ALPHA CrossLaps (CTX-I) EIA

Transkript

1 ALPHA CrossLaps (CTX-I) EIA Insan idrarında Tip I kollajen C terminal telopeptid parçalanma ürünlerinin ölçümü için Belge No:AC-04 Version:06 Yürürlük Tarihi: 17 Eylül 2014 Sayfa 1/9

2 İngilizce 3 İmmünodiyagnostik Systemleri Limited, yukarıda belirtilen olandan işbu kiti ya da sonucun herhangi başka bir kullanım için sorumlu tutulamaz. Kötüye kullanma, örneğin: bu kılavuzda açıklanan prosedüre sapma kullanın. Ayrıca, İmmünodiyagnostik Sistemleri Limited kullanıcı veya ALPHA CrossLaps (CTX- I) ÇED kiti ile de bu tür yorumların neden olabilecek sonuçlar için elde edilen sonuçlara dayalı olarak üçüncü şahıs tarafından yapılan herhangi bir tanı veya sonuca sorumlu değildir. Belge No:AC-04 Version:06 Yürürlük Tarihi: 17 Eylül 2014 Sayfa 2/9

3 AÇIKLAMA Kullanım amacı ALPHA CrossLaps (CTX-I) EIA insan idrarında (CTX-I α) Tip-I kollajen C-terminal telopeptid-olmayan izomerleştirilmiş fragmanlarının miktar tayini için bir enzime-bağlı imünosorbent testidir. ALPHA CrossLaps (CTX-I) EIA olmayan izomerleştirilmiş kemik kollajen bozunmasının bir göstergesi olarak kullanım için tasarlanmıştır ve meme ve prostat kanserli hastalarda kemik metastazları tanımlanmasında bir yardımcı olarak kullanılabilir Buna ek olarak, ALPHA CrossLaps (CTX-I) EIA Paget hastalığı teşhisinde bir yardım olarak ve Paget hastalığı olan hastalarda anti-resoptive tedavinin izlenmesinde uygulanabilir. Sınırlamalar Testin kullanımı kemik resorpsiyonu seviyesinin belirlenmesi için, tespit edilmemiştir. Özet ve test açıklaması Tip I kollajen kemiğin organik matrisinin %90nında fazlasını açıklar ve esas olarak kemikte sentezlenir (1). İskeletin yenilenmesi sırasında Tip I kollajen degrade olur ve küçük peptid parçaları idrarla atılır. Bu parçalar ALPHA CrossLaps (CTX-I) EIA kitiyle ölçülebilir. İnsan idrarında (ALPHA crosslaps) kolajen Tip I spesifik parçalanma ürünlerinin ölçümleri Paget hastalığında, kemik rezorpsiyon için faydalı değerlendirme olarak bildirilmiştir ve prostat kemik metastazının tespiti (2, 5) ve meme kanseri için (3, 4, 5, 6). Prosedür prensibi ALPHA CrossLaps (CTX-I) EIA EKAHDG amino asit dizisine karşı bir oldukça spesifik monoklonal antikorlara dayanmaktadır. ALPHA CrossLaps (CTX-I), EIA içerisinde belirli bir sinyal elde edilmesi için, EKAHDG iki zincirleri çapraz bağlanmış olması gerekir. Standartlar, kontrol ya da bilinmeyen serum örnekleri, streptavidin ile kaplanmış biyotinlenmiş antikor karışımı ve bir peroksidaz ile konjüge edilmiş antikor uygulaması ardından,mikrotitre uygun kuyucuklara pipetle aktarılır. Daha sonra, ALPHA CrossLaps antijenler, biyotinlenmiş antikor ve peroksidaz ile konjüge edilmiş antikor ile kompleks oluşturulur ve bu kompleks biyotin ile antikor aracılığıyla streptavidin yüzeyine bağlanır. 2-8 C de bir adım inkubasyonun ardından, gözenekler boşaltılır ve yıkanır. Ardından bir kromojenik madde ilave edilir ve renk reaksiyon sülfirik asitle durdurulur. Son olarak, absorbans ölçülür. ÖEMLER Aşağıdaki önlemler laboratuarda dikkat edilmelidir: İmmundiagnostik material işlenirken yemek yemeğin, içmeyin, sigara ve kosmetik ürünleri kullanmayın. Ağzınızla pipetleme yapmayınız. Immunodiagnostik maddelerle çalışırken eldiven giyin ve sonradan ellerinizi iyice yıkayın. Çalışma alanını tek kullanımlık kağıt havlu ile temizleyin. Uyarılar Sadece in vitro kullanım için. Tüm reaktifler ve laboratuvar ekipmanı bulaşıcı olarak ele alınıp imha edilmesi gerekir. Son kullanma tarihi geçmiş kit bileşenlerini kullanmayın ve farklı kit lotlu reaktifleri karıştırmayın. Muhafaza ALPHA CrossLaps (CTX-I) EIA kiti alındıktan sonra 2-8 C de saklayın.bu koşullar altında kit kutusunun üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabildir. MALZEMELER Örnek toplama Aç bireylerin ikinci sabah geçersiz idrar örneklerinin kullanılması tavsiye edilir İdrar numunleri 4 C de 7 gün stabildir. Daha uzun bir saklama için idrar numunlere (< -18 C)dondurulmalıdır. Kullanımdan önce, idrar örnekleri çalkalanmalıdır ve çökelme en az 30 dakika izin verilmelidir. Belge No:AC-04 Version:06 Yürürlük Tarihi: 17 Eylül 2014 Sayfa 3/9

