10 dk inkübe edin. Süpernatantı 1,5 ml lik polipropilen tüpe aktarın ve g. da 5 dk santrifüjleyin. RNA ekstraksiyonu için süpernatantı kullanın. hayvan ve kümes hayvan beslemeleri: mekanik homojiner veya neşter, cam çubuk, teflon havan ile homojen hale getirilir. cloaca swablar: 1,0 ml tuzlu su veya PBS steril içinde resüspanse edin ve g/dk da 10 dk

7 santrifüjleyin. Süpernatantı ayırın ve kaldırın. Pelleti 100 µl tuzlu suda resüspanse edin. doku: 1,0 gr (parankimatöz organları, trakea, akciğer, beyin) mekanik homojiner veya neşter, cam çubuk, teflon havan ile homojen hale getirilir ve 1,0 ml tuzlu su veya PBS sterilde çözülür. Kuvvetlice vortekslenir ve oda sıcaklığında 30 dk. Inkübe edilir. Süpernatantı 1,5 ml lik yeni tüpe aktarın; Örnekler 12 saatten fazla olmamak kaydıyla +2-8 C de muhafaza edilebilir ya da 20 C den -80 C ye kadar dondurulabilir. Klinik örneklerin taşınması, etiyolojik ajanların taşınmasına yönelik ülke, federal, eyalet ya da yerel yönetmeliklere, uymak zorundadır. RNA IZOLASYON Sacace Biotechnologies aşağıdaki kitleri kullanmanızı önerir: Ribo-Sorb- (Sacace, REF K-2-1); DNA/RNA Prep (Sacace, REF K-2-9); SaMag Viral Nucleic Acid Extraction kit (Sacace, REF SM003). RNA ekstraksiyonunu, lütfen üreticinin talimatına göre gerçekleştirin. 10 µl Internal Control DNA izolasyon prosedürü esnasında direkt numune/lysis karışımına eklenir. NUMUNE VE REAKTİF HAZIRLAMA 1. Lysis Solution ve Washing Solution (+2-8 C de muhafazası durumunda ) buz kristalleri yok olana kadar C 'ye kadar ısıtılmış olmalıdır. Ektraksiyon Negatif Kontrolü için de bir tüp de dahil olamak üzere, gerekli miktarda1.5 ml polypropylene tüpleri hazırlayın. 2. Her tüpe 450 µl Lysis Solution ve 10 µl Internal Control (IC RNA) ekleyin. Pipetlemeyle karıştırın ve 5 dk. Oda sıcaklığında inkübe edin. 3. Lysis Solution evic içeren uygun tüplere 100 µl numunelerden ekleyin. 4. Kontrolleri aşağıdaki gibi hazırlayın: Cneg etiketli tüpe 100 µl C Negative Control ekleyin. 5. Tüpleri vorteksleyin ve 5000g de 5 sn. Santrifüjleyin. Eğer numune tamamen çözünmezse, tüpün maksimum ( g.) 1 dk. yeniden santrifüjlenmesi önerilir, süpernantı RNA ekstraksiyon için yeni tüpe aktarın. 6. Sorbent i kuvvetlice vorteksleyin ve her tüpe 25 µl ekleyin sn vorteksleyin ve bütün tüpleri oda sıcaklığında 10 dk. Inkübe edin.periyodik olarak vorteksleyin. 8. Bütün tüpleri 1 dakika 10000g de santrifüjeleyin ve tıkaçlı aerosol bariyer uçlu mikropipet kullanarak, her tüpten pelleti dağıtmadan süpernatantı dikkatice ayırın ve kaldırın.

