Silo Yemlerinde Organik Asit Belirlemede İki Farklı Metodun Karşılaştırması

Transkript

1 Hayvasal Üretim 44(2): 3746 (2003) Silo Yemleride Orgaik Asit Belirlemede İki Farklı Metodu Karşılaştırması Fisu Koç, Levet Coşkutua Trakya Üiversitesi Tekirdağ Ziraat Fakültesi Zooteki Bölümü, Tekirdağ Özet: Araştırmada, silo yemleride orgaik asit (laktik, asetik, bütirik) tesitie yöelik Leer metodu ile sektrofotometrik metodu karşılaştırılmasıa çalışılmıştır. Araştırma materyalii adet farklı muamele uygulamış mısır silajı oluşturmuştur. Araştırma soucuda, sektrofotometrik ve Leer metoduyla yaıla aaliz souçlarıda, Latik asit, Asetik asit, ve Bütirik asit değerleri sırasıyla 2.29, 1.15, 0.26; 1.27, 1.01 ve 0.38 olarak bulumuştur. Aahtar sözcükler: Silaj, Leer metodu, sektrofotometrik metot, TUYA, The Comariso of the Two Differet Methods o The Determiatio of Orgaic Acids i Silage Fodders Abstract: I the reset exerimet, the comariso of the aalytical results of the Leer method ad sectrohotometric methods were studied to determie the orgaic acid (lactic, asitic ad butiryc) cotets i differet silage fodders. This study cosisted of fifty treatmets ad each treatmets icludes differet combiatios of cor ad other fodders. The results of this study idicated that the alytical results of the sectrohotometric ad leer methods were foud to be resectively as 2.29, 1.15, 0.26; 1.27, 1.01 ad Key words: Silage, Leer method, sectrohotomatric method, TVFA. Giriş Yeşil yemleri oksijesiz koşullarda fermatasyoa tabii tutulması olarak taımlaabilecek silaj yaımıda amaç, homofermatatif itelikteki laktik asit fermatasyouu yem kitlesie hakim kılmaktır. Acak iklim, bitki çeşidi ve kimyasal bileşimi silolama tekiği gibi birçok faktör kotrol edilmediği taktirde fermatasyo süreci arzu edilmeye bir şekilde gerçekleşir. Silolama süresice gerçekleşe fermatasyo sürecii bir soucu olarak silajlarda kuru madde, H, orgaik asit bileşimi, amoyağa bağlı itroje gibi özellikler bakımıda gözleecek değerleri, silaja ilişki kuru madde tüketimi ve besleme değerliliği üzeride öemli etkilere sahi olduğu bilimektedir (Kılıç, 1986; Phis, 1986; Mc Doald ve ark., 1988). Pek çok araştırıcı silaj kalitesii satamasıda silo yemii fiziksel iteliklerii yaı sıra silo asitlerii satamasıı da e doğru soucu verdiğii bildirmiştir (Alçiçek ve ark., 1996). İyi kaliteli bir silo yemide laktik, asetik, bütirik asit oraları ile silaj kalitesi arasıda öemli düzeyde bir ilişki mevcuttur. Nitekim kaliteli bir silo yemide süt asidi oraı % 2 i üzeridedir. Bua karşı asetik asit oraı içi % arasıda e ideal düzeydir. İyi kalitede bir silo yemide bütirik asit hiç istemez ve geellikle % arasıda ortalama bir değer söz kousudur (Kılıç, 1986). Silo içeriside cereya ede fermatasyo sürecii istemeye bir yöde seyretmesi durumuda gerek süt asidi gerekse asetik ve bütirik asit değerleride 37