4 Verilen Malzemeler Kiti açmadan önce, Önlemler bölümünü okuyun. Kit 96 tayin için yeterli reaktif içerir. Streptavidin kaplanmış microtitre plate MICROAT Mikro şeritler (12x8 kuyu) önceden streptavidin ile kaplanmış. Plastik çerçeve içinde teslim edilir. Standard KAL 0 Bir şişe(min. 12,0 ml) kullanımı için hazır,protein stabilizatörler, deterjan ve koruyucu madde ile kullanım tamponlu Standard KAL 1-5 Beş şişe(min. 0,4 ml) kullanımı için hazır,protein stabilizatörler, deterjan ve koruyucu madde ile kullanım tamponlu Her Standart tam değer QC Raporu yazdırılır. Kontrol CTRL 1-2 İki şişe(min. 0,4 ml) kullanımı için hazır,protein stabilizatörler, deterjan ve koruyucu madde ile kullanım tamponlu Kontrol aralığı için kapalı QC Raporu bakın. Biotinylated Antibody Ab BIOTIN Bir şişe (min. 0.2 ml) Tip I kollajen C-terminal telopeptid parçalanma ürünleri için özel bir biyotinlenmiş monoklonal fare antikoru konsantre çözeltisi, yükseltilmiş. Protein stabilize edici ve koruyucu madde ile tamponlanmış bir çözelti hazırlandı. Peroksidaz ile konjüge edilmiş antikor ENZYMCONJ Bir şişe (dak ml) tip I kollajenin C-terminal telopeptid parçalanma ürünleri için özel bir fare monoklonal antikoru konjuge edilmiş bir peroksidaz, bir konsantre çözeltisi. Protein stabilize edici ve koruyucu madde ile tamponlanmış bir çözelti hazırlandı. İnkübasyon tamponu BUF Bir şişe(min. 15,0 ml) kullanımı için hazır,protein stabilizatörler, deterjan ve koruyucu madde ile kullanım tamponlu Substrate Solusyon SUBS TMB Bir şişe (min. 12,0 ml) kullanıma hazır bir asidik tampon içinde tetrametilbenzidin (TMB) substrat. Kromogenik substrat sligthy mavimsi görünebilir unutmayın. Durdurma Solüsyon H2O4 Bir şişe (min. 12,0 ml) kullanıma hazır 0.18 mol / L sülfürik asit. Yıkama Tampon WASHBUF 50x Bir şişe (dak. 20 ml) deterjan ve bir koruyucu madde ile bir konsantre yıkama tamponu eklenmiştir. Sızdırmazlık bandı Inkübasyon sırasında kuyu kapsayan yapışkan film. Gerekli Malzemeler - ürünle birlikte verilmez Antikor çözeltisi ile yıkama çözeltisinin hazırlanması için kaplar Hassas mikropipetler dağıtmak için ul Distile veya deiyonize su. Hassas 8 veya 12 kanallı multi pipet dağıtmak için 100 μl. ELISA plaka okuyucusu referans dalga boyu 450 nm ve 650 nm Test Prosedürü Kullanımdan önce, tüm solusyonları hazırlayın ve oda sıcaklığına (18-22 C) ulaşmasını sağlayın. Tüm reaktifler ve numuneler kullanımdan önce karıştırılır( köpük oluşumu engelleyin ) Testi Oda sıcaklığına (18-22 C) gerçekleştirin. Belge No:AC-04 Version:06 Yürürlük Tarihi: 17 Eylül 2014 Sayfa 4/9