8 Her tüp için pipet ucunu değiştirin. 9. Her tüpe 400 µl Washing Solution ekleyin. Kuvvetlice vorteksleyin, 1 dakika 10000g de santrifüjeleyin ve tıkaçlı aerosol bariyer uçlu mikropipet kullanarak her tüpten pelleti dağıtmadan süpernatantı dikkatice ayırın ve kaldırın. Her tüp için pipet ucunu değiştirin. 10. Her tüpe 500 µl Ethanol %70 ekleyin Kuvvetlice vorteksleyin, 1 dakika 10000g de santrifüjeleyin ve tıkaçlı aerosol bariyer uçlu miktopipet kullanarak her tüpten pelleti dağıtmadan süpernatantı dikkatice ayırın ve kaldırın. Her tüp için pipet ucunu değiştirin adımı tekrarlayın. 12. Her tüpe 400 µl Aseton ekleyin. Kuvvetlice vorteksleyin, 1 dakika 10000g de santrifüjeleyin ve tıkaçlı aerosol bariyer uçlu miktopipet kullanarak her tüpten peleti dağıtmadan dikkatlice süpernatantı ayırın. Her tüp için pipet ucunu değiştirin. 13. Tüm tüpleri ağızları açık halde 60 C de 10 dakika inkübe edin. 14. Pelleti 40 µl RNA-eluent te resüspanse edin. Periyodik olarak voteksleyerek 60 C de 10 dakikak inkübe edin. Tüpleri maksimum ( g) hızda 2 dakika santrifüjleyin. 15. Süpernatant kullanıma hazır RNA içerir. RT-PCR aynı gün içinde gerçekleştirilebilir. Eğer mümkün değilse, RNA preparasyonları bir aya kadar -80 C'de muhafaza edilebilir. RT VE AMPLIFIKASYON Ters transkripsiyon: 1) Reaction Mix Hazırlama: 12 reaksiyon için, RT- mix içeren tüpe 5,0 µl RT-G-mix-1 ekleyin ve en az 5-10 saniye vorteksleyin, kı saca santrifüjleyin. Bu karışım -20 C de 1 ay stabildir. Reagent Mix li tüpe 6 µl M-MLV ekleyin, pipetlemeyle karıştırın, 3 sn vorteksleyin, 5-7 sn santrifüjleyin (hazırlandıktan sonra hemen kullanılmalıdır). ( 12 numuneden daha az test gerekirse, her numune için (N) yeni steril tüpe 10*N µl RT-G-mix-1 ile RT-mix ve 0,5*N µl M-MLV ekleyin) 2) Her numune tüpüne 10 µl Reaction Mix ekleyin. 3) Uygun tüplere 10 µl RNA numunelerini pipetleyin. (RNA ekstraksiyon kiti olarak Ribo-Sorb izolasyon kiti kullanılmışsa, ekstrakte RNA lı bütün tüpleri, maksimum ( ) hızda 2 dk. Yeniden santrifüjleyin ve dikkatlice süpernatantı alın. N.B. pellet dağıtmayın, sorbet reaksiyonu inhibe eder.) Pipetlemeyle dikkatlice karıştırın. 4) Tüpleri thermalcyclera yerleştirin ve 37 o С de 30 dakika inkübe edin. 5) Elde edilmiş cdna numunesini, TE-buffer ile 1:2 oranında dilüe edin. (Her tüpe 20 µl TE-buffer ekleyin). cdna örnekleri -20 o С de bir haftaya kadar, -70 o С de yıl boyunca muhafaza edilebilir.

9 PCR Reaktifleri hazırlama Reaksiyon Mix 25 µl 1) Prepare the required number of tubes with PCR-mix-1 H1N1 (or PCR-mix-1 H3N2) for amplification of cdna from clinical and control samples. Make sure that wax completely covers the solution at the bottom Klinik ve kontrol numunelerinden cdna amlifikasyonu için, PCR-mix-1 H1N1 (veya PCR-mix-1 H3N2) ile gereken sayıda tüpleri hazırlayın. 2) wax'ın altında kalmadığından emin olarak, her tüpün wax tabakasının yüzeyine 7 µl PCRmix-2 ekleyin. 3) Hazırlanan tüplere ters transkripsiyon aşamasında, klinik ya da kontrol numunelerinden elde edilen cdna 10 µl ekleyin. 4) Kontrol amplifikasyon reaksiyonlarını uygulayın: NCA - NCA (Amplifikasyon Negative kontrol) etiketli tüpe 10 µl TE-buffer ekleyin. C+A H1N1 - C+A H1N1 (Amplifikasyon Pozitif kontrol) etiketli tüpe 10 µl Pozitif kontrol cdna Influenza virus A H1N1 ekleyin. C+A H3N2 - Add 10 µl of Positive Control cdna Influenza virus A H3N2 to the tube l C+A H3N2 (Amplifikasyon Pozitif kontrol) etiketli tüpe 10 µl Pozitif kontrol cdna Influenza virus A H3N2 ekleyin IC DNA Pos - IC DNA Pos (Amplifikasyon Pozitif kontrol) etiketli tüpe 10 of Pozitif kontrol STI ekleyin. Real-time Enstrümanınızda aşağıdaki gibi bir sıcaklık profili oluşturun: Aşama Sıcaklık, С Süre Floresan Tespiti Cycle tekrarları Hold 95 5 min s Cycling s s s Cycling s FAM(Green), HEX/JOE(Yellow), ROX(Orange) s Örneğin SaCycler-96 (Sacace), CFX96/iQ5 TM (Biorad), Mx3000P/3005P TM (Agilent); Rotor-Gene 3000/6000/Q (Corbett Research, Qiagen)

10 PCR-mix-1 PCR-mix- 1- H1N1 PCR-mix- 1- H3N2 ENSTRÜMAN AYARLARI Rotor-tip enstrümanlar Kanal Calibrate/Gain Optimisation Eşik Çizgisi Diğer Ayarlar/ Outlier Removal Slope Correct FAM/Green from 5 Fl to 10 Fl % off JOE/Yellow from 4 Fl to 8 Fl % off Rox/Orange from 4 Fl to 8 Fl % on FAM/Green from 5 Fl to 10 Fl % off JOE/Yellow from 4 Fl to 8 Fl % off Rox/Orange from 4 Fl to 8 Fl % on