2 38 Koç ve Coşkutua öemli değişmeler gözlemektedir. Bu edele silo asitlerii satamasıda çeşitli yötemler geliştirilmiştir. Bularda e eskisi destilasyo yötemi olu ezim ve gaz kromotografisi ile yürütüle diğer yötemlerde mevcuttur. Bu çalışmada silo asitlerii satamasıda kullaıla destilasyo yötemi ve sektrofotometrik metot karşılaştırılmıştır. Materyal ve Yötem Materyal Araştırmaı materyalii Tekirdağ merkez köyleride tolaa ve farklı muamele uygulaa adet mısır silajı oluşturmaktadır. Bu öreği, birici ürü mısır (3), % / mısır + yaş bira osası (4), % 75/25 mısır + yaş bira osası (3), ikici ürü mısır (13), % 75/25 mısır + soya fasulyesi (15), % 25/75 mısır + yaş bira osası (12) oluşturmuştur.yem örekleri usulüe uygu olarak tolamış ve mümkü olduğuca soğuk hatla taşımasıa öze gösterilmiştir. Yötem Araştırma materyalii oluştura silajlar temi oktalarıda laboratuvar koşullarıa ulaştırılmalarıı takibe umaraladırılı aaliz güüe kadar deri dodurucuda saklamıştır. Tolam uçucu yağ asidi (TUYA), laktik ve asetik asit içi kimyasal aalizleri satamasıda Leer ve sektrofotometrik metot kullaılmıştır. Bütirik asit miktarı ise iki farklı metotta elde edile souçlarda yararlaarak, formüller aracılığı ile hesalamıştır. Söz kousu aalizlere ilişki metotlar ile hesalamada taki edile yötemlere ait bilgiler aşağıda suulmaktadır. Titrimetrik Yötemler Tolam Uçucu Yağ Asidi Tayii Kimyasal Maddeler (N) KOH veya NaOH 10 (N) H 2 SO 4 % 98 lik H 2 SO 4 MgSO 4 7.H 2 O doymuş çözeltisi Aalizi Yürütülmesi Feolfitaley idikatörü 10 ml silaj ekstraktı test tüüe alıır, 3000 rm'de 10 dakika satrüfüjlei soğutulur. Üzerie 23 damla % 98 lik H 2 SO 4 kour. Satrüfuj edile umuede 2 ml alıır ve üzerie 2 ml MgSO 4 7.H 2 O çözeltisi ilave edilir. Bu süzük Markham destilasyo düzeeğie yerleştirilir. Buhar destilasyoda, destilat soğutularak 1 ml erlee tolaır. 23 damla feoftaley idikatörü yardımı ile N/ veya N/100'lük NaOH ile titrasyou embe rek olaa dek sürdürülür (Patlak ve ark.,1996). Leer Aalizi ile Orgaik Asit Tayii Kimyasal Maddeler Kalsiyum oksit (CaO, ulver) Bakır sülfat (CuSO 4.5H 2 O,.a)

3 Silo Yemleride Orgaik Asit Belirlemede İki Farklı Metodu Karşılaştırması 39 Sülfirik asit (H 2 SO 4, d=1.84) Kromik asit (CrO 3 ) Feolfitaley Aalizi Yürütülmesi Silaj Süzüğüü Hazırlaması Sodyum hidroksit (NaOH)) Silaj süzüğüü (ekstrakt) hazırlaması içi, 100 g iyice arçalamış silo yemi öreği 1 litrelik balo jojeye kour ve çizgisie kadar saf su ile doldurulu iyice çalkaladıkta sora e az 12 saat oda sıcaklığıda dilemeye bırakılır. 12 saatlik diledirme süreside sora tekrar iyice çalkalaarak bir filtre kağıdıda süzülür. Bu işlem, aalizi bu safhasıda itibare, e az 2 aralel halide yürütülür. Silo Yemide Şekeri Giderilmesi Silo yemide şekeri giderilmesi amacıyla, her iki aralelde 200 ml süzük alıarak 2 ml lik ölçü baloa kour. Üzerie 20 ml kireç sütü ve 10 ml bakır sülfat çözeltisi ilave edilir. Oda sıcaklığıda l saat diledirmede sora balo joje işaretli çizgiye kadar saf su ile doldurulu çalkalaır ve filtre kağıdıda süzülür. Asetik Asit ve Bütirik Asidii Damıtılması Silo yemide bulua asetik ve bütirik asiti sataması amacıyla, 0 ml lik yuvarlak balolara daha öcede hazırlaa süzüklerde 200 ml alıarak üzerie 5 ml % 48 lik sülfürik asit çözeltisi ilave edilir. Balo jojeye 23 tae cam bilye ilave edilir, çok kısa bir süre çalkalaır ve destilasyo aletie bağlaır. Soğutucusuu alt kısmıa 100 ml'lik balo joje koarak kayamaı başladığı ada itibare tam 20 dakika souda 100 ml destilat elde edilir (D 1 ). Buu taki ede 10 dakika içeriside ml lik balo jojeye tekrar ml destilat elde edilir (D 2 ). Laktik Asidi Sataması Süt asidii sataması amacıyla destilasyo balolarıda kala yaklaşık 55 ml destilat ayı orada (55 ml) kromik asit çözeltisi ile karıştırılır ve zama geçirmede süt asidii oksidasyou amacıyla geriye akıta bir soğutucu takılarak 5 dakika süreyle kayatılır. 5 dakikalık kayama süresi souda soğutucu üzeride 100 ml saf su kour ve geriye akıta soğutucu çıkarılarak bir öceki destilasyo sistemide kayama başladıkta soraki 10 dakika içeriside ml daha destilat (D 3 ) elde edilir. Titrasyo Titrasyo yaılması içi her üç destilat da (Dı, D 2, D 3 ) birer beherglas içerisie dökülerek üzerie 10 damla, feolfitaley çözeltisi damlatılır ve 0.05 N NaOH ile kısa zamada kaybola hafif kırmızı bir rek elde edilee kadar titrasyoa devam edilir. Titrasyo sorası şekeri giderilmesi sırasıdaki suladırmada dolayı titrasyodaki sarfiyat 1.25 ile çarılarak Dı, D 2 ve D 3 olarak kaydedilir.

4 40 Koç ve Coşkutua Hesalama ve Souçları Gösterilmesi Asetik asit, Dı'de = % 37.95; D 2 'de = % Bütirik asit, Dı'de = % 78.69; D 2 'de = % Laktik asit, D 3 'de = Asetik asit, bütirik asit ve laktik asit miktarları aşağıdaki formüllere göre hesalaır. Asetik asit (A), %= D D 1 Bütirik asit (B) %= D D 2 Laktik Asit (L) %= D 3 ( A B) D 1 = Birici damıtığı titrasyo değerii 1.25 ile çarımıda elde edile değer D 2 = İkici damıtığı titrasyo değerii 1.25 ile çarımıda elde edile değer D 3 = Üçücü damıtığı titrasyo değerii 1.25 ile çarımıda elde edile değer A= Birici formülde bulua asetik asidi % değeri B=Bütirik asidii ikici formülde bulua % değeri (Akyıldız, 1984). Sektrofotometrik Yötem ile Orgaik Asit Tayii Laktik Asit Tayii Kimyasal Maddeler H 2 SO 4 %96 d = 1.84 g/cm 3 % 20'lik CuSO 4 w/v %0.4'lük CuSO 4 w/v Kuru Ca(OH) 2 Aalizi Yürütülmesi β aftol 1.5g+100ml %0.5 NaOH (arafeilfeol) Li. Laktat l Satrifüj tüüe l ml silaj ekstrakt, l ml % 20 CuSO 4 ve 7 ml distile su alıır, diledirilir. Üzerie l g Ca(OH) 2 ekleir ve vorteks mikserde karıştırılır dakika oda sıcaklığıda bekletilir rm'de 10 dakika süre ile satrüfüj edilir. 4 15x0.8 cm cam tüe üst fazda l ml kour, üzerie 0.5 ml % 0.4 CuSO 4 solüsyou ekleir. 5 Karışım üzerie 6 ml H 2 SO 4 kour ve vorteks mikserde iyice karıştırılır. 6 Tüler 2025 C'ye soğutulur. Üzerie 0.1 ml ara feil feol kour ve vorteks'te karıştırılır. Süsasiyo formu oluşur ve 30 dakikada 30 C'de ikübasyoa bırakılır.

5 Silo Yemleride Orgaik Asit Belirlemede İki Farklı Metodu Karşılaştırması C de 90 dakika su bayosuda bekletilerek içideki laktik asiti çözümesi sağlaır. Oda sıcaklığıda soğutulur ve sektrofotometrede 560 m'de okuur, kör çalışılır. Stadart Kurvei Hazırlaışı: gr lityum laktat tartılı, ml'lik balo jojeye kour ve üzerie 40 ml saf su ve 24 damla % 96 lık H 2 SO 4 ekleerek karıştırılır ve ml'ye tamamlaır (l mg/1 ml laktik asit). Hazırlaa çözeltide l ml alıı 100 ml'lik balo jojeye aktarılır ve üzerie 99 ml saf su kour (stadart solüsyo içi laktik asit 10 mg/ l ml) ml arası solüsyo eğrisi ve l ml solüsyo 15x0.8 cm tüe kour ve 5. aşamada so aşamaya kadar sürdürülür. Souçları Hesalaması Laktik Asit (mg / g) = [(C x D ) / 10] C: Kosatre laktik asit (mg) içi l ml dilisyo ekstrakt D: Dilisyo ekstrakt (Aoim, 1986). Sektrofotometik Metot ile Asetik Asit Tayii Kimyasal Maddeler Kloroform 0.5 N Sodyum hidroksit çözeltisi l N Hidroklorik asit çözeltisi l mg/ml stadart asetik asit çözeltisi 100 mg kuru asetik asit tartılır, 100 ml baloa alıır, ml saf su ve 4 ml 0.5 N NaOH ile çözülür, ölçü çizgisie kadar saf su ile tamamlaır ve karıştırılır. Aalizi Yürütülmesi 1Kloroform ile Ekstraksiyo 60 g umue 0.1 mg tartılarak bledere alıır. Üzerie 80 ml CHCl 3 ilave edilir ve 3 dakika yüksek devirde karıştırılır. Cam süzgece 10 cm çalı süzgeç kağıdı yerleştirilir, karışım süzgece satül yardımı ile aktarılır ve emme yardımı ile süzülür. Süzgeç kağıdıda kala asta ve süzgeç kağıdı bledere aktarılır üzerie 80 ml CHCl 3 ilave edilirerek, l dakika çalıştırılır, ikici ekstraksiyo işlemi ile yei süzgeç kağıdı kullaılarak ikici bir süzme işlemi uygulaılır. Üçücü ekstraksiyo ve süzme işlemi ikici işlemde olduğu gibi uygulaır. Süzgeç kağıdıı kearları ve çökelti 25 ml CHC1 3 ile yıkaır. Çökelti bastırılarak CHCl 3 'ü büyük bir kısmı uzaklaştırılır. 2Alkali ile ekstraksiyo Tolaa CHCl 3 ekstraktları 0 ml 'lik ayırıcıya aktarılır, süzgeç ve ekstrakt tolama kabı 2 şer ml'lik CHCl 3 ile yıkaır ve ayırıcıya aktarılır. Ayırıcıya 33 ml 0.5 N NaOH çözeltisi ilave edilerek ekstrakte edilir CHC1 3 fazı 600 ml'lik, sulu faz 300 ml'lik behere

6 42 Koç ve Coşkutua alıır. CHCl 3 fazı ayı ayırıcıya alıır ve 33 ml 0.5 N NaOH çözeltisi ile ikici bir ekstraksiyoa işlemi uygulaır. İkici ekstraksiyoda emülsiyo oluşursa bekletme ile emülsiyo fazı kırılır. Fazlar ait ola beherlere alıır. Soucu ekstraksiyo işlmideki emülsiyo fazı alkali fazı toladığı behere alıır. 3Asitledirme Alkali ekstrakt 70 ml yaklaşık l N HCl çözeltisi ile asidledirilir, çözülmüş CHCl 3 'u uzaklaştırılması içi 510 dakika hızlıca havaladırılır. CHCl 3 tamame uzaklaştığıı koklayarak kotrol edilir. 4Süzme Çözelti, süzgeç kağıdı yerleştirilmiş gözeekli cam süzgeçte süzülür. Süzütü bulaık ise ice süzgeçte veya cam elyaf ile süzülerek berraklaştırılır. Süzütü 0 ml'lik baloa aktarılır ve çizgisie kadar saf su ile tamamlaır. Stadart çözelti karşı absorbasları sektrofotometrede 307 m dalga boyuda okuma yaılır. 5Stadart Çözeltii Hazırlaması 0 ml'lik ayırıcıya 2 ml CHC1 3 alıır, NaOH ile ekstrakte edilir, HCl ile asitledirilir ve havaladırılır. 0 ml'lik ölçü baloua alıır ve ölçüsüe kadar saf su ile tamamlaır. 6Kalibraso Eğrisii Hazırlaması Stadart asetik asit çözeltiside l, 2, 3 ve 5ml ietle alıarak 0 ml'lik ölçü balolarıa aktarılır, her birie 100 ml 0.5 N'lik NaOH çözeltisi ve 70 ml l N HCl çözeltisi ilave edilir ve ölçü çizgisie kadar saf su ile tamamlaır, stadart çözeltiye karşı absorbasları sectrofotometrede 307 m dalga boyuda okuma yaılır. Hesalama ve Souçları Gösterilmesi Asetik Asit (mg / kg) = [(C x 1000) / (M x 0 ml)] C: Kalibrasyo eğriside bulua asetik asit miktarı (mg) M: Deey umuesi, g Bütirik Asidi Hesa Yolu İle Tesiti Bütirik asit miktarıı buluması içi destilasyotitrasyo yötemi ve kromotografik yötemler kullaılmaktadır. Hesalamada kullaıla aa usurlar; Tolam uçucu yağ asit aalizi (TUYA), Leer aalizi (% Laktik asit, % Asetik asit), Sektrofotometrik aalizler (% Laktik asit, % Asetik asit). Bu aaliz souçlarıda yararlaarak % Bütirik asit soucuu istatistiki olarak iceleme olaağı verir. Buu içi aşağıdaki formülasyolar kullaılmıştır. A= % Bütirik asit (sektrofotometrik metot) = TUYA (% Sektrofotometrik Laktik asit +

7 Silo Yemleride Orgaik Asit Belirlemede İki Farklı Metodu Karşılaştırması 43 % Sektrofotometrik Asetik asit) B =% Bütirik asit (Leer) = TUYA (% Leer Laktik asit + % Leer Asetik asit) Bu formülasyolarda TUYA'da sektrofotometrik metot ile elde edile laktik ve asetik asitler çıkarıldığıda "A" soucua eşit kabul edersek, Leer yötemide bulua % bütirik asit ile direkt olarak karşılaştırıldığıda % bütirik asit souçlarıı %10'uda ozitif, %90'ı da ise egatif souç elde edilmiştir. Araştırma Bulguları Titrimetrik Aaliz Souçları Tolam Uçucu Yağ Asitleri Yaıla aalizler soucuda uçucu yağ asitlerii tolam %'si bulumuştur. Bua göre elde edile tolam % içeriside laktik asit, asetik asit, bütirik asit, valorik asit, karolik asit, roiyoik asit gibi souçlar da bulumaktadır. Tolam uçucu yağ asitlerii içeriside, e fazla laktik asit ve asetik asit bulumaktadır. Burada e büyük % ile laktik asit ve asetik asit vardır daha sora bütirik asit gelir, diğerleri eser düzeydedir. Çizelge 1. Tolam uçucu yağ asidi değerleri (%) Sektrofotometrik Metot Leer Metotu Laktik Asit 2.29 ± * 1.27 ± Asetik Asit 1.15 ± * 1.01 ± Bütirik Asit 0.26 ± * 0.38 ± * Ayı satırdaki ortalamalar arasıdaki fark istatistiki olarak öemlidir (<0.05) Çizelge 1 de de görüldüğü gibi sektrofotometre ve Leer metotlarıyla yaıla orgaik asit aaliz souçları arasıda istatistiki alamda öemli bir farklılık olduğu belirlemiştir (<0.01) Çizelge 2. Sektrofotometrik metot ile tesit edile laktik, asetik, bütirik asit değerlerii korelasyou Laktik Asit Asetik Asit Bütirik Asit Laktik Asit Asetik Asit Bütirik Asit Sektrofotometre metodu ile yaıla orgaik asit aalizi soucuda laktik asit ile asetik arasıda ozitif bir korelasyo söz kousu ike, laktik asitbütirik asit arasıda ve asetik

8 44 Koç ve Coşkutua asitbütirik asit arasıda ise egatif bir korelasyo olduğu satamıştır. Fakat tüm bu ortalamalar arasıdaki farklılıklar istatistiki açıda öemli bulumamıştır (>0.05). Çizelge 2. Leer metodu ile tesit edile orgaik asit değerlerii korelasyou Laktik Asit Asetik Asit Bütirik Asit Laktik Asit Asetik Asit Bütirik Asit * Ayı satırdaki ortalamalar arasıdaki fark istatistiki olarak öemlidir (<0.05) * Leer metodu ile ile yaıla orgaik asit aalizi soucuda laktik asit ile asetik arasıda azitif bir korelasyo söz kousu ike, laktik asitbütirik asit arasıda egatif bir korelasyo olduğu satamıştr. Asetik asit ile bütirik asit arasıda ise egatif bir korelasyou varlığı söz kousudur. Asetik asitbütirik asit arasıdaki egatif korelasyo istatistiki alamda öemli buluurke (<0.05) diğer özellikler arasıdaki farklılıklar öemli bulumamıştır (>0.05) Sektrofometre Leer 2.5 Laktik Asit (%) Örek Numue Şekil 1. İcelee öreklerde iki metotla belirlee laktik asit değerleri Şekil 1 de de görüldüğü gibi iki metot souçları arasıda artış ve azalmalar kousuda bezerlik göstermesie karşılık Leer metodu ile elde edile değerler daha düşük olarak bulumuştur.

9 Silo Yemleride Orgaik Asit Belirlemede İki Farklı Metodu Karşılaştırması Sektofotometre Leer Asetik Asit (%) Örek Numue Şekil 2. İcelee öreklerde iki metotla belirlee asetik asit değerleri Şekil 2 de de görüldüğü gibi her iki metotla elde edile asetik asit souçları arasıda artış ve azalmalar kousuda bezerlik göstermektedir. Acak, Leer yötemi ile elde edile değerler daha düşük olarak bulumuştur. Bütirik asit aaliz souçları Leer metodu ile yaıla bütirik asit aalizide elde edile souçlarıda % bütirik asit souçlarıı tamamıa yakııda egatif souç alımıştır. Aalizde elde edile bu olumsuz durumu gidermek içi TUYA aalizi yaılmıştır. TUYA aalizide laktik, asetik, bütirik, roiyoik, valorik ve karolik asitlerii tolamıı % desi bulumuştur. TUYA aalizide elde edile souçlarda sektrofotometrede elde edile % laktik asit ve asetik asit souçlarıı farkıı aldığımızda % bütirik asit soucuu elde edilir, Leer metodu ile bulua % bütirik asit ile karşılaştırıldığıdaki durum Şekil 3 te verilmiştir. Şekil 3 te de görüldüğü gibi iki metot souçları arasıda artış ve azalmalar kousuda bezerlik göstermesie karşılık Leer yötemi ile elde edile değerleri tamamıa yakıı egatif olarak bulumuştur. Souçlar ve Tartışma Silajlarda yaıla aalizlere ilişki elde edile souçlarda yola çıkarak Leer metoduyla tesit edile % laktik, asetik, bütirik asit souçlarıda laktik asit ve asetik asit souçları (+), bütirik asit aalizi ise () souç vermiştir. Çalışmalarda örekte elde edile laktik asit ve asetik asit souçları daha öce Leer metodu ile yaılmış çalışmalarla uyumluluk göstermektedir. Bütirik asit souçlarıda uyumlu acak teorik ve ratik alamda uyumsuzluk göstermektedir. Bütirik asit souçlarıı egatif vere birçok araştırmacı bütirik asit souçlarıı yorumlarke yok veya eser düzeyde kabul

10 46 Koç ve Coşkutua etmiştir. Bu oktada hareketle sektrofotometrik metotla orgaik asit aalizleri yaılmıştır. Araştırma souçlarıda hareketle hem zama açısıda hem de uygulama kolaylığı bakımıda ve aaliz değerleri açısıda sekrofotometrik metot daha güveilir souç elde edileceği kaısıdayız. 0.5 Sektofotometre Leer Bütrik Asit (%) Örek Numue Şekil 3. İcelee öreklerde iki metotla belirlee bütirik asit değerleri Kayaklar Akyıldız, R., Yemler Bilgisi Laboratuvar Klavuzu, Yayı No: 358, Uygulama Klavuzu No:22, A.Ü. Basımevi, Akara, 214s. Alçiçek, A., Özka, K., Silo Yemleride Destilasyo Yötemi ile Süt Asidi, Asetik Asit ve Bütirik Asit Tayii. Ege Üiversitesi Ziraat Fakültesi Dergisi Cilt:33 (23): Aoim, Aalysis of Agricultural Materials, Referece Book: 427, Lodo. P: 248. Kılıç, A Silo yemi (Öğretim, Öğreim ve Uygulama Öerileri). Bilgeha Basımevi, İzmir. Mc Doald, P., Edwards, R.A., Grehalg, J.F.D., Aimal Nutritio, Logma Sigaore Publishers Pte. Ltd., Aberystwyth, P: 340. Patlak, N.N., Kamra, D.N.,Agarval, N., Jackmola, R.C., Aaltical Teciques i Aimal Nutritio Research. Aimal Nutritio Diviso, Idia Veteriary Research Istute, Hatagar. 243,122,U.P. Idia Phis, R.H., The Role of Coserved Forage I Milk Productio System With Particular Referece to Self ad Easy Fed Silage Systems, Priciles ad Practise of Feedig Dairy Cows, Ed. W:H. Broster, R.H.Phis, C.L. JohsoNird, UK, P: 322.