5 Deney için gerekli şerit sayısını belirler. Tüm örneklerinin çift olarak tçalışılması için tavsiye edilir Her çalışma için ek olarak, 16 kuyu toplam standartları ve kontrol için ihtiyaç vardır. Plastik çerçeve içine uygun sayıda şeritleri koyun. Kurutucu kapsülleri ile sıkıca kapatılmış folyo torba içinde kullanılmayan immun şeritler saklayın. 1 Ön-seyretlme idrar numunelerin Kit kontrolleri CTRL 1-2 kit ile ve idrar örneklerini 1+7 Standart 0 Kal 0 ( örneğin 25+75μL) test öncesinde sulandırın. 2 Antikor Solüsyon Hazırlanması: DİKKAT: Antikor Solüsyonunu kullanımdan hemen önce hazırlayın. Antikor Solüsyonu Biyotinile edilmiş antikor Ab biotin karıştırılmasıyla hazırlanmaktadır, boş bir kap içinde hacimsel oranı Biotinlenmiş Antikor Ab Biotin, Peroksidaz Konjuge Antikor ENZYMCONJ ve İnkubasyon Tampon BUF karıştırın Dikkatli bir şekilde karıştırılır ve köpük oluşumunu önleyin. Her çalışmadan önce taze bir solusyon hazırlayın. 3 One Step İnkubasyon Uygun kuyucuğa 25 μl her bir Standart Kal 0-5, Kontrol ve bilinmeyen numunelerden pipetleyin, ardından 100 μl Antikor Solüsyonu ekleyin. İzole bantla kapatın ve immunostrips çalkalamadan 2-8 C'de 60 ± 5 dakika boyunca inkübe edin. 4 Yıkama 300 ul Yıkama Tamponu ile manuel 5 kez immunostripleri yıkayın. Bir otomatik plaka yıkayıcı kullanılarak, üretici talimatlar veya laboratuvar yönergeleri izleyin. Genellikle 5 yıkama döngüleri yeterli. Çukurlar tamamen her manuel veya otomatik yıkama sonrasında boşaltılmış olduğundan emin olun. 5 Kromojenik substrat çözeltisi ile inkübasyon Her kuyuya 100 ul Substrat Çözeltisi SUBS TMB pipetleyin, karıştırma cihazı (300 rpm) üzerinde, oda sıcaklığında karanlıkta (18-22 C) 15 ± 2 dakika boyunca inkübe edin. Sızdırmazlık bandı kullanın. TMB substrat içeren flakondan doğrudan pipetle yapmayın, ama temiz bir rezervuar için gerekli hacim aktarın. Rezervuar içinde kalan tabaka atılır ve TMB flakona geri aktarılmamalıdır.. 6 Renk reaksiyonunun durdurma Her bir kuyunun içine 100 ul durdurma Solüsyonu H2SO4 pipetleyin. 7 Absorbans Ölçümü Iki saat içinde referans olarak 450 ile 650 nm'de absorbansı ölçülür. Prosedür prensibi Bir (ön-seyreltilmiş) numunenin absorbansı 5.0 ng/ ml üzerinde ise, numune ayrıca Standard 0 seyreltilmiş edilmeli ve yeniden analiz edilir. KALİTE KONTROL İyi Laboratuar Uygulamaları (GLP) tahlil performansını kontrol etmek için tahlillerin her seride kalite kontrol numunelerinin kullanımını gerektirir. Kontroller bilinmeyen numune olarak tedavi edilmelidir ve sonuçlar uygun istatistik yöntemlerle analiz edilmiştir. SONUÇLAR Sonuçların Hesaplanması Bu 4 parametreli bir eğri uyumuyla kullanılması tavsiye edilir Belge No:AC-04 Version:06 Yürürlük Tarihi: 17 Eylül 2014 Sayfa 5/9

6 Sonuç Örnekleri Standartlar / Kontroller / Örnekleri ALPHA CrossLaps Kons.( ng/ml) 450, (Abs) Obs 1/ Obs 2 Ortala ma A (Abs) ALPHA CrossLaps Interpolated conc. ALPHA CrossLaps Conc. corrected for dilution x8 Standart 0 Standart 1 Standart 2 Standart 3 Standart 4 Standart 5 0,00 0,50 1,12 3,22 4,59 5, / / / / / / ,009 0,030 0,140 0,901 1,442 1,932 Control 1 Control / / ,595 1,158 2,49 3,86 19,9 30,9 I II III / / / ,585 0,289 0,157 Lütfen aklınızda bulundurun: Yukarıdaki veriler, sadece açıklama amaçlıdır ve herhangi bir çalışma sonuçları hesaplamak için kullanılmamalıdır. Düzeltilmiş ALPHA CrossLaps değerinin hesaplanması Her idrar için ALPHA CrossLaps konsantrasyonunu (ng / ml) ve kreatinin konsantrasyonu(mm = mmol / L) eşdeğer bir enzimatik kolorimetrik yöntem klinik kimya analizörleri (örneğin CREA artı Roche / Hitachi analiz için) kullanılarak tespit edilmelidir. 2,03 1,23 0,66 16,2 9,84 5,26 Aşağıdaki denklem idrar konsantrasyon değişimi için ALPHA CrossLaps konsantrasyonunu düzeltir ALPHA CrossLaps Kons.( ng/ml) Corr. ALPHA CrossLaps Value (µg/mmol) = Creatinine (mmol/l) PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Tespit limiti: 0.80 ng/ml CrossLaps Bu seyreltme faktörü 8 ile çarpılır boşluğun 21 tayinleri (Standart 0) ortalamasından yukarıdaki üç standart sapma tekabül eden konsantrasyonudur. Kesinlik ALPHA CrossLaps (CTX-I) ELISA farklılığı, üç serum numuneleri için değerlendirilmiştir. Aşağıdaki tabloda özetlenen sonuçlar, (sonuçlar seyreltme faktörü iledüzeltilmiş değil). InterAssay Variation (n=10) IntraAssay Variation (n=10) Ortalama 5,21 3,19 1,15 SD 0,30 0,17 0,11 CV 5,8 5,3 9,4 Ortalam a 5,21 3,19 1,15 SD 0,07 0,07 0,02 CV 1,4 2,3 2,0 Dilution/Linearity ALPHA CrossLaps (CTX-I) ELISA 0.10 ng/ml arası 5.00 ng/ml (seyreltme düzeltme öncesi ) ALPHA CrossLaps doğrusaldır. Belge No:AC-04 Version:06 Yürürlük Tarihi: 17 Eylül 2014 Sayfa 6/9

7 (Seyreltme için düzeltildi) konsantrasyonu üzerindeki idrar Standart 0 ile seyreltilmiş ve ALFA crosslaps konsantrasyonu ALPHA CrossLaps (CTX-I) EIA ile belirlenmiştir Serum temiz numune% 100 olarak ayarlanır. Dilüsyon Sample vs. diluent Obs. 1 Exp. RC Obs. 2 Exp. RC Obs. 3 Exp. RC Neat ,79 0,38 0,19 0,10 0,79 0,39 0,20 0,10 Obs.: Observed, Exp.: Expected, RC: Recovery ,67 1,00 0,49 0,21 1,67 0,83 0,42 0, ,16 0,59 0,28 0,14 1,16 0,58 0,29 0, Girişim Belirlenecek. Beklenen Değerler Bir laboratuvar, normal ve patolojik değerlerin kendi yelpazesini kurmak için bu tavsiye edilir. Bir örnek olarak, çeşitli gruplar için ortalama değerleri ve% 95 CI aşağıda verilmiştir. Daha fazla okuma için referans listesine bakınız. Tüm numuneler sağlıklı bireylerden sabah açlık örnekleri olmalıdır. Popülasyonlar Sayısı Yaş Geometrik konular (Years) Ortalama Değerler (n) (µg/mmol) 95% CI Menopoz öncesi kadınların , Menopoz sonrassı kadınların , erkekler , Belge No:AC-04 Version:06 Yürürlük Tarihi: 17 Eylül 2014 Sayfa 7/9

8 REFERENC 1. Alexandersen et al. Non-Isomerized C-Telopeptide fragments are highly sensitive markers for monitoring disease activity and treatmentefficacy in Padget s disease of bone. 2. Cloos et al. Investigation of bone diseases using isomerised and racemised fragments of type I collagen. Calcif Tissue Int (2003);72: Cloos et al. Breast cancer patients with bone metastases are characterised by increasing levels of nonisomerised type I collagen fragments. Breast Cancer Res (2003);5:R Cloos et al. An immunoassay for measuring fragments of newly synthesized collagen type I produced during metastatic invasion of bone. Cli. Lab. (2004); 50: Leeming DJ, Koizumi M, Byrjalsen I, Li B, Qvist P, Tanko LB: The relative use of eight collagenous and noncollagenous markers for diagnosis of skeletal metastases in breast, prostate, or lung cancer patients. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 15: 32-8, Leeming DJ, Delling G, Koizumi M, Henriksen K, Karsdal MA, Li B, Qvist P, Tanko LB, Byrjalsen I: Alpha CTX as a biomarker of skeletal invasion of breast cancer: immunolocalization and the load dependency of urinary excretion. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 15: , 2006 Belge No:AC-04 Version:06 Yürürlük Tarihi: 17 Eylül 2014 Sayfa 8/9

9 EXP Use By Verwendbar bis Fecha de caducidad Utilizzare entro Utiliser jusque Houdbaar tot Holdbar til Použitelné do Použiteľné do Ημερομηνία λήξης Prazo de validade Felhasználható Använd före Użyć przed LOT Batch code Chargenbezeichnung Código de lote Codice del lotto Code du lot Lot nummer Lotnummer Číslo šarže Číslo šarže Αριθμός Παρτίδας Código do lote Sarzsszám Lot nummer Kod partii REF Catalogue number Bestellnummer Número de catálogo Numero di catalogo Référence du catalogue Catalogus nummer Katalognummer Katalogové číslo Katalógové číslo Αριθμός καταλόγου Referência de catálogo Katalógusszám Katalognummer Numer katalogowy Manufacturer Hersteller Fabricante Fabbricante Fabricant Fabrikant Producent Výrobce Výrobca Κατασκευαστής Fabricante Gyártó Tillverkare Producent Contains sufficient for <n> tests Inhalt ausreichend für <n> Prüfungen Contenido suficiente para <n> ensayos Contenuto sufficiente per n saggi Contenu suffisant pour n tests Inhoud voldoende voor n testen Indeholder tilsttrækkeligt til n test Lze použít pro <n> testů Obsah postačuje na <n> stanovení Περιεχόμενο επαρκές για «ν» εξετάσεις Conteúdo suficiente para n ensaios A doboz tartalma <n> vizsgálat elvégzéséhez elegendő Räcker till n antal tester Wystarczy na wykonanie <n> testów IVD In Vitro Diagnostic Medical Device In-Vitro-Diagnostikum Producto sanitario para diagnóstico in vitro Dispositivo medico-diagnostico in vitro Dispositif médical de diagnostic in vitro Medisch hulpmiddel voor in-vitro diagnostiek Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik In Vitro diagnostický zdravotnický prostředek Zdravotnícka pomocka in vitro In Vitro Διαγνωστικό Ιατροτεχνολογικό προϊόν Dispositivo médico para diagnóstico in vitro In vitro diagnosztikum Medicintekniska produkter för in vitro diagnostik Wyrób do diagnistyki In Vitro Temperature limitation Temperaturbegrenzung Límite de temperatura Limiti di temperatura Limites de température Temperatuurlimiet Temperaturbegrænsning Teplotní rozmezí od do Teplotné rozmedzie od do Περιορισμοί θερμοκρασίας Limites de temperatura Hőmérséklettartomány Temperaturbegränsning Przestrzegać zakresu temperatury Consult Instructions for Use Gebrauchsanweisung beachten Consulte las instrucciones de uso Consultare le istruzioni per l uso Consulter les instructions d utilisation Raadpleeg de gebruiksaanwijzing Se brugsanvisning Viz návod k použití Viď návod na pužitie Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης Consulte as instruções de utilização Nézze meg a Használati utasítást Se handhavandebeskrivningen Sprawdź w instrukcji obsługi Immunodiagnostic Systems Limited. UK Immunodiagnostic Systems Limited, 10 Didcot Way, Boldon Business Park, Boldon, Tyne & Wear, NE35 9PD, UK Tel: +44 (0) Fax: +44 (0) info.uk@idsplc.com USA Immunodiagnostic Systems (IDS) Inc, 948 Clopper Road, Gaithersburg, MD 20878, USA Tel: +1(877) Fax: +1 (301) info.us@idsplc.com Almanya Immunodiagnostik Sistemler GmbH (IDS GmbH), Mainzer Landstrasse 49, Frankfurt am Main. Tel: +49 (0) Fax: +49 (0) info.de@idsplc.com France Immunodiagnostic Systems France SA (IDS France SA) 153 Avenue D Italie, PARIS Tel: +33 (0) Fax: +33 (0) info.fr@idsplc.com Scandinavia Immunodiagnostic Systems Nordic a/s (IDS Nordic a/s), International House, Center Boulevard 5, 2300 København S, Denmark Tel: info.nordic@idsplc.com Belge No:AC-04 Version:06 Yürürlük Tarihi: 17 Eylül 2014 Sayfa 9/9