11 SONUÇLARIN ANALİZİ Sonuçlar, eşik çizgisi ile floresans eğri geçişlerinin varlığı sayesinde cihaz yazılımıyla yorumlanır. Gen hedeflerininin saptanması için kanallar PCR-mix-1 Tespit Kanalı FAM/Green JOE/HEX/Yellow ROX/Orange/Texas Red PCR-mix-1- H1N1 IC Influenza virus A H1 Influenza virus A N1 PCR-mix-1- H3N2 IC Influenza virus A H3 Influenza virus A N2 İlgili olan amplifikasyon hem pozitif hem de neğatif kontrolleri geçmişse, sonuçlar kabul edilir. Klinik örnekler için Sonuçların analizi: - AH1 (veya A/H3) Influenza virus, Ct değeri JOE/Yellow kanalda tespit edilmişse, numunede tespit edilir. - AN1 (veya A/N2) Influenza virus, Ct değeri ROX/Orange kanalda tespit edilmişse, numunede tespit edilir. - Eğer Ct değeri bir veya her iki kanalda birden (JOE/Yellow veya ROX/Orange) tespit edilmemişse ve Internal Kontrol için Ct değeri FAM/Green kanalda IC (kontrol sonuçalrı tablosuna bakınız) için belirtilen değerden daha küçükse, analiz edilen salgın Influenza virus A/H1N1 (veya A/H3N2) alt tipleri bulunmadı. Kontrol Sonuçları Kontrol Negative Control DNAbuffer IC DNA C+1, C+2 Kontrol Aşaması RNA extraction Amplification Amplification Kanallardaki Ct değeri FAM Green JOE Yellow/HEX ROX/Orange/ Texas Red Yorumlama Pos (< 30) Neg Neg OK Neg Neg Neg OK Pos (< 30) Neg Neg OK Amplification Neg Pos (< 25) Pos (< 25) OK PERFORMANS KARAKTERİSTİKLERİ Influenza A H1N1 & H3N2 Real-TM kiti 1000 kopya / ml den az olmayan hassasiyetli testlerin %100 ünde, Influenza A tespitine olanak sağlar.

12 SORUN GİDERME 1. Z a y i f v e y a o l m a y a n IC (Fam/Green channel) sinyali: numunenin yeniden test edilmesi gereklidir PCR inhibe edilmiştir. Tavsiye edilen RNA ekstraksiyon metodunu kullandığınızdan ve üreticinin talimatlarına uyduğunuzdan emin olunuz. Bütün tüpleri ekstrakte RNA pipetlemesinden önce maksimum ( g) hızda 2 dk. Yeniden santrifüjleyin ve süpernatantı dikkatice alın. Pelleti dağıtmayın, Sorbent reaksiyonu inhibe eder. Reaktiflerin muhafaza koşulları talimatlara uygun değil. Muhafaza koşullarını kontrol edin. PCR koşulları talimatlara uygun değil. PCR koşulları kontrol edin ve IC tespiti için protokol belirtilen floresan kanalı seçin IC, reaktiflerin pipetlenmesi esnasında numuneye ilave edilmedi. RNA ekstraksiyon işlemi sırasında dikkat edin. 2. Fam(Green) (Ct > 30), Joe (Yellow)/Cy3/HEX (Ct > 35) veya Rox(Orange)/TexasRed channel (Ct > 35) kanalda zayıf sinyal: numunenin yeniden test edilmesi gereklidir 3. Sinyalsiz Negatif PCR kontrol. PCR hazırlama prosedürü esnasında kontaminasyon. Tüm numune sonuçları geçersizdir. Tüm yüzeyleri ve enstrümanları sodyum hipoklorid ve etanol veya özel DNA dekontaminasyon reaktifleri ile dekontamine edin Pozitif kontrolleri, en son pipetleyin Yeni reaktif setleriyle PCR hazırlamayı tekrarlayın.

13 KULLANILAN SEMBOLLERİN ANLAMLARI Liste Numarası Dikkat! Lot Numarası <n> testleri için yeterli içerik RUO Sadece Araştırma kullanımı için Versiyon de muhafaza NCA Amplifikasyon Negatif Kontrol Üretici NCE Kullanım Talimatlarına Bakınız C+ Ekstraksiyon Negatif Kontrol Amplifikasyon Pozitif Kontrol Son kullanım tarihi IC Internal (İç) Kontrol * SaCycler Sacace Biotechnologies tescilli markasıdır. * Rotor-Gene Qiagen tescilli markasıdır. * CFX ve iq5 Bio-Rad Laboratories tescilli markasıdır. * MX 3000P/3005P Agilent Technologies tescilli markasıdır. Sacace Biotechnologies Srl via Scalabrini, Como Italy Tel Fax mail: info@sacace.com